SEMINARIO

CURSO: Microbiología General

DOCENTE: Eterio Alva Muñoz

INTEGRANTES:

Arroyo Lozano Junior Yorkei Burgos Agreda Gleyser Isaac Huincho Aquiño Sonia Marisol Luera Dominguez Royder Santos Vásquez Villacorta Nelly Sofía

“Año de la Diversificación Productiva y del Fortalecimiento de

la Educación”UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

BOTULISMO

INTRODUCCIÓNEsta interesante enfermedad (afortunadamente rara) se debe a la exotoxina formada por el crecimiento del Clostridium botulinum, en algún tipo de alimento preparado o conservado. Su nombre deriva del latín botulus, que significa salchicha, y se aplico originalmente a esta enfermedad, debido a que numerosos casos, sobre todo en Alemania, fueron producidos por el consumo de salchichas contaminadas. En 1793 (Alemania) se presentó por primera vez un brote de “envenenamiento por embutidos” en el que hubo 13 enfermos, 6 de los cuales murieron.

El brote se imputó a un embutido de sangre (tripa de cerdo rellena de sangre y otros ingredientes)una ves llena la tripa se ataba ,se sometía a un ligero hervor, se ahumaba y se conservaba a temperatura ambiente. En 1820-1822 Justinius Kerner estudió 230 casos de “envenenamiento por embutidos” y observo que el embutido no era toxico si se dejaba bolsas de aire en las tripas y si se sometía a ebullición. En 1896, 24 socios de un circulo musical comieron jamón salado crudo, 23 enfermaron y 3 murieron, un grupo de microbiólogos (Ermengem) ponían fin a la incertidumbre, al demostrar que el botulismo era causado por la toxina de un bacilo anaeróbico. En los EE.UU la mayoría de los casos se han debido a

verduras enlatadas, especialmente maíz, o espinacas.

El Clostridium botulinum es un bacilo gram positivo, anaeróbico, saprofito y habitante normal en el suelo de todas las partes del mundo, que forma esporas subterminales. Se han registrado siete tipos dentro de la especie(A-B-C-D-E-F-G). Cada uno forma una exotoxina ligeramente diferente. El tipo A de toxina botulínica y la toxina tetánica son las sustancias más venenosas que se conocen. Son aproximadamente 400 veces más toxicas que la toxina diftérica. Afortunadamente, la toxina botulínica se destruye por ebullición durante 10 minutos.

El botulismo es una intoxicación, no una infección. Las esporas del bacilo están ampliamente distribuidas y pueden contaminar toda clase de alimentos, pero la ingestión de alimentos frescos nunca causa botulismo.

Todos los casos humanos pueden atribuirse a la ingestión de alimentos conservados en alguna forma, generalmente enlatados, pero insuficientemente procesados, de modo que la esterilización no fue completa y sobrevivieron las esporas resistentes del Clostridium botulinum. Estas pueden germinar y los bacilos resultantes (debido a que son saprofitos y anaeróbicos) encuentran en la lata cerrada condiciones para multiplicarse.

El organismo y sus características

CLASIFICACIÓN DE LA BACTERIA, CARACTERÍSTICAS DE SUS ESPORAS Y LA TOXINA

CLASIFICACIÓNTaxonomía y clasificación de acuerdo a la especificidad serológica de sus toxinas y Según la Subdivisión fisiológica

TAXONOMÍA

Reino: Bacteria

División: Firmicutes

Clase: Clostridia

Orden: Clostridiales

Familia: Clostridiaceae

Género: Clostridium

Especie: C. Botulinum

Bacilo Gram positivo con flagelos perítricos

Anaerobio, productor de gas.

Esporulado

DE ACUERDO A LA ESPECIFICIDAD SEROLÓGICA DE SUS TOXINAS

Tipo A: es el más corriente de los productores de botulismo en la especie humana, en todo el oeste de USA. Suele ser mas toxico que el tipo B.Tipo B: es el más corriente que el A en los suelos de casi todo el mundo y menos toxico para la especie humana. Tipo C: Produce el botulismo de las aves, ganado vacuno, visón y otros animales, pero hasta ahora no se conocen casos en la especie humana.

Tipo D: es el responsable de la intoxicación por forraje del ganado vacuno en la Unión sudafricana.

Tipo E: toxico para el hombre, se encuentra fundamentalmente en el pescado y productos derivados.

Tipo F: se parece a los de tipo A y B, excepto en su toxina; se ha aislado en Dinamarca y produce botulismo en el hombre.

Tipo G: se ha aislado en los suelos argentinos pero no es responsable del botulismo humano.

