Estudios de marcadores STR por MPS · 2020-06-17 · Estudios de marcadores STR por MPS . para uso...

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Estudios de marcadores STR por MPS para uso forense: Validación de kits y Estudio Poblacional Español Madrid, 28 de Mayo de 2019 Pedro A. Barrio 1 , Pablo Martin 1 , The DNASEQEX Consortium, Antonio Alonso 1 1 Servicio de Biología del Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses (INTCF), Departamento de Madrid [email protected]

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Estudios de marcadores STR por MPS para uso forense: Validación de kits y Estudio Poblacional Español

Madrid, 28 de Mayo de 2019

Pedro A. Barrio1, Pablo Martin1, The DNASEQEX Consortium, Antonio Alonso1

1 Servicio de Biología del Instituto Nacional de Toxicología y Ciencias Forenses (INTCF), Departamento de [email protected]

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Massive Parallel Sequencing (MPS). Paradigm shift

CE (Sanger) MPSvs

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DNA-STR Massive Sequencing & International Information ExchangeHOME/2014/ISFP/AG/LAWX/4000007135

Comparison of two MPS platforms: Ion S5 (Thermo Fisher Scientific) MiSeq FGxTM (Illumina)

Madrid Innsbruck Berlin

STRs Standardization typing by MPS

International Exchange of MPS data

Population Studies

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Main Applications of MPS

Identification (forensic casework)

Cases of complex relationships and / or family searches

Mixtures ResolutionDegrade DNALTDNA

Missing Persons and Mass Disasters Investigations (DVI)

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European Survey on Forensic Applications of MPS

Alonso et al., FSI:G (2017), 29:e23-e25

33 ENFSI DNA WG laboratories from 25 countries

Participation: 54% of all ENFSI DNA Labs(53 Member Institutes and 8 Associated Members)

52%48%

Does your laboratory have a Massively Parallel Sequencing instrument?

YESNO

61%

39%

Does your laboratory have a Massively Parallel Sequencing instrument or Will your laboratory purchase a MPS instrument in the next 18

months?

Yes

No14

119

118 8 8

3 3 2

19 18 1715 15 14

118 8

3

Please check for which category or categories of Forensic DNA markers MPS iscurrently used or being evaluated in your lab and for which ones will be developed in

the next 18 months

Number of labs in December 2016 Number of labs in 2018

> 75%

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Outline

Kits ValidationEarly Access Applied Biosystems Precision ID Globalfiler Mixture ID™ PanelEarly Access Applied Biosystems Precision ID Globalfiler NGS STR Panel for the Ion S5™

Spanish Population StudyMüller et al., FSI:G (2018), 36:95-103

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Material: Panels

Early Access Precision ID GlobalFiler® Mixture ID Panel

STRs29 autosomal STRs

1 Y-STRsSNPs

42 autosomal2 Y chromosome

InDelsAmelogeninY-InDel rs2032678

Microhaplotyes36 clusters (2-4 SNPs)

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Early Access Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel

STRs29 autosomal STRs

1 Y-STRsInDels

AmelogeninY-InDel rs2032678

Material: Panels

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Ion Chef

Methods: Analytical phase. Workflow

Ion Chef Torrent Server & Torrent BrowserS5 / S5xl

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Samples Type

NIST 2391_A_female sNIST 2391_B_male sNIST 2391_C_male sNIST 2391_D_mixture mNIST 2391_E_female sNIST 2391_F_male s

NIST 2372_A_male s

9947A_female s2800M_male s007_male s

GEDNAP2012_44_S3 sGEDNAP2012_45_S2.1 sGEDNAP2013_46_S2.1 sGEDNAP2013_46_S3.1 sGEDNAP2013_47_S1 sGEDNAP2013_47_S2 sGEDNAP2014_48_S3 sGEDNAP2014_48_S4 sGEDNAP2015_49_S4.1 sGEDNAP2015_50_S2 sGEDNAP2015_50_S3.1 sGEDNAP2015_51_S4 s

GEDNAP2012_44_S4 mGEDNAP2012_45_S1 mGEDNAP2012_45_S3.1 mGEDNAP2013_46_S1 mGEDNAP2013_47_S3 mGEDNAP2013_47_S4 mGEDNAP2014_48_S1 mGEDNAP2014_48_S2 mGEDNAP2015_49_S1 mGEDNAP2015_49_S3 mGEDNAP2015_50_S1 mGEDNAP2015_50_S4 mGEDNAP2015_51_S3 m

