Hierro-Sodio-Ácido Áscórbico

Hierro-Sodio-Ácido Hierro-Sodio-Ácido ÁscórbicoÁscórbico

Método Absorción Atómica Fe y NaMétodo Absorción Atómica Fe y Na

Valoración oxidimétrica Vit CValoración oxidimétrica Vit C

Validación de un método analítico.Validación de un método analítico.

Una vez desarrollado un método analítico, al igual que toda técnica Una vez desarrollado un método analítico, al igual que toda técnica analítica deberá validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los analítica deberá validarse, es decir, se debe confirmar y documentar que los resultados producidos por el método son confiables.resultados producidos por el método son confiables.

En general, para validar existen 3 tipos de validación:En general, para validar existen 3 tipos de validación: -Validación Prospectiva:-Validación Prospectiva: es aquella validación realizada a métodos analíticos es aquella validación realizada a métodos analíticos

nuevos.nuevos. -Validación Retrospectiva:-Validación Retrospectiva: Para métodos analíticos antiguos, pero que se usan en Para métodos analíticos antiguos, pero que se usan en

forma rutinaria, y que no han sido validados.forma rutinaria, y que no han sido validados. -Revalidación-Revalidación: repetición parcial o total de una validación debido a cambios : repetición parcial o total de una validación debido a cambios

efectuados, que puedan afectar a la capacidad del método validado. (1)efectuados, que puedan afectar a la capacidad del método validado. (1) La validación se puede realizar mediante estudios intralaboratorio o interlaboratorios.La validación se puede realizar mediante estudios intralaboratorio o interlaboratorios. -Estudios Intralaboratorio: -Estudios Intralaboratorio: este tipo de validación lo realiza un laboratorio este tipo de validación lo realiza un laboratorio

individualmente, utilizando materiales de referencia, comparación con otro método, individualmente, utilizando materiales de referencia, comparación con otro método, utilizando muestras blanco o muestras positivas fortificadas, etc.utilizando muestras blanco o muestras positivas fortificadas, etc.

-Estudios interlaboratorios-Estudios interlaboratorios: conjunto de mediciones a un nivel o varios niveles de : conjunto de mediciones a un nivel o varios niveles de concentración del analito problema, ejecutadas independientemente, por varios concentración del analito problema, ejecutadas independientemente, por varios laboratorios, sobre muestras de un material dado. (11)laboratorios, sobre muestras de un material dado. (11)

ValidaciónValidación

Al momento de validar un método analítico se Al momento de validar un método analítico se requiere actuar mediante procedimientos correctos requiere actuar mediante procedimientos correctos entre los que se incluyen; una buena organización entre los que se incluyen; una buena organización funcional; personal adecuadamente adiestrado en la funcional; personal adecuadamente adiestrado en la aplicación del método; instalaciones adecuadas y aplicación del método; instalaciones adecuadas y suficientes; equipos, reactivos y material de suficientes; equipos, reactivos y material de laboratorio apropiado y en perfectas condiciones para laboratorio apropiado y en perfectas condiciones para su uso; métodos escritos, actualizados y aprobados. su uso; métodos escritos, actualizados y aprobados. De esta forma se puede garantizar la calidad de los De esta forma se puede garantizar la calidad de los resultados obtenidos en el laboratorio.resultados obtenidos en el laboratorio.

Parámetros Fundamentales de Parámetros Fundamentales de Validación.Validación.

Una vez que se ha realizado el ajuste de los parámetros y Una vez que se ha realizado el ajuste de los parámetros y se ha probado con éxito el método en muestras, se está en se ha probado con éxito el método en muestras, se está en condiciones de realizar la validación del método, para poder condiciones de realizar la validación del método, para poder confirmar y documentar que los resultados obtenidos por el método confirmar y documentar que los resultados obtenidos por el método son seguros y confiablesson seguros y confiables

En el proceso de validación, los parámetros que En el proceso de validación, los parámetros que generalmente son evaluados son:generalmente son evaluados son:

-Selectividad-Selectividad -Linealidad-Linealidad -Precisión-Precisión -Exactitud-Exactitud -Sensibilidad-Sensibilidad

ValidaciónValidación

Selectividad (Selectividad ()) La selectividad de un sistema La selectividad de un sistema

depende de la interacción de todos los depende de la interacción de todos los componentes, Longitud de onda, componentes, Longitud de onda, interferentes, etc y muestra. interferentes, etc y muestra.

Selectividad o especificidad.Selectividad o especificidad.

La selectividad o especificidad de un método La selectividad o especificidad de un método analítico se refiere a la capacidad de un método de analítico se refiere a la capacidad de un método de producir una señal medible debida sólo a la presencia producir una señal medible debida sólo a la presencia del analito, libre de interferencias de otros componentes del analito, libre de interferencias de otros componentes en la matriz de muestra, estas interferencias pueden ser en la matriz de muestra, estas interferencias pueden ser productos de degradación, metabolitos del mismo productos de degradación, metabolitos del mismo analito en un fluido biológico, etc.analito en un fluido biológico, etc.

La selectividad se puede controlar simplemente La selectividad se puede controlar simplemente por la adición, por ejemplo del doble de estándar puro, por la adición, por ejemplo del doble de estándar puro, verificando el aumento de su señal.verificando el aumento de su señal.

Linealidad.Linealidad.

La linealidad de un método analítico se refiere a la capacidad de La linealidad de un método analítico se refiere a la capacidad de un método de obtener resultados linealmente proporcionales entre la un método de obtener resultados linealmente proporcionales entre la concentración de analito y su respuesta. Este parámetro se considera como concentración de analito y su respuesta. Este parámetro se considera como un criterio inicial de validación, y es necesario verificarlo si se va a trabajar un criterio inicial de validación, y es necesario verificarlo si se va a trabajar con un sólo estándar en las determinaciones de rutina. Al trabajar con con un sólo estándar en las determinaciones de rutina. Al trabajar con estándares múltiples se puede aceptar métodos no lineales,.estándares múltiples se puede aceptar métodos no lineales,.

Junto con establecer la linealidad del método se puede estimar el rango de Junto con establecer la linealidad del método se puede estimar el rango de linealidad del método, es decir, el intervalo de concentraciones para el cual linealidad del método, es decir, el intervalo de concentraciones para el cual el método ha demostrado responder en forma lineal y dentro del cual se el método ha demostrado responder en forma lineal y dentro del cual se puede estimar la cantidad de analito por interpolación.puede estimar la cantidad de analito por interpolación.

Para determinar la linealidad se prepara una serie de, al menos, Para determinar la linealidad se prepara una serie de, al menos, cinco diluciones de un estándar, las cuales deben estar de acuerdo con las cinco diluciones de un estándar, las cuales deben estar de acuerdo con las cantidades esperadas de analito en la muestra. Se efectúa el análisis cantidades esperadas de analito en la muestra. Se efectúa el análisis siguiendo exactamente el procedimiento descrito.siguiendo exactamente el procedimiento descrito.

En procedimientos cromatográficos se recomienda efectuar las inyecciones En procedimientos cromatográficos se recomienda efectuar las inyecciones por triplicado, a no ser que se use un patrón interno.. Para Absorción por triplicado, a no ser que se use un patrón interno.. Para Absorción atómica a lo menos el promedio de 3 lecturas por concentración.atómica a lo menos el promedio de 3 lecturas por concentración.

El coeficiente de correlación(r)El coeficiente de correlación(r) a) Coeficiente de correlación (r).a) Coeficiente de correlación (r). El coeficiente de correlación refleja el grado de relación o ligazón entre las El coeficiente de correlación refleja el grado de relación o ligazón entre las

variables x (concentración), y (respuesta). El valor r = 1 indica una recta variables x (concentración), y (respuesta). El valor r = 1 indica una recta perfectamente lineal de pendiente positiva, r = -1 una recta perfectamente lineal de perfectamente lineal de pendiente positiva, r = -1 una recta perfectamente lineal de pendiente negativa y r =0 la no correlación entre x e y. En análisis químico se pendiente negativa y r =0 la no correlación entre x e y. En análisis químico se obtienen valores de r elevadas, iguales o superiores a 0,999, si bien en análisis de obtienen valores de r elevadas, iguales o superiores a 0,999, si bien en análisis de trazas se aceptan valores mas bajos (iguales o superiores a 0,99). trazas se aceptan valores mas bajos (iguales o superiores a 0,99).

Sin embargo, el mejor indicador del modelo lineal no es r sino un test estadístico, en Sin embargo, el mejor indicador del modelo lineal no es r sino un test estadístico, en el cual se calcula un valor el cual se calcula un valor trtr (n-2 grados de libertad y se compara con el valor de t (n-2 grados de libertad y se compara con el valor de t tabulado para el nivel de confianza requerido. En este caso si tabulado para el nivel de confianza requerido. En este caso si trtr es mayor que el t de es mayor que el t de tabla, significa que existe una correlación lineal entre x e y, para el nivel de confianza tabla, significa que existe una correlación lineal entre x e y, para el nivel de confianza requerido. requerido.

tr = tr = rr (n-2)__(n-2)__ (1-r2)(1-r2) Donde:Donde: r = coeficiente de correlaciónr = coeficiente de correlación n = numero de medicionesn = numero de mediciones

Curva de calibración que Curva de calibración que relaciona respuestarelaciona respuesta

área, alturas, absorbancia, etc., con concentración o cantidad de analito. La área, alturas, absorbancia, etc., con concentración o cantidad de analito. La cual posteriormente se gráfica para su documentación e interpretación cual posteriormente se gráfica para su documentación e interpretación estadística. estadística.

La recta de calibración es del tipo:La recta de calibración es del tipo: y = bx + a y = bx + a Donde:Donde: x = corresponde a la concentraciónx = corresponde a la concentración y = corresponde a la respuestay = corresponde a la respuesta b = el valor de la pendiente o variación de respuesta por unidad de b = el valor de la pendiente o variación de respuesta por unidad de

concentración.concentración. a = el termino independiente o intercepto sobre el eje Y.a = el termino independiente o intercepto sobre el eje Y.

