HEMOGRAMA MANUAL
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HEMOGRAMA MANUAL
Bqco. Gonzalo A OjedaCátedra Hematología ClínicaFa.C.E.N.A-U.N.N.E2013
Definición
ES EL ESTUDIO CUALI Y CUANTITATIVO DE LOS ELEMENTOS
CORPUSCULARES DE LA SANGRECUANTITATIVO : Recuento de GR, GB Dosaje de Hb Índices Hematimétricos ( VCM, HCM, CHCM ) Fórmula Leucocitaria
CUALITATIVO Estudio Morfológico de la Serie Roja, Serie Blanca y Pq
Determinaciones Adicionales
RECUENTO DE Pq
Reticulocitos
VSG
ETAPA Pre-ANALÍTICA
Condiciones del Paciente
Tipo y Toma de Muestra
Condiciones del Paciente
NO NECESITA ESTAR ESTRICTAMENTE EN AYUNAS (se sugiere al menos 2 h).
NO HABER REALIZADO ACTIVIDAD FÍSICA INTENSA
PERMANECER PREFERENTEMENTE SENTADO DURANTE LA EXTRACCION
DATOS A TENER EN CUENTA
EDAD DX. PRESUNTIVO SEXO
REFERENTE A LA MUESTRA
TIPO DE MUESTRA-VENOSA
-CAPILAR
-ARTERIAL??
PUNCION VENOSA
VENTAJAS-Técnica rápida y segura-Permite obtener volúmenes adecuados para las demás determinaciones.-Permite repetir el análisis en caso de dudas.-Reduce los posibles errores de la punción capilar.
DESVENTAJAS-Resultados erróneos por hemo-concentración (torniquete pro-longado)-Hematomas y dolor (extraccióndificultosa)-No se recomienda en neonatoso pacientes quemados.-Paciente Oncológicos
PUNCION CAPILAR
VENTAJAS-Resulta sencillo para neonatos yniños-Se puede realizar más de una vez en pacientes especiales (que-mados, oncológicos, etc)-Útil en pacientes con patologíasHemorrágicas.
DESVENTAJAS-Recuentos erróneos por hemo-concentración o hemodilución-Dificultad para obtener flujo continuo.-Recuentos de Pq disminuidos, coagulación.-Errores por contaminación-Paciente Oncológicos
ANTICOAGULANTES SALES DE EDTA :(Na2 o K3) Forman complejos con el
Ca++, efectivo en pequeñas cc, no necesita ser evaporado (Posible error por dilución a tener en cuenta) 0.01mL (10 μL) sirven para anticoagular hasta 2,5 mL de sangre LA RELACION NORMALMENTE USADA ES 10 μL más 1 mL (990 µL) de sangre (1/100)
PERMITE CONSERVAR EN HELADERA LAS MUESTRAS HASTA 48h SIN ALTERAR LOS VALORES
MEZCLAS DE OXALATOS DE AMONIO Y POTASIO ( MEZCLA DE WINTROBE) Actúa precipitando el Ca²+
Proporción 1/10 (0.5 mL ACG EVAPORADO a 37 + 5 mL sangre)
HEPARINA: Actúa neutralizando la trombina. Proporción 10-50 UI/mL sangre. (COLORACIÓN)
ACTIVIDAD
TENIENDO EN CUENTA PROPORCIONES CALCULE:
- volumen de EDTA-Na2 para anticoagular 3 mL de sangre
-volumen de EDTA–Na2 para anticoagular
2 mL de sangre
Obtenida la muestra
HOMOGENEIZAR !!!!! LENTA Y REPETIDAS VECES
ANTES DE PROCESAR : HOMOGENEIZAR LENTA Y REPETIDAS VECES!!!
ETAPA ANALÍTICA
RECUENTOS DE GB , GR y Plq Hematocrito Dosaje de Hb Fórmula Leucocitaria
RECUENTO DE GB
DILUYENTE: LIQUIDO DE TURK-Acido acético glacial (20 mL)-Cristal Violeta 1% (10 mL)-Levar a 1000 mL con agua destilada Dilución : 1/20 380 μL + 20 μL muestra
Muestra
HomogeneizarPor agitación
Secar con papelel dispositivo de
cargado
RECUENTO DE GBCAMARA DENEUBAUER
PIPETAS
CAMARA DE NEUBAUERSe trata de un portaobjetos con una depresión en el centro, en el fondo de la cual se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula. Es un cuadrado de 3 x 3 mm, con una separación entre dos líneas consecutivas de 0.25 mm. Así pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 mm². La depresión central del cubreobjetos está hundida 0.1 mm respecto a la superficie, de forma que cuando se cubre con un cubreobjetos éste dista de la superficie marcada 0.1 mm, y el volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 mm³.