Una toxina: es una sustancia venenosa producida por células vivas u organismos, como animales, plantas, bacterias y otros organismos biológicos.Serología es un análisis de sangre para detectar la presencia de anticuerpos contra un microorganismo.

SEGÚN LA SUBDIVISIÓN FISIOLÓGICA

GRUPO TIPOS DE TOXINA

PROTEOLÍTICO LIPOLÍTICO SACAROLÍTICO PSICRÓTROFO (TEMP. CREC. )

INHIBICION POR SAL (aw)

Termorresistencia

patogenicidad

I A,B o F + + + - (10-12° C) 10% (0.94) + (D121 0.1-0.25 min)

Personas

II B, E o F - + + + (3-5° C) 5% (0.975) - (D80 0.6-3.3 min)

Personas

III C1 C2 o D - + + - (10-12° C) 3% Habitualmente animales y

aves.IV G + - - Sin datos >3% Sin datos Personas

Fuente: Microbiología de los alimentos pág. 214

Psicrótrofo viven a T° entre -5 y 35°CProteolítico: que degrada proteínas.Valores D: se utiliza para indicar el tiempo de reducción decimal, o sea, el tiempo de calentamiento que a una temperatura dada determina una reducción del 90% en el recuento de esporas (o células viables)

CARACTERÍSTICASDe las esporas y la toxina

LAS ESPORAS

Termorresistencia

Grupo II y tipo D Grupo I

Radiorresistencia

Tipo A y B Tipo E

Psicrótrofo viven a T° entre -5 y 35°C Valores D: se utiliza para indicar el tiempo de reducción decimal, o sea, el tiempo de calentamiento que a una temperatura dada, determina una reducción del 90% en el recuento de esporas (o células viables)

LA TOXINA

• La toxina botulínica, también llamada «botulina», es una neurotoxina.

• Se trata de uno de los venenos más poderosos que existen y es una proteina, relativamente termolábil, su fórmula química es: C6760H10447N1743O2010S32.

• Es soluble en agua, inodora, insípida e incolora

Producción de toxina

- Ausencia de O2

- T° entre 3°C y 45-

50°C

- pH ligeramente ácido o alcalino

(superior a 4,6)

-Alta cantidad

de proteinas.-Baja [ ] de

sal

Factor que ihnibe la producción de toxina

En carne, contenido de agua al 30%.

Ph de 4.5 o inferiores

Concentracion de sal de 8%

Maíz > Guisantes > Judías verdes > Espinacas

El poder de la toxina en los alimentos enlatados (de mayor a menor poder)

Patogenia y signos clínicos

¿Cómo se contrae el botulismo?

El botulismo por vía alimenticia: se contrae al comer alimentos que contienen la toxina.

El botulismo infantil: se ha asociado con el comer miel que contiene las esporas bacterianas.

El botulismo por herida: ocurre cuando se produce la toxina en una herida infectada

El botulismo por inhalación: ocurriría más probablemente como consecuencia de un acto de

terrorismo biológico.

Patogenia:

Signos clínicos:

1. Botulismo transmitido por alimentos:

• los primeros signos suelen ser trastornos gastrointestinales tales como nauseas, vómitos y dolor abdominal

• A medida que progresa la enfermedad, se desarrolla una parálisis fláccida simétrica descendente en los nervios motores y autónomos. Los signos clínicos pueden incluir visión borrosa o doble, fotofobia, párpados caídos, rostro inexpresivo, arrastre de las palabras, disfagia, retención urinaria, boca seca, somnolencia y debilidad muscular. Los casos no tratados pueden progresar a una parálisis descendente de los músculos respiratorios, brazos y piernas.

• A menudo se produce la muerte como resultado de compromiso respiratorio. La recuperación puede tomar semanas o meses.

2. Los síntomas del Botulismo infantil

• El primer síntoma es generalmente constipación, que puede durar varios días antes de que se desarrolle la parálisis fláccida. También se puede observar letargo, debilidad, períodos excesivamente prolongados de sueño, dificultad para mamar y tragar, reflejo faríngeo disminuido, disfagia con párpados caídos y reflejos pupilares disminuidos a la luz.

• Algunos bebés desarrollan un llanto débil o alterado. En casos progresivos, el niño puede desarrollar parálisis fláccida, es típico observar la “cabeza caída”. En casos graves, puede haber disfunción o paro respiratorio.

4. Los síntomas del botulismo por inhalación:

• Aparecen aproximadamente entre 12 y 80 horas después de la exposición. Se parece al botulismo transmitido por alimentos.