Interpretación estadística de la regresión lineal.Interpretación estadística de la regresión lineal. La representación gráfica suele ser suficiente. Sin embargo La representación gráfica suele ser suficiente. Sin embargo

conviene efectuar una interpretación estadística de la regresión lineal.conviene efectuar una interpretación estadística de la regresión lineal.

b) Significación estadística de la b) Significación estadística de la varianza de la pendiente bvarianza de la pendiente b

La pendiente b se llama también coeficiente de regresión, y La pendiente b se llama también coeficiente de regresión, y se determina como parámetro indicativo de la sensibilidad, el cual a se determina como parámetro indicativo de la sensibilidad, el cual a mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta del método frente a mayor pendiente, mayor sensibilidad (respuesta del método frente a los cambios de concentración del analito). La varianza de la los cambios de concentración del analito). La varianza de la pendiente Sb2 se utiliza como expresión matemática de la pendiente Sb2 se utiliza como expresión matemática de la linealidad, a menor varianza mejor linealidad, para expresar la linealidad, a menor varianza mejor linealidad, para expresar la linealidad también se utiliza la desviación estándar de la pendiente linealidad también se utiliza la desviación estándar de la pendiente Sb y el coeficiente de variación (%CV) Sb y el coeficiente de variación (%CV)

A su vez los limites de confianza de la pendiente se hallan a partir A su vez los limites de confianza de la pendiente se hallan a partir de la expresión: de la expresión:

b b ++ t Sb t Sb Donde:Donde: b = valor de la pendienteb = valor de la pendiente t = valor de la distribución de Student para n-2 grados de libertad t = valor de la distribución de Student para n-2 grados de libertad

para el grado de confianza escogido.para el grado de confianza escogido. Sb = desviación estándar de la pendiente.Sb = desviación estándar de la pendiente.

c) Significación estadística de la c) Significación estadística de la varianza de la ordenada al origenvarianza de la ordenada al origen

El valor de El valor de a ( ordenadaa ( ordenada al origen), se determina para verificar si la al origen), se determina para verificar si la recta pasa por el origen y que cualquier desviación puede recta pasa por el origen y que cualquier desviación puede adjudicarse únicamente a valores aleatorios, por lo que en un caso adjudicarse únicamente a valores aleatorios, por lo que en un caso ideal debe ser cero. Al igual que en el caso de la pendiente para ideal debe ser cero. Al igual que en el caso de la pendiente para poder obtener los intervalos de confianza de la ordenada al origen poder obtener los intervalos de confianza de la ordenada al origen se calcula en función de su varianza se calcula en función de su varianza Sa2Sa2, su desviación estándar , su desviación estándar SaSa. Y estos se hallan a través de la formula:. Y estos se hallan a través de la formula:

aa++ t Sa t Sa Donde:Donde: a = valor de la ordenada al origen.a = valor de la ordenada al origen. t = valor de la distribución de student para n-2 grados de libertad t = valor de la distribución de student para n-2 grados de libertad

para el grado de confianza escogido.para el grado de confianza escogido. Sa = desviación estándar de aSa = desviación estándar de a

PrecisiónPrecisión

La precisión es el grado de concordancia entre los valores La precisión es el grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una de una serie repetida de ensayos analíticos efectuados sobre una muestra homogénea o, expresado de otra forma, la dispersión de muestra homogénea o, expresado de otra forma, la dispersión de los valores analíticos alrededor de su media. La precisión indica la los valores analíticos alrededor de su media. La precisión indica la capacidad del método para dar resultados semejantes cuando se capacidad del método para dar resultados semejantes cuando se aplica repetidamente a una muestra.aplica repetidamente a una muestra.

La precisión se expresa matemáticamente por la media La precisión se expresa matemáticamente por la media para el valor central y la desviación estándar para la dispersión de para el valor central y la desviación estándar para la dispersión de los resultados, y más comúnmente por la desviación estándar los resultados, y más comúnmente por la desviación estándar relativa (RSD).relativa (RSD).

La precisión requiere del análisis sobre una muestra y la La precisión requiere del análisis sobre una muestra y la precisión así obtenida se denomina del método, puesto que incluye precisión así obtenida se denomina del método, puesto que incluye todo el procedimiento analítico, desde la preparación de la muestra todo el procedimiento analítico, desde la preparación de la muestra hasta la lectura instrumental. También se puede determinar hasta la lectura instrumental. También se puede determinar directamente la precisión del sistema, hallando la variabilidad de directamente la precisión del sistema, hallando la variabilidad de respuesta de una solución patrón. Por lo que la precisión se respuesta de una solución patrón. Por lo que la precisión se distinguirá en 2 tipos de estudios:distinguirá en 2 tipos de estudios:


-Precisión del sistema:-Precisión del sistema: la cual evalúa la dispersión de al menos 6 la cual evalúa la dispersión de al menos 6 inyecciones del estándar o repeticiones de lecturas de inyecciones del estándar o repeticiones de lecturas de absorbancias.absorbancias.

-Precisión del método:-Precisión del método: evaluando la dispersión de varias evaluando la dispersión de varias preparaciones de la muestra final homogéneapreparaciones de la muestra final homogénea

A su vez la precisión deberá medirse en condiciones A su vez la precisión deberá medirse en condiciones repetitivasrepetitivas, es decir, mismas condiciones, sobre la misma muestra, , es decir, mismas condiciones, sobre la misma muestra, por un mismo analista, en el mismo laboratorio, el mismo día y con por un mismo analista, en el mismo laboratorio, el mismo día y con los mismos aparatos y reactivos. los mismos aparatos y reactivos.

También debe medirse en condiciones También debe medirse en condiciones reproduciblesreproducibles, es decir, , es decir, medir la precisión de un método, efectuado sobre la misma muestra medir la precisión de un método, efectuado sobre la misma muestra pero en condiciones diferentes, analistas, aparatos, días, etc.pero en condiciones diferentes, analistas, aparatos, días, etc.

El cociente El cociente repetibilidad/reproducibilidadrepetibilidad/reproducibilidad, es de gran , es de gran utilidad para evaluar la precisión de un método analítico. Su valor utilidad para evaluar la precisión de un método analítico. Su valor según estudios realizados por la AOAC es normalmente según estudios realizados por la AOAC es normalmente comprendido entre 1,5 y 2. Valores mayores a 2 son indicadores de comprendido entre 1,5 y 2. Valores mayores a 2 son indicadores de un método muy personal y valores inferiores a 1,5 indican pobre un método muy personal y valores inferiores a 1,5 indican pobre repetibilidad.repetibilidad.


Los criterios de aceptación pueden ser variables, por ejemplo la USP indica Los criterios de aceptación pueden ser variables, por ejemplo la USP indica una RSD del sistema de no más de 2%, inyectando 5 veces una solución una RSD del sistema de no más de 2%, inyectando 5 veces una solución estándar. Existen tablas que relacionan la RSD máxima aceptable para un estándar. Existen tablas que relacionan la RSD máxima aceptable para un método analítico en función de los límites de aceptación y del número de método analítico en función de los límites de aceptación y del número de réplicas.réplicas.

En muchos casos debe indicarse el intervalo de confianza de la En muchos casos debe indicarse el intervalo de confianza de la medida, es decir el rango en el cual se encuentra presente el analito, medida, es decir el rango en el cual se encuentra presente el analito, preferentemente, cuando el numero de muestras es pequeño (menor de preferentemente, cuando el numero de muestras es pequeño (menor de 30), las medidas independientes, y la distribución normal, puede calcularse 30), las medidas independientes, y la distribución normal, puede calcularse de acuerdo a la distribución de Student según la formula:de acuerdo a la distribución de Student según la formula:

X - X - tt,, x S x S < < < X + < X + tt,, x S x S n n nn Donde:Donde: X = promedio de las medicionesX = promedio de las mediciones tt,, = es el valor de Student, tabulado para n mediciones con = es el valor de Student, tabulado para n mediciones con = n-1 grados = n-1 grados

de libertad y para el nivel de libertad y para el nivel de confianza empleado, generalmente 95%. de confianza empleado, generalmente 95%. S = desviación estándar de las medicionesS = desviación estándar de las mediciones n = numero de mediciones.n = numero de mediciones.

SensibilidadSensibilidad

La sensibilidad de un método analítico se relaciona La sensibilidad de un método analítico se relaciona con la cantidad mínima de analito requerida para dar un con la cantidad mínima de analito requerida para dar un resultado significativo, cualitativo o cuantitativo. Debe resultado significativo, cualitativo o cuantitativo. Debe distinguirse entre sensibilidad de calibrado y sensibilidad distinguirse entre sensibilidad de calibrado y sensibilidad analítica.analítica.

a) Sensibilidad de calibrado:a) Sensibilidad de calibrado: corresponde a la pendiente corresponde a la pendiente de la recta de calibración, es decir, la señal o respuesta por de la recta de calibración, es decir, la señal o respuesta por unidad de concentración.unidad de concentración.

b) Sensibilidad analítica:b) Sensibilidad analítica: corresponde a la sensibilidad de corresponde a la sensibilidad de calibrado dividida por la desviación estándar de la calibrado dividida por la desviación estándar de la respuesta.respuesta.

Los parámetros a definir para poder evaluar la Los parámetros a definir para poder evaluar la sensibilidad de un método analítico son los limites de sensibilidad de un método analítico son los limites de detección y de cuantificación.detección y de cuantificación.

Los pasos a seguir son los siguientesLos pasos a seguir son los siguientes::

a) Se determina la pendiente de la curva de calibración a) Se determina la pendiente de la curva de calibración (concentración v/s respuesta) en el rango apropiado:(concentración v/s respuesta) en el rango apropiado:

b) Se realiza otra curva de calibración, inyectando cada b) Se realiza otra curva de calibración, inyectando cada punto por triplicado, pero en este caso para punto por triplicado, pero en este caso para concentraciones menores de analito, determinándose la concentraciones menores de analito, determinándose la ecuación de esta nueva recta de calibración y se ecuación de esta nueva recta de calibración y se extrapola la respuesta a concentración cero, obteniéndose extrapola la respuesta a concentración cero, obteniéndose un estimado de la respuesta del blanco: Yblun estimado de la respuesta del blanco: Ybl

c) Se determina la desviación estándar correspondiente a c) Se determina la desviación estándar correspondiente a cada concentración del punto 2, se calcula la recta cada concentración del punto 2, se calcula la recta correspondiente a concentración v/s s y se extrapola correspondiente a concentración v/s s y se extrapola como en el caso anterior la desviación estándar a como en el caso anterior la desviación estándar a concentración cero, obteniéndose el estimado concentración cero, obteniéndose el estimado correspondiente a la desviación estándar del blanco: Sblcorrespondiente a la desviación estándar del blanco: Sbl

a) Limite de detección:a) Limite de detección:

corresponde según la USP XXII, a la menor corresponde según la USP XXII, a la menor concentración de analito en una muestra que puede ser concentración de analito en una muestra que puede ser detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo detectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo las condiciones experimentales establecidas y se las condiciones experimentales establecidas y se expresa en unidades de concentración (%, ppm, ppb, expresa en unidades de concentración (%, ppm, ppb, etc.). Se calcula como:etc.). Se calcula como:

Limite de detección = Limite de detección = Ybl + 3 Sbl_ Ybl + 3 Sbl_ bb Donde:Donde: Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco.Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco. Sbl = desviación estándar estimada del blancoSbl = desviación estándar estimada del blanco b = pendiente de la curva de calibración.b = pendiente de la curva de calibración.

b) Limite de cuantificación:b) Limite de cuantificación:

según USP XXII, la menor concentración de analito de una muestra según USP XXII, la menor concentración de analito de una muestra que puede ser cuantificada con precisión y exactitud aceptable bajo que puede ser cuantificada con precisión y exactitud aceptable bajo las condiciones experimentales establecidas y se expresa también las condiciones experimentales establecidas y se expresa también en unidades de concentración. Se calcula según:en unidades de concentración. Se calcula según:

Limite de cuantificación: = Limite de cuantificación: = Ybl + 10 Sbl_ Ybl + 10 Sbl_ bb Donde:Donde: Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco.Ybl = valor estimado de la respuesta del blanco. Sbl = desviación estándar estimada del blancoSbl = desviación estándar estimada del blanco b = pendiente de la curva de calibración.b = pendiente de la curva de calibración. Los límites de detección y cuantificación se estiman a partir Los límites de detección y cuantificación se estiman a partir

de la curva de regresión o calibración, siempre que se hayan de la curva de regresión o calibración, siempre que se hayan considerado concentraciones bajas de analito, por extrapolación a considerado concentraciones bajas de analito, por extrapolación a concentración cero. concentración cero.