Aumento 10X
Aumento 10x
Consideraciones prácticas
PARA CARGAR LA CAMARA : SE COLOCA EL CUBRE OBJETO Y ACERCANDO LA PUNTA DE LA PIPETA O EL CAPILAR SE LLENA POR CAPILARIDAD
EL LLENADO DEBE HACERCE DE UNA SOLA VEZ SIN QUE QUEDEN BURBUJAS, NI LÍQUIDOS EXEDENTES ALREDEDOR DEL CAMPO
NO BALANCEARLA AL ACERCAR AL MO PARA DISTINGUIR DE BASURAS MOVER EL
TORNILLO MICROMETRICO. NO DEMORARSE
Elementos contados 4 mm² X 1mm² X N / 4 Dado que el espesor de la cámara es 0.1 mm, para expresar el
número de elementos por mm³ deberemos multiplicar el valor X por 10.
X= (N/4) X 10 Como se ha efectuado una dilución de 1/20, debemos
multiplicar por la dilución, es decir: X= Nx10x20= N x 50= Nº de GB/mm³ 4
Según el ICSH, debe expresarse este resultado en Nº de GB. 10x9/l
Cálculos
Valores de Referencia
ADULTOS : 5000 a 10.000 GB / mm³ NIÑOS- RN : 12.000 a 25.000 GB / mm³- Hasta 1 año : 6000 a 18.000 GB /
mm³- 3 a 6 años : 5000 a 15.000 GB / mm³- 6 a 12 años: 4500 a 13.500 GB / mm³
ACTIVIDAD
EXPRESAR 6500 GB/mm3
En: cel / dL cel / µL (notación científica) cel / L (notación científica)
CAUSAS DE ERROR DEL MATERIAL CUBREOBJETOS MAL COLOCADO SUCIEDAD ,LEVADURAS EN EL LIQUDO DE DILUCION RESTOS DE G.R. APELOTAMIENTO DE LEUCOCITOS DESGASTE
DE TECNICA EXTRACCION DE SANGRE DILUCION (PIPETA MAL ENRASADA) LLENADO DE CAMARA EN FORMA DESIGUAL AUTOAGLUTINACION
DEL OPERADOR DIFERENCIAS DE UN INDIVIDUO A OTRO FATIGA OCULAR
LEUCOCITOSIS
FISIOLÓGICAS- Embarazo, Lactancia, Puerperio,
Período menstrual- Ejercicio violento, Stress.
LEUCOCITOSIS PATOLOGICAS CAUSAS INFECCIOSAS
-Bacterias piógenas : Strepto, Staphylo , Meningo y gonococo.-Tos convulsa (Bordetella) Leucocitosis con Linfocitosis-Sarampión (Inc)-Cuadros septicos : Peritonitis, Neumonía
CAUSAS NO INFECCIOSAS-Cuadros inflamatorios-Post hemorragias-Vómitos, convulsiones, crisis eclámp-sicas, epilepsia, taquicardias-Hipertemias no infecciosas-Quemaduras extensas-Sock traumático-IMC, necrosis de tejido tumoral, pan-creatitis.-Leucemias-Enfermedades metabólicas : DBT, Coma diabético, Acidosis-IRC-Endócrinopatias : Cushing- Corticoterapia
Leucopenias-Constitucional (Rara) tener presente resultados previos-Digestiva (post prandial)-Infecciosa: fiebre tifoidea y paratifoidea-Sepsis de mala evolución-Casi todas las virosis (Sarampión, Varicela, Gripe,
Neumonía )-Intoxicación por benzoles o sulfas-Hemopatías: Leucemias leucopénicas, aplasia medular, etc-Afecciones hepatoesplénicas-Cirrosis hepática, trombosis de la vena porta o esplénica-Leucopenias alérgicas, shock anafiláctico-Afecciones reumáticas-Quimioterapia-Leucopenias carenciales-Colagenopatías: LES, Esclerodermia-AINES
DOSAJE DE Hb
Método de la Cianmetahemoglobina Fue recomendado por el Comité
Internacional para la Estandarización de Hematología (ICSH) en 1966, modificado en 1977 y sigue siendo hasta hoy el más recomendado.
REACTIVO DE DRABKIN
Fe(CN)6K3---------------200 mg KCN---------------------------- 50 mg K3HPO3--------------------140 mg Sterox Se o Triton X-100-------1 mL Llevar a 1L con agua destilada y ajustar el
pH a 7,2 con H3PO4 0.1 N o con KOH 0.1N. Guardar en frasco color caramelo, a T
amb, estable 6 meses.