GHEP2013_M4.2 sGHEP2015_M6 mGHEP2016_M7.2 m

PS_MADRID_S1 sPS_MADRID_S2 sPS_MADRID_S3 s

TOOTH sFEMUR_NEONATAL sPARAFFIN_BLOCK sPARS_PETROSA s

Stantard Reference Material (Certificated)

Reference Material (NO Certificated)

Proficiency Exercises Samples (GEDNAP)

Proficiency Exercises Samples (GHEP)

Reference Material - Project Staff

Casework-type Samples

EA Precision ID GlobalFiler® Mixture Panel

EA Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel

Sensivity Coverage Study Stutter Study ConcordanceSingle Profiles Mixed Profiles

Material & Methods

Total Replicates Analyzed: 56 (GFm); 106 (GF)

- GlobalFiler®

Previously typing by CE (ABI3500)

- PowerPlex® Fusion 6C

Samples (N = 43)

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Results. Some Forensic Parameters Analyzed

Sensitivity:# Markers Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_21 AMELX2 AMELY3 CSF1PO4 D10S1248 I I5 D12ATA63 A A/I6 D12S391 I A A A7 D13S317 A8 D14S14349 D16S539

10 D18S51 A A A A/I A A11 D19S433 A A12 D1S1656 A A A A A A A13 D1S1677 A I I14 D21S11 A15 D22S1045 A16 D2S1338 A A A17 D2S44118 D3S1358 I I19 D3S4529 A A A A A A/I A20 D4S240821 D5S2800 A/I A I22 D5S818 A I23 D6S1043 A24 D6S474 A A/I A A25 D7S820 I I26 D8S1179 A I27 DYS391 A28 FGA A A A A I29 TH01 I I30 TPOX A31 vWA I I

24 cycles

500 pg (250 pg) 250 pg (125 pg) 125 pg (62 pg) 62 pg (31 pg)Control SRM 2372_A

32 samples (2 controls / 8 serial dilutions / 2 replicates)

Stutter Ratios:

0,000

0,050

0,100

0,150

0,200

0,250

0,300

0,350

D2S1

776

TH01

D4S2

408

D3S4

529

D5S2

800

D2S4

41TP

OX

DYS3

91D7

S820

D6S4

74D1

3S31

7CS

F1PO

D21S

11D8

S117

9D2

S133

8D1

S167

7D1

4S14

34D3

S135

8D1

8S51

D5S8

18D1

9S43

3D6

S104

3vW

AFG

AD1

0S12

48D1

6S53

9D2

2S10

45D1

S165

6D1

2S39

1D1

2ATA

63 All

Stutter -4 by STRs markers

Stutter Thresholds:0,000

0,100

0,200

0,300

0,400

0,500

0,600

D2S1

776

TH01

D4S2

408

D3S4

529

D5S2

800

D2S4

41TP

OX

DYS3

91D7

S820

D6S4

74D1

3S31

7CS

F1PO

D21S

11D8

S117

9D2

S133

8D1

S167

7D1

4S14

34D3

S135

8D1

8S51

D5S8

18D1

9S43

3D6

S104

3vW

AFG

AD1

0S12

48D1

6S53

9D2

2S10

45D1

S165

6D1

2S39

1D1

2ATA

63 All

Stutter -4 ratio Threshold (media + 3SD) by STRs markers

23 single-source samples, ≈ 1 ng of DNA input

Concordance

Samples TypeQ

(ng/µL)