Exactitud.Exactitud.

La exactitud de un método, también conocida La exactitud de un método, también conocida como error sistemático o tendencia, corresponde a la como error sistemático o tendencia, corresponde a la capacidad del método analítico para dar resultados lo capacidad del método analítico para dar resultados lo más próximos posibles al valor verdadero. La exactitud o más próximos posibles al valor verdadero. La exactitud o bien podríamos llamarla inexactitud, debe ser tan bien podríamos llamarla inexactitud, debe ser tan pequeña como sea posible, para que el valor promedio pequeña como sea posible, para que el valor promedio se aproxime al de referencia, es decir, la recuperación se aproxime al de referencia, es decir, la recuperación del analito debe acercarse al 100%.del analito debe acercarse al 100%.

No deben confundirse exactitud y precisión. La No deben confundirse exactitud y precisión. La precisión está relacionada con la dispersión de una serie precisión está relacionada con la dispersión de una serie de mediciones, pero no da ninguna indicación de lo de mediciones, pero no da ninguna indicación de lo cerca que están del valor verdadero. Se pueden tener cerca que están del valor verdadero. Se pueden tener mediciones muy precisas pero poco exactas.mediciones muy precisas pero poco exactas.


Matemáticamente la exactitud se expresa en forma de porcentaje Matemáticamente la exactitud se expresa en forma de porcentaje de recuperación de la cantidad de analito presente en la muestra, o de recuperación de la cantidad de analito presente en la muestra, o bien en forma de diferencia entre el valor hallado y el valor bien en forma de diferencia entre el valor hallado y el valor verdadero. Si bien el valor verdadero de concentración no se verdadero. Si bien el valor verdadero de concentración no se conoce sino que solo puede estimarse, es posible preparar una conoce sino que solo puede estimarse, es posible preparar una muestra por un procedimiento más exacto, y utilizarla como muestra por un procedimiento más exacto, y utilizarla como referencia.referencia.

Recuperación: R= Recuperación: R= X_ X_ x 100 x 100 XX Donde:Donde: X = valor verdaderoX = valor verdadero X = promedio de las medicionesX = promedio de las mediciones

ExactitudExactitud

En el análisis de trazas (micro componentes), no siempre En el análisis de trazas (micro componentes), no siempre se alcanzan recuperaciones tan elevadas y se consideran se alcanzan recuperaciones tan elevadas y se consideran valores habituales de recuperación entre el 60 y 80%. valores habituales de recuperación entre el 60 y 80%. Para determinar si el valor medio hallado y el valor Para determinar si el valor medio hallado y el valor considerado verdadero no difieren significativamente, para considerado verdadero no difieren significativamente, para esto se efectúa un test estadístico, como lo es el test de esto se efectúa un test estadístico, como lo es el test de Student, para un nivel de confianza determinado. El test Student, para un nivel de confianza determinado. El test de Student emplea, al menos, 3 concentraciones del de Student emplea, al menos, 3 concentraciones del analito, preparadas por triplicado, comprendidas dentro del analito, preparadas por triplicado, comprendidas dentro del rango de linealidad del sistema, en general se utilizan rango de linealidad del sistema, en general se utilizan concentraciones correspondientes al 80, 100 y 120% del concentraciones correspondientes al 80, 100 y 120% del valor esperado. valor esperado.


En este caso, el valor de t se calcula como: En este caso, el valor de t se calcula como: texp = texp = (100-R)_ (100-R)_ RSD x RSD x nn Donde:Donde: R = recuperación porcentual.R = recuperación porcentual. RSD = desviación estándar relativa de las medicionesRSD = desviación estándar relativa de las mediciones n = número de repeticionesn = número de repeticiones Los valores de texp se comparan con los tabulados Los valores de texp se comparan con los tabulados

para el intervalo de confianza requerido con n-1 grados para el intervalo de confianza requerido con n-1 grados de libertad, y la exactitud se evalúa para el promedio de de libertad, y la exactitud se evalúa para el promedio de recuperación de todas las concentraciones. Si texp < recuperación de todas las concentraciones. Si texp < ttabla, no existe diferencia significativa con el 100% de ttabla, no existe diferencia significativa con el 100% de recuperación y la exactitud es apropiada. (1)recuperación y la exactitud es apropiada. (1)

Test de ANOVA- homogeneidad

ExactitudExactitud

SodioSodio

Método Espectrofotometría de Método Espectrofotometría de Absorción atómica Absorción atómica

Papel biológicoPapel biológico

El El catióncatión sodio (Na+) tiene un papel sodio (Na+) tiene un papel fundamental en el fundamental en el metabolismometabolismo celularcelular, por , por ejemplo, en la transmisión del ejemplo, en la transmisión del impulso nerviosoimpulso nervioso (mediante el mecanismo de (mediante el mecanismo de bomba de sodio-bomba de sodio-potasiopotasio). Mantiene el volumen y la osmolaridad. ). Mantiene el volumen y la osmolaridad. Participa, además del impulso nervioso, en la Participa, además del impulso nervioso, en la contracción muscular, el contracción muscular, el equilibrio ácido-baseequilibrio ácido-base y y la absorción de nutrientes por las la absorción de nutrientes por las célulascélulas..

La concentración La concentración plasmáticaplasmática de sodio es en de sodio es en condiciones normales de 135 - 145 mmol/l. El condiciones normales de 135 - 145 mmol/l. El aumento de sodio en la sangre se conoce como aumento de sodio en la sangre se conoce como hipernatremiahipernatremia y su disminución y su disminución hiponatremiahiponatremia

CompuestosCompuestos Los compuestos de sodio de mayor importancia industrial son:Los compuestos de sodio de mayor importancia industrial son: Sal comúnSal común (Na (NaClCl). ). Carbonato de sodioCarbonato de sodio (Na2 (Na2CCOO3). 3). Bicarbonato de sodioBicarbonato de sodio (Na (NaHHCO3). CO3). Sosa cáusticaSosa cáustica (NaOH). El hidróxido de sodio, más conocido como soda (NaOH). El hidróxido de sodio, más conocido como soda

cáustica, es una base muy fuerte y corrosiva usada en productos cáustica, es una base muy fuerte y corrosiva usada en productos destinados a la limpieza de desagües y al desengrase de hornos. Cuando destinados a la limpieza de desagües y al desengrase de hornos. Cuando se disuelve en agua produce una reacción muy exotérmica (-42,9 kJ/mol). se disuelve en agua produce una reacción muy exotérmica (-42,9 kJ/mol). Su poder corrosivo hace de la soda cáustica un compuesto letal para los Su poder corrosivo hace de la soda cáustica un compuesto letal para los tejidos vivos y los compuestos orgánicos, e incluso puede atacar al vidrio tejidos vivos y los compuestos orgánicos, e incluso puede atacar al vidrio en caso de que el contacto sea permanente. En presencia del dióxido de en caso de que el contacto sea permanente. En presencia del dióxido de carbono atmosférico produce carbonato de sodio, por lo que sus soluciones carbono atmosférico produce carbonato de sodio, por lo que sus soluciones son poco estables. son poco estables.

Nitrato de sodioNitrato de sodio (Na (NaNNO3). O3). Tiosulfato de sodioTiosulfato de sodio (Na2 (Na2SS2O3 2O3 ·· 5H2O). 5H2O). BóraxBórax (Na2 (Na2BB4O7 · 10H2O). 4O7 · 10H2O). Yoduro de sodioYoduro de sodio (NaI) (NaI)

Sodio en la dietaSodio en la dieta La mayor fuente de sodio es el cloruro de sodio o una ración común La mayor fuente de sodio es el cloruro de sodio o una ración común

de sal, del cual el sodio constituye el 40%. Sin embargo, todos los de sal, del cual el sodio constituye el 40%. Sin embargo, todos los alimentos contienen sodio en forma natural, siendo más alimentos contienen sodio en forma natural, siendo más predominante la concentración en alimentos de origen animal que predominante la concentración en alimentos de origen animal que vegetal. Aproximadamente 3 gr. de sodio están contenidos en los vegetal. Aproximadamente 3 gr. de sodio están contenidos en los alimentos que se consumen diariamente, sin la adición de cloruro alimentos que se consumen diariamente, sin la adición de cloruro de sodio o sal común, esto es importante considerarlo en pacientes de sodio o sal común, esto es importante considerarlo en pacientes que tengan una restricción o disminución en la ingesta de sal diaria que tengan una restricción o disminución en la ingesta de sal diaria (pacientes nefrópatas, diabéticos, (pacientes nefrópatas, diabéticos, hipertensoshipertensos). El requerimiento de ). El requerimiento de sodio es de 500 mg /día aproximadamente (3). La mayoría de las sodio es de 500 mg /día aproximadamente (3). La mayoría de las personas consumen más sodio que el que fisiológicamente personas consumen más sodio que el que fisiológicamente necesitan, para ciertas personas con presión arterial sensible al necesitan, para ciertas personas con presión arterial sensible al sodio, esta cantidad extra puede causar efectos negativos sobre la sodio, esta cantidad extra puede causar efectos negativos sobre la salud.salud.

REFERENCIASREFERENCIAS

AOAC Official Method 985.35. AOAC Official AOAC Official Method 985.35. AOAC Official Methods of Analysis (2005). Methods of Analysis (2005). Cp. 50, p.15.Cp. 50, p.15.

M Series Atomic Absorption, Manual de M Series Atomic Absorption, Manual de operación,1999-2006 Thermo Electron operación,1999-2006 Thermo Electron Manufacturing Ltda.Manufacturing Ltda.

Spectrometers Manual de Métodos, 9499 230 Spectrometers Manual de Métodos, 9499 230 24011, Issue 4 280804. Thermo Electron 24011, Issue 4 280804. Thermo Electron CorporationCorporation

Optimización del equipoOptimización del equipo

1.- Realizar la puesta a punto y optimización de las condiciones del 1.- Realizar la puesta a punto y optimización de las condiciones del espectrofotómetro (ajuste de quemador y lámpara) para el metal a determinar espectrofotómetro (ajuste de quemador y lámpara) para el metal a determinar siguiendo las indicaciones del manual o instructivo del equipo de medición.siguiendo las indicaciones del manual o instructivo del equipo de medición.