Fundamento del MétodoHb ( Fe II )
Meta Hb ( Fe III)
Fe(CN)6K3
CIANMETAHEMOGLOBINA
KCN
MAXIMO DE ABSA 540 nm
Técnica5 mL Rvo Drabkin + 20 μL sangre entera anticoagulada
5 minutos
Leer a 540 nm en espectrofotómetro o en fotocolorímetro confiltro verde
Curva de calibración
Se realiza cada vez que se prepara o adquiere reactivo.
Kits comerciales : 3 niveles ( bajo, normal, alto )
Muestra testigo de cc conocida (trabajo con dilución al ½ y con el doble )
Curva de Calibración
A=Ɛ.b.Cy=ax+b
g/dL
Abs
ACTIVIDAD
A=ξ b C despejar C y especificar Unidades (g/dL)
Idem desde la pendiente del gráfico
VENTAJAS DE LOS METODOS
KIT COMERCIAL-Controla la
linealidad del equipo-Estado del rvo
MUESTRA TESTIGO-Controla la linealidad del equipo-Controla la manipulación del material de medición volumétrico(en forma indirecta) pues elpatrón se procesacomo si fuese una muestra-Posible deterioro del reactivo-Variaciones de tensión, Int de la -Lampara,etc.
Para tener en cuenta
La determinación de un patrón diario nos permite:
-Controlar que el reactivo no ha sufrido deterioro
-Controlar el factor humano-Cambios en la tensión eléctrica o
funcionamiento del equipo de lectura.
VALORES DE REFERENCIA
Bibliografía Laboratorio
Mujeres 11,5 - 14 g% 12 – 15 g%
Varones 13,5 – 17 g% 13 – 17 g%
HEMATOCRITO O VOLUMEN GLOBULAR
Definición
ES EL VOLUMEN DE MASA GLOBULAR EXPRESADO COMO UN % EN EL VOLUMEN DE SANGRE TOTAL
Técnica
1-SE CARGAN TUBOS CAPILARES: Sangre venosa : Sin heparina Punción digital: Con heparina2-LLENAR HASTA 2/3 EL CAPILAR Y CERRAR
EN UN EXTREMO CON PLASTILINA3-CENTRIFUGAR EN CENTRIFUGA ESPECIAL:
15000 rpm 5 a 6 min4-LEER EN ABACO ESPECIAL
MICROCENTRÍFUGA
VENTAJAS
RÁPIDO < VOLÚMEN DE SANGRE TUBOS CAPILARES DESCARTABLES MAS EXACTO YA QUE AL CENTRIFUGAR LA
SANGRE A MAYOR VELOCIDAD EL VOLUMEN DE PLASMA ATRAPADO POR LOS G.R. EN DICHA CAPA ES <
Valores de referencia
Recién Nacido 52 – 65 % Varones 40 – 48 % Mujeres 37 – 47 %
VALORES BAJOS -ANEMIAS-FASE DE
RECUPERACIÓN DE PERDIDA
DE SANGRE-EMBARAZADAS
VALORES ALTOS
POLIGLOBULIA REAL
HEMOCONCENTRACION : QUEMADURAS ,
ECLAMPSIAS, SHOCK QUIRURGICO
O TRAUMATICO
ESTADOS DE DESHHIDRATACION (VOM. DIARREAS, DIABETICOS)
HIPOXIA DE LAS ALTURAS
FUMADORES
RECUENTO DE GLÓBULOS ROJOS EL CONTAJE HA ADQUIRIDO MUCHA
PRESICION CON LOS METODOS AUTOMATIZADOS
EL RECUENTO EN CAMARA ES OBSOLETO Y SUJETO AGRAVES ERRORES TANTO QUE CUANDO NO SE DISPONE DE VALORES POR AUTOMATIZACION ES MEJOR PRESCINDIR DE ESTE DATO Y GUIARSE POR LOS VALORES DE HTO Y HB.