AMEL

X

AMEL

Y

CSF1

PO

D10S

1248

D12A

TA63

D12S

391

D13S

317

D14S

1434

D16S

539

D18S

51

D19S

433

D1S1

656

D1S1

677

D21S

11

D22S

1045

D2S1

338

D2S4

41

D3S1

358

D3S4

529

D4S2

408

D5S2

800

-250

0

D5S8

18

D6S1

043

D6S4

74

D7S8

20

D8S1

179

DYS3

91

FGA

TH01

TPO

X

vWA

NIST 2391_A_female s C C C C CI CI C C C CA C CA CI C C CA C-IS C C C C C C C C C CA CA C C C

NIST 2391_B_male s C C C C CI C C C C CA CI C C C CI C C C C C C CI CI C C C C CA C C CI

NIST 2391_C_male s C C C C C CA C C C CA C C CI C C C C C C C C-IS C C C C C C CII CI C C

NIST 2391_D_mixture m C C CI CI C AI C C C CA CI AI C CI C CA C-IS CI C C C-IS C CI C CI CI C CII C CI CI

NIST 2391_E_female s C C C C CI CI C C C C C CA CI C CI C C-IS C C C C CI C C CI C C CI C C C

NIST 2391_F_male s C C C C C C C C C CA C CA C C C C C C C C C C C CI C C C CA C C C

NIST 2372_A_male s C C CI CI C CI C CI C C CI C CII C C-(IS) C CI C-IS C CI CI C CI

9947A_female s C C C C C C C C C C C CI CI C CI C C C-IS C CI CI C C

2800M_male s C C C C C C C C CA C C C C C C C C C C CA C C C

007_male s C C C C C C C CA C C C CI C C C C C C C CA C C CI

GEDNAP2013_46_S2.1 s 0.62 C C C CI C C CI C CI C CI CI C CI C CI CI CI C C C C C

GEDNAP2013_46_S3.1 s 0.6 C C C CI C CA CI C CI CI C C CA CI C CI CI CI C CI CI CI C

GEDNAP2013_47_S1 s 0.4 C C C C C C C C C CI CI C C C C C C C C C C C CI

GEDNAP2013_47_S2 s 2.38 C C C C C C C C C C C CI C C C C C C C CA C C C

GEDNAP2014_48_S3 s 2.9 C C C C CII C C C C C C C C C C C C CI C C C C C

GEDNAP2014_48_S4 s 1.16 C C C C CII C C C CI C CI C C C C C C C C C C C CI

GEDNAP2015_49_S4.1 s 15.6 C C CI C C C C C C C C C C C C C C C C C C C C

GEDNAP2015_50_S2 s 0.62 C C CI CI CI CI C C C C CI C CI C AO C C C C C C C C

GEDNAP2015_50_S3.1 s 4.20 C C CI CI CII C C C C CI C C C C C C C C C C C C C

GEDNAP2015_51_S4 s 1.38 C C CI C CA CI C C C C C C C C CI C C C C C CI C C

GHEP2013_M4.2 s 0.44 C C C C CA C C C CI C C C CI C C C C C C C C C C-IS

GEDNAP2012_44_S4 m 2 C C C C C-IS CI C C-IS C-IS C-IS C CI CI CI C-IS CI C C C C C CI C

GEDNAP2012_45_S1 m 3 C C CI C C C C C CI C CI C CI C CI CI C C C C C CI C

GEDNAP2012_45_S3.1 m 3 C C C C C C C CI CI CI-IS CI CI C C C-IS CI C C-IS C C C C C

GEDNAP2013_46_S1 m 1.61 C C C CI C CI CI C CI CI-IS C-2IS CI C CI C-3IS CI CI CI C C C CI C-IS

GEDNAP2013_47_S3 m 1.71 C C CI CI AOA-IS C CI CI AOI AO AOI CI C C C CI C AO C AO CI AOI C

GEDNAP2013_47_S4 m 1.7 C C C CI C C C C C C C C C CI C C CI C C C C C C

GEDNAP2014_48_S1 m 3.44 C C C C CI CI CI CI C C C-IS CI C CI C CI C CI C C CI C C

GEDNAP2014_48_S2 m 1.93 C C C C CI CI C CI C C CI CI CI CI C CI CI CI C CI CI CI C

GEDNAP2015_49_S1 m 2.58 C C CI CI CI C C CI CI C-IS C-IS C C C C CI C C-IS C C C C C

GEDNAP2015_49_S3 m 4.5 C C CI CI CI CI CI C C CII C C C CI C-IS C C C C C C C CA

GEDNAP2015_50_S1 m 2.8 C C C C CA CI C C C C C CI C C C-IS C CI C C C CI CI CI

GEDNAP2015_50_S4 m 6.74 C C CI C AOI CI C C CI C CI CI C C C-IS CI CI C C C C C CI

GEDNAP2015_51_S3 m 1.14 C C CI C CI CI CI C CI AOI CI CI CI CI CI-IS CI CI CI C C CI CI C

GHEP2015_M6 m 2.28 C C C C C C C C-IS CI CI CI CI CI C-IS CI C CI C-IS C C CI C C-IS

GHEP2016_M7.2 m 1099 C C CI CI AOI CI CI AOI C CI CI CI C C CI CI CI CI C CII CI AOI CI

PS_MADRID_S1 s 23.13 C C CI C C C CI CA C C C CI C C C C C C C C C C CI

PS_MADRID_S2 s 144.59 C C C CI CI C C CA C C C C C C C C C C C CA C C C

