1. Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativos empleados por el laboratorio clnicoMxico, Abril de 2008Derechos reservados

2. PRESENTACINDurante la evaluacin de la competencia tcnica de los laboratorios clnicos, la demostracin dela validacin y verificacin de los procedimientos de examen requiere la aplicacin de criteriostcnicos uniformes y consistentes.Con el propsito de desarrollar criterios tcnicos para uno de los componentes en la evaluacinde la trazabilidad e incertidumbre de las mediciones en este tipo de laboratorios, la entidadmexicana de acreditacin, a. c., solicit al Centro Nacional de Metrologa su participacin en laelaboracin de la Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examencuantitativos empleados por el laboratorio clnico. Este trabajo ha sido realizado con elfinanciamiento del Fondo de Apoyo para la Micro, Pequea y Mediana Empresa (FONDOPYME), auspiciado por la Secretara de Economa mediante el proyecto aprobado con folioFP2007-1605 de nombre Elaboracin de Guas Tcnicas sobre Trazabilidad e Incertidumbrepara la medicin que permitan el fortalecimiento del Sistema Nacional de Acreditacin deLaboratorios de ensayo y calibracin, El Subcomit de evaluacin de Laboratorios Clnicosparticip en la elaboracin de la Gua y su participacin est orientada a transmitir susconocimientos y experiencias tcnicas en la puesta en prctica de las Polticas de Trazabilidad yde Incertidumbre establecidas por ema, mediante el consenso de sus grupos tcnicos de apoyo.La incorporacin de estos conocimientos y experiencias a las Guas, las constituyen enreferencias tcnicas para usarse en la evaluacin de la competencia tcnica de los laboratoriosclnicos.En este trabajo, el CENAM se ocupa, entre otras actividades, de proponer criterios tcnicossobre la materia, validar los documentos producidos, procurar que todas las opinionespertinentes sean apropiadamente consideradas y asegurar la consistencia de la Gua con losdocumentos de referencia indicados al final de este documento.La elaboracin de esta Gua est vinculada con la responsabilidad que comparten loslaboratorios clnicos acreditados de ofrecer servicios con validez tcnica, en el marco de laevaluacin de la conformidad, tomando en cuenta que la informacin que transmiten a losmdicos es fundamental para permitirles brindar servicios con la calidad y confiabilidad querequieren los pacientes.La calidad de estos servicios se apoya en la confiabilidad y uniformidad de las mediciones, cuyofundamento est establecido en la trazabilidad y en la evaluacin de la incertidumbre de lasmismas. Esta Gua es una referencia tcnica en la que encontrarn un apoyo para elaseguramiento de las mediciones los que realizan la prctica rutinaria de los serviciosacreditados de medicin, as como los que evalan la competencia tcnica de los laboratorios.La Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico, no reemplaza a los documentos de referencia en que seGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 002 de 47 3. fundamentan las polticas de trazabilidad e incertidumbre de ema. La Gua aporta criteriostcnicos que servirn de apoyo a la aplicacin de la norma NMX-EC-15189-IMNC vigente. Laconsistencia de la Gua con esta norma y con los dems documentos de referencia, permitirlograr el propsito de asegurar la confiabilidad y validez tcnica de los resultados emitidos porlos laboratorios clnicos.Dr. Hctor O. Nava Jaimes Mara Isabel Lpez Martnez.Director General. Directora Ejecutiva.Centro Nacional de Metrologa entidad mexicana de acreditacin, a.c.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 3 de 47 4. AGRADECIMIENTOS.La entidad mexicana de acreditacin expresa su reconocimiento al Fondo de Apoyo para la Micro,Pequea y Mediana Empresa (FONDO PYME), auspiciado por la Secretara de Economa, por haberproporcionado los recursos financieros para la elaboracin de este documento, mediante el proyectoaprobado con folio FP2007-1605 de nombre Elaboracin de guas tcnicas sobre trazabilidad eincertidumbre para la medicin que permitan el fortalecimiento del Sistema Nacional de Acreditacin deLaboratorios de Ensayo y Calibracin y por este medio hace patente su sincero reconocimiento yagradecimiento a la Secretara de Economa, a la Subsecretara para la Pequea y Mediana Empresa, a laDireccin General de Desarrollo Empresarial y Oportunidades de Negocio, y a los profesionales queaportaron su tiempo y conocimiento en su desarrollo, destacando a los responsables de la elaboracin:BARLANDAS RENDN, Nicols Rogelio Eric, - Universidad Autnoma de Guerrero.QUINTANA PONCE, Sandra, - Laboratorio BIOCLIN, S.A. de C.V.REYES RAMREZ, Ignacio, - Laboratorio Clnico Profesional Reforma, S.A. de C.V.LARA RODRGUEZ, Emma Eugenia, - Biomdica de Referencia, S.A. de C.V.GUDIO RAMREZ, ngela, - CARPERMOR, S.A. de C.V.ROSAS GARCA, Eva, - entidad mexicana de acreditacin, a.c.BALDERAS ESCAMILLA, Miryan, - CENAM.MITANI NAKANISHI, Yoshito, - CENAM.PREZ URQUIZA, Melina, - CENAM.La entidad mexicana de acreditacin reconoce de manera especial el esfuerzo y constancia de lostres primeros autores, quienes impulsaron el desarrollo de esta gua en todas sus fases deelaboracin.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 004 de 47 5. NDICEPRESENTACIN ................................................................................................................................2AGRADECIMIENTOS........................................................................................................................41.0 INTRODUCCIN ......................................................................................................................62. OBJETIVO .................................................................................................................................63.0 ALCANCE..................................................................................................................................64.0 TRMINOS Y DEFINICIONES................................................................................................75.0 RESPONSABILIDADES ........................................................................................................136.0 DESCRIPCIN .......................................................................................................................136.1 Validacin de los procedimientos de examen ..............................................................................136.2 Verificacin de los parmetros de desempeo de los procedimientos de examen.......................147.0 PROCEDIMIENTO PARA LA EVALUACIN DE LOS PARMETROS DE DESEMPEO DEL PROCEDIMIENTO DE EXAMEN. .............................................157.1 Linealidad....................................................................................................................................157.1.1 Procedimiento para evaluar la linealidad .................................................................................157.1.1.1 Consideraciones generales ....................................................................................................157.1.1.2 Procedimiento para la preparacin de las diluciones ............................................................167.1.1.3 Nmero de mediciones por dilucin .................................................................................167.1.2 Evaluacin de la linealidad.....................................................................................................167.1.3 Validacin del intervalo reportable (intervalo validado) .........................................................187.1.4 Criterio de aceptabilidad ..........................................................................................................197.2 Precisin .....................................................................................................................................197.2.1 Criterios para verificar la precisin ..........................................................................................207.2.2 Criterio de aceptabilidad ..........................................................................................................207.2.2.1 Acorde al fabricante ...............................................................................................................207.2.2.2 Precisin acorde a criterios del Clinical Laboratory Improvement Amendments (CLIA). ...207.3. - Veracidad ..................................................................................................................................217.3.1 Criterios para verificar la veracidad ..........................................................................................227.3.1.1 Evaluacin de la veracidad a travs de la valoracin de un material de referencia certificado. .......................................................................................................................227.3.1.1.1 Valoracin por el clculo del error relativo........................................................................227.3.1.1.2 Valoracin por el clculo del porcentaje de recuperacin ..................................................237.3.1.2 Evaluacin de la veracidad utilizando estudios de comparacin de mtodos .......................237.3.1.2.1 Procedimiento.....................................................................................................................247.3.1.2.2 Evaluacin y criterio de aceptabilidad ...............................................................................257.3.1.3 Estudios de comparacin interlaboratorio con base en los resultados de los programas de ensayos de aptitud............................................................................................................297.4 Incertidumbre ..............................................................................................................................308BIBLIOGRAFA ......................................................................................................................319MATERIAL DE LECTURA ADICIONAL.............................................................................33ANEXO EJEMPLOS PARA LA EVALUACIN DE LOS PARMETROS DE VERIFICACIN.............................................................................................................34Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 005 de 47 6. 