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MICROBIOLOGIA GENERAL IIMICROBIOLOGIA GENERAL II FACTOR X y V, Haemophilus.FACTOR X y V, Haemophilus.

El género El género HaemophilusHaemophilus comprende un grupo de pequeños comprende un grupo de pequeños Bacilos pleomórficos, gramnegativos, con requerimientos Bacilos pleomórficos, gramnegativos, con requerimientos nutricionales especiales, además de ser inmóviles. nutricionales especiales, además de ser inmóviles.

El El H. InfluenzaH. Influenza, como todos los miembros del género, es de , como todos los miembros del género, es de aspecto pleomórfico; los m.o son predominantemente aspecto pleomórfico; los m.o son predominantemente cocobacilares y de forma uniforme, midiendo 0.2 a 0.3 por cocobacilares y de forma uniforme, midiendo 0.2 a 0.3 por 0.5 a 0.5 µm. 0.5 a 0.5 µm.

Para el crecimiento de diversas especies de Para el crecimiento de diversas especies de HaemophilusHaemophilus en medios de cultivos artificiales, son necesarios factor en medios de cultivos artificiales, son necesarios factor X (hemina) y factor V (NAD), solos o en combinación. X (hemina) y factor V (NAD), solos o en combinación. En el mercado se dispone de tiras o discos de papel filtro En el mercado se dispone de tiras o discos de papel filtro impregnados con factor X o V.impregnados con factor X o V.

Los factores X y V, al ser hidrosolubles, se difunden en Los factores X y V, al ser hidrosolubles, se difunden en medios de cultivo con agar. Las tiras o discos de papel medios de cultivo con agar. Las tiras o discos de papel filtro impregnados con estos factores se colocan en la filtro impregnados con estos factores se colocan en la superficie de un medio deficiente de factores X y V, superficie de un medio deficiente de factores X y V, como BHI o AST, que se han inoculado con el m.o en como BHI o AST, que se han inoculado con el m.o en estudio.estudio.

El agar chocolate se prepara agregando sangre de El agar chocolate se prepara agregando sangre de carnero (7.5-10%) a una base que se encuentra a carnero (7.5-10%) a una base que se encuentra a (80°C) como para lisar los hematíes y liberar factor (80°C) como para lisar los hematíes y liberar factor X y V. Debe evitarse el calentamiento prolongado X y V. Debe evitarse el calentamiento prolongado para no inactivar el factor V. para no inactivar el factor V.

La desventaja de utilizar agar chocolate para el aislamiento La desventaja de utilizar agar chocolate para el aislamiento primario de primario de HaemophilusHaemophilus es que el medio no permite es que el medio no permite determinar las propiedades hemolíticas, que ayudan a determinar las propiedades hemolíticas, que ayudan a diferenciar diferenciar H.H. HaemolyticusHaemolyticus y y H. ParahaemolyticusH. Parahaemolyticus de de H. H. InfluenzaeInfluenzae. Debe usarse agar chocolate para el . Debe usarse agar chocolate para el primoaislamiento de Haemophilus ya que asegura que primoaislamiento de Haemophilus ya que asegura que cualquier especie se desarrollara en el.cualquier especie se desarrollara en el.

ESPECIES PARA HUMANOS ESPECIES PARA HUMANOS ESPECIES PARA ANIMALESESPECIES PARA ANIMALES

H. influenzaeH. influenzae H. parasuis (ganado porcino)H. parasuis (ganado porcino)

H. para influenzaeH. para influenzae H. paragallinarum (aves de corral H. paragallinarum (aves de corral

H. parahemolyticusH. parahemolyticus H. paracuniculus (conejos)H. paracuniculus (conejos)

H. aphrophilusH. aphrophilus H. haemoglobinophilus H. haemoglobinophilus

H. paraphrophilusH. paraphrophilus H. felis (gatos)H. felis (gatos)

H. paraphrohaemoliticusH. paraphrohaemoliticus

H. segnisH. segnis

H. ducreyiH. ducreyi

Tiras o discos de papel filtro impregnados con factores X y Tiras o discos de papel filtro impregnados con factores X y V. V.

Un medio agar deficiente de factores X y V. El agar Un medio agar deficiente de factores X y V. El agar tripticasa-soja o el agar infusión de cerebro-corazón.tripticasa-soja o el agar infusión de cerebro-corazón.

Agar sangre de carnero Agar sangre de carnero Cepa de Staphylococcus aureusCepa de Staphylococcus aureus

CONTROL DE CALIDADCONTROL DE CALIDAD

HaemophilusHaemophilus parainfluenzae: requiere solamente factor V parainfluenzae: requiere solamente factor V

Haemophilus influenzae: requiere tanto de factor X y VHaemophilus influenzae: requiere tanto de factor X y V

MATERIAL Y METODOS

PROCEDIMIENTO PROCEDIMIENTO

1.1. Sembrar el m.o en cuestión sobre la superficie del agar Sembrar el m.o en cuestión sobre la superficie del agar deficiente de factores (BHI – STA)deficiente de factores (BHI – STA)

2.2. Colocar una Colocar una tira de factor X y factor Vtira de factor X y factor V sobre la superficie del sobre la superficie del agar, con una separación aproximada de 1cm.agar, con una separación aproximada de 1cm.

3.3. Incubar la placa en COIncubar la placa en CO22 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24

hrs.hrs.

1.1. Sembrar Sembrar HaemophilusHaemophilus en el agar BHI y en el agar sangre. en el agar BHI y en el agar sangre.2.2. Colocar Colocar una estría de Staphylococcus aureusuna estría de Staphylococcus aureus en cada agar. en cada agar.