3. Los síntomas del botulismo por herida:

• Los síntomas del botulismo por heridas es muy similar a la forma por transmisión de alimentos; sin embargo, en general no están presentes los signos gastrointestinales, y los pacientes pueden tener una herida que supura, o desarrollar fiebre.

Diagnóstico

Botulismo por heridas, inhalación y alimentación

Se puede utilizar el ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas

(ELISA) y después se realiza la biocuantificación en ratones.

Botulismo infantil

Mediante la demostración de la detección de las toxinas botulínicas y del organismo

en las heces fecales de los niños.

Prueba de Elisa:• Si se trata de botulismo, te

someterás a la venopunción.• Luego, se enviará la muestra

al laboratorio donde se evaluará.

• El resultado es positivo cuando el color de la solución cambia.

Biocuantificación en ratones:

• Durante el examen, tu suero sanguíneo se mezclará con diferentes tipos de antitoxinas específicas para las cepas de Clostridium botulinum y se inyectarán en el estómago de un grupo de ratones.

• Se inyectarán antitoxinas específicas a 2 pares, mientras que el tercer par no recibirá la antitoxina, solo el suero sanguíneo.

• Luego, los trabajadores de laboratorio observarán a los ratones y los síntomas de botulismo, como dificultad para respirar, debilidad muscular, piel erizada, cintura de avispa y muerte.

• Si se presentan síntomas, la prueba indicará positiva en Clostridium botulinum.

 

Tratamiento:

La antitoxina equina •Puede producir efectos adversos tales como sensibilidad a las proteínas equinas, con la posibilidad de anafilaxia.

La antitoxina humana •La dosis recomendada es de 1 ml/kg peso (50 mg/kg) y debe ser administrada tan pronto como se sospeche.

Prevención:• Las toxinas expuestas a la luz solar se inactivan dentro de 1 a 3

horas. También se pueden inactivar con un tratamiento de hipoclorito de sodio al 0.1%

• Escoger frutos frescos en su punto justo de maduración, ni verdes ni pasados, eliminando los rotos, golpeados y agrietados. Lavarlos con agua potable eliminando todos los restos de tierra que puedan tener.

• Recalentar alimentos uniformemente por encima de 75 ºC. Cuando se hace en microondas, remover periódicamente para asegurar calentamiento homogéneo.

• Cuando se hagan conservas caseras deberían envasarse sólo frutas ácidas como manzanas, peras, piña etc.

Aislamiento e identificación del

botulismo

AISLAMIENTO

En la diversidad existente dentro de esta especie en

el aislamiento de C. botulinum los medios

selectivos son de un uso bastante limitado y la

identificación se basa en la capacidad de las colonias

tipicas para producir toxina en los cultivos.

• Con frecuencia la C. botulinum constituye un pequeño porcentaje de la micro flora total por lo que para aumentar la probabilidad de aislamiento es necesario el enriquecimiento o la pre incubación. Los cultivos enriquecidos se someten a un calentamiento antes de incubarlos para eliminar los microorganismos anaerobios no esporogenos.

TIEMPO DE CALENTAMIENTO DEL CULTIVODependiendo del régimen de calentamiento usado comúnmente se cita el régimen de calentamiento a 80°C durante unos 10 minuto para así poder eliminar las cepas de C. botulinum menos termo resistentes.

TÉCNICASSe ha descrito una técnica que simplifica este

procedimiento incorporando antitoxina en el medio de agar en cuyo caso las colonias que producen toxina están

rodeados de una zona del precipitado toxina – antitoxina.

• Un extracto sospechoso de contener toxina se divide en tres facciones: una de estas fracciones para utilizar como testigo, se calienta a 100°c durante 10 minutos con el fin de destruir cualquier toxina existente; otro a parte con tripsina con el fin de evitar cualquier prototoxina; y la tercera no se trata. El tipo de toxina se puede identificar con antisueros mono valentes .

LOS TIPOS DE ANTISUEROS

• Los antisueros PROLAB y MUREX polivalentes se preparan mezclando el antisuero no absorbido de modo que den fuertes reacciones de aglutinación con las cepas correspondientes. Estos antisueros polivalentes sirven para guiar el diagnóstico, pero la identificación del grupo sólo puede realizarse con los antisueros monovalentes somáticos (O ó Vi) adicionales.

Los antisueros monovalentes flagelares (H) se utilizan para establecer la fórmula antigénica del aislamiento.Todos estos antisueros se fabrican en conejos, de acuerdo con la WHO (World Health Organization) utilizando cultivos específicos de referencia y absorbidos por otros cultivos heteroespecíficos, para eliminar anticuerpos que reaccionan con antígenos homólogos.