1.0 INTRODUCCINLa presente gua, es el resultado de un consenso del grupo de trabajo de loslaboratorios clnicos de la ema, que describe los puntos a considerar para la validaciny verificacin de los procedimientos de examen cuantitativos que se realizan en ellaboratorio clnico, para el cumplimiento y evaluacin del punto 5.5.2 de la normaNMX-EC-15189-IMNC-2006 / ISO 15189:2003.2.0 OBJETIVOEstablecer las directrices para llevar a cabo la validacin y la verificacin de losprocedimientos de examen cuantitativos que se realizan en el laboratorio clnico, loscuales pueden estar basados en mtodos:2.1 - Publicados en libros emitidos por alguna autoridad en la materia (por ejemplo:ICH, ILAC, ISO, IUPAC, NCCLS, IFCC), mtodos establecidos o autorizados pororganismos cientficos nacionales o internacionales (ejemplo: NOM-199-SSA1-2000), publicados en artculos o revistas especializadas, mtodos revisados porpares o publicados en directrices internacionales, regionales o nacionales, ascomo los mtodos de examen especificados por el fabricante del equipo, todosstos con informacin previa de validacin.2.2 - Mencionados en el inciso 2.1, que sean empleados fuera de su alcanceprevisto o ampliaciones y modificaciones a los mismos.2.3 - Desarrollados o diseados por el propio laboratorio.Los mencionados en el inciso 2.1, deben como parte de su implementacin por ellaboratorio clnico, ser verificados en su desempeo contra las especificaciones de lavalidacin para confirmar su desempeo analtico cuando se aplica bajo lascondiciones operativas del propio laboratorio y determinar que es adecuado para elpropsito.Los mencionados en los incisos 2.2 y 2.3 deben ser adecuadamente validados,documentados y autorizados antes de su uso, por el laboratorio clnico con el propsitode confirmar su desempeo analtico y para determinar su adecuacin para el usodeseado.3.0 ALCANCEEsta gua la deben aplicar los laboratorios clnicos que se encuentren en alguna etapadel proceso de acreditacin ante la ema, a todos los procedimientos de examencuantitativos del alcance de la acreditacin, an cuando dichos procedimientos yaestn implementados previamente en el laboratorio, as como, cada vez que secambie, modifique o se implemente un mtodo de examen.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 006 de 47 7. 4.0 TRMINOS Y DEFINICIONES4.1 Adecuado para el propsito:Grado en el que los datos resultantes de un proceso de medicin le permiten alusuario tomar decisiones tcnica y administrativamente correctas para el propsitoestablecido.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.2 mbito lineal:Es la parte de la funcin de calibracin en la que la seal obtenida para el analitoresponde linealmente a la concentracin. Se verifica mediante la obtencin de uncoeficiente de correlacin mayor o igual a 0,995.6 (Metrologa en el laboratorioclnico)4.3 Analito:Especie de inters a determinar en un anlisis.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.4 Calibracin:Conjunto de operaciones que establecen, en condiciones especificadas, la relacinentre los valores de las magnitudes indicadas por un instrumento de medicin o unsistema de medicin, o los valores representados por una medida materializada o unmaterial de referencia, y los valores correspondientes de la magnitud realizada por lospatrones.21 (NMX-Z-055-1997-IMNC)4.5 Corrida:Conjunto de muestras analizadas en forma continua, bajo las mismas condicionesexperimentales.22 (NOM-177-SSA1-1998)4.6 Desviacin/Sesgo:Error sistemtico de un proceso de medicin.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.7 Ensayo/Prueba:Determinacin de una o ms caractersticas de acuerdo con un procedimiento.17(NMX-CH-152-IMNC-2005)4.8 Especificidad:Es la capacidad de determinar el analito inequvocamente en la presencia decomponentes los cuales se espera que estn presentes. Comnmente puede incluirimpurezas, degradantes, matriz, etc.10 (Mtodos Analticos Adecuados a su propsito,CENAM, 1998)4.9 Evidencia objetiva:Datos que respaldan la existencia o veracidad de algo.23 (Poltica de seleccin yvalidacin de mtodos de ensayo, Oficina de Acreditacin Guatemala, 2005)Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 007 de 47 8. 4.10 Exactitud de medicin:Grado de la concordancia entre el resultado de una medicin y un valor verdadero (oreal) de lo medido (el mensurando).17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.11 Exactitud relativa:Grado de concordancia entre los resultados del mtodo evaluado y los obtenidosutilizando un mtodo de referencia reconocido.23 (Poltica de seleccin y validacin demtodos de ensayo)4.12 Incertidumbre de medicin:Parmetro asociado al resultado de una medicin, que caracteriza la dispersin de losvalores que podran razonablemente, ser atribuidos al mensurando.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.13 Intervalo de trabajo:Intervalo de las concentraciones analticas o los valores de las propiedades sobre lascuales el mtodo va a ser aplicado. Dentro del intervalo de trabajo puede existir unintervalo de respuesta lineal, en el que, la seal de respuesta sistema de medicintendr una relacin lineal con la concentracin del analito o el valor de la propiedad.17(NMX-CH-152-IMNC-2005) Nota 1. Se refiere al intervalo de concentracin del parmetro de inters, para el cual el mtodo se considera aplicable. Nota 2. El intervalo validado es el intervalo de concentracin del analito dentro del cual el mtodo puede considerarse valido. Nota 3. Se debe tener en cuenta que el intervalo de medicin para un determinado parmetro, vara de un mtodo a otro, e incluso dentro de un mismo mtodo es posible an realizar variaciones del intervalo cambiando algunas de las variables de medicin. No obstante, la validacin de un mtodo analtico implica la definicin del intervalo o intervalos de medicin.4.14 Lmite de cuantificacin:Es aquel valor de concentracin mnimo que puede obtenerse con una imprecisinaceptable.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.15 Lmite de deteccin:Concentracin mnima de un analito en la matriz de una muestra que puede serdetectada, pero no necesariamente cuantificada, bajo condiciones analticasespecficas.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.16 Linealidad:La capacidad (dentro de un intervalo dado) para proporcionar resultados que sondirectamente proporcionales a la concentracin del analito en las muestras deexamen.14 (NCCLS Document EP6A)El trmino linealidad aplicado a un mtodo analtico, se refiere al tramo deconcentraciones del analito en el que la respuesta del sistema de medicin es unafuncin lineal de la concentracin; la representacin grfica de este tramoGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 008 de 47 9. (concentraciones frente a respuestas) debe exhibir una buena correlacin de lospuntos experimentales a la recta de regresin para que el mtodo analtico en cuestinsea aceptable.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.17 Magnitud (medible):Atributo de un fenmeno, de un cuerpo o de una sustancia, que es susceptible dedistinguirse cualitativamente y de determinarse cuantitativamente.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.18 Material de referencia (MR):Material o sustancia cuyo(s) valor(es) es(son) suficientemente homogneo(s) y biendefinido(s) para permitir su uso para la calibracin de un instrumento, la evaluacin deun mtodo o la atribucin de valores a los materiales.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.19 Material de referencia certificado (MRC):Material de referencia acompaado de un certificado cuyo(s) valor(es) de la(s)propiedad(es) es(son) certificado(s) por un procedimiento que establece su trazabilidada una realizacin exacta de la unidad en la cual los valores de propiedad sonexpresados y para la cual cada valor certificado est acompaado de unaincertidumbre a un nivel de confiabilidad indicado.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.20 Medicin:Conjunto de operaciones que tienen por finalidad determinar el valor de unamagnitud.21 (NMX-Z-055-IMNC-2005)4.21 Mensurando:Magnitud particular sometida a medicin.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.22 Mtodo de medicin:Secuencia lgica de las operaciones, descritas de manera genrica, utilizada en laejecucin de las mediciones.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.23 Mtodo de referencia:Mtodo ampliamente investigado, que describe clara y exactamente las condiciones yprocedimientos necesarios, para la medicin de uno o ms valores de la propiedad,que han demostrado tener exactitud y precisin de acuerdo con su propsito de uso yque puede, por lo tanto, ser usado para evaluar la exactitud de otros mtodos por lamisma medicin, permitiendo en particular la caracterizacin de un Material deReferencia.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.24 Mtodo desarrollado por el laboratorio:Mtodo analtico que no se encuentra en normas u otras colecciones de mtodos, nien publicaciones de terceros, habiendo sido desarrollado por el propio laboratorio.23(Poltica de seleccin y validacin de mtodos de ensayo) Nota: El desarrollo del mtodo incluye la etapa de su validacin.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 009 de 47 10. 4.25 Mtodo no normalizado:Mtodo analtico desarrollado por un tercero o que ha sido adaptado por el laboratorioa partir de un mtodo normalizado.23 (Poltica de seleccin y validacin de mtodos deensayo, Oficina de Acreditacin Guatemala, 2005) Nota: El desarrollo del mtodo, as como su adaptacin, incluyen la etapa de su validacin.4.26 Mtodo normalizado:Mtodo analtico desarrollado por un organismo de normalizacin u otro organismoreconocido cuyos mtodos son generalmente aceptados por el sector tcnicocorrespondiente.23 (Poltica de seleccin y validacin de mtodos de ensayo, Oficinade Acreditacin Guatemala, 2005) Nota. El desarrollo del mtodo incluye la etapa de su validacin.4.27 Muestra blanco:Material que es similar en matriz y estado fsico de preparacin a las muestras queestn siendo analizadas como muestras problema, pero que no contiene el analitonativo y que es usado con el propsito de dar seguimiento a diferentes aspectos delproceso analtico.23 (Poltica de seleccin y validacin de mtodos de ensayo, Oficinade Acreditacin Guatemala, 2005)4.28 Muestra de control:Material de composicin conocida usado con el propsito de dar seguimiento alproceso analtico, que debe ser similar a las muestras que estn siendo analizadascomo muestras problema, en cuanto a la matriz, y al estado fsico de preparacin y elintervalo de concentracin del analito.23 (Poltica de seleccin y validacin de mtodosde ensayo, Oficina de Acreditacin Guatemala, 2005)4.29 Parmetros de desempeo del mtodo:Son las propiedades, caractersticas o capacidades cuantificables del mtodo queindican su grado de calidad; incluyen: exactitud, efecto de matriz, repetibilidad,reproducibilidad, especificidad, lmite de deteccin, lmite de cuantificacin, linealidad,intervalo analtico, sensibilidad, robustez. Todas estas caractersticas relacionadas conlos resultados obtenibles por el mtodo.23 (Poltica de seleccin y validacin demtodos de ensayo, Oficina de Acreditacin Guatemala, 2005)4.30 Precisin:Grado de concordancia entre los valores de una serie repetida de ensayos, utilizandouna muestra homognea, bajo condiciones establecidas.23 (Poltica de seleccin yvalidacin de mtodos de ensayo, Oficina de Acreditacin Guatemala, 2005)Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0010 de 47 11. 