Una estrategia eficaz para la ingeniera del genoma mediada por TALEN en Drosophila.

UNA ESTRATEGIA EFICAZ PARA LA INGENIERA DEL GENOMA MEDIADA POR TALEN EN DROSOPHILA.Crdenas Hurtado, RosmeryChacn Snchez, DaliaCharaja Apaza, DianaChoquetico Iquiapaza, IvoneCorzo Beltrn, ValeryRoque Borda, CesarIntegrantes:

Qu es TALEN?La tecnologa TALEN consiste en utilizar un nuevo tipo de nucleasas especficas (N) efectoras (E). facilitan la edicin especfica del genoma mediante la creacin de roturas de doble cadena en el ADN en lugares especficos del usuario.Roturas de doble cadena son importantes para la mutagnesis de sitio especfico en el que estimulan proceso natural de reparacin del ADN de la clula, es decir, la recombinacin homloga y recombinacin no homloga.

Edicin de genoma de su gen Favoritos (YFG) utilizando Talens.La secuencia se identifica El target, una secuencia TALEN correspondiente se dirige y se inserta en un plsmido.El plsmido se inserta en la clula diana donde se traduce para producir el TALEN funcional, que entra en el ncleo y se une y escinde la secuencia diana.Dependiendo de la aplicacin, esto puede ser utilizado para introducir un error (para noquear a un gen diana) o para introducir una nueva secuencia de ADN en el gen diana.

Nucleasas utilizadasNI ANG TNK GHD -- CConstruccin de TALEN:TALEN yTALEN wTALEN UDPTALEN wgConstruccin de plsmidos donantes:Brazo izquierdo y derecho del cromosoma X se amplificaron a partir de mosca (salvaje) y clonados en pGEM-T

Micro inyeccin de embrin:

F1Gen y: amarillo, fenotipo caracterstico (cuerpo amarillo).Gen w: blanco, pigmentacin de ojos rojos reducido o perdido por completo.Deteccin del TALEN inducida por los 2 genes mutantes con EGFP

Las moscas que llevan integraciones lnea germinal del gen marcador se identificaron mediante fluorescencia verde en los ojos de la progenie de los embriones micro inyectados.GRACIAS