2. Aspirar por el capilar del quemador blanco y haga autocero. Ajustar la sensibilidad 2. Aspirar por el capilar del quemador blanco y haga autocero. Ajustar la sensibilidad con concentración de estándar referencial indicado en el manual para lograr la con concentración de estándar referencial indicado en el manual para lograr la máxima sensibilidad.máxima sensibilidad.

3. Aspirar las soluciones estándares de la curva de calibración en orden decreciente 3. Aspirar las soluciones estándares de la curva de calibración en orden decreciente por el capilar del quemador y leer en E.A.A. Para realizar la calibración se deben por el capilar del quemador y leer en E.A.A. Para realizar la calibración se deben usar a lo menos 3 estándar y un blanco. El coeficiente de correlación de la curva de usar a lo menos 3 estándar y un blanco. El coeficiente de correlación de la curva de regresión lineal debe ser regresión lineal debe ser >> 0,99. 0,99.

4. Aceptar curva de calibración, aspirar un material de referencia control o una 4. Aceptar curva de calibración, aspirar un material de referencia control o una solución control del analito a analizar, verificar que se encuentra dentro del rango de solución control del analito a analizar, verificar que se encuentra dentro del rango de aceptabilidad.aceptabilidad.

5. Proceder a realizar las lecturas de las muestras en el EAA.5. Proceder a realizar las lecturas de las muestras en el EAA. 6. Las lecturas son obtenidas por interpolación desde la curva de calibración y están 6. Las lecturas son obtenidas por interpolación desde la curva de calibración y están

expresados en mg/L del analito correspondiente.expresados en mg/L del analito correspondiente. 7. En caso, de que el valor este fuera de rango del máximo de la curva de 7. En caso, de que el valor este fuera de rango del máximo de la curva de

calibración, realice una dilución y registre el valor del factor de dilución (F.D.) calibración, realice una dilución y registre el valor del factor de dilución (F.D.) aplicado.aplicado.

8. Registre los valores obtenidos.8. Registre los valores obtenidos.

ReactivosReactivos

6.3.1. Solución estándar stock comercial de multielementos de metales, 100 mg/L, certificada.6.3.1. Solución estándar stock comercial de multielementos de metales, 100 mg/L, certificada. 6.3.2. Solución estándar stock comercial de Sodio 1000 mg/L, certificada.6.3.2. Solución estándar stock comercial de Sodio 1000 mg/L, certificada. 6.3.3. Gases calidad AAS: Acetileno 99.99% , Oxido nitroso 99.99%. 6.3.3. Gases calidad AAS: Acetileno 99.99% , Oxido nitroso 99.99%. 6.3.4. Agua grado reactivo, destilada o desionizada, tipo I.6.3.4. Agua grado reactivo, destilada o desionizada, tipo I. 6.3.5. Acido nítrico (HNO3) 65% 14 N, calidad AAS.(suprapur)6.3.5. Acido nítrico (HNO3) 65% 14 N, calidad AAS.(suprapur) 6.3.6. Acido clorhídrico (HCl) 37%, p.a.6.3.6. Acido clorhídrico (HCl) 37%, p.a. 6.3.7. Oxido de lantano (La2O3), 99.99%, calidad AAS.6.3.7. Oxido de lantano (La2O3), 99.99%, calidad AAS. 6.3.8. Solución de cloruro de lantano ( LaCl3, 1% p/v): Pesar 11,7 g (+/- 100mg) de La2O3 y 6.3.8. Solución de cloruro de lantano ( LaCl3, 1% p/v): Pesar 11,7 g (+/- 100mg) de La2O3 y

llevar a un matraz aforado de 1L, agregar un poco de agua grado reactivo para disolver el polvo, llevar a un matraz aforado de 1L, agregar un poco de agua grado reactivo para disolver el polvo, agregar bajo campana lentamente 50 mL de HCl 37% ( Precaución: ¡Reacción exotérmica!). agregar bajo campana lentamente 50 mL de HCl 37% ( Precaución: ¡Reacción exotérmica!). Agitar suavemente, hasta disolver todo el reactivo y luego aforar con agua grado reactivo. Agitar suavemente, hasta disolver todo el reactivo y luego aforar con agua grado reactivo. Estable 6 meses a temperatura ambiente.Estable 6 meses a temperatura ambiente.

6.3.9. Solución de ácido nítrico 20% v/v para eliminación de trazas en lavado de material: En un 6.3.9. Solución de ácido nítrico 20% v/v para eliminación de trazas en lavado de material: En un contenedor de plástico para lavar material, agregar 5 l de agua grado reactivo, luego, medir 1L contenedor de plástico para lavar material, agregar 5 l de agua grado reactivo, luego, medir 1L de HNO3 65% con una probeta, verter agitando lentamente al contenedor con el agua grado de HNO3 65% con una probeta, verter agitando lentamente al contenedor con el agua grado reactivo y mezclar suavemente.reactivo y mezclar suavemente.

6.3.10. Solución de ácido nítrico 1M: en un matraz de 1 L agregar unos 200 mL de agua grado 6.3.10. Solución de ácido nítrico 1M: en un matraz de 1 L agregar unos 200 mL de agua grado reactivo, luego medir 71,5 mL de HNO3 65% 14N y agregar bajo campana lentamente al matraz reactivo, luego medir 71,5 mL de HNO3 65% 14N y agregar bajo campana lentamente al matraz (Precaución: ¡Reacción exotérmica!), aforar con agua grado reactivo y agitar. Almacenar en (Precaución: ¡Reacción exotérmica!), aforar con agua grado reactivo y agitar. Almacenar en frasco vidrio o plástico ámbar. Duración 6 meses a temperatura ambiente. frasco vidrio o plástico ámbar. Duración 6 meses a temperatura ambiente.

Para determinar la selectividad se Para determinar la selectividad se utilizó un material de referencia matriz utilizó un material de referencia matriz liquida multielementos trazables al NIST, liquida multielementos trazables al NIST, con adición de oxido de lantano acorde a con adición de oxido de lantano acorde a la metodología analítica, con lo cual se la metodología analítica, con lo cual se pudo observar que el método presenta pudo observar que el método presenta una buena selectividad. una buena selectividad.

Selectividad SodioSelectividad Sodio

Determinación de SodioDeterminación de Sodio Digestión de la muestraDigestión de la muestra

Moler y homogeneizar la muestra ..Moler y homogeneizar la muestra .. Pesar exactamente en un crisol Pesar exactamente en un crisol ++ 3 g de muestra dependiendo de 3 g de muestra dependiendo de

la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso.la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso. Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora, Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora,

estufa o mufla a 100º C por 30 minutos.estufa o mufla a 100º C por 30 minutos. Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 525ºC por un Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 525ºC por un

periodo de 3 a 5 hrs (periodo de 3 a 5 hrs (<< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 mL aproximadamente de HNO3 65%, colocar el crisol destapado en mL aproximadamente de HNO3 65%, colocar el crisol destapado en placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar nuevamente mufla a 525ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.nuevamente mufla a 525ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.

Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HNO3 1M en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de HNO3 1M en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con porciones de alrededor de 3 mL de HNO3 1M, agregar al matraz 5 porciones de alrededor de 3 mL de HNO3 1M, agregar al matraz 5 mL de LaCl3, 1% p/v y aforar con HNO31M. La solución esta lista mL de LaCl3, 1% p/v y aforar con HNO31M. La solución esta lista para ser leída.para ser leída.

Sodio 1Sodio 1

Sodio 2Sodio 2

Hierro Hierro

Método Espectrofotometría de Método Espectrofotometría de Absorción atómica con LlamaAbsorción atómica con Llama

Metabolismo del hierro Metabolismo del hierro Aunque solo existe en pequeñas cantidades en los seres vivos, el hierro ha asumido en papel Aunque solo existe en pequeñas cantidades en los seres vivos, el hierro ha asumido en papel

vital en el crecimiento y en la supervivencia de los mismos y es necesario no solo para lograr vital en el crecimiento y en la supervivencia de los mismos y es necesario no solo para lograr una adecuada oxigenacion tisular sino también para el una adecuada oxigenacion tisular sino también para el metabolismometabolismo de la mayor parte de las de la mayor parte de las célulascélulas. El hierro es el elemento numero 26 en la . El hierro es el elemento numero 26 en la tabla periódicatabla periódica y tiene un y tiene un peso atómicopeso atómico de de 55,85. Es el cuarto elemento en abundancia y el segundo metal más abundante en la corteza 55,85. Es el cuarto elemento en abundancia y el segundo metal más abundante en la corteza terrestre. El hierro fue seleccionado en la evolución de los tiempos de entre muchos metales terrestre. El hierro fue seleccionado en la evolución de los tiempos de entre muchos metales transicionales para formar la ENERGIA VITAL en la fisiología de los vertebrados.transicionales para formar la ENERGIA VITAL en la fisiología de los vertebrados.

En la actualidad con un incremento en el En la actualidad con un incremento en el oxigenooxigeno atmosférico el hierro se encuentra en el medio atmosférico el hierro se encuentra en el medio ambiente casi exclusivamente en forma oxidada (ó ferrica ó Fe+++) y en esta forma es poco ambiente casi exclusivamente en forma oxidada (ó ferrica ó Fe+++) y en esta forma es poco utilizable.utilizable.

En los adultos sanos el hierro corporal total es de 3 a 4 gramos ó 35 mg/kg en las mujeres a 50 En los adultos sanos el hierro corporal total es de 3 a 4 gramos ó 35 mg/kg en las mujeres a 50 mg/kg en los hombre se encuentra distribuido en dos formas:mg/kg en los hombre se encuentra distribuido en dos formas:

70% como hierro funcional (2.8g):70% como hierro funcional (2.8g): EritrocitosEritrocitos (65%). (65%). Tisular: mioglobinas (4%). Tisular: mioglobinas (4%). EnzimasEnzimas dependientes del hierro (hem y no hem): 1% dependientes del hierro (hem y no hem): 1% Estas son enzimas esenciales para la función de las Estas son enzimas esenciales para la función de las mitocondriasmitocondrias y que controlan la oxidación y que controlan la oxidación

intracelular (citocromos, oxidasas del citrocromo, catalasas, peroxidasas).intracelular (citocromos, oxidasas del citrocromo, catalasas, peroxidasas). Transferrina (0.1%), la cual se encuentra normalmente saturada en 1/3 con hierro.Transferrina (0.1%), la cual se encuentra normalmente saturada en 1/3 con hierro. La mayor atención con relación a este tipo de hierro se ha enfocado hacia el eritrón, ya que su La mayor atención con relación a este tipo de hierro se ha enfocado hacia el eritrón, ya que su

estatus de hierro puede ser fácilmente medible y constituye la principal fracción del hierro estatus de hierro puede ser fácilmente medible y constituye la principal fracción del hierro corporal.corporal.