4.31 Procedimiento de medicin:Conjunto de operaciones, descritas de forma suficientemente detallada, que se utilizanpara la ejecucin de mediciones particulares de acuerdo a un mtodo dado.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005) Nota 1: Un procedimiento de medicin es usualmente descrito en un documento, llamado algunas veces procedimiento y que proporciona suficientes detalles para que un operador pueda realizar una medicin sin necesitar ms informacin.4.32 Recuperacin:La recuperacin es el cociente entre la cantidad de analito medida y el contenido en lamuestra. En el caso ideal, se obtiene un 100%. En mediciones experimentales puedeperderse analito especialmente en el caso de tratamientos complejos de muestras conanalito en cantidades traza, dando lugar a porcentajes de recuperacin menores(importante especialmente en el caso de procedimientos cromatogrficos).17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.33 Repetibilidad:Grado de concordancia entre los resultados de mediciones sucesivas de un mismomensurando, llevadas a cabo totalmente bajo las mismas condiciones de medicin.17(NMX-CH-152-IMNC-2005) Nota: Las condiciones de repetibilidad incluyen: el mismo procedimiento, analista/observador, ubicacin, instrumento y condiciones de medicin. Por mediciones sucesivas se entiende aquellas mediciones repetidas dentro de un corto perodo de tiempo.4.34 Reproducibilidad:Grado de concordancia entre los resultados de los resultados de mediciones delmismo mensurando, realizadas en diferentes condiciones de medicin. Nota: Una declaracin vlida de reproducibilidad requiere que se especifiquen los cambios en las condiciones del anlisis o calibracin. Estos cambios pueden incluir: el principio en que se basa la medicin, el mtodo, analista/observador e instrumento, material y patrones de referencia, ubicacin, condiciones de uso y tiempo.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.35 Robustez:Capacidad de un procedimiento analtico de no ser afectado por pequeas perodeliberadas variaciones en los parmetros del mtodo, provee una indicacin de suconfiabilidad en condiciones de uso normales.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.36 Selectividad:La habilidad de un mtodo para determinar exactamente y especficamente el analitode inters en la presencia de otros componentes en la matriz bajo condicionesestablecidas de prueba.10 (Mtodos Analticos Adecuados a su Propsito)Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0011 de 47 12. Nota 1 Selectividad Cualitativa.- Trmino que indica hasta qu punto otras sustancias interfieren en la determinacin de una sustancia de acuerdo a un procedimiento dado. Nota 2 Selectividad Cuantitativa.- Un trmino usado en conjuncin con otros sustantivos (por ejemplo constante, coeficiente, ndice, factor, nmero) para la caracterizacin cuantitativa de interferencias.4.37 Sensibilidad Analtica (o metrolgica):Es la relacin entre la seal obtenida de un sistema de medicin y la correspondienteconcentracin de analito, es decir, la pendiente de la funcin de calibracin y no essinnimo de lmite de deteccin. Cuando la funcin de calibracin es una recta, lasensibilidad analtica es constante en todo el intervalo de medida. Por el contrario, confunciones de calibracin diferentes de la recta, la sensibilidad vara en funcin de laconcentracin del analito. El valor absoluto de sensibilidad analtica tiene utilidad paracomparar entre s diferentes procedimientos de medida o mtodos basados en lamedicin de una misma seal fsica. Cuando se trata de funciones de calibracin queno corresponden a una recta, la sensibilidad debe especificarse para unaconcentracin determinada de analito o en forma de funcin de la concentracin deanalito.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.38 Validacin:Confirmacin mediante el suministro de evidencia objetiva de que se han cumplidolos requisitos del mtodo para una utilizacin o aplicacin especfica prevista.17(NMX-CH-152-IMNC-2005)4.39 Valor de Referencia Aceptado:Valor que sirve como referencia consensuada para la comparacin, obtenido a partirde:a.- Un valor terico o establecido, con base en principios cientficos.b.- Un valor asignado o certificado, con base en trabajos experimentales dealguna organizacin nacional o internacional.c.- Un valor certificado o consensuado, con base en trabajos de colaboracinexperimental bajo los auspicios de algn grupo cientfico o tcnico.d.- Cuando no se dispone de a, b, c, el valor supuesto de la magnitud(medible); por ejemplo, la media de una poblacin especificada de mediciones.18(NMX-CH-5725-1-IMNC-2006).4.40 Valor Observado:Valor de un mensurando obtenido como resultado de una observacin simple.18(NMX-CH-5725-1-IMNC-2006).Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0012 de 47 13. 4.41 Veracidad:Grado de concordancia existente entre la media aritmtica de un gran nmero deresultados y el valor verdadero o aceptado como referencia.18 (NMX-CH-5725-1-IMNC-2006)Se relaciona con la presencia de errores de tipo sistemtico, tambin llamado sesgoo desviacin; que puede expresarse como un valor absoluto o relativo al valorverdadero.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)4.42 Verificacin:Confirmacin mediante la aportacin de evidencia objetiva de que se han cumplido losrequisitos especificados para un mtodo.15 (NMX-CC-9000-IMNC-2000)La verificacin consiste en evaluar el desempeo del mtodo para demostrar quecumple con los requisitos para el uso previsto, que fueron especificados comoresultado de su validacin.17 (NMX-CH-152-IMNC-2005)5.0RESPONSABILIDADESEs responsabilidad de los laboratorios clnicos en proceso de acreditacin oacreditados, el seguir los lineamientos de esta gua en todos los procedimientos deexamen cuantitativos establecidos en el alcance de la acreditacin del laboratorioclnico.As mismo, es responsabilidad de los evaluadores y expertos tcnicos que participanen los procesos de acreditacin el verificar la aplicacin de esta gua.6.0DESCRIPCINGeneralmente para la medicin de un analito en un tipo especfico de muestra existenvarios mtodos analticos disponibles. Es importante que el laboratorio usuario de lametodologa evale los diferentes mtodos y seleccione aquel que mejor se adecue alas necesidades y recursos.6.1 Validacin de los procedimientos de examenLa realizacin de las actividades de validacin y verificacin de los procedimientos deexamen utilizados por el propio laboratorio, contemplan la satisfaccin de lasnecesidades metrolgicas requeridas por el mdico para un adecuado tratamiento delpaciente. Un laboratorio clnico acreditado o en proceso de acreditacin debedemostrar que tiene competencia tcnica para realizar las actividades de validacin yverificacin de los procedimientos de examen cuantitativo establecidos en su alcancede acreditacin.La validacin comprueba la aptitud de los procedimientos de examen y refleja lascondiciones reales de la aplicacin de los mismos. Los datos de esta validacin losinforma el fabricante en los instructivos de uso de los reactivos. No obstante, ellaboratorio debe verificar que puede aplicar correctamente los mtodos ya validadosGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0013 de 47 14. por el fabricante, previo a su uso en los exmenes, bajo sus condiciones propias deoperacin (equipo, calibradores, analistas, etc.) generando evidencias objetivas, paraconfirmar su aplicacin correcta.24 Adicionalmente, cuando sea posible, el laboratoriodebe presentar una comparacin de la informacin proporcionada por el fabricanterespecto de la informacin disponible en bibliografa cientfica sobre el mismo mtodode medicin, con el propsito de asegurar la confiabilidad de la validacin de losprocedimientos de examen.Antes de realizar la validacin y/o verificacin en la rutina del laboratorio, debellevarse a cabo la calibracin analtica de los equipos.La validacin y/o verificacin de un procedimiento de examen depende de los cambiosrealizados, por lo que debe repetirse cuando existan cambios mayores.Se consideran cambios mayores, el cambio de equipo y mantenimiento mayor deequipo, entre otros. Se consideran cambios menores, la modificacin del tamao demuestra, cambio de analista y sustitucin de reactivos, entre otros.23Esta informacin debe incluir los siguientes parmetros: Linealidad (intervalo analtico) Precisin Veracidad Limite de deteccin Selectividad Sensibilidad analtica Intervalo de trabajo Especificidad analtica IncertidumbreSi la informacin no se encuentra completa en los insertos, el laboratorio debepresentar evidencia documentada y actualizada de que la ha solicitado al fabricante.14En el caso de realizar modificaciones a mtodos establecidos o ya validados por elfabricante o cuando se utilicen mtodos desarrollados por el propio laboratorio(internos), ste debe realizar la validacin completa del mtodo y presentar lasevidencias correspondientes, incluyendo el procedimiento que utiliz para realizarla.276.2 Verificacin de los parmetros de desempeo de los procedimientos deexamenEl laboratorio debe realizar la verificacin de los procedimientos de examenseleccionados antes de ponerlos en uso y evidenciar si stos cumplen con lascaractersticas de desempeo en las condiciones del laboratorio. La verificacintambin se debe realizar cada vez que se realice un cambio mayor en algnprocedimiento de examen que ya hubiera sido verificado anteriormente.Para el propsito de esta gua, esta verificacin debe incluir los parmetros siguientes:6,14 Linealidad (intervalo analtico)Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0014 de 47 15. Precisin Veracidad IncertidumbreSi el laboratorio considera que alguno de los parmetros para la verificacin de losprocedimientos de examen, no