3.3. Incubar la placa en CO Incubar la placa en CO22 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 (3 a 5%) y 35 °C durante 18 a 24 hrs.hrs.

X V

X V VV XX

VV

Agar sangre BHI

XX

Agar sangre BHI

X y VX y V

Agar sangre BHI

ESPECIEESPECIE FACTOR XFACTOR X FACTOR VFACTOR V HEMOLISISHEMOLISIS REQUIERE REQUIERE COCO22

CATALASACATALASA

H. inflenzaeH. inflenzae ++ ++ -- ++ +/-+/-

H. parainfluenzaeH. parainfluenzae - -

++ -- -- ++

H. ducreyiH. ducreyi ++ -- ++ ++ ++

H. aegyptiusH. aegyptius ++ ++ -- ++ +/-+/-

H. parasuisH. parasuis -- ++ -- -- +/-+/-

CUADRO PARA LA DIFERENCIASIÓN DE ESPECIES DEL GENERO HAEMOPHILUS.

Genero/especieGenero/especie EnfermedadEnfermedad

H. influenzaeH. influenzae Respiratoria alta (sinusitis, faringitis, Respiratoria alta (sinusitis, faringitis, epiglotitis, otitis media), bacteremia, epiglotitis, otitis media), bacteremia, meningitis.meningitis.

H. parainfluenzaeH. parainfluenzae Respiratoria alta, comensal.Respiratoria alta, comensal.

H. ducreyiH. ducreyi Chancro blando, transmisión sexual.Chancro blando, transmisión sexual.

H. aegyptiusH. aegyptius Conjuntivitis.Conjuntivitis.

H. parasuisH. parasuis Inf. En cerdosInf. En cerdos

GENERO HAEMOPHILUS

PERTENECE A LA FAMILIA : PasteurellaceaeHaemophilusActinobacillusPasteurella

CARACTERISTICAS MORFOLOGICAS: Cocobacilos Gram-,no esporulados, dificiles de crecer en medios sinteticos, requieren de factores de crecimiento ( X y V) hemina y NAD respectivamenteambos factores se encuentran en la sangre.

Hi (Haemophilus influenzae) requiere ambos, se proporcionan en Agar chocolate al 10% por su incapacidad para lisar los GR..

Hi tiene 6 serotipos capsulares (a, b, c, d, e y f) puede expresar unoo ninguno. < 5% de las cepas aisladas del tracto respiratorio poseencapsula.

BiotipoBiotipo indolindol ureasaureasa Ornitina Ornitina

descarboxilasadescarboxilasa

Reduccion de Reduccion de nitritosnitritos

II ++ ++ ++ ++

IIII ++ ++ -- ++

IIIIII -- ++ -- ++

IVIV -- ++ ++ ++

VV ++ -- ++ ++

En exudados nasofaringeos humanos más del 80% de individuos están colonizados por Hi no tipificables.

Como resultado del contacto intimo con aerosoles o por contacto directo con secreciones.

La exposición inicia después del nacimiento, continuando por la infancia y el adulto.

El estado de acarreador persiste por días y meses.

273/100 000, incidencia de infección invasiva con un 30% (81.9) de mortalidad.

DETERMINANTES DE PATOGENICIDAD

1. Polisacarido capsular.2. Lipopolisacarido3. Pili y fimbria4. Proteínas de membrana externa5. Proteasa para IgA6. Adquisición de fierro7. Variación de fase e identificación de genes involucrados en la patogenicidad.

Hi puede expresar uno o ninguno de los seis antigenos capsulares

1. Hi coloniza eficientemente el tracto respiratorio superior y la nasofaringe de ahí se disemina a sitios alejados, esta mediada por la proteína P2 y P5 de ME y el ácido sialico conteniendo oligosacáridos de mucina.

2. Enfermedad localizada, Hi no tipificable causa bronquitis, sinusitis, conjuntivitis y otitis media con infección inicial en la nasofaringe. La otitis media Vía de la trompa de Eustaquio.

3. Bacteriemia, se ha usado el modelo de la rata infante, en la cual se observan los cambios patológicos en meninges virtualmente indistinguibles que en el niño afectado. La cápsula es el componente más involucrado en el proceso de bacteriemia.

4. Localización, la meningitis es la más devastadora consecuencia de la invasión por Hi, el modelo de la rata infante a proporcionado información al estudio de la patogénesis, Bacteriemia con > 105/ml dará un cuadro de meningitis. <103/ml no da meningitis.

PATOGENESIS

BIBLIOGRAFIA BIBLIOGRAFIA M.RBREACH. MANUAL DE TÉCNICA M.RBREACH. MANUAL DE TÉCNICA

BACTERIOLOGICA; EDITORIAL ACRIBA; 2BACTERIOLOGICA; EDITORIAL ACRIBA; 2dada EDICIÓN; ZARAGOZA ESPAÑA; PÁG. EDICIÓN; ZARAGOZA ESPAÑA; PÁG.

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MAcFADDIN, JEAN F. PRUEBAS BIOQUIMICAS MAcFADDIN, JEAN F. PRUEBAS BIOQUIMICAS PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS DE PARA LA IDENTIFICACION DE BACTERIAS DE IMPORTANCIA CLÍNIC; EDITORIAL IMPORTANCIA CLÍNIC; EDITORIAL PANAMERICANA; 3PANAMERICANA; 3RARA EDICIÓN.BUENOS AIRES EDICIÓN.BUENOS AIRES ARGENTINA 2003, 422-424.ARGENTINA 2003, 422-424.