30% como hierro de depósito (1g):30% como hierro de depósito (1g): FerritinaFerritina (2/3). (2/3). Hemosiderina (1/3). Hemosiderina (1/3). Hemoglobina: transporta el oxigeno a las celulas. Hemoglobina: transporta el oxigeno a las celulas. Transferrina: transporta el hierro a través del plasma. Transferrina: transporta el hierro a través del plasma. Ferritina: principal forma de deposito del hierro en los tejidos. Ferritina: principal forma de deposito del hierro en los tejidos. Estudios recientes de disponibilidad del hierro de los alimentos han demostrado que el hierro del Estudios recientes de disponibilidad del hierro de los alimentos han demostrado que el hierro del

hem es absorbido bien, pero el hierro no hem se absorbe en general muy pobremente y este hem es absorbido bien, pero el hierro no hem se absorbe en general muy pobremente y este ultimo es el hierro que predomina en la dieta de gran cantidad de gente en el mundo.[ultimo es el hierro que predomina en la dieta de gran cantidad de gente en el mundo.[cita requeridacita requerida]]

Hem: como hemoglobina y mioglobina, presente principalmente en la carne y derivados. No Hem: como hemoglobina y mioglobina, presente principalmente en la carne y derivados. No hem.hem.

La absorción del hierro hem no es afectada por ningun factor ni dietetico, ni de secreción La absorción del hierro hem no es afectada por ningun factor ni dietetico, ni de secreción gastrointestinal. Se absorbe tal cual dentro del anillo porfirinico. El hierro es liberado dentro de gastrointestinal. Se absorbe tal cual dentro del anillo porfirinico. El hierro es liberado dentro de las celulas de la mucosa por la HEM oxigenasa, enzima que abunda en las celulas intestinales las celulas de la mucosa por la HEM oxigenasa, enzima que abunda en las celulas intestinales del duodeno.del duodeno.

Las absorción del hierro no hem, por el contrario se encuentra afectada por una gran contidad de Las absorción del hierro no hem, por el contrario se encuentra afectada por una gran contidad de factores dieteticos y de secreción gastrointestinal que se analizanran posteriormente.factores dieteticos y de secreción gastrointestinal que se analizanran posteriormente.

El hierro procedente de la dieta, especialmente el no hem, es hierro férrico y debe ser convertido El hierro procedente de la dieta, especialmente el no hem, es hierro férrico y debe ser convertido en hierro ferroso a nivel gástrico antes que ocurra su absorción en esta forma (hierro ferroso) a en hierro ferroso a nivel gástrico antes que ocurra su absorción en esta forma (hierro ferroso) a nivel duodenal principalmente.nivel duodenal principalmente.

Otros factores, independientes de la dieta que pueden influir en la absorción del hierro son:Otros factores, independientes de la dieta que pueden influir en la absorción del hierro son:

Funciones HierroFunciones Hierro El hierro se encuentra en prácticamente todos los seres vivos y cumple numerosas y variadas funciones.El hierro se encuentra en prácticamente todos los seres vivos y cumple numerosas y variadas funciones. Hay distintas Hay distintas proteínasproteínas que contienen el que contienen el grupo grupo hemohemo, que consiste en el , que consiste en el ligandoligando porfirinaporfirina con un átomo de hierro. con un átomo de hierro.

Algunos ejemplos: Algunos ejemplos: La La hemoglobinahemoglobina y la y la mioglobinamioglobina; la primera transporta oxígeno, O2, y la segunda lo almacena. ; la primera transporta oxígeno, O2, y la segunda lo almacena. Los Los citocromoscitocromos; los citocromos c catalizan la reducción de oxígeno a agua. Los citocromos P450 catalizan la ; los citocromos c catalizan la reducción de oxígeno a agua. Los citocromos P450 catalizan la

oxidación de compuestos hidrofóbicos, como fármacos o drogas, para que puedan ser excretados, y participan oxidación de compuestos hidrofóbicos, como fármacos o drogas, para que puedan ser excretados, y participan en la síntesis de distintas moléculas. en la síntesis de distintas moléculas.

Las Las peroxidasasperoxidasas y y catalasascatalasas catalizan la oxidación de peróxidos, H2O2, que son tóxicos. catalizan la oxidación de peróxidos, H2O2, que son tóxicos.

Ejemplo de centro de una proteína de Fe/S (Ejemplo de centro de una proteína de Fe/S (ferredoxinaferredoxina)) Las proteínas de hierro/azufre (Fe/S) participan en procesos de transferencia de electrones. Las proteínas de hierro/azufre (Fe/S) participan en procesos de transferencia de electrones. También se puede encontrar proteínas en donde átomos de hierro se enlazan entre sí a través de enlaces puente de También se puede encontrar proteínas en donde átomos de hierro se enlazan entre sí a través de enlaces puente de

oxígeno. Se denominan proteínas Fe-O-Fe. Algunos ejemplos: oxígeno. Se denominan proteínas Fe-O-Fe. Algunos ejemplos: Las Las bacteriasbacterias metanotróficas, que emplean el metano, CH4, como fuente de energía y de carbono, usan metanotróficas, que emplean el metano, CH4, como fuente de energía y de carbono, usan

proteínas de este tipo, llamadas proteínas de este tipo, llamadas monooxigenasasmonooxigenasas, para catalizar la oxidación de este metano. , para catalizar la oxidación de este metano. La La hemeritrinahemeritrina transporta oxígeno en algunos organismos marinos. transporta oxígeno en algunos organismos marinos. Algunas Algunas ribonucleótido ribonucleótido reductasasreductasas contienen hierro. Catalizan la formación de contienen hierro. Catalizan la formación de desoxinucleótidosdesoxinucleótidos. .

Los animales para transportar el hierro dentro del cuerpo emplean unas proteínas llamadas Los animales para transportar el hierro dentro del cuerpo emplean unas proteínas llamadas transferrinastransferrinas. Para . Para almacenarlo emplean la almacenarlo emplean la ferritinaferritina y la y la hemosiderinahemosiderina. El hierro entra en el organismo al ser absorbido en el intestino . El hierro entra en el organismo al ser absorbido en el intestino delgado y es transportado o almacenado por esas proteínas. La mayor parte del hierro se reutiliza y muy poco se delgado y es transportado o almacenado por esas proteínas. La mayor parte del hierro se reutiliza y muy poco se excreta.excreta.

Tanto el exceso como el defecto de hierro pueden provocar problemas en el organismo. El envenamiento por hierro Tanto el exceso como el defecto de hierro pueden provocar problemas en el organismo. El envenamiento por hierro ocurre debido a la ingesta exagerada de esté (como suplemento en el tratamiento de ocurre debido a la ingesta exagerada de esté (como suplemento en el tratamiento de anemiasanemias).).

La La hemocromatosishemocromatosis corresponde a una enfermedad de origen genético, en la cual ocurre una excesiva absorción del corresponde a una enfermedad de origen genético, en la cual ocurre una excesiva absorción del hierro, el cual se deposita en el hierro, el cual se deposita en el hígadohígado, causando disfunción de este y eventualmente llegando a la , causando disfunción de este y eventualmente llegando a la cirrosiscirrosis hepática. hepática. En las transfusiones de sangre se emplean ligandos que forman con el hierro complejos de una alta estabilidad para En las transfusiones de sangre se emplean ligandos que forman con el hierro complejos de una alta estabilidad para evitar que quede demasiado hierro libre.evitar que quede demasiado hierro libre.

Estos ligandos se conocen como Estos ligandos se conocen como sideróforossideróforos. Muchos microorganismos emplean estos sideróforos para captar el . Muchos microorganismos emplean estos sideróforos para captar el hierro que necesitan. También se pueden emplear como antibióticos, pues no dejan hierro libre disponiblehierro que necesitan. También se pueden emplear como antibióticos, pues no dejan hierro libre disponible..


Official methods of analysis AOAC 15 th Official methods of analysis AOAC 15 th edition, vol 2, pág 1106,1107, año 1990edition, vol 2, pág 1106,1107, año 1990

M Series Atomic Absorption, Manual de M Series Atomic Absorption, Manual de operación,1999-2006 Thermo Electron operación,1999-2006 Thermo Electron Manufacturing Ltda.Manufacturing Ltda.

Spectrometers Manual de Métodos, Spectrometers Manual de Métodos, 9499 230 24011, Issue 4 280804. 9499 230 24011, Issue 4 280804. Thermo Electron CorporationThermo Electron Corporation

SelectividadSelectividad

Dada que las líneas de emisión de la lámpara del Dada que las líneas de emisión de la lámpara del cátodo hueco de Fe son muy estrechas es rara la cátodo hueco de Fe son muy estrechas es rara la interferencia. Si interfiere en la dispersión de la luz la interferencia. Si interfiere en la dispersión de la luz la combustión incompleta de la matriz orgánica o combustión incompleta de la matriz orgánica o Interferente espectral hierro 213,859 nm y el Zinc Interferente espectral hierro 213,859 nm y el Zinc 213,856 lo cual produce una sobreposición de 0,003 nm213,856 lo cual produce una sobreposición de 0,003 nm

Para determinar la selectividad se utilizó una matriz de Para determinar la selectividad se utilizó una matriz de harina sin fortificar (grado de extracción, 78%), y una harina sin fortificar (grado de extracción, 78%), y una matriz de harina con adición de estándar de hierro y matriz de harina con adición de estándar de hierro y sulfato y pirofosfato de hierro con lo cual se pudo sulfato y pirofosfato de hierro con lo cual se pudo observar que el método presenta una buena observar que el método presenta una buena selectividad, ya que las matrices no se ven afectadas selectividad, ya que las matrices no se ven afectadas por la presencia de otros analitos interferentespor la presencia de otros analitos interferentes

Reactivos, insumosReactivos, insumosMatraces aforados de 50 mLMatraces aforados de 50 mLPisetaPisetaEspátula, toalla absorbente, plumón permanenteEspátula, toalla absorbente, plumón permanenteCápsulas de porcelana para digestión de 25cm de diámetroCápsulas de porcelana para digestión de 25cm de diámetroElementos de seguridad como guantes y anteojosElementos de seguridad como guantes y anteojos

Balanza analítica sensibilidad 0.1 mgBalanza analítica sensibilidad 0.1 mg Campana de extracción de gasesCampana de extracción de gases Espectrofotómetro de absorción atómica con llamaEspectrofotómetro de absorción atómica con llama Homogeneizador de muestrasHomogeneizador de muestras Plancha calefactoraPlancha calefactora Agua para análisis, desionizadaAgua para análisis, desionizada Ácido clorhídrico 37 % p.a.Ácido clorhídrico 37 % p.a. Ácido nítrico 65% p.aÁcido nítrico 65% p.a Estándar de Hierro o multielementosEstándar de Hierro o multielementos Lámpara de hierroLámpara de hierro Micropipeta de 100ul a 1000 ulMicropipeta de 100ul a 1000 ul

Curva de calibración de Curva de calibración de estándaresestándares

1.- Estándares de hierro solución concentrada de 1.- Estándares de hierro solución concentrada de 1000 mg/L. o St multielemenos 100 ppm1000 mg/L. o St multielemenos 100 ppm2.- Estándar de 5 mg/L: tomar 0,5 mL del estándar 2.- Estándar de 5 mg/L: tomar 0,5 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada.concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada.3.- Estándar de 2 mg/L: tomar 0,2 mL del estándar 3.- Estándar de 2 mg/L: tomar 0,2 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada.concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada.