aplica en funcin al mtodo seleccionado, esta decisindebe ser justificada tcnicamente.7.0PROCEDIMIENTO PARA LA EVALUACIN DE LOS PARMETROS DEDESEMPEO DEL PROCEDIMIENTO DE EXAMEN.7.1 LinealidadEs importante evaluar dentro del intervalo analtico de los procedimientos de medicinimplementados por un laboratorio, los resultados mximo y mnimo que pueden serreportados.Los fabricantes emiten valores para la linealidad (el intervalo reportable), por lo que esnecesario confirmar mediante el suministro de evidencia objetiva que los valoresreportados por el laboratorio utilizando dicho procedimiento de medicin muestran uncomportamiento lineal.14El experimento de linealidad involucra una serie de muestras de concentracinconocida o una serie de diluciones conocidas de muestras altamente concentradas.Las mediciones o los valores de las pruebas reportadas son comparados con losvalores asignados o los valores de dilucin. La linealidad es obtenida al trazar la mejorlnea recta que toque la mayor cantidad de puntos.11, 27Debe considerarse que dicha verificacin debe tocar los puntos de decisin clnica,entendindose stos como las concentraciones o actividades de los analitos donde elmdico decide entre administrar o no algn tratamiento teraputico.1, 277.1.1 Procedimiento para evaluar la linealidad7.1.1.1 Consideraciones generalesPara realizar la evaluacin de la linealidad, se deben preparar disoluciones patrn en5 niveles de concentracin,14 an cuando se puede hacer con 4 como mnimo.27 En elcaso que desee hacerse con ms de 5 niveles, no existe restriccin alguna.Para preparar las disoluciones debe emplearse material de referencia certificado, encaso de no contar con dicho material, pueden utilizarse calibradores con valoresasignados, los cuales podrn ser los mismos o diferentes con los que se calibr elequipo analtico, sueros control bajo y alto o muestras de pacientes analizadasrutinariamente en el laboratorio, siempre y cuando un par de ellas presenten: una bajaGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0015 de 47 16. concentracin del analito a ser evaluado en una de ellas y una concentracin alta en laotra.27Por lo que una vez definidas las muestras a utilizar, la asignacin final del valor serobtenido calculando la media aritmtica de un triplicado. Estos valores corresponderna la dilucin No. 1, concentracin baja y dilucin No. 5, concentracin alta, de latablas 1 y 2.7.1.1.2 Procedimiento para la preparacin de las dilucionesLa preparacin de las disoluciones patrn debe realizarse de acuerdo a la tabla 1. Tabla 1. Preparacin de las dilucionesProporcin enProporcin enNmero devolumen de lavolumen de la dilucin muestra 1muestra 2 1 Usar sin diluir0 2 31 3 22 4 13 5 0Usar sin diluir Nota.- Muestra 1. (M1) concentracin baja preferentemente cercana a cero. Muestra 2. (M2) concentracin alta.La matriz del diluyente debe ser mantenida, preferentemente utilizar suero humano.27Para preparar disoluciones patrn para distintos niveles de concentracin, se debemodificar/ cambiar/adecuar el protocolo de preparacin de las diluciones de maneracorrespondiente al nmero de niveles involucrados.7.1.1.3 Nmero de mediciones por dilucinSe recomienda hacer cuatro replicas, sin embargo un nmero de tres es suficiente.27Es importante que se preparare un volumen mnimo por dilucin que garantice realizarlas replicas programadas y el volumen muerto (lo que queda en la celda de reaccin)que necesitan sobretodo los equipos automatizados para su lectura.7.1.2 Evaluacin de la linealidad a) Obtener las medias de la concentracin o de la actividad de acuerdo a la tabla2.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0016 de 47 17. Tabla 2. Resultados de la concentracin o de la actividad de las diluciones respectivasResultados de laNmero de concentracin o de la Media dilucinactividad 123 1 2 3 4 5 b) Construir una grfica con la media aritmtica de las replicas sobre el eje Y(ordenadas), en funcin de la concentracin (el valor conocido (calibradores) oasignado) sobre el eje X.14, 27 c) Para construir la grfica emplear los siguientes criterios: Marcar en el eje X, las concentraciones en funcin de M2 (0%, 25%, 50%, 75% y 100% de M2). Marcar sobre el eje Y, la escala apropiada al intervalo de valores de las medias obtenidas para las diluciones. Graficar las coordenadas de los puntos: (0%, media de la dilucin 1), (25%, media de la dilucin 2), (50%, media de la dilucin 3), (75%, media de la dilucin 4), (100%, media de la dilucin 5). d) Calcular la ecuacin de la recta para los puntos dados, as como el coeficientede correlacin. La grfica resultante deber ser lineal, con un coeficiente decorrelacin de por lo menos del 0,99.11 Este clculo puede realizarseempleando las herramientas de anlisis de datos del programa Excel, o bien,cualquier programa de estadstica con el que cuente el laboratorio. Nota. El coeficiente de correlacin permite estimar la relacin entre dos propiedades y de esta manera si los puntos experimentales siguen una funcin lineal.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 17 de 47 18. Grafica de linealidad 400 100 350 30075 Concentracin 250 20050 150 10025 5000 0 255075 100Dilucin Nota: La escala de valores de concentracin estar en funcin de las concentraciones esperadas (obtenidas en el experimento), la escala que se muestra aqu, de 0 a 400 es una escala arbitraria solo para ejemplificar.7.1.3 Validacin del intervalo reportable (intervalo validado) a) Llenar la columna 2 en la tabla 3 correspondiente a las medias obtenidas en latabla 2. b) Calcular los valores tericos de las abscisas (x), usando la dilucin tres como elvalor verdadero en caso que la muestra 1 tenga cero de concentracin oactividad enzimtica, o bien un valor muy cercano a cero.27 Si esto no secumple entonces considerar los valores extremos para calcular los valorestericos siempre y cuando se hayan utilizado sueros control o muestras depacientes. En caso que se hayan usado materiales de referencia certificados ocalibradores, se debern usar los valores asignados a dicho calibrador. c) Graficar utilizando los valores obtenidos tericamente en el eje X y el valor delas medias de concentracin de la tabla 2 en el eje Y. Graficar la columna 2 vsla columna 3 de la tabla 3, la columna 2 en Y (valores medios deconcentracin) y la columna 3 en X (valores tericos). d) Calcular la ecuacin de la lnea y obtener la pendiente y la ordenada al origen.El sesgo (desviacin) para cada nivel es calculado por la diferencia del valor de lamedia de cada dilucin y su valor terico, cuyo valor ser colocado en la columna 4 dela tabla 3.El porcentaje de error se puede calcular dividiendo el sesgo (desviacin) entre el valorterico y el resultado es multiplicado por 100.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 18 de 47 19. Nota: Si el valor de la dilucin 1 es cero entonces l % de error no aplica (NA). Tabla 3. Cuantificacin de errores en el intervalo reportableNmero Media de losSesgo de valores deValor terico (x)(desviaci% Errordilucin concentracin (Y) n)Ingresarvalor 1(M1 x 1) + (M2 x 0)y1-x1[(sesgo1)/x1) x 100]medioIngresarvalor 2 (M1 x 0,75) + (M2 x 0,25) y2-x2[(sesgo2)/x2) x 100]medioIngresarvalor 3 (M1 x 0,5) + (M2 x 0,5) y3-x3[(sesgo3)/x3) x 100]medioIngresarvalor 4 (M1 x 0,25) + (M2 x 0,75) y4-x4[(sesgo4)/x4) x 100]medioIngresarvalor 5 (M1,x,0) + (M2,x,1,0) y5-x5[(sesgo5)/x5) x 100]medio7.1.4 Criterio de aceptabilidadCalcular la pendiente y la ordenada al origen (la pendiente deseable es de 1,00 y laordenada al origen de 0), finalmente comparar el sesgo (desviacin) o el porcentaje deerror para cada dilucin con el error permitido para la prueba de acuerdo con lainformacin del fabricante o del mtodo donde el sesgo (desviacin) y % de errordeben ser menores que el error permitido y por ltimo se deber hacer la decisin deaceptar o rechazar.277.2 PrecisinPara conocer el valor de una magnitud se emplea un procedimiento de medicin, y losresultados que se obtienen son una estimacin del valor del mensurando. Talestimacin contiene un error de medida, que es la diferencia entre el valor obtenido yel valor verdadero del mensurando. 1, 5, 6, 24, 27En el error de medicin est involucrado el efecto de dos componentes:- El error aleatorio, que se relaciona con la precisin del procedimientode medicin. Estos errores difieran en cualquier sentido del valor medioy afectan la reproducibilidad- El error sistemtico, que se relaciona con la veracidad delprocedimiento de medicin. Pueden existir varias fuentes de errorsistemtico, siendo algunos errores positivos y otros negativos, la sumade todos ellos se conoce como error sistemtico total o sesgo de lamedicin.Los errores aleatorios y sistemticos pueden ocurrir independientemente unos de otrosy surgir en diferentes etapas del procedimiento. El error aleatorio es ms fcil deGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0019 de 47 20. detectar que el sistemtico, ya que el segundo no se puede apreciar con la solarepeticin de mediciones y, a menos que se conozca de antemano el valor verdaderodel mensurando, podran existir errores sistemticos muy grandes, que paseninadvertidos si no se aplican sistemas de control de calidad interno o se participa enprogramas de ensayos de aptitud (tales como los programas de evaluacin externa dela calidad).La precisin usualmente se especifica en trminos de desviacin estndar odesviacin estndar relativa.Para identificar la precisin en los procedimientos analticos se deben realizarmediciones repetidas y aplicar algunos conceptos estadsticos fundamentales como elclculo de la media ( X ), la desviacin estndar (DE), la desviacin estndar relativa(DER), el coeficiente de variacin (%CV) y la varianza (s2).7.2.1 Criterios para verificar la precisinPara evaluar la precisin el laboratorio debe aplicar alguna de las siguientes opciones:a) Realizar el examen de un material (muestras de pacientes, muestras control, etc.)de valor conocido o no, analizado por lo menos 20 veces en forma continua, llamadointraserial o intracorrida o 20 veces en el transcurso del da (24 h) llamado intrada.14, 27b) Utilizar 20 valores obtenidos uno cada da de la misma muestra de un paciente obien obtenidos de una curva de un programa de control de calidad interno de 20 dasdiferentes y del mismo lote (interserial o intercorrida).En ambos casos se debe calcular la media, la desviacin estndar y el coeficiente devariacin expresado en porcentaje.7.2.2 Criterio de aceptabilidad7.2.2.1 Acorde al fabricanteLa precisin del mtodo obtenida por el laboratorio debe ser menor o igual a laprecisin del mtodo que proporciona el fabricante.14En caso de que sea mayor, el laboratorio deber presentar la justificacin estadsticadocumentada de que no existe una diferencia significativa. La prueba F es apropiadapara evaluar la precisin considerando una distribucin normal.87.2.2.2 Precisin acorde a criterios del Clinical Laboratory ImprovementAmendments (CLIA).Los resultados en la corrida intraserial o en la intrada tendrn menor precisin que lainterserial, por lo tanto el criterio de aceptabilidad debe ser diferente.