PS_MADRID_S3 s 1.84 C C C C C CI C CA CI C C-IS C C C C C C C C CA C C C

TOOTH s 0.019 C C C C C C C C C CI C C C C-IS CI C C CI C CA C CI C-IS

FEMUR_NEONATAL s 0 C C C CI CI C CI CI C AO-IS C CI C-D C CI C CI C-IS C CI-D C C CI

PARAFFIN_BLOCK s 0.0154 C C CI C CI C C C C CI C CI CI C C C C C C C C C C

PARS_PETROSA s 0.0246 C D 11,12 C-D C-D CI-D 11,12 14,(19) CA-D C-D C-D D DA C-D CI-D C-D 10,11,12-D C-D C C CI 11 C-D

Markers / Locus

Reference Material

Casework-type Samples - Singles

Casework-type Samples - Mixtures

Reference Material - Project Staff

Casework-type Samples

% Concordance

Single-source: 99.90 %(1 drop-out / 1046 alleles)

Mixed-source: 98.91 %(11 drop-outs / 1011 alleles)

27 single samples 16 mixtures

Samples (N = 43) Total Replicates Analyzed: 106

62 pg (up to 31 pg with some losses)

on average <15%

on average <30%

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Results. EA Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel

Some Details… NIST 2391_A

Isoalleles(isometric heterocygotes)

% Loci with isoallelesSingle-source: 1.53 % (8/523)

Mixed-source: 7.94 % (25/315)

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Results. EA Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel

Casework… Pars Petrosa

QFDUO Total: 0.025 ng/µLQFDUO Male: 0 ng/µLIPC: 29.75

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Inter-Laboratory Evaluation Study

Innsbruck (GMI)

Interlocus balanceStutter analysis

Sensitivity

Madrid (INTCF)

EA Applied Biosystems Precision ID Globalfiler Mixture IDTM & Globalfiler NGS STR Panels

for the Ion S5TM

Müller et al., FSI:G (2018), 36:95-103

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Results. EA Precision ID Globalfiler® Mixture Panel

Interlocus Balance

Interlocus balance varies from 4.7 % (D22S1045) to 241.4 % (TH01) compared to the calculated expected value (100 %)

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Results. EA Precision ID Globalfiler® NGS STR Panel

Interlocus Balance

Interlocus balance varies from 22.3 % (D22S1045) to 182.7 % (TH01) com-pared to the calculated expected value (100 %)

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Results. EA Precision ID Globalfiler® Mixture Panel

Stutter Analysis

Stutter ratios range from 6.5 % (TPOX) to 24.1 % (D22S1045)

Dataset includes single person samples (1 ng DNA input), homo- and heterozygous genotypes as well as isometric allele calls

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Results. EA Precision ID Globalfiler® NGS STR Panel

Stutter ratios range from 5.6 % (TH01) to 18.9 % (D12ATA63)

Stutter Analysis

Dataset includes single person samples (1 ng DNA input), homo- and heterozygous genotypes as well as isometric allele calls

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Sensitivity: NIST 2372_A (& Valuation of Cycles Increment)

Results. EA Precision ID Globalfiler® NGS STR Panel

24 PCR cycles

Standard PCR conditions display the expected decrease in reads/marker relative to DNA input

28 PCR cycles

Changed cycling conditions affect marker balance

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15 µL 7 + 7µL

+

Sensitivity: NIST 2372_A

# Markers Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_21 AMELX2 AMELY3 CSF1PO4 D10S1248 I I5 D12ATA63 A A/I6 D12S391 I A A A7 D13S317 A8 D14S14349 D16S539