ASOCIACIÓN CON ALIMENTOS

La enfermedad del botulismo transmitida por los alimentos es un tipo severo de envenenamiento causado por la ingestión de alimentos conteniendo la potente neurotoxina formada durante el crecimiento del microorganismo.

El botulismo es una intoxicación alimentaria grave, a menudo mortal, que ocurre tras el consumo de alimentos que contienen la exotoxina producida por C. botulinum.

Incluso en muy pequeñas cantidades, esta neurotoxina puede ser peligrosa. Una dosis de entre 0,1 y 1 millonésima de gramo puede causar la muerte de una persona.

Si los alimentos se procesan de modo adecuado, de tal forma que las endosporas de C. botulinum se eliminen o mueran, no se producirán problemas; pero si existen endosporas viables, pueden germinar y producir toxina.

BOTULISMO TRANSMITIDO POR LOS ALIMENTOS

En los brotes de botulismo se pueden descubrir cuatro características corrientes:

1. El alimento ha sido contaminado en el origen o durante su tratamiento con esporas o con células vegetativas de C. botulinum.

2. El alimento recibe algún tratamiento que restringe la microflora competitiva y, en circunstancias normales, también debería controlar a C. botulinum.

3. Las condiciones existentes en el interior del alimento (pH, Eh, aw) son apropiadas para el crecimiento de C. botulinum.

4. El alimento se consume frío o después de un tratamiento suave que es insuficiente para inactivar la toxina.

CARACTERÍSTICAS:

Puesto que los alimentos enlatados poco ácidos pueden satisfacer todos los criterios anteriores, para garantizar su inocuidad, en la industria del enlatado ha sido necesario implantar rigurosas medidas de control del tratamiento.

La toxina botulínica se ha encontrado en diversos alimentos, incluidas conservas vegetales con bajo grado de acidez, tales como judías verdes, espinacas, setas y remolachas; pescados, incluido el atún en lata y los pescados fermentados, salados y ahumados; y productos cárnicos, por ejemplo, jamón y salchichas.

La asociación desde hace mucho tiempo del botulismo con productos cárnicos en Europa ya ha sido indicada y la inadecuada curación de las carnes todavía origina problemas fortuitos en algunos países europeos.

CARNES:

En la producción de embutidos es indispensable la adición de nitritos con el fin de evitar el crecimiento de C. botulinum y la consecuente producción de su toxina, así como para la obtención del color rosado en las carnes curadas y embutidos.

El pescado ahumado que se consume sin volverlo a calentar, generalmente ha sido ahumado en caliente por lo que el control de C. botulinum depende de la inactivación microbiana por el calor sumada a los efectos inhibidores de la sal, de los constituyentes del humo y de la desecación superficial.

PECES:

Los peces se pueden contaminar con C. botulinum, especialmente por el tipo E, en el medio acuático y de aquí que los productos ahumados derivados del pescado hayan sido responsables de varios brotes de botulismo causado por el tipo E.

La contaminación del suelo es un origen importante del C. botulinum existente en los alimentos y constituye un origen al que están inevitablemente expuestas las hortalizas, de modo especial los cultivos de raíces.

VEGETALES:

Los vegetales no ácidos mantenidos en conserva casera (como el envasado de maíz y judías) se usan con frecuencia sin cocinar para preparar ensaladas frías.

PREVENCIÓN:

La pasteurización comercial (productos pasteurizados envasados al vacío, ahumados en caliente) no siempre es suficiente para matar todas las esporas.

Las temperaturas de refrigeración combinadas con el contenido de sal y/o las condiciones de acidez impedirán el crecimiento de la bacteria y la formación de toxinas.

CONCLUSIONES• Aunque gran parte de los primeros indicios sugerían que el botulismo se encontraba solo en

los productos cárnicos, posteriormente se comprobó que se presentaba donde quiera que los alimentos y su tratamiento ofrecían condiciones apropiadas para la supervivencia y crecimiento del organismo causativo.

• La toxina botulínica es una neurotoxina que origina una parálisis flácida que afecta los nervios autónomos que controlan funciones corporales como la respiración y el latido cardíaco. Se conocen al menos siete toxinas distintas. Sin embargo, como estas toxinas se destruyen por el calor (a 80°C durante 10 minutos), un alimento cuidadosamente cocinado puede ser totalmente inocuo, incluso si estuviera contaminado con la toxina.

• La prevención del botulismo de trasmisión alimentaria se basa en las buenas prácticas de elaboración, en particular la conservación y la higiene. El botulismo se puede prevenir mediante la desactivación de las esporas bacterianas en los productos termoesterilizados o enlatados, o la inhibición del crecimiento bacteriano en otros productos.