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0020 de 47 21. Para la precisin intraserial o intrada, la desviacin estndar obtenida debe ser igual omenor a del error total permitido esto es: DE intraserial o DE intrada 0,25 ET (error total permitido)De manera similar para la precisin interserial, la desviacin estndar debe ser de omenor del error total, esto es: DE interserial 0,33 ET (error total permitido)Una mayor desviacin estndar implica un mayor coeficiente de variacin y por lo tantouna mayor precisin del mtodo analtico.7.3. - VeracidadEl trmino veracidad, en la norma NMX-CH-5725-1-IMNC-2006 se define como elgrado de concordancia existente entre la media aritmtica de un gran nmero deresultados y el valor verdadero o aceptado como referencia.18La veracidad se relaciona con la presencia de errores de tipo sistemtico, tambinllamado sesgo o desviacin; que puede expresarse como un valor absoluto orelativo al valor verdadero.5,6La veracidad de un mtodo de medicin es de inters cuando es posible disponer delvalor verdadero del mensurando sujeto a medicin. El valor verdadero no se conoceexactamente en algunos mtodos de medicin, pero es posible contar con un valor dereferencia certificado para el mensurando sujeto a medicin; por ejemplo si se disponede materiales de referencia adecuados, se establece el valor de referencia con base aotro mtodo de medicin o mediante la preparacin de una muestra conocida. Sepuede investigar la veracidad de un mtodo de medicin mediante la comparacin delvalor de referencia certificado con los resultados obtenidos por el mtodo de medicin.Normalmente la veracidad se expresa en trminos de sesgo, en un anlisis qumicopor ejemplo dicho sesgo se puede presentar si el mtodo falla en extraer a todo elelemento de inters o si la presencia de un elemento interfiere en la determinacin deotro.18El termino sesgo se ha utilizado durante mucho tiempo en cuestiones estadsticas,pero debido a que causo algunas objeciones de carcter filosfico en algunos camposprofesionales (tales como la medicina y las leyes), se ha decidido acentuar el aspectopositivo usando veracidad como nuevo trmino.18Nota: En algunos documentos la veracidad ha sido referida como la exactitud de lamedicin. Sin embargo, este uso no es recomendable.El trmino exactitud se utiliz durante cierto tiempo para referirse nicamente a lacomponente ahora denominada veracidad, pero qued claro para muchas personasque dicho trmino deba indicar el desplazamiento total de un resultado con respecto asu valor de referencia, debido tanto a los efectos aleatorios como a los sistemticos.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0021 de 47 22. Por lo anterior, el trmino general de exactitud se usa en esta gua para referirseconjuntamente, a la veracidad y a la precisin.5 EXACTITUDERROR DE MEDIDA ERROR ALETORIOERROR SISTEMTICO PRECISIN VERACIDAD Figura n.1 Relacin entre los distintos tipos de error y los correspondientesconceptos cualitativos7.3.1 Criterios para verificar la veracidadPara verificar la veracidad de los mtodos de examen cuantitativos que se emplean enel laboratorio clnico, se pueden utilizar las siguientes herramientas:18 Valoracin de un material de referencia certificado a) Valoracin por el clculo del error relativo b) Valoracin por el clculo de porcentaje de recuperacin Estudios de comparacin de mtodos Estudios de comparacin interlaboratorios con baseen losresultados de programas de ensayos de aptitud7.3.1.1 Evaluacin de la veracidad a travs de la valoracin de un material dereferencia certificado.7.3.1.1.1 Valoracin por el clculo del error relativoLa veracidad de un mtodo analtico se puede estimar por medio del error relativo,para lo cual se utiliza un material de referencia certificado (MRC), un material dereferencia (MR), un calibrador o un suero con un valor conocido del analito,considerado el valor asignado a ste como el valor verdadero.El clculo del porcentaje de error relativo, se puede estimar mediante el clculo inicialde la media aritmtica desviacin estndar y el coeficiente de variacin de unamuestra de suero usada, aplicando la siguiente frmula:27Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 22 de 47 23. Entre menor sea el porcentaje de error relativo mayor ser la veracidad del mtodo.El criterio de aceptabilidad es que el valor del error relativo sea menor o igual alreportado por el fabricante del equipo.7.3.1.1.2 Valoracin por el clculo del porcentaje de recuperacinOtra forma de verificar la veracidad es mediante la obtencin de los valores esperadosde los materiales de referencia ensayados.Se puede utilizar material de referencia certificado, un material de referencia (MR) oun calibrador de valor conocido. El material se somete a examen 10 veces y se estimala concentracin media del analito y con el valor obtenido se puede determinar elporcentaje de recuperacin:27El porcentaje de recuperacin tiene que ser igual o lo ms cercano a 100. Valoresmenores indican menor cantidad recuperada del analito cuantificado y a mayorporcentaje mayor cantidad del analito recuperado.El criterio de aceptacin es que el valor sea menor o igual al reportado por elfabricante del instrumento.7.3.1.2 Evaluacin de la veracidad utilizando estudios de comparacin demtodosUn experimento de comparacin de mtodos es utilizado para estimar el errorsistemtico. El plan del experimento consiste en analizar muestras de pacientes por 2mtodos, el de prueba y el de comparacin, despus de lo cual se estima el errorsistemtico basado en las diferencias observadas entre los mtodos. 27Dichas diferencias deben ser determinadas en las concentraciones crticas de decisinmdica; cabe mencionar que tanto el diseo del experimento, como los clculosestadsticos utilizados son crticos para obtener estimaciones confiables de los erroressistemticos.17, 27Los mtodos analticos que sern usados en la comparacin de mtodos deben sercuidadosamente seleccionados, un mtodo de referencia debe ser elegido como elmtodo de comparacin, cuando esto sea posible.Cuando existan diferencias entre el mtodo de prueba y el mtodo de comparacin,dichas diferencias le son asignadas al mtodo de prueba.17Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0023 de 47 24. Cuando la diferencia es pequea entonces se dice que los dos mtodos tienenrelativamente la misma veracidad. Si la diferencia es grande y mdicamenteinaceptable, entonces es necesario identificar qu mtodo es el inexacto o el exacto,para lo cual pueden ser utilizados experimentos de recuperacin e interferencias. 277.3.1.2.1 ProcedimientoNmero de muestras. Para los experimentos de comparacin de mtodos unpromedio de 40 muestras deben ser probadas por ambos mtodos, la concentracindel analito debe cubrir el intervalo reportable y el espectro de los valores utilizadospara la decisin mdica.Un nmero mnimo de 20 muestras puede utilizarse siempre y cuando estas hayansido seleccionadas de acuerdo al criterio anterior, ya que son preferibles pocasmuestras basadas en su concentracin a muchas muestras recibidas aleatoriamentepor el laboratorio.27Nota: la calidad del experimento y la estimacin de los errores sistemticos depender ms de 27un amplio intervalo de prueba que de un gran nmero de resultados de prueba.Las muestras deben ser ensayadas el mismo da o lo ms cercano al da de lacoleccin de la muestra.27Se deben seguir las instrucciones del fabricante para la colecta y el manejo de lasmuestras. Para los laboratorios en que las muestras anormales sean poco frecuentespuede ser necesario almacenarlos hasta que haya suficiente nmero para elexperimento.14No se deben utilizar muestras que rebasen el intervalo reportable y se deben eliminarmuestras en las que se haya identificado la presencia de interferencias.14, 27Si no se tienen muestras para todo el intervalo analtico entonces la conclusin sersolo aplicable para el intervalo probado.27Nota: Los procedimientos de control de calidad interno deben estar corrindose en ambosmtodos.Duplicado de las medicionesLas mediciones deben realizarse por duplicado, estos duplicados deben ser realizadoscolocando la muestra en diferentes copas, para que sean analizadas en diferentescorridas (en tiempos diferentes y/o en portamuestras diferentes), o al menos endiferente orden (evitar la corrida de la misma copa) y por tanto una determinacinseguida de la otra.27Las rplicas proveen confianza sobre los resultados de las mediciones y ayudan aidentificar problemas de confusin de muestras, errores de transposicin y otroserrores, como burbujas en una de las muestras etc.