IDENTIFICACION BACTERIANAGRAM POSITIVA

PRUEBA DE LA CATALASA Bacterias que viven en

ambientes aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno molecular.

Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con H2O2 y se producen burbujas de oxígeno. Se emplea para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positivo) del género Streptococcus (catalasa negativo).

PRUEBA DE LA COAGULASA Permite diferenciar Staphylococcus

aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus (coagulasas negativos).

La técnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada.

Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo análogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo de fibrina en ausencia de Ca2+. 

La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el fibrinógeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmáticos.

MANITOL SALADO Medio selectivo y

diferencial para el aislamiento e identificación de Staphylococcus aureus(NaCl 7,5% ).

Manitol es el único azúcar fermentado por las cepas patógenas de este género bacteriano. La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por el viraje del indicador de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. Staphylococcus epidermidis no fermenta el manitol, dará lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo púrpura.

PRUEBA DE HEMOLISIS EN AGAR SANGRE Detecta la presencia de

hemolisina, enzima que permite la clasificación de los Streptococcus en alfa (hemólisis parcial, incompleta que torna color verdoso), beta (hemólisis total) y gamma hemolíticos (no existe hemólisis) .Muchas otras bacterias, aparte de los Streptococcus, pueden tener esta enzima como B. megaterium; se usa el cultivo para demostrar el grado de hemólisis (hemólisis beta) en la cual se puede observar claramente por detrás de la siembra.

PRUEBA DE OPTOQUINA Permite diferenciar

Streptococcus pneumoniae que es sensible a optoquina (etilhidroxicupreína, Taxo P) de otras especies de Streptococcus alfa-hemolíticos, en especial del grupo viridans que son resistentes.

PRUEBA SENSIBILIDAD BILIS ESCULINA Los enterococos crecen en

presencia de NaCl 6,5%, toleran las sales biliares y pueden hidrolizar la esculina. Estas propiedades se pueden usar para distinguir los enterococos de otros cocos Gram (+) catalasa-negativos. En la prueba positiva, el tubo torna de color chocolate oscuro, característico al desdoblar la bilis esculina. Enterococcus faecalis es la antigua categoría taxonómica para Streptococcus faecalis.  

ANTIBIOGRAMA

ANTIBIOGRAMAS Determina la acción de los antimicrobianos

sobre un microorganismo.

CIM: Menor concentración de un antibiótico capaz de impedir el crecimiento de un microorganismo en condiciones normales.

CMB: Menor concentración de un antibiótico capaz de producir el efecto letal sobre el 99.9 % o mas de las células de un inoculo en 24 horas

OBJETIVOS:1. Medir la sensibilidad de una cepa bacteriana que se

sospecha es la responsable de una infección a uno o varios antibióticos. En efecto, la sensibilidad in vitro es uno de los requisitos previos para la eficacia in vivo de un tratamiento antibiótico. El antibiograma sirve, en primer lugar, para orientar las decisiones terapéuticas individuales.

2. Seguir la evolución de las resistencias bacterianas. Gracias a este seguimiento epidemiológico, a escala de un servicio, un centro de atención médica, una región o un país, es como puede adaptarse la antibioterapia empírica, revisarse regularmente los espectros clínicos de los antibióticos y adoptarse ciertas decisiones sanitarias, como el establecimiento de programas de prevención en los hospitales.

Hay pues un doble interés: Terapéutico y epidemiológico.

Cuándo realizar un antibiograma Siempre que una toma bacteriológica de

finalidad diagnóstica haya permitido el aislamiento de una bacteria considerada responsable de la infección.

Establecer esta responsabilidad exige una colaboración entre el bacteriólogo y el clínico. En efecto, en ciertas circunstancias, el microbiólogo no podrá determinar con certeza que el aislamiento de una bacteria exige un antibiograma, sin los datos clínicos que le aporta el médico.

CLASIFICACION

SENSIBLES: cuando la CMI de un antibiótico para una bacteria se puede conseguir in vivo, a dosis terapéuticas.

RESISTENTES: Cuando el m.o no es inhibido por las concentraciones que normalmente se pueden obtener en el sitio de infección

INTERMEDIA: Cuando las bacterias no se inhiben a concentraciones normales, pero pueden inhibirse a concentraciones mas altas sin resultar tóxicas para el animal

Antibiograma realizado por el método de difusión en agar realizado por el método

de difusión en agar por medio de discos.

La zona de color claro que ocupa la mayor parte de la placa es el crecimiento bacteriano en las zonas no inhibidas. Los círculos negros que rodean a cinco de los seis discos marcan las zonas en que los respectivos antibióticos han inhibido, con mayor o menor eficacia, el crecimiento del microorganismo a estudio.

Método de E-test

Métodos más recientes que se han presentado en el mercado resulta de una curiosa combinación de características de los métodos anteriores. Se trata de una técnica cuantitativa en placa que permite obtener una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas impregnadas en concentraciones crecientes de antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la propia tira.

Una de sus grandes ventajas, dadas sus características, es que resulta un método ideal para estudiar cualquier tipo de microorganismo, aerobio o anaerobio, incluyendo aquellos llamados "fastidiosos" o los que tengan requerimientos especiales para crecer.

El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira del antibiótico (o antibióticos) a ensayar. Tras la incubación de 16-24 horas a 35ºC se observan las placas y se valora la zona de inhibición, de forma elíptica, alrededor de cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto más bajo de la elipse que presente crecimiento