4.- Estándar de 1 mg/L: tomar 0,1 mL del estándar 4.- Estándar de 1 mg/L: tomar 0,1 mL del estándar concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado de 1000 mg/L + 5 mL de HCL concentrado y aforar a 100 mL con agua desionizadaconcentrado y aforar a 100 mL con agua desionizada

Condiciones del equipo de FLAACondiciones del equipo de FLAA

Longitud de Onda 248,3 nmLongitud de Onda 248,3 nm Franja de paso (slite) 0,2 nmFranja de paso (slite) 0,2 nm Tipo de Llama Aire-acetilenoTipo de Llama Aire-acetileno Flujo de Combustible 0,8 a1,0 L/minFlujo de Combustible 0,8 a1,0 L/min Corriente de la lámpara 75Corriente de la lámpara 75 Tipo de señal ContinuaTipo de señal Continua T° de ignición 800°CT° de ignición 800°C T° de atomización 2300 °CT° de atomización 2300 °C Corrector de background onCorrector de background on

Determinación de HierroDeterminación de Hierro Digestión de la muestraDigestión de la muestra

Moler y homogeneizar la muestra ..Moler y homogeneizar la muestra .. Pesar exactamente en un crisol Pesar exactamente en un crisol ++ 3 g de muestra dependiendo de 3 g de muestra dependiendo de

la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso.la concentración esperada del o los analitos. Registre el peso. Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora, Colocar el crisol con la muestra sin tapar en placa calefactora,

estufa o mufla a 100ºC por 30 minutos.estufa o mufla a 100ºC por 30 minutos. Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 550ºC por un Colocar el crisol con la muestra tapado en mufla a 550ºC por un

periodo de 5 a 6 hrs (periodo de 5 a 6 hrs (<< 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De 8 hrs), hasta obtener cenizas blancas. De obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 obtenerse cenizas grises dejar enfriar y agregar al crisol de 0,5 a 3 mL aproximadamente de HCL 1:1 colocar el crisol destapado en mL aproximadamente de HCL 1:1 colocar el crisol destapado en placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar placa calefactora a unos 100ºC, hasta evaporar. (realizar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar procedimiento bajo campana extractora de gases).Luego llevar nuevamente mufla a 550ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.nuevamente mufla a 550ºC por 1 a 2 hrs hasta cenizas blancas.

Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HCL Digerir las cenizas blancas contenidas en el crisol con 5 mL de HCL 1:1 en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas 1:1 en placa calefactora cuantitativamente llevar el licor de cenizas a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con porciones a un matraz aforado de 50 mL, a través de 2 lavados con porciones de alrededor de 3 mL de HCL 1:1, aforar con agua. La solución esta de alrededor de 3 mL de HCL 1:1, aforar con agua. La solución esta lista para ser leída.lista para ser leída.

Test de ANOVA- homogeneidad

Interpretación, cálculos, expresión e Interpretación, cálculos, expresión e informeinformede los resultadosde los resultados

Para calcular la concentración de sodio o hierro en la muestra en Para calcular la concentración de sodio o hierro en la muestra en mg/kg, aplique la siguiente formula:mg/kg, aplique la siguiente formula:

mg/Kg del analito = mg/Kg del analito = L x 50 x F.D.L x 50 x F.D. PP L: Lectura de la concentración en mg/L obtenida por la interpolación L: Lectura de la concentración en mg/L obtenida por la interpolación

de la curva de calibración.de la curva de calibración. FD: Factor de dilución. En caso de no realizar ninguna dilución, es FD: Factor de dilución. En caso de no realizar ninguna dilución, es

igual a 1.igual a 1. P: Peso de la muestra en gramosP: Peso de la muestra en gramos Los resultados obtenidos se expresan en muestras sólidas mg/Kg o Los resultados obtenidos se expresan en muestras sólidas mg/Kg o

en muestras líquidas mg/Len muestras líquidas mg/L ENO sodio en mg/100g y mg/porción de consumo habitualENO sodio en mg/100g y mg/porción de consumo habitual

ÁCIDO ASCÓRBICOÁCIDO ASCÓRBICO

Método J.TillmanMétodo J.Tillman

La La Vitamina CVitamina C o o enantiómero L enantiómero L del ácido ascórbicodel ácido ascórbico,,

es un es un nutriente esencialnutriente esencial para los para los primates superioresprimates superiores y y un pequeño número de otras especies. La presencia de un pequeño número de otras especies. La presencia de esta vitamina es requerida para un cierto número de esta vitamina es requerida para un cierto número de reacciones metabólicasreacciones metabólicas en todos los animales y plantas en todos los animales y plantas y es creada internamente por casi todos los organismos, y es creada internamente por casi todos los organismos, siendo los humanos una notable excepción. Es siendo los humanos una notable excepción. Es ampliamente sabido que su deficiencia causa ampliamente sabido que su deficiencia causa escorbutoescorbuto en humanos,en humanos,11 22 33 de ahí el nombre de de ahí el nombre de ascórbicoascórbico que se que se le da al ácido. Es también ampliamente usado como le da al ácido. Es también ampliamente usado como aditivo alimentarioaditivo alimentario..

El El farmacóforofarmacóforo de la vitamina C es el de la vitamina C es el ionion ascorbato. En ascorbato. En organismos vivos, el ascorbato es un organismos vivos, el ascorbato es un antioxidanteantioxidante, pues , pues protege el cuerpo contra la protege el cuerpo contra la oxidaciónoxidación, y es un cofactor , y es un cofactor en varias reaciones en varias reaciones enzimáticasenzimáticas vitales. vitales.

ayuda al desarrollo de ayuda al desarrollo de dientesdientes y y encíasencías, , huesoshuesos, , cartílagoscartílagos, a la absorción del , a la absorción del hierrohierro, al crecimiento y , al crecimiento y reparación del reparación del tejido conectivotejido conectivo normal (piel más suave, normal (piel más suave, por la union de las células que necesitan esta vitamina por la union de las células que necesitan esta vitamina para unirse), a la producción de para unirse), a la producción de colágenocolágeno (actuando (actuando como cofactor en la como cofactor en la hidroxilaciónhidroxilación de los de los aminoácidosaminoácidos lisinalisina y y prolinaprolina), metabolización de ), metabolización de grasasgrasas, la , la cicatrizacióncicatrización de heridas. Su carencia ocasiona el de heridas. Su carencia ocasiona el escorbutoescorbuto, también resulta esta vitamina un factor , también resulta esta vitamina un factor potenciador para el potenciador para el sistema inmunesistema inmune aunque algunos aunque algunos estudios ponen en duda esta última actividad de la estudios ponen en duda esta última actividad de la vitamina C.vitamina C.

Efectos Efectos La vitamina CLa vitamina C

Indicaciones Indicaciones

La Vitamina C es esencial para el desarrollo y mantenimiento del organismo, por lo que su consumo es La Vitamina C es esencial para el desarrollo y mantenimiento del organismo, por lo que su consumo es obligatorio para mantener una buena salud.obligatorio para mantener una buena salud.

La vitamina C sirve para:La vitamina C sirve para: Evitar el envejecimiento prematuro (proteger el Evitar el envejecimiento prematuro (proteger el tejido conectivotejido conectivo, la "piel" de los vasos sanguíneos). , la "piel" de los vasos sanguíneos). Facilita la absorción de otras vitaminas y minerales. Facilita la absorción de otras vitaminas y minerales. AntioxidanteAntioxidante. . Evita las enfermedades degenerativas tales como Evita las enfermedades degenerativas tales como arteriosclerosisarteriosclerosis, , cáncercáncer, , enfermedad de Alzheimerenfermedad de Alzheimer. . Evita las enfermedades cardíacas (tema tratado más adelante). Evita las enfermedades cardíacas (tema tratado más adelante). Desde los descubrimientos de Desde los descubrimientos de Linus PaulingLinus Pauling se aseveraba que la vitamina C reforzaba el se aseveraba que la vitamina C reforzaba el sistema inmunesistema inmune y y

prevenía la gripe, pero investigaciones realizadas en los prevenía la gripe, pero investigaciones realizadas en los 1990s1990s parecen refutar esta teoría y, en todo caso, han parecen refutar esta teoría y, en todo caso, han demostrado que el consumo en exceso (a diferencia de lo preconizado por Pauling y sus seguidores) de demostrado que el consumo en exceso (a diferencia de lo preconizado por Pauling y sus seguidores) de suplementos de vitamina C son poco recomendables, porque,entre otras cosas, un consumo excesivo puede suplementos de vitamina C son poco recomendables, porque,entre otras cosas, un consumo excesivo puede provocar alteraciones gastrointestinales. provocar alteraciones gastrointestinales.

Requerimientos diarios Requerimientos diarios El ser humano parece ser extremadamente eficiente en la reutilización de la vitamina C, por lo que sus El ser humano parece ser extremadamente eficiente en la reutilización de la vitamina C, por lo que sus

requerimientos son 50 veces menores que en el resto de los simios. Al ser una vitamina hidrosoluble su requerimientos son 50 veces menores que en el resto de los simios. Al ser una vitamina hidrosoluble su eliminación por el eliminación por el riñónriñón por por diuresisdiuresis es extremadamente eficaz, por lo que los excesos se pueden eliminar en es extremadamente eficaz, por lo que los excesos se pueden eliminar en menos de cuatro horas. Todo ello hace que haya muy poco consenso en cual es la cantidad mínima y la cantidad menos de cuatro horas. Todo ello hace que haya muy poco consenso en cual es la cantidad mínima y la cantidad máxima. Prueba de ellos damos las siguientes referencias:máxima. Prueba de ellos damos las siguientes referencias:

40 miligramos por día: 40 miligramos por día: FoodFood Standards Agency Standards Agency11 del Reino Unido del Reino Unido 45 miligramos por día: La 45 miligramos por día: La Organización Mundial de la SaludOrganización Mundial de la Salud44 60–95 miligramos por día: 60–95 miligramos por día: National Academy of SciencesNational Academy of Sciences55 de los Estados Unidos. Segun este organismo no se de los Estados Unidos. Segun este organismo no se

deben exceder los 2000 miligramos por día. deben exceder los 2000 miligramos por día. 400 miligramos por día: the 400 miligramos por día: the Linus Pauling Linus Pauling InstituteInstitute..66 1.000 miligramos por día: Profesor 1.000 miligramos por día: Profesor RocRoc OrdmanOrdman, para la investigación de los radicales libres., para la investigación de los radicales libres.77 3.000 miligramos por día 3.000 miligramos por día (hasta 300.000 mg para enfermos)(hasta 300.000 mg para enfermos): La : La Fundación para la vitamina CFundación para la vitamina C..88 6.000–12.000 miligramos por día: 6.000–12.000 miligramos por día: Thomas E. LevyThomas E. Levy, Colorado Integrative Medical Centre., Colorado Integrative Medical Centre.99 6.000–18.000 miligramos por día: Dosis que ingiere 6.000–18.000 miligramos por día: Dosis que ingiere Linus PaulingLinus Pauling..1010 3.000–200.000 miligramos por día: 3.000–200.000 miligramos por día: Robert CathcartRobert Cathcart va subiendo la dosis hasta que aparece una diarrea. va subiendo la dosis hasta que aparece una diarrea.