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0024 de 47 25. La diferencia en datos proporciona la oportunidad de identificar rpidamente unadiscrepancia en la ejecucin del mtodo, o bien la posibilidad de desechar el dato portratarse de un valor aberrante.27Periodo de tiempoUn mnimo de 5 das es requerido para hacer el experimento, aunque un nmero dedas recomendables podran ser 20 das.Si se piensa en el nmero mnimo de muestras esto representa 4 muestras en 5 das ouna muestra diaria por 20 das.27Si se decide usar 40 muestras entonces sern 8 muestras por da.Se recomienda que las muestras sean analizadas dentro de un periodo mximo de 2horas entre un mtodo y el otro, y si se hace simultneamente es mejor.27Cuando se corran las muestras que han estado refrigeradas o congeladas estas sedeben correr en un periodo de una a dos horas despus de haber sido atemperadas.14Datos necesarios para el experimentoSe deber llenar una tabla con los siguientes datos y clculos estadsticos:14 ( %bi %b )2 ()NmeroResultado Resultadodemtodo de mtodo debi bi b bi b2%bi % bi % b DamuestrapruebacomparacinDonde: bi = (resultado del mtodo de prueba resultado del mtodo de comparacin) o sesgoindividual de la muestra en unidades convencionales. %bi = [(resultado del mtodo de prueba resultado del mtodo de comparacin)/(resultado del mtodo de comparacin)] x 100 o porcentaje del sesgo individual de lamuestra. %b = sesgo en porcentaje7.3.1.2.2 Evaluacin y criterio de aceptabilidadCalcular la diferencia (o sesgo individual de la muestra) en unidades convencionalesde reporte y/o el porcentaje de la diferencia (porcentaje del sesgo individual de lamuestra) entre los resultados de cada muestra para los dos mtodos.14El anlisis de datos ms elemental consiste en graficar y comparar los datosidealmente, al tiempo que los datos son colectados con el objeto de identificarGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0025 de 47 26. discrepancias entre el mtodo de prueba y el mtodo de comparacin, si hubieradiferencias se debe reanalizar para confirmar que esa diferencia es real y no un errorde confusin con las muestras.27Se espera que los dos mtodos presenten una relacin uno a uno de los datosobtenidos por lo que un grfico de la diferencia de los valores de los mtodos esrecomendable, esto es, se grafica bi o tambin se puede usar %bi , aunque lo mscomn es el primero, la diferencia de los valores del mtodo de prueba menos losvalores del mtodo de comparacin los cuales se colocan en el eje y, mientras losvalores del mtodo de comparacin sobre el eje x, como se muestra en la figurasiguiente:14,27Grfica de diferenciasLnea de diferencias nulas(Prueba de comparacin)DiferenciasDatos del mtodo de comparacinLos valores deben aparecer cerca de la lnea de diferencias nulas, aproximadamenteen la misma proporcin por encima y por debajo de la lnea.El promedio de las diferencias es el sesgo o desviacin, el cual se expresa enunidades convencionales, ste representa la diferencia promedio entre los mtodos yse obtiene de la siguiente manera:27 I bi b= i =1 nDe manera similar se obtiene el sesgo o desviacin en porcentaje:I %bi%b = i =1nAmbos valores se debern comparar con los del fabricante:Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0026 de 47 27. Si el sesgo estimado b es menor que el reportado por el fabricante entonces elusuario habr encontrado consistencia con lo declarado por el fabricante. Esto tambines vlido para el %b .14Si b < se concluye que el mtodo es aceptableSi lo anterior sucede entonces ya no es necesario calcular lo siguiente: ( )( ) 22bi b , bi b , % bi % b y %bi %bPero si b > , se concluye que el mtodo no cumple con lo declarado por el fabricantepor lo que, para aceptar el mtodo habr que demostrar que el valor de b no essignificativamente ms grande o realmente diferente de y entonces s se debern(bi b ) , %bi %b y ( %bi %b ) , para obtener la desviacin estndar 2 2calcular bi b ,de b y %b , la cual se calcula de la siguiente manera:14 ( ) ( %bi %b ) I2I 2 bi b Sb = i =1 y S %b = i =1 n 1n 1Los valores obtenidos permiten saber si hay diferencia estadstica significativa o noentre b y .Si algn usuario desea demostrar esto, se le sugiere lo siguiente: Verificar que el sesgo o desviacin o el porcentaje de sesgo son constantes atravs del intervalo analtico ya que este procedimiento solo puede ser aplicadocuando el sesgo es constante.14 Asumir un porcentaje de falso rechazo . Tpicamente los valores seleccionadospara este porcentaje de error , son: 1% y 5%. Determinar un valor de t con el punto porcentual (100-), de la distribucin t conn-1 grados de libertad. Donde n representa el nmero de muestras depacientes. Por ejemplo si = 1% y n = 20, el punto (100-) de la distribucin tcon 19 grados de libertad es 2,539 que se puede obtener en las tablas de t decualquier texto de estadstica.14 Calcular el valor de verificacin para el sesgo en unidades convencionales elcual est dado por la ecuacin:Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 27 de 47 28. t S b Valor de verificacin para b =n + Donde:t= valor de t calculado en tablas Sb = desviacin estndar del sesgon= Nmero de muestras= sesgo declarado por el fabricante Concluir con base en lo siguiente:Si el sesgo b estimado es menor que el valor de verificacin, el usuario hademostrado que l b es consistente con el sesgo declarado por el fabricante.Por el contrario si el sesgo b estimado es mayor que el valor de verificacin, ellaboratorio usuario ha demostrado que l b es inconsistente con el sesgo declaradopor el fabricanteSi el porcentaje de sesgo es utilizado, entonces se debe calcular el valor deverificacin para el porcentaje de sesgo como: t S % b Valor de verificacin para %b = n + Si %b estimado es menor que el valor de verificacin, el laboratorio usuario hademostrado que el %b es consistente con el sesgo en porcentaje, declarado por elfabricante.Por el contrario si %b estimado es mayor que el valor de verificacin el laboratoriousuario ha demostrado que l %b es inconsistente con el sesgo en porcentaje,declarado por el fabricante.14Esta comparacin de mtodos es til cuando el laboratorio quiere demostrar que elmtodo cumple con lo declarado por el fabricante. Si el mtodo es nuevo y se va aimplementar en el laboratorio entonces se sugiere aplicar el procedimiento de la guaNCCLS document EP9-A2 Method comparison and bias estimation using patientsamples.14Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0028 de 47 29. 7.3.1.3 Estudios de comparacin interlaboratorio con base en los resultadosde los programas de ensayos de aptitudNota: Un tipo de programa de ensayos de aptitud mediante comparaciones interlaboratoriosson comnmente conocidos en el rea clnica como Programas de Evaluacin Externa de laCalidad (PEEC).Los materiales utilizados (suero, plasma, liofilizados etc.) con un valor asignado porconsenso en los programas de ensayos de aptitud pueden ser utilizados para ladeterminacin de la veracidad o de la exactitud de medicin. En este caso lademostracin de la veracidad o de la exactitud de medicin se limita a la confirmacinpor el mtodo de prueba de que este se desempea de manera similar al mismomtodo en otros laboratorios.14Si un programa de ensayos de aptitud existe para un analito dado, los resultados sedeben interpretar usando los criterios de aceptacin del organizador.14Dado que muchos procedimientos analticos han sido implantados con meses o aosde antelacin estos se consideran procedimientos histricos dentro del laboratorio ypor lo tanto es preferible una verificacin interlaboratorio de la veracidad, que unacomparacin de mtodos.Por otra parte cuando se pretende implementar un nuevo mtodo en el laboratorio, nopuede hacerse con base en los resultados de programas de ensayos de aptitud, si noque en este caso se sugiere aplicar el procedimiento de la gua NCCLS documentEP9-A2 Method comparison and bias estimation using patient samples.14, 27El criterio de aceptabilidad para los procedimientos de examen que los laboratoriosclnicos van a acreditar deben demostrar consistencia en al menos los ltimos seismeses en la participacin y en los resultados de programas de ensayos de aptitud.Si las evaluaciones en los programas de ensayos de aptitud fueran por bimestre,trimestre o cuatrimestre, entonces se debe demostrar consistencia en, al menos losltimos doce meses tanto en la participacin como en los resultados de programas deensayos de aptitud.Los resultados expresados en ndice de desviacin no sern en promedio mayores de1,0 y los resultados expresados en puntuacin del ndice de varianza no sern enpromedio mayores a 100%, considerando en ambos indicadores valores absolutos. Loanterior deber ser corroborado por el experto tcnico al evaluar el proceso.Es requisito indispensable que el analito a acreditar se pruebe en, por lo menos, dosde los tres niveles de concentracin (baja, media y alta) del intervalo de medicin delmtodo. Lo ms conveniente es probar con tres niveles de concentracin. As mismo,sera ptimo contar con valores de exactitud de medicin o veracidad correspondientesa niveles de decisin clnica.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0029 de 47 30. 7.4 IncertidumbreLa utilizacin de procedimientos de examen adecuados para el propsito, permiteobtener resultados trazables con un nivel apropiado de incertidumbre. La trazabilidaddel resultado de medicin obtenido con los procedimientos de examen cuantitativospueden agruparse de acuerdo a lo establecido por el Joint Commite for Trazability onLaboratory Medicine (JCTLM) en aquellos cuyo resultado de medicin es trazable amateriales de referencia certificados trazables a unidades del sistema internacional(SI) o a mtodos de referencia a unidades de consenso aceptados por acuerdointernacional.Al realizar la validacin o verificacin de un mtodo debe incluirse la estimacin de laincertidumbre. La estimacin de la incertidumbre del resultado final de medicindeber considerar las contribuciones de incertidumbre significativas y que no seencuentren incluidas en el diseo de la validacin. Por ejemplo, preparacin delpaciente, muestreo, tipo de matriz, preparacin de la muestra, entre otras. 25La poltica de incertidumbre de la ema en el punto 5.3.2.2 establece:Como una consecuencia del uso de la incertidumbre en el rea clnica, y donde seaaplicable una declaracin de sta, se deber estimar de acuerdo a cualquiera de lossiguientes casos:a) Cuando el mtodo de medicin se haya validado dentro del laboratorio.b) Cuando existan datos provenientes de mediciones de control de calidad interno.c) Pruebas interlaboratorio para determinar los parmetros de desempeo del mtodo de acuerdo a la NMX-5725-3-IMNC.Cuando se requiera para soportar la validez o aplicacin del resultado de ensayo,cuando exista una solicitud expresa del cliente, o cuando la incertidumbre afecte elcumplimiento de una especificacin.Cuando en los procedimientos de medicin del rea clnica se dificulte el clculo de laincertidumbre componente por componente, el laboratorio debe por lo menos, intentaridentificar a todos los componentes de la incertidumbre y hacer una estimacin quepermita una interpretacin adecuada de la misma.Para la estimacin de la incertidumbre, el laboratorio proceder de la siguientemanera, segn sea el caso:Caso a, se debern considerar por lo menos la incertidumbre proveniente del materialde referencia (calibrador, ajustador, material de referencia certificado) y laincertidumbre de la medicin (datos de repetibilidad, datos del control diario, precisinintermedia).Caso b, si se cuenta con los datos de las mediciones de control de calidad interno sedebe proceder como en el caso a y si no se cuenta con informacin de laconcentracin y la incertidumbre del material de calibracin se debe considerarGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0030 de 47 31. nicamente la contribucin de la incertidumbre de la medicin. Por ejemplo cuando seutilizan calibradores electrnicos o ajustadores fotomtricos.Caso c, en los programas formales de comparacin interlaboratorio, es comn que elorganizador, informe un valor de ndice de desviacin (ID) o una puntuacin del ndicede varianza (PIV), este dato ser empleado para calcular el error cuadrtico medio(ECM) que corresponde al valor de la incertidumbre de la medicin.En caso de no existir dichos programas, el intercambio de muestras con otroslaboratorios ser vlido.En esta gua se considera para la estimacin de la incertidumbre lo propuesto en losincisos a y b, no obstante, los laboratorios debern continuamente identificar y evaluarla contribucin de otras fuentes de incertidumbre, tales como: la variabilidad de la fasepre-examen, variabilidad en la preparacin o reconstitucin de los calibradores, faltade conmutabilidad de los calibradores, inadecuacin de la funcin de calibracin,interferencias y el redondeo de los resultados, entre otras.38 BIBLIOGRAFA1.Castillo M. L., Fonseca M. E., Mejora Continua de la Calidad. Glosario. 