10 D18S51 A A A A/I A A11 D19S433 A A12 D1S1656 A A A A A A A13 D1S1677 A I I14 D21S11 A15 D22S1045 A16 D2S1338 A A A17 D2S44118 D3S1358 I I19 D3S4529 A A A A A A/I A20 D4S240821 D5S2800 A/I A I22 D5S818 A I23 D6S1043 A24 D6S474 A A/I A A25 D7S820 I I26 D8S1179 A I27 DYS391 A28 FGA A A A A I29 TH01 I I30 TPOX A31 vWA I I

24 cycles

500 pg (250 pg) 250 pg (125 pg) 125 pg (62 pg) 62 pg (31 pg)Control SRM 2372_A

Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 Replicate_1 Replicate_2 MarkersAMELXAMELY

A I CSF1POI A D10S1248

I I I D12ATA63I D12S391

D13S317I A A D14S1434I D16S539

A D18S51D19S433

I I D1S1656I D1S1677

A A D21S11D22S1045

A D2S1338I I I D2S441

I D3S1358I I A D3S4529

D4S2408D5S2800

A A D5S818A D6S1043A D6S474

I D7S820I D8S1179

DYS391I A/I FGA

I TH01TPOX

I I vWA

28 cyclesControl SRM 2372_A

125 pg (62 pg) 62 pg (31 pg) 31 pg (15 pg) 15 pg (7 pg)

A I A/I A I A/I A

Com

plet

e

Com

plet

e w

ith A

rtef

acts

Com

plet

e w

ith

Imba

lanc

e >3

0%

Com

plet

e w

ith A

rtef

acts

an

d Im

blan

ce >

30%

Drop

-out

Drop

-out

and

Art

efac

ts

Drop

-out

and

Imba

lanc

e >3

0%

Drop

-out

and

Art

efac

ts

and

Imba

lanc

e >3

0%

Locu

s Dro

p-ou

t

Locu

s Dro

p-ou

t and

Ar

tefa

cts

LEGEND

(& Valuation of Cycles Increment)

Results. EA Precision ID Globalfiler® NGS STR Panel

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* Comparable results between INTCF and GMI in terms of:Interlocus balanceStutter ratios

* Minimal handling (IonChef / Ion S5), Complete Integration with forensic LIMS system

* High number of samples / markers analyzed at the same time

Inter-Laboratory EvaluationConclusions

* Sensitivity:Fully automated sensitivity testing yielded 98.6 % alleles down to125 pg (Globalfiler® NGS STR Panel) >> up to 62 pg… or even up to 31 pg (with some losses)

* Concordance:367/376 alleles (97.6 %) concordant to known reference (Globalfiler® Mixture Panel)

376/376 alleles (100 %) concordant to known reference (Globalfiler® NGS STR Panel)

* Increase in number of different alleles: Isoalleles (sequence alleles – isometric heterocygotes)

Loci with more Isoalleles: D3S1358, D8S1179, D1S1656, D21S11, D2S441, vWAVery useful in the case of mixtures, or even kinship investigation

* Works relatively well on Degraded or Low Template DNA samples (LTDNA)

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Outline

Kits ValidationEarly Access Applied Biosystems Precision ID Globalfiler Mixture ID™ PanelEarly Access Applied Biosystems Precision ID Globalfiler NGS STR Panel for the Ion S5™

Spanish Population Study

Barrio et al., FSI:G (2019)manuscript in review

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498 samples

Material & Methods

Spanish ancestries representing all the 17 Autonomous Communities of Spain (i.e. “regions”)

Concordance Study CE/MPS221 samplesPowerPlex Fusion 6C System (Promega, Madison, WI, USA)

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Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel v.2

STRs29 autosomal STRs

Material: Panels

Aditional markers (v.2)Penta DPenta ESRY

1 Y-STRsInDels

AmelogeninY-InDel rs2032678

A total of 31 auSTRs

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Methods: Analytical phase. Workflow

Ion Chef Torrent Server & Torrent BrowserS5 / S5xlManually

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Methods: Data Analysis

1. Torrent Server Suite (TSS), v. 5.6.0

2. Converge, v. 2.0

3. Discordances Analysis

4. Statistic Analysis

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

13.1452

14366

Dept

h of

Cov

erag

e

Alleles

Sample M17-06603-60-608-EX-1_D2S441

STRait Razor v3 (Woerner et al., 2017)

updated Forensic STR Sequence Guide v4 (Phillips et al., 2018)

(Gouy et al., 2017)