Entonces recomienda la dosis más elevada que no cause diarrea al paciente.Entonces recomienda la dosis más elevada que no cause diarrea al paciente.1111

Efectos AdversosEfectos Adversos

Se considera que las necesidades diarias Se considera que las necesidades diarias de ácido ascórbico para un adulto no de ácido ascórbico para un adulto no exceden de los 60 mg y que cantidades exceden de los 60 mg y que cantidades superiores a los 3 g diarios causan superiores a los 3 g diarios causan acidificación de la orina e incrementan el acidificación de la orina e incrementan el consiguiente riesgo de cálculos urinariosconsiguiente riesgo de cálculos urinarios

Otros UsosOtros Usos El ácido ascórbico y sus sales El ácido ascórbico y sus sales ascorbatosascorbatos de de sodiosodio, , potasiopotasio y y calciocalcio

se utilizan de forma generalizada como se utilizan de forma generalizada como antioxidantesantioxidantes y y aditivosaditivos. . Estos compuestos son solubles en agua por lo que no protegen a Estos compuestos son solubles en agua por lo que no protegen a las grasas de la oxidación; para este propósito pueden utilizarse los las grasas de la oxidación; para este propósito pueden utilizarse los ésteresésteres del ácido ascórbico del ácido ascórbico solublessolubles en grasas con en grasas con ácidos grasosácidos grasos de cadena larga (palmitato y estearato de ascorbilo).de cadena larga (palmitato y estearato de ascorbilo).

Principales fuentes naturales Principales fuentes naturales Las principales fuentes naturales de vitamina C que actualmente se Las principales fuentes naturales de vitamina C que actualmente se

conocen son todas vegetales, principalmente ciertas frutas (las que conocen son todas vegetales, principalmente ciertas frutas (las que poseen colores rojos o azulados suelen ser ricas en ácido poseen colores rojos o azulados suelen ser ricas en ácido ascórbico), a continuación se enumeran los principales vegetales ascórbico), a continuación se enumeran los principales vegetales que hacen aporte de esta vitamina: " — que hacen aporte de esta vitamina: " — grosella negragrosella negra ( (Ribes nigrumRibes nigrum), los ), los ajísajís, , chileschiles, , pimientospimientos, , morronesmorrones, , pimentonespimentones, el , el perejilperejil, la , la guayabaguayaba, el fruto , el fruto kiwikiwi, el , el brécolbrécol o o broccolibroccoli ( (Brassica oleracea italicaBrassica oleracea italica), el híbrido llamado ), el híbrido llamado loganberryloganberry, la , la grosellagrosella ((Ribes rubrumRibes rubrum) el ) el repollito de Bruselasrepollito de Bruselas también conocido como col también conocido como col de Bruselas, el de Bruselas, el gojigoji ( (Lycium barbarumLycium barbarum), el ), el lichilichi ( (Litchi chinensisLitchi chinensis) ) entre otros, sin embargo en gran parte del mundo de cultura entre otros, sin embargo en gran parte del mundo de cultura "Occidental" las fuentes más comunes para obtener vitamina C "Occidental" las fuentes más comunes para obtener vitamina C suelen ser los suelen ser los citruscitrus: : limónlimón, naranja, pomelo, bergamota y, fuera de , naranja, pomelo, bergamota y, fuera de los citrus, el tomate.los citrus, el tomate.

la vitamina C es una de las vitaminas que intervienen en el funcionamiento del la vitamina C es una de las vitaminas que intervienen en el funcionamiento del sistema inmunológico, como lo hacen la vitamina A y la tiamina. También es muy sistema inmunológico, como lo hacen la vitamina A y la tiamina. También es muy importante como vitamina antioxidante, lo que de una u otra manera protege a importante como vitamina antioxidante, lo que de una u otra manera protege a nuestro organismo de radicales libres u otras sustancias tóxicas. Por otro lado, al ser nuestro organismo de radicales libres u otras sustancias tóxicas. Por otro lado, al ser hidrosoluble, el exceso es fácilmente eliminado en la orina.hidrosoluble, el exceso es fácilmente eliminado en la orina.

Como curiosidad puede señalarse que esta vitamina sólo es esencial en unos pocos Como curiosidad puede señalarse que esta vitamina sólo es esencial en unos pocos animales: los monos antropoides, el ser humano que ha perdido la capacidad de animales: los monos antropoides, el ser humano que ha perdido la capacidad de sintetizarla naturalmente en su cuerpo; el ruiseñor chino, una especie de trucha, los sintetizarla naturalmente en su cuerpo; el ruiseñor chino, una especie de trucha, los cuyes y los murciélagos frugívoros.cuyes y los murciélagos frugívoros.

Tipos de vitamina Tipos de vitamina La vitamina C se divide en naturales y sintéticas. Las naturales se dividen en ácido La vitamina C se divide en naturales y sintéticas. Las naturales se dividen en ácido

ascórbico y ascorbato de sodio; por su parte las sintéticas pueden tener distintas ascórbico y ascorbato de sodio; por su parte las sintéticas pueden tener distintas variaciones.variaciones.

Las ventajas de la vitamina C sintéticas es su bajo precio y su fabricación pues su Las ventajas de la vitamina C sintéticas es su bajo precio y su fabricación pues su materia prima es el petróleo, sus desventajas son su baja efectividad y los efectos materia prima es el petróleo, sus desventajas son su baja efectividad y los efectos secundarios que conlleva el consumo de elementos minerales en reemplazo de secundarios que conlleva el consumo de elementos minerales en reemplazo de vegetales.vegetales.

En cambio, la vitamina C natural es sumamente efectiva, y de muy bajo precio pues En cambio, la vitamina C natural es sumamente efectiva, y de muy bajo precio pues está presente en casi toda las frutas y vegetales (cítricos de preferencia); su está presente en casi toda las frutas y vegetales (cítricos de preferencia); su problema radica en que al extraerse y convertirse en cristales toma un fuerte sabor a problema radica en que al extraerse y convertirse en cristales toma un fuerte sabor a limón no bien tolerado por personas con sensibilidad en su estomagolimón no bien tolerado por personas con sensibilidad en su estomago


Association of Official Analytical Chemists Association of Official Analytical Chemists 985.33 (1995)985.33 (1995)

United State Pharmacopeia U.S.P. XXIIIUnited State Pharmacopeia U.S.P. XXIII Methods for the determination of vitamins Methods for the determination of vitamins

in food, G. Brubacher Muller Mulot and in food, G. Brubacher Muller Mulot and A.T. SouthgateA.T. Southgate

Selectividad Ácido AscórbicoSelectividad Ácido Ascórbico Método J.TillmanMétodo J.Tillman

La determinación oxidimétrica no es La determinación oxidimétrica no es muy selectiva ya que la presencia de muy selectiva ya que la presencia de otros analitos interferentes (compuestos otros analitos interferentes (compuestos reductores, SO2,etc) tienden a producir reductores, SO2,etc) tienden a producir gastos elevados del titulante 2,6DFIF, con gastos elevados del titulante 2,6DFIF, con lo cual generalmente da como resultados lo cual generalmente da como resultados valores sobreestimados.valores sobreestimados.

El método es aplicable a productos con o El método es aplicable a productos con o sin almidón productos heterogéneos, sin almidón productos heterogéneos, verduras, frutas, leche y productos a base verduras, frutas, leche y productos a base de leche.de leche.

CAMPO DE APLICACIÓN Y ALCANCE

ReactivosReactivos

1.- Ácido L(+) ascórbico estándar1.- Ácido L(+) ascórbico estándar 2.- Ácido meta-fosfórico p.a2.- Ácido meta-fosfórico p.a 3.- Ácido acético p.a3.- Ácido acético p.a 4.- 2,6-diclorofenol-indofenol sal sódica p.a 4.- 2,6-diclorofenol-indofenol sal sódica p.a 5.- EDTA sal sódica del ácido etilendiaminotetraacético.5.- EDTA sal sódica del ácido etilendiaminotetraacético. 6.- 6.- Solución estándar de ácido ascórbico.- 1mg/mLSolución estándar de ácido ascórbico.- 1mg/mL. Pesar con exactitud . Pesar con exactitud

50 mg de Acido L(+) ascórbico estándar (U.S.P., B.P.). Transferir a un 50 mg de Acido L(+) ascórbico estándar (U.S.P., B.P.). Transferir a un matraz volumétrico de 50 mL. Diluir al volumen con la solución de ácido matraz volumétrico de 50 mL. Diluir al volumen con la solución de ácido meta-fosfórico al 2%.meta-fosfórico al 2%.

7.- Solución ácido meta-fosfórico.- Disolver con agitación 15 mg de pellets 7.- Solución ácido meta-fosfórico.- Disolver con agitación 15 mg de pellets de HPO3 glacial en 40 mL de ácido acético glacial y 150 mL de H2O. Aforar de HPO3 glacial en 40 mL de ácido acético glacial y 150 mL de H2O. Aforar a 250 mL con H2O y filtrar rápidamente a través de un papel filtro plegado a 250 mL con H2O y filtrar rápidamente a través de un papel filtro plegado cuantitativo (Whatman Nº 541, rápido, 18,5 cm u otro equivalente).cuantitativo (Whatman Nº 541, rápido, 18,5 cm u otro equivalente).

8.- Solución de EDTA.- Disolver con agitación 0,9 g de EDTA en 200 mL de 8.- Solución de EDTA.- Disolver con agitación 0,9 g de EDTA en 200 mL de H2O.H2O.

9.- 9.- Solución precipitante.-Solución precipitante.- Mezclar inmediatamente antes de su uso en Mezclar inmediatamente antes de su uso en volúmenes iguales de la solución de EDTA y ácido meta-fosfórico.volúmenes iguales de la solución de EDTA y ácido meta-fosfórico.