1raedicin. Editorial Mdica Panamericana, pp 297 314, 1995.2. Douglas C. Montgomery. Control Estadstico de la Calidad, Grupo EditorialIberoamericana, 1991.3.Fuentes Arderiu, X, Snchez Manrique, M. Gua para estimar la incertidumbrede medida en ciencias de laboratorio clnico. Bioquimia. Octubre-Diciembre2002.4.Fuentes-Arderiu, X. Recomendaciones para la preparacin de los informes delaboratorio clnico, Artculo para el Consejo Tcnico de la Sociedad Espaolade Bioqumica Clnica y Patologa Molecular, 2005.5.Gella F. Javier. Control de calidad. Monografa. Barcelona: BioSystems.2005.6.Gella F. Javier. Metrologa en el laboratorio clnico. Monografa. Barcelona:BioSystems. 2005.7.Guder WG, Narayanan S, Wisser H, Zawta B. Muestras: del paciente allaboratorio. Impacto de las variables preanalticas sobre la calidad de losresultados de laboratorio, CD-ROM. Madrid: Becton Dickinson; 1999.8.Harmonized guidelines for single-laboratory validation of methods of analysis.Pure appl. Chem., vol. 74, n 5, pp.835-855, 2002.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0031 de 47 32. 9.ISO guide 30. Terms and definitions used in connection with referencematerials. 1992.10. Mtodos analticos adecuados a su propsito. Traduccin libre. CentroNacional de Metrologa. 199811. Miller N. James, Miller C. Janes, Estadstica y Quimiometra para QumicaAnaltica, Editorial Prentice Hall, 4 Edicin, 2002.12. MP-CA005-00 Manual de procedimiento. Incertidumbre de mediciones.Poltica. Entidad Mexicana de Acreditacin, A.C. 200713. NCCLS Document EP15-A; User Demonstration of Performance for Precisionand Accuracy; Approved Guideline. 2001.14. NCCLS. Document EP6-A: Evaluation of the Linearity of QuantitativeMeasurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline. 200315. NMX-CC-9000-IMNC-2000. Sistemas de gestin de la calidad. Fundamentosy vocabulario.16. NMX-CH-140-INMC-2002. Gua para la expresin de incertidumbre en lasmediciones.17. NMX-CH-152-IMNC-2005. Metrologa en Qumica-Vocabulario.18. NMX-CH-5725-1-IMNC-2006. Exactitud (veracidad y precisin) de resultadosy mtodos de medicin, parte 1: Principios generales y definiciones. 1.Edicin, 2006.19. NMX-EC-15189-IMNC-2006 Administracin de calidad en el laboratorioclnico.20. NMX-EC-43/1-INMC-2000 Ensayos de aptitud por comparacionesinterlaboratorios. Parte 1 Desarrollo y funcionamiento de programas deensayos de aptitud.21. NMX-Z-055-1997-IMNC, Metrologa vocabulario de trminos fundamentales ygenerales.22. NOM-177-SSA1-1998, Que establece las pruebas y procedimientos parademostrar que un medicamento es intercambiable. Requisitos a que debensujetarse los terceros autorizados que realicen las pruebas.23. Oficina de Acreditacin Guatemala. Poltica de seleccin y validacin demtodos de ensayo. Oct 200524. Organismo Argentino de Acreditacin. Gua para validacin de mtodos deensayo. Septiembre 2003.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0032 de 47 33. 25. Prez-Castorena, A, Guevara-Hernndez, A, Calculo de la incertidumbreasociada al resultado de la medicin de glucosa, Bioquimia, 107: 32-40;2002.26. Swartz, M., Krull, I.S. 1997. Analytical method development and validation.27. Westgard O. James. Basic Method Validation. 2nd. Edition. 2003 pp.29-30,87-99, 111-122.9 MATERIAL DE LECTURA ADICIONAL. NCCLS document EP5-A2: Evaluation of Precision Performance ofQuantitative Measurement Methods; Approved-Second Edition. (2004) NCCLS document EP6-A: Evaluation of the Linearity of QuantitativeMeasurement Procedures: A Statistical Approach; Approved Guideline.(2003) NCCLS document EP7-A: Interference Testing in Clinical Chemistry;Approved Guideline (2002) NCCLS document EP9-A2 : Method Comparison and Bias Estimation UsingPatient Samples; Approved Guideline - Second Edition (2002) NCCLS document EP10-A2: Preliminary Evaluation of Quantitative ClinicalLaboratory Methods; Approved Guideline - Second Edition (2002) NCCLS document EP12-A: User Protocol for Evaluation of Qualitative TestPerformance; Approved Guideline (2002) NCCLS document EP14-A : Evaluation of Matrix Effects; Approved Guideline(2001) NCCLS document EP15-A : User Demonstration of Performance forPrecision and Accuracy; Approved Guideline (2001) NCCLS document EP17-A: Protocols for Determination of Limits of Detectionand Limits of Quantitation; Approved Guideline. NCCLS document EP21-A : Estimation of Total Analytical Error for ClinicalLaboratory Methods; Approved Guideline (2003) Nota aclaratoria: El National Committee for Clinical Laboratory Standards denominado hasta el 2004 fue conocido como NCCLS, actualmente es Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI).Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0033 de 47 34. ANEXO EJEMPLOS PARA LA EVALUACIN DE LOS PARMETROS DEVERIFICACIN1. - Ejemplo de Evaluacin de la linealidadSuponer que se va a evaluar la linealidad de un mtodo analtico para ladeterminacin de colesterol, el fabricante del equipo menciona que el mtodo es linealen el intervalo de 40 a 430 mg/dL.Por lo tanto lo primero que se debe hacer es buscar controles o muestras muycercanas a estos lmites, de preferencia por abajo del menor y por arriba del superior,sin embargo esto ltimo no debe ser considerado un requisito o una limitante.Primero se decidir si se hace con calibradores, con sueros control o con muestras;nicamente si no se pueden tener calibradores ni sueros control se optar por utilizarmuestras de pacientes.1.1 - Ejemplo de evaluacin de la linealidad utilizando muestrasSuponer que la determinacin de colesterol se realiza en la misma fecha y en el mismoequipo con dos muestras, una de concentracin igual a 50 mg/dL y otra de 410 mg/dL.Ntese que la primera muestra es mayor en concentracin que el lmite inferior y lasegunda muestra tiene una concentracin menor que el lmite superior reportado por elfabricante.Por lo que el usuario de esta gua podra preguntarse podra usar un par de muestrasde 80 mg/dL y 320 mg/dL, o quizs de 160 y 400 mg/dL?La respuesta en ambos casos es s, pero la linealidad del mtodo solo ser vlidapara el intervalo seleccionado.27 Al seleccionar el intervalo de verificacin para lalinealidad, se deben considerar los siguientes criterios:Si se tiene el intervalo terico, el intervalo probado debe ser al menos 2/3 del tericopero adems incluyendo puntos de decisin clnica.Si no se tiene el intervalo terico entonces el experto tcnico deber aplicar su criterio,ya que si un laboratorio evala la linealidad en un intervalo muy pequeo, por ejemplode 150 a 250 mg/dL, el resultado sera poco representativo y por lo tanto el ejerciciosera inadmisible.Suponer que se designa a la muestra de 50 mg/dL como muestra 1 y a la de 410mg/dL como muestra 2 y que se preparan diluciones, de acuerdo a la tabla 1.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0034 de 47 35. Tabla 1. Preparacin de dilucionesNmero dePorcin en volumen Porcin en volumen dilucinde la muestra 1de la muestra 2 1Usar sin diluir0 231 322 413 50Usar sin diluirPor lo general se realizan al menos tres mediciones de cada dilucin y se tabulan losdatos (supuestos) como en la tabla siguiente.Tabla 2. Obtencin de las medias de concentracin de las respectivas dilucionesMediciones de concentracinPreparacin de la Dilucin o actividad Mediadilucin12 3No serequierepreparacin (M1) (usar1 valores muy bajos o 47 49 48 48cercanos a cero enconcentracin)Tres partes de M1 y una2135 135137 135,6M2Dos partes de M1 y dos3230 233236233partes de M2Una parte de M1 y tres4330 322329327partes de M2No serequierepreparacin (M2) (usarmuestra con valor de5401 407399 402,3concentracin cercanoal tope del mbitolineal).Se grafica la media de las replicas sobre el eje Y, contra el valor conocido(calibradores) o asignado (sueros control o muestras) sobre el eje X. 14, 27Con los datos de la media de las muestras, tabla 3, se grafican las coordenadas de lospuntos (0%, media de la dilucin 1), (25%, media de la dilucin 2), (50%, media de ladilucin 3), (75%, media de la dilucin 4), (100%, media de la dilucin 5).Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 35 de 47 36. Tabla 3. Linealidad utilizando muestrasMedia de laDilucin % concentracin(M2)(md/dL)048 25135,6 50 233 75 327100402,3 Usando el mtodo de mnimos cuadrados, se calcul la ecuacin de la recta de regresin para los puntos dados y el coeficiente de determinacin.500 y = 3,6x + 49,18Colesterol en mg/dL400 R2 = 0,9983300200100 0020 40 60 80 100 120DilucinEl valor r2, 0,9983 del coeficiente de determinacin indica la proporcin de la varianzade y que puede atribuirse a la varianza de X.1.2 - Ejemplo de evaluacin de la linealidad utilizando calibradoresSi, para evaluar la linealidad, en vez de muestras se utilizan calibradores deconcentracin conocida, la tabla de datos (supuestos), puede ser la siguiente:Tabla 4. Linealidad utilizando calibradores Valor de la mediaValor asignado de los (mg/dL) calibradores (mg/dL) 5048 138,2 135,6230 233320 327410402,3Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 00 36 de 47 37. Estos datos se grafican y la curva resultante corregida por el mtodo de mnimoscuadrados resulta lineal con una pendiente de 0,9981 y su intercepto de - 0,0134. (Lapendiente deseable es de 1,00 y la ordenada al origen de 0).500 Valor obtenido mg/dL y = 0,9981x - 0,0134400 R2 = 0,9984300200100 00100 200300400500 Valor asignado mg/dLEl valor r2 0,9984 del coeficiente de determinacin indica que en el intervalo evaluado,la funcin de calibracin es lineal, sin embargo esto no es suficiente, se deben obtenertambin las desviaciones y para ello se completa la Tabla 5. Tabla. 