IGV v2.4.16 (Thorvaldsdottir et al., 2013)

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Results. Sequencing results

Overall coverage data by locus

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Results. Concordance Study

Putative mismatches:3 loci:

5 samples: 5 samples out of 221 (97.73 % sample concordance)

1 locus/sample: 5 loci out of 5083 (99.90 % locus concordance)

1 allele/locus: 5 alleles out of 10166 (99.95 % allele concordance)

Penta D, D2S441 and D19S433

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Results. Allele frequencies

STR allelic gains by sequence:

Number of alleles compared to heterozygosity observed for the 31 auSTR loci

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

0,600

0,620

0,640

0,660

0,680

0,700

0,720

0,740

0,760

0,780

0,800

0,820

0,840

0,860

0,880

0,900

0,920

0,940

0,960

0,980

1,000

Lenght Repeat Region Sequence Flanking Region Sequence

accession number STR000248

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Results. Allele frequencies

SNPs in the flanking regions:

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Results. Population genetics

Decrease of Match Probability (PM) (length-sequence)

0,0000

0,0100

0,0200

0,0300

0,0400

0,0500

0,0600

0,0700

0,0800

0,0900

20 CODIS core STR loci: 1.999E-24 (length-based)

31 auSTR loci: 14.828E-40 (sequence-based)

>> 1.043E-27 (sequence-based)

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0,0000

0,5000

1,0000

1,5000

2,0000

2,5000

3,0000

3,5000

4,0000

4,5000

Results. Population genetics

Increase of Typical Paternity Index (TPI) (length-sequence)

20 CODIS core STR loci: 1.420E+08 (length-based)

31 auSTR loci: 7.850E+13 (sequence-based)

>> 7.483E+09 (sequence-based)

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* There is substantial variation within repeat motifs and/or their immediate flanking regions of a number of STR markers.

Conclusions. Highlights

* MPS allows to analyze a high number of samples/markers at the same time.

* The knowledge of the MPS sequence demonstrated that some of the micro-variantswere erroneously called by CE >> alleles with complete repeat units plus deletions/insertions in the flanking region.

* The gain in PD (loss in PM) from length-based to sequence-based data is particularly beneficial for mixture deconvolution [Novroski et al., 2016; Devesse et al, 2018].

* The increase in TPI through sequence-based data will be of great help in kinship studies [Staadig et al, 2019].

Penta_D[CE2.2]-chr21-hg19 45056086-45056150 [AAAGA]5 45056081-45056093-delAAAAGAAAGAAAA

D19S433[CE13.2]-chr19-hg19 30417142-30417197 [CCTT]12 ccta CCTT cttt CCTT 30417137-3041713-delGA

* The Spanish data set is expected to:- provide allele frequencies of STR sequencing for forensic casework applications- support implementation of MPS technology in forensic laboratories

* It is important to highlight the need for more population studies to enrich the allele frequencies of sequence-based STR genotypes.

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The Faculty

Institute of Legal Medicine, Medical University of Innsbruck. Austria

Institute of Legal Medicine and ForensicScience, Charité - Universitätsmedizin Berlin. Germany

Center for Human Identification at the University of North Texas Health Science Center. USA

National Institute of Toxicology and Forensic Sciences. Madrid Department. Spain

Follow us on https://www.researchgate.net/project/DNASEQEX

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Thanks for your attention!!

This project has been funded with support from the European Commission (grantHOME/2014/ISFP/AG/LAWX/4000007135 under the Internal Security Funding Policeprogramme of the European Commission---Directorate General Justice and Home Affairs). Thispublication reflects the views only of the authors, and the European Commission cannot be heldresponsible for any use which may be made of the information contained therein.

Acknowledgements

Thermo Fisher Scientific Inc. Provider of EA Precision ID GlobalFiler® PanelsPrototypes, Precision ID GlobalFiler® NGS STR Panel v2 and Converge v2.1 software.The authors would like to thank Matt Phipps for technical support.

The authors would like to thank members of LIMS Administrators Team of the General Subdirectorate ofNew Technologies of Justice (SGNTJ) of the Ministry of Justice (Spain) for their helpful technical support.

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Nuestro cerebro se resiste a cambiar la imagen que tiene

del mundo, por eso es tan difícil convencer a la gente de

que está equivocada.

Eduard Punset(1936-22 de mayo de 2019)