Manejo y Almacenamiento de Semen Congelado en Carneros

Irma Celi.

Investigadora privada

Manejo del tanque de almacenamiento

Medir el contenido de Nitrgeno lquido mediante una varilla graduada (cm. pulg.). Cuidar que el nivel este por arriba de 4 a 5 pulgadas, el chequeo debe hacerse cada 2 - 3 semanas.

Guardar el tanque en un lugar fresco y seguro

Fijar bien el tanque durante el transporte para evitar balanceo o choque.

Determinar la localizacin del semen que se va a usar, antes de abrir el tanque; sacar la pajilla que se necesite e inmediatamente tapar el tanque.

Partes del tanque criognico

Manipulacin de semen

No exponer el semen a temperatura ambiente por mas de 20 segundos.

Nunca levante la canastilla con el semen a una altura que sobrepase el cuello del tanque, por ms de 40 segundos.

Si necesita ms tiempo para su trabajo, devolver las dosis al fondo por 15 segundos para restablecer la temperatura a la del nitrgeno lquido.

Usar en lo posible guantes y pinzas de madera o plstico al manipular el semen, as evitara quemarse las manos con el nitrgeno lquido.

Generalidades sobre tanques y semen

Pajillas y/o pellets debidamente identificadas y tener un inventario.

Se recomienda tener en cada canastilla del tanque, semen de un solo carnero.

La presentacin del semen congelado en la actualidad es en pellets de 0.2 cc y pajillas de 0.5 0.25 cc de capacidad.

El almacenamiento en pajillas presenta la ventaja de ahorrar espacio en el tanque, permitiendo una gran capacidad de almacenamiento

Congelacin de semen en pellets

Preparar una barra de hielo seco (-79 oC)

Depositar 0.2 ml de semen diluido refrigerado (5 oC)

Dejar en el hielo por espacio de 1 minuto.

Semen despus de 1 minuto, listo para ir al Nitrgeno lquido

Congelacin de semen en pellets

Completar el congelamiento sacudiendo los pelletscontenidos en el hielo seco directamente al nitrgeno lquido (-196 oC).

Los pellets de cada carnero son almacenados en canastillas individuales dentro de goblets cubiertos por algodn para evitar que los pellets floten en el nitrgeno lquido.

Retiro de pellet para la descongelacin.

Descongelacin y evaluacin del semen

Tubo temperado en agua tibia a 37C x 10 minutos.

Colocar el pellet y agitar lentamente hasta descongelar (25-30 seg)

Colocar una gota de semen descongelado para evaluar la motilidad. Esta debe ser mayor de 60%

Congelacin de semen de carnero en pajillas

Secado de pajillas de semen diluido refrigerado a 5 oC.

Caja de congelamiento de semen.

Pajillas sometidas a vapores de nitrgeno lquido por 2 minutos hasta 140 oC.

Pajillas sumergidas en nitrgeno lquido (-196 oC)

Almacenamiento de semen empajillado

Almacenamiento de pajillas a granel

Almacenamiento de pajillas en varillas

Descongelacin de pajillas de semen

Descongelacin en agua temperada a 37-38 oC

Sumergir la pajilla por espacio de 15-20 segundos

Secar completamente Cortar del extremo del alcohol polivinilico

Evaluacin de motilidad

Colocar una gota de semen en el portaobjeto a 38 oC.

Cubrir con una lmina cubre objeto.

Motilidad progresiva individual mayor de 60%

Eliminar la primera gota de semen

DILUYENTE IMV PARA SEMEN DE OVINO

CONGELADO Cada frasco contiene 40 ml de diluyente. Agregue 10 ml de yema de

huevo fresco a cada frasco antes de usar. Los huevos deben estarlimpios para minimizar la contaminacin de agentes patgenos y tambin de jabn. Tenga cuidado de no incluir la clara del huevo.

Despus que se ha agregado la yema de huevo y mezclado completamente con el diluyente, puede centrifugarse para mejorarsu transparencia. Centrifugue el diluyente a 4000 r.p.m. durante 20 minutos o su equivalente. La materia flotante debe ser escurrido a travs de un papel de filtro grueso para remover grasas ligeras y luego ser usado como diluyente de semen. Generalmente cuanto ms rpido y largo sea el centrifugado del diluyente mejor ser la claridad. La centrifugacin no es esencial pero producir una mayor claridad para la evaluacin del semen.

El diluyente contiene Gentamicina.

El diluyente contiene Glycerol

La relacin de dilucin variar dependiendo de la calidad inicial del semen y de la concentracin de las clulas vivas requeridas despus del descongelado. Generalmente, recomendamos una relacin de dilucin de 1:10 (una parte de semen para 10 partes de diluyente) para una alta calidad de semen en inseminacin laparoscpica. No recomendamos relacin de dilucin menores de 1:4.

La dilucin inicial debe hacerse a 35 oC. Ambos, semen y diluyente deben estar a 35 oC para evitar un shock de fro. Poner el diluyente ms el semen en bao de agua fra de 100 a 200 ml (cmara) para enfriarlo calmadamente. Enfre a 5 oC por aproximadamente 1.5 horas

Despus que el diluyente ms el semen ha sido enfriado a 5oC mantener esta temperatura, sin enfriar ni calentar. Permita que el semen se equilibre por cuatro horas antes del congelado. Incremente el tiempo de equilibrio si es necesario para incrementar su recuperacin.

Congelar en vapor de nitrgeno lquido, colocando las pajillas oredenadas sobre Zarandelas a 1 cm. del nivel de nitrgeno lquido por 2 minuto, tiempo en el cual se alcanza la -140 oC de temperatura. Posteriormente Las pajillas se sumergen en Nitrgeno lquido (-196 o C).

Almacenar las pajillas congeladas.