1. Evaluacin del efecto de diferentes soportes de liofilizacin sobre la tromboplastina.Realiz: QFB Carlos Enrique Guilln Barrios.Departamento de Nuevos Productos.Fecha: 28 FEB 2013.Resumen.Para probar el efecto que tienen diferentes soportes de liofilizacin sobre una tromboplastina en desarrollo, se realiz laprueba manual de tiempo de protrombina con plasma control liofilizado. Los soportes probados fueron manitol,sorbitol, glicina y sacarosa, en concentraciones de 0 a 4.5%. Se presentaron los tiempos de coagulacin en cada casoencontrando que la glicina presenta menor interferencia en el tiempo de coagulacin del plasma control.Objetivo. alguna tendencia de disminucin o aumento del TP. LosDeterminar la aptitud de diferentes soportes de resultados se pueden observar en la Tabla 2 y en elliofilizacin para aplicarse en la tromboplastina Grfico 2.liofilizada en desarrollo.Metodologa. Soporte ConcentracinTP (s)Tromboplastina. Se prepararon 100 mL por el mtodo0.0%12.47TRL-02.1.5%12.47Solucin de calcio 25 mM: Se prepar una solucin de Manitol3.0%12.92Cloruro de calcio 25 mM con Azida de sodio. Se4.5%13.27prepararon0.0%12.47Adicin de Soportes: Se prepararon soluciones de 0.0%,1.5%12.311.5%, 3.0% y 4.5% de los diferentes soportes de Glicina3.0%11.79manitol, sorbitol, glicina y sacarosa pesando la cantidad 4.5%11.97necesaria de cada uno y aforando con la solucin de 0.0%12.47calcio 25 mM. Cada una de las soluciones de Calcio- 1.5%12.76 SacarosaSoporte se utiliz para diluir alcuotas de 3.0%12.71tromboplastina lquida en proporcin 1:1. 4.5%12.19Plasma control: Se utiliz el plasma control preparado0.0%12.47por el mtodo PLA-NOV.2012.1 identificado como1.5%12.51 Sorbitol28.NOV.2012, reconstituyendo cada frasco con 1.0 mL 3.0%12.70de agua destilada.4.5%12.90Procedimiento: Se realiz la prueba de tiempo de Tabla 1. Tiempos de protrombina obtenidos.protrombina (PT) al plasma control evaluando cadasoporte a diferentes concentraciones, teniendo unEvento TP (s)panel de 16 pruebas que se realizaron por triplicado. La 112.56prueba se desarrollo a 37C agregando 200 L de212.43tromboplastina clcica a 100 L de plasma control. 3 12.1 413.11 512.23Resultados. 611.93El tiempo promedio de coagulacin con cada soporte 711.95se muestra en la Tabla 1 y se puede visualizar en el 811.88Grfico 1. Media 12.273La evaluacin del reactivo sin soporte (concentracinD.E. 0.416cero) se llev a cabo entre las determinaciones paraTabla 2. TP del plasma control.cada soporte, para detectar en el plasma control

2. Grfico 1. Tiempos de protrombina obtenidos.Faltara determinar el efecto de los diferentes soportessobre la sensibilidad del reactivo, mediante unacalibracin del ndice Internacional de Sensibilidad (ISI).La evaluacin del plasma muestra una tendencia adisminuir el tiempo de coagulacin a travs del tiempoy se observa una probable.Conclusiones.A reserva de los resultados del ndice Internacional de Grfico 2. TP del plasma control.Sensibilidad y de la apariencia del producto despus dela liofilizacin, la glicina es el soporte con mejoresresultados sobre el TP, seguida de sacarosa. Por otrolado, no es recomendable el uso de manitol y sorbitolAnlisis de resultadosdebido a su efecto prolongador del tiempo deLas curvas obtenidas muestran pendientes positivascoagulacin.para el manitol (0.30) y el sorbitol (0.17); mientras quela pendiente es negativa en el caso de la sacarosa (- Perspectivas en el desarrollo del producto.0.02) y la glicina (-0.18). Esto quiere decir que,Para continuar con el desarrollo se sugiere realizar yaparentemente, la adicin de glicina logra no solo no evaluar formulaciones de tromboplastina liofilizadaafectar el TP, sino disminuirlo.que incluyan glicina 1.5%, 3.0% y 4.5%.