ExtracciónExtracción

Extracción del ácido ascórbico mediante ácido Extracción del ácido ascórbico mediante ácido meta-fosfórico, en donde el ácido ascórbico meta-fosfórico, en donde el ácido ascórbico reduce el indicador de oxido-reducción 2,6-reduce el indicador de oxido-reducción 2,6-diclorofenol-indofenol, eliminando el color azul diclorofenol-indofenol, eliminando el color azul inicial del compuesto en estado sólido en inicial del compuesto en estado sólido en solución neutra y alcalina; la solución en medio solución neutra y alcalina; la solución en medio ácido es de coloración rosada y se reduce al ácido es de coloración rosada y se reduce al derivado leuco, incoloro, el ácido ascórbico se derivado leuco, incoloro, el ácido ascórbico se oxida a ácido dehidroascórbico, lo cual permite oxida a ácido dehidroascórbico, lo cual permite su determinación por volumetría oxidimétricasu determinación por volumetría oxidimétrica

Disolver 0,0625 de sal sódica en 50 mL de Disolver 0,0625 de sal sódica en 50 mL de H2O en un matraz volumétrico de 250 mL H2O en un matraz volumétrico de 250 mL al cual se le adiciona previamente 0,0525 g al cual se le adiciona previamente 0,0525 g de NaHCO3 grado reactivo. Agite de NaHCO3 grado reactivo. Agite vigorosamente, cuando el colorante esté vigorosamente, cuando el colorante esté disuelto, diluya a 250 mL con H2O. Filtrar a disuelto, diluya a 250 mL con H2O. Filtrar a una botella ámbar utilizando el papel filtro. una botella ámbar utilizando el papel filtro. Guardar bajo refrigeración.Guardar bajo refrigeración.

Solución estándar 2,6-dicloro fenol-indo fenol sal sódica p.a.

Transfiera 2,0 mL de solución estándar Acido L(+) ascórbico a cada Transfiera 2,0 mL de solución estándar Acido L(+) ascórbico a cada uno de los 3 matraces erlenmeyer que contienen 5 mL de la uno de los 3 matraces erlenmeyer que contienen 5 mL de la solución precipitante cada uno. solución precipitante cada uno.

Empleando una bureta de 25 mL graduada en 0,05 mL y con una Empleando una bureta de 25 mL graduada en 0,05 mL y con una llave de vidrio o teflón, titular rápidamente con la solución estándar llave de vidrio o teflón, titular rápidamente con la solución estándar de indofenol hasta obtener una coloración rosada pálida que de indofenol hasta obtener una coloración rosada pálida que persista por 5 segundos.(Cada titulación debe requerir persista por 5 segundos.(Cada titulación debe requerir aproximadamente 15 mL, y debe corroborarse dentro de aproximadamente 15 mL, y debe corroborarse dentro de 0,1 mL). 0,1 mL).

Titule 3 blancos compuestos de 7 mL de solución precipitante más Titule 3 blancos compuestos de 7 mL de solución precipitante más 15 mL de H2O. El blanco promedio es 0,1 mL. 15 mL de H2O. El blanco promedio es 0,1 mL.

Calcule el equivalente del colorante indofenol (F), equivalente a Calcule el equivalente del colorante indofenol (F), equivalente a ácido ascórbico de un mL de la solución estándar de indofenol.ácido ascórbico de un mL de la solución estándar de indofenol.

mL DFIF de la titulación del estándar de ácido ascórbico - mL DFIF mL DFIF de la titulación del estándar de ácido ascórbico - mL DFIF de la titulación del blanco = mL DFIF equivalente a 2 mg de ácido de la titulación del blanco = mL DFIF equivalente a 2 mg de ácido ascórbico (A)ascórbico (A)

Valoración del título de la solución de 2,6 diclorofenol-indofenol sal sódica

Preparación de la porción de ensayoPreparación de la porción de ensayo.. Pesar 10 g con una precisión de 0,1 g una cantidad del Pesar 10 g con una precisión de 0,1 g una cantidad del

producto a analizar que contenga aproximadamente 5 a producto a analizar que contenga aproximadamente 5 a 10 mg de ácido ascórbico en un matraz de 100 mL con 10 mg de ácido ascórbico en un matraz de 100 mL con H2O.H2O.

Pipetear 20-40 mL de la disolución y un volumen igual Pipetear 20-40 mL de la disolución y un volumen igual de la solución precipitante a un vaso de precipitado de de la solución precipitante a un vaso de precipitado de 125 mL. Designar el volumen como v y el de la 125 mL. Designar el volumen como v y el de la disolución de la muestra como E. disolución de la muestra como E.

Mezclar y centrifugar a 5.000 rpm por 5 - 10 min.Mezclar y centrifugar a 5.000 rpm por 5 - 10 min. Filtrar el sobrenadante utilizando papel filtro. Filtrar el sobrenadante utilizando papel filtro. Designar al filtrado como la solución de ensayo. La Designar al filtrado como la solución de ensayo. La

preparación debe realizarse inmediatamente antes de la preparación debe realizarse inmediatamente antes de la determinación.determinación.

Productos sin o con poco almidón, Ej.leche en polvo

Ej. verdura, frutaEj. verdura, fruta Homogeneizar una muestra de 50 a 100 g Homogeneizar una muestra de 50 a 100 g

con un volumen de ácido meta-fosfórico con un volumen de ácido meta-fosfórico de 10% representando 1/5 del volumen de 10% representando 1/5 del volumen total es decir 50 mL de ácido meta-total es decir 50 mL de ácido meta-fosfórico para un matraz de 250 mL y fosfórico para un matraz de 250 mL y enrasar con H2O destilada.enrasar con H2O destilada.

Centrifugar y/o filtrar la solución obtenida Centrifugar y/o filtrar la solución obtenida sobre un filtro plegado. sobre un filtro plegado.

Productos heterogéneos

Pipetear tres alicuotas de 10 mL, de cada solución de Pipetear tres alicuotas de 10 mL, de cada solución de ensayo (V), llevar cada una de las alicuotas a matraces ensayo (V), llevar cada una de las alicuotas a matraces erlenmeyer separados y titular con el DFIF (X). erlenmeyer separados y titular con el DFIF (X).

En forma similar, titular 2 blancos compuestos cada uno En forma similar, titular 2 blancos compuestos cada uno de 10 mL de la solución precipitante y 10 mL de H2O. de 10 mL de la solución precipitante y 10 mL de H2O. Además agregué un volumen de H2O equivalente a los Además agregué un volumen de H2O equivalente a los mL de la solución estándar de indofenol usados en la mL de la solución estándar de indofenol usados en la titulación de la solución de ensayo. titulación de la solución de ensayo.

Titule con la solución estándar de indofenol hasta el Titule con la solución estándar de indofenol hasta el mismo color del punto final observado en la titulación de mismo color del punto final observado en la titulación de la alícuota estándar (B). El color rosa debe permanecer la alícuota estándar (B). El color rosa debe permanecer a lo menos 5 segundos.a lo menos 5 segundos.

Valoración

Cuantificación e Cuantificación e Identificación Identificación

Ejemplo leche en polvoEjemplo leche en polvo mg ácido ascórbico/100 g de muestra = (X-B) x (A/E) x (V/Y) x (100/0,10)mg ácido ascórbico/100 g de muestra = (X-B) x (A/E) x (V/Y) x (100/0,10) donde X = mL promedio obtenido en la titulación de ensayo; donde X = mL promedio obtenido en la titulación de ensayo; B = mL promedio obtenido de la titulación del blancoB = mL promedio obtenido de la titulación del blanco A = mg de ácido ascórbico equivalente a 1 mL de A = mg de ácido ascórbico equivalente a 1 mL de

solución estándar de indofenol solución estándar de indofenol E = volumen de la muestra disueltaE = volumen de la muestra disuelta V = volumen de la muestra de ensayo V = volumen de la muestra de ensayo Y = volumen de solución de ensayo titulada = 10 mLY = volumen de solución de ensayo titulada = 10 mL (100/0,10) = factor para expresar el contenido en 100 g de (100/0,10) = factor para expresar el contenido en 100 g de

producto final.producto final.

Expresión de Resultados.Expresión de Resultados. Expresar el contenido de ácido ascórbico en mg /100 g de producto final.Expresar el contenido de ácido ascórbico en mg /100 g de producto final.

ParámetrosParámetros

SodioSodio HierroHierro Ácido AscórbicoÁcido Ascórbico

SelectividadSelectividad BuenaBuena BuenaBuena Relativa (valoración visual Relativa (valoración visual oxidimétrica)oxidimétrica)

LinealidadLinealidad 0,9968 - 0,9950,9968 - 0,995 0,99950,9995 NANA

Rangos de linealidadRangos de linealidad 0,6-3,0 ppm - 0,2-1,5 ppm0,6-3,0 ppm - 0,2-1,5 ppm 0,5-5,0 ppm0,5-5,0 ppm NANA

% CV Sistema% CV Sistema

RepetibilidadRepetibilidad 0,010,01 0,020,02 NANA

ReproducibilidadReproducibilidad 0,10,1 0,20,2 NANA

% CV Método% CV Método

RepetibilidadRepetibilidad 4%4% 2,82,8 0,7%0,7%

ReproducibilidadReproducibilidad 15%15% 6,56,5 Entre analistas Entre analistas

No exceder de 1,2 mg/50mg/100gNo exceder de 1,2 mg/50mg/100g

Exactitud Exactitud (Recuperación)(Recuperación)

111-106 %111-106 % 100-104%100-104%

SensibilidadSensibilidad

LDLD Menor a 0,2 ppmMenor a 0,2 ppm 0,110,11 0,25 mg0,25 mg

LCLC Mayor a 0,2 ppmMayor a 0,2 ppm 0,380,38 1,5 mg1,5 mg

Control de CalidadControl de Calidad

Se efectuarán controles para comprobar la validez de los Se efectuarán controles para comprobar la validez de los ensayos realizados con el método analítico recogido en ensayos realizados con el método analítico recogido en este procedimiento. este procedimiento.

Nivel I: Nivel I: Ensayos de intercomparación, utilización de Ensayos de intercomparación, utilización de materiales de referencia certificados y patrones de materiales de referencia certificados y patrones de referencia certificados, según disponibilidad. referencia certificados, según disponibilidad.

Nivel II: Materiales de referencia con o sin certificación Nivel II: Materiales de referencia con o sin certificación externa y muestras fortificadas por el analista en la externa y muestras fortificadas por el analista en la validación.validación.

Nivel III. Durante el desarrollo de la serie de trabajo se Nivel III. Durante el desarrollo de la serie de trabajo se incluye:incluye:

Control de blanco al inicio de las lecturasControl de blanco al inicio de las lecturas Control de estándar de concentración conocida Control de estándar de concentración conocida Repetición del estándar como control por cada diez Repetición del estándar como control por cada diez

muestras.muestras.

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