5 Validacin del intervalo reportable Nmero deMedia, valoresValor tericoSesgo % Errordilucin prcticos YX (sesgo)1 4850 -2 -4,0%2 135,6 138,2 -2,6 -1,88%3233 23031,3%4327 32073,0%5 402,3410-7,7 -1,87%Finalmente, se compara el sesgo (desviacin) o el porcentaje de error para cadadilucin con el error permitido para la prueba, de acuerdo con la informacin delfabricante o del mtodo, donde el sesgo (desviacin) y % de error debe ser menor queel error permitido y a partir de esta comparacin se toma la decisin de aceptabilidad orechazo.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0037 de 47 38. 2. - Ejemplo de la precisin obtenida en el laboratorioSuponer que se ha determinado colesterol utilizando un suero control y que se hanrealizado 20 determinaciones en el transcurso del da y sus resultados fueron:Tabla. 6 Resultados intrada de un suero controlN de lecturasColesterol en mg/dL 1204 2200 3198 4201 5203 6200 7199 8198 9202 10 206 11 197 12 202 13 206 14 200 15 197 16 198 17 200 18 200 19 205 20 208De los datos se obtienen la media, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin,para posteriormente aplicarle el criterio de aceptabilidad.Media = 201,2DE = 3,14CV= 1,56%De acuerdo a los criterios de aceptabilidad de CLIA para imprecisin intraserial ointrada, la desviacin estndar obtenida debe ser igual o menor a del error totalpermitido.27 Para colesterol el error total permitido 10 %Esto es: DE intraserial o DE intrada 0,25 ET (error total permitido)Sustituyendo el valor para colesterol se tiene: DE intradia 0,25 (10%)De ah que al comparar el valor de CV obtenido en el ejemplo vsel criterio deaceptacin, resulta que es menor.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0038 de 47 39. 1,56% 2,5%Por lo que se concluye que la imprecisin del mtodo de colesterol es aceptable.Cabe mencionar, que aqu podran usarse 20 valores del control interno del colesteroly aplicar el criterio para la DE interserial 0,33 ET (error total permitido).Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0039 de 47 40. 3. - Ejemplos para verificar la veracidad3.1 - Ejemplo para determinar la veracidad de un mtodo analtico utilizando elclculo del error relativoSe desea determinar el error relativo del mtodo utilizado para la cuantificacin de laconcentracin de leucocitos (WBC) en un contador de clulas por citometra de flujo.Para ello se emplea un material de referencia que indica una concentracin de 9,7 1x 103 clulas / L. Despus de la calibracin adecuada del equipo, se realizan 10lecturas del material de referencia y se calculan la media, la desviacin estndar y elcoeficiente de variacin, obteniendo los siguientes resultados: Tabla. 7No. de Concentracin lecturas WBC x 103 cel / L. 19,8 29,8 39,5 49,7 59,8 69,8 79,8 89,5 99,7109,8 Media9,71 DE 0,12 % CV 1,26Determinacin del error relativo: % Error Relativo = ((Valor real Valor media) / Valor real) x 100Se sustituyen los valores en la frmula:% Error Relativo = ((9,70 9,71) / 9,70) x 100 = -0,1989 %Interpretacin de los resultados:En este caso el % error relativo es igual a -0,1989 %El criterio de aceptabilidad es que el valor sea menor o igual al reportado por elfabricante del instrumento, si el fabricante ha reportado un valor de 2 %, se concluyeque la veracidad del mtodo es aceptable.Ya que entre menor sea el porcentaje de error relativo mayor ser la veracidad delmtodo.Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0040 de 47 41. Y como podr notarse, la desviacin estndar y el coeficiente de variacin no se usanen los clculos, sin embargo, son importantes dado que podramos tener datos comolos siguientes: Tabla. 8 No. deConcentracinlecturasWBC x 103 cel / L1 8,92 9,13 9,54 9,75 9,46 9,9710,28 9,5910,5 1010,3Media9,7DE0,52% CV5,38Donde el valor de la media es prcticamente el mismo que el valor esperado, peroaqu el coeficiente de variacin es muy grande y si consideramos que el porcentaje delcoeficiente de variacin reportado por el fabricante es de 4%, entonces el mtodo debedescartarse para WBC.Nota. Cuando se realicen experimentos de veracidad es muy conveniente corroborarque tambin se cumple con criterios de precisin.En este ejemplo la desviacin estndar es igual a 0,52. Esta informacin es til paraestimar la incertidumbre del valor promedio, de manera que la decisin sobre laveracidad del mtodo analtico se realiza sobre una base terica ms robusta.3.2 Ejemplo para determinar la veracidad de un mtodo analtico por mediodel porcentaje de recuperacinSe desea determinar la veracidad de la cuantificacin de la concentracin de laglucosa por el mtodo de GOD-PAP en un equipo automatizado.Se emplea un suero control con un valor conocido de 106 mg / dL (5,8 mmol / L).Metodologa:Despus de realizar la calibracin como lo indica el fabricante del equipoautomatizado, se realizan 10 lecturas del suero control y se obtienen los siguientesdatos:Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0041 de 47 42. Tabla. 9 Resultados glucosa en suero control N deConcentracinLecturasmg/dL111121023111410751136110710981129109 10111 Media 109,45 DE 3,13 % CV 2,86Determinacin del % de Recuperacin: % de Recuperacin = (Valor obtenido/ Valor verdadero) x 100Se sustituyen los valores en la frmula:% de Recuperacin = (109,45 / 106,00) x 100 = 103,2 %Interpretacin de los resultados:En este caso el % de Recuperacin es igual a 103,2 % lo que indica que larecuperacin es mayor a un 3 % del mensurando.Si se considera el criterio de que el porcentaje permitido de recuperacin o la mediadel porcentaje de recuperacin vare de 98% a 102%, se concluye que el mtodoanaltico no es aceptable ya que l % de recuperacin est fuera del intervaloestablecido.El criterio anterior, no siempre se cumple en todos los sistemas analticos ni para todoslos analitos, por lo que un segundo criterio es que el valor sea menor o igual alreportado por el fabricante del instrumento.Si el fabricante proporciona un porcentaje de recuperacin de 100 4%, entonces elvalor de 103,2 % sera aceptado.3.3 Ejemplo para determinar la veracidad de un mtodo de prueba por medio dela comparacin contra un mtodo aceptadoGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0042 de 47 43. Considere un experimento para la comparacin de dos mtodos analticos utilizadospara la determinacin de colesterol total en el laboratorio. El mtodo de prueba es elque se desea verificar si cumple con las especificaciones de veracidad del fabricante,y el mtodo de comparacin es el usado por otro laboratorio (por ej. el laboratoriosubcontratado).Se analizan por 5 das, 4 muestras en el intervalo de 50 a 303 mg/dL de colesterol,esto cubre casi todo el intervalo analtico incluyendo valores cercanos a puntos dedecisin clnica, como 200 mg/dL.27Los resultados y clculos asociados se dan en la tabla 10. Tabla. 10 Resultados de la comparacin entre los dos mtodos Resultado Resultado mtodo de mtodo de2 2Da Muestra pruebacomparacin bibi-b (bi-b) %bi %bi-%b (%bi-%b) 11 6063-3 -5,1626,63 -4,76-6,9348,052206 200 63,8414,753.00 0,83 0,693158158,2-0,2-2,36 5,57 -0,13 -2,3 5,274106 102 41,84 3,393,92 1,75 3,07 25 5850 85,8434,11 16.0013,83 191,276184 179 52,84 8,072,79 0,62 0,397264 259 52,84 8,071,93-0,24 0,068210 212-2 -4,1617,31 -0,94-3,11 9,69 39 7971 85,8434,11 11,279,182,77 10130131,6-1,6-3,7614,14 -1,22-3,3911,46 11130 129 1 -1,16 1,350,78-1,39 1,95 12159 164-5 -7,1651,27 -3,05-5,2227,24 4 13283 277 63,8414,752,17 0.00 0.00 14196 201-5 -7,1651,27 -2,49-4,6621,69 15176 169 74,8423,43 4,141,973,89 16115 120-5 -7,1651,27 -4,17-6,3440,15 5 17197 198-1 -3,16 9,99 -0,51-2,68 7,16 18 7670 63,8414,758,576,440,98 19133 127 63,8414,75 4,722,556,53 20307 303 41,84 3,39 1,32 -0,850,72Sumas43,2 402,2943,36503,02b2,16 %b2,17Primero se obtiene el valor de las diferencias (sesgo individual) resultado del mtodode prueba menos el resultado del mtodo de comparacin, dichos valores se suman yse obtiene un valor de 43,2 para bi y de 43,36 para %bi con lo cual se aplica laecuacin para obtener el sesgo en unidades convencionales y en porcentaje. I bi 43.2 b= i =1 == 2.16 mg / dL n20Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0043 de 47 44. I %bi43.36 %b = i =1 = = 2.17 % n20Posteriormente, elaborar el grfico de las diferencias, expresando en este el valor de bsi este estuviera en unidades convencionales o bien el de %b si el grfico lohubisemos expresado en %.Grfica de las diferencias de la comparacin de mtodos paracolesterol total. 10 8 6 4Diferencias bi 2 b 00 50 100150 200 250300 350 -2 -4 -6 Valores de colesterol del mtodo de comparacin en mg/dL.Ahora si el sesgo declarado por el fabricante es de 2,5 mg/dL y 2,7%respectivamente, entonces se tiene que:b < o bien que %b < expresado en porcentaje.Otra forma es comparar en un grfico, los datos del mtodo de prueba (en el eje Y) ylos datos del mtodo de comparacin (en el eje X).Se traza la mejor recta mediante regresin lineal, con lo que se obtiene la pendiente yla interseccin al origen: Y= mX + bDonde:m = pendienteb = intercepto en Y u ordenada al origenX = valor del mtodo de comparacinGua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuantitativosempleados por el laboratorio clnico/Marzo 2008.Fecha de emisin 2008-04-15, fecha de entrada en vigor 2008-09-01, revisin 0044 de 47 45. Y = valor del mtodo de pruebaPara el caso de los datos de la tabla anterior se obtiene el grfico y ecuacin siguiente:Grafico de mtodo de comparacin Vs. mtodo de pruebaY = 0.9977 X + 4.72r =0.9979350300250 Valores mtodo de prueba20015010050 00 50 100 150200250300350 Valores de mtodo de comparacin mg/dL.M. Prueba M. ComparacinLa ecuacin permite obtener el error sistemtico en los puntos de inters mdico, deforma tal que sustituyendo X por el valor de 200 mg/dL se obtiene el valor para elmtodo de prueba.Y = (0,9977 x 200) + 4,72 = 199,54 + 4,72 = 204,26 mg/dLEnseguida se procede a calcular el valor de desviacin (sesgo) en los puntos dedecisin clnica.21Y calculado X punto de decisin clnica = 204,26 200 = 4,26 mg/dL.Lo que significa que hay un error sistemtico de 4,26 mg/dL y un %b de (4,26/200) x100 = 2,13 % muy similar al obtenido por el mtodo de las diferencias que fue de 2,17%. Este valor, 2,13, tambin es inferior al 2,7% declarado por el fabricante, por lo quese confirma que el mtodo es conforme con lo establecido por el fabricante.3.4 Ejemplo para estimar la incertidumbre componente por componenteMedicin de la concentracin de masa de albmina en la orina.3Gua para la validacin y la verificacin de los procedimientos de examen cuanti