VALORES DE REFERENCIA
Mujeres 4 – 4.8 millones/mm³ Varones : 4.5 -5.5 millones / mm³ RN : 5.6 millones / mm³ 4 semanas: 4 millones/ mm³ 6 semanas: 3.6 millones/ mm³ 12 semanas : 3.8 millones/mm³ 6 a 12 años : 4.5 millones / mm³
INDICES HEMATIMÉTRICOS
VCM HCM CHCM
Expresa el volumen medio del GR
Cantidad de Hbcontenida en un hematie
% de Hb contenida en la masa globular total
90 ± 5 fL 29 ± 3 pg 30 – 34 %
Hto x 10GR
Hb x 10GR
Hb x 100Hto
ACTIVIDAD
EXPRESAR CON UNIDADES VCM (fL) HCM (pg)
ANÁLISIS DE FROTIS SANGUÍNEOS
Coloración May Grüwald - Giemsa May Grüwald -Eosinato – Azul de Metileno-Metanol Giemsa-Eosinato de Azur II-Azur II-Glicerina y Metanol
TÉCNICA
1-Realizar el extendido – Dejar secar- Rotular
2- Cubrir 3 minutos con MG (FIJACIÓN)3-Agregar en igual proporción al colorante
buffer o agua común : agua destilada (1:1) con movimientos sin eliminar todo el colorante anterior (ACTIVACION)
4-Volcar la mezcla anterior y (enjuagar) cubrir con Giemsa al 10% durante 15 minutos. PREPARAR EN EL MOMENTO
5-Dejar secar – Observar con Aceite de Inmersión
MG
Metanol : Agente Fijador Eosinato : colorea partes básicas del
citoplasma (rosado) : hematíes, gránulos de Eos, citoplasma de granulocitos.
Azul de Metileno: granulaciones específicas de granulocitos, nucleolos, citoplasmas basófilos, hematíes policromatófilos, colorea levemente el núcleo.
Giemsa
Colorea fuertemente las granulaciones inespecíficas (azurófilas), colorea además fuertemente los núcleos diferenciando la cromatina.
Tiñe también cuerpos de Howell Jolly, anillos de Cabot y Bastones de Auer
RESUMIENDO… NÚCLEOS: En violeta rojizo CITOPLASMA DE LAS CELULAS LINFOIDEAS
:en azul -celeste luminoso. Los gránulos linfoideos en rojo purpúreo
LOS GRANULOS NEUTRÓFILOS .en rosado pardusco
LOS GRANULOS EOSINÓFILOS: en naranja pardo o rojo ladrillo
LOS GRANULOS BASÓFILOS: En azul marino con tonalidad violácea
ERITROCITOS en rosado rojizo
NEUTROFILO
BASOFILO
LINFOCITO
EOSINOFILO MONOCITO
Fórmula Leucocitaria
Cayados…………0 - 2% Neutrófilos……….50 - 70% Eosinófilos……….0 – 8 % Basófilos…………0 – 1% Linfocitos…………20- 40 % Monocitos……….. 4 – 6 %
OCULARES
OBJETIVOS
PLATINAMACRO
CONDENSADOR
MICRO
PARA LOS TRABAJOS PRÁCTICOS GUARDAPOLVO O CHAQUETILLA 2 PARES* DE GUANTES POR
PERSONA MATERIAL DE EXTRACION (AGUJAS,
JERINGAS, LAZO, ALGODÓN ALCOHOL, CINTA DE PAPEL)
MARCADOR PARA ROTULAR
POR GRUPO DE LABORATORIO
1 ROLLO DE COCINA X 3
1 LITRO DE LAVANDINA (MARCA)
1 BOTELLA DE ALCOHOL 250 CC
PAUTAS DE TRABAJO
ORDEN Y ORGANIZACIÓN
CONCEPTOS TEÓRICOS LLEVADOS A LA PRÁCTICA (COLOQUIO)
LIMPIEZA (ROTULADO)
INFORME INDIVIDUAL
HOJA A4 FOLIO A4
DÍA MIÉRCOLES AL INICIO DE CLASES
G1-20
GRUPO 1 (15:00 – 17:00) GRUPO 2 (17:00 – 19:00)
AGÜERO CORONA ROMINA ARRÚA JOSÉ
ALARCÓN PATRICIA BARONI PIETTO MARIA
ALVAREZ JUAN MARCELO BERTONA VANNINA
ARANDA MARIA BELEN CERULLO FABIAN
BREGANT MATIAS COMPARIN LAURA
CASTILLO RÚVEDA EDUARDO DEZOTTI EDGARDO
DORNELES GABRIEL FERNANDEZ SOSA ELIANA
ESCALANTE ROSAURAGARCIA PABLO
GONZALEZ VIANO VALERIA
GOMEZ HERNAN LEDESMA RUBEN
MONJE ANALIA MARTINEZ VALERIA
MONTAÑEZ LUCAS MENDOZA MAYRA
PENTENERO MARIANA MIJALEC TATIANA
PINTO MARÍA TOMASZUK ANA
FIN