ESTUDIO DE REOLOGÍA SANGUÍNEA EN ESTUDIO DE REOLOGÍA SANGUÍNEA EN SUJETOS NORMALES Y PACIENTES CON SUJETOS NORMALES Y PACIENTES CON

ERITROCITOSIS EXCESIVAERITROCITOSIS EXCESIVA

PROYECTOPROYECTO ALFA ALFA �� EUROPEAN COMMISSIONEUROPEAN COMMISSION

Autor: Autor: Bernardo Torrico Arzady, Bernardo Torrico Arzady, M.ScM.Sc..Asesores: Asesores: Ginés Viscor Carrasco, Ginés Viscor Carrasco, Ph.DPh.D..

HildeHilde SpielvogelSpielvogel, , M.DM.D..Universidad Mayor de San AndrésUniversidad Mayor de San Andrés

Universitat de Barcelona Universitat de Barcelona

OBJETIVO PRINCIPALOBJETIVO PRINCIPAL

Dilucidar, a través de estudios de Dilucidar, a través de estudios de hemorreologíahemorreología, el posible papel de la viscosidad , el posible papel de la viscosidad sanguínea en el síndrome de sanguínea en el síndrome de EritrocitosisEritrocitosisExcesiva.Excesiva.

JUSTIFICACIÓNJUSTIFICACIÓN

El posible papel de la viscosidad sanguínea en el El posible papel de la viscosidad sanguínea en el síndrome de síndrome de EritrocitosisEritrocitosis Excesiva no está bien Excesiva no está bien establecido; y muchos pacientes que asisten al IBBA establecido; y muchos pacientes que asisten al IBBA presentan un cuadro clínico de EE., algunos de ellos con presentan un cuadro clínico de EE., algunos de ellos con hematocritoshematocritos muy altos, por encima de 70%. Estos muy altos, por encima de 70%. Estos datos demuestran la necesidad de desarrollar estudios datos demuestran la necesidad de desarrollar estudios de de hemorreologíahemorreología en poblaciones expuestas que viven a en poblaciones expuestas que viven a grandes alturas como ocurre en la ciudad de La Paz y el grandes alturas como ocurre en la ciudad de La Paz y el Alto de Bolivia.Alto de Bolivia.

HIDRODINÁMICA Y VISCOSIDADHIDRODINÁMICA Y VISCOSIDADDE LA SANGRE DE LA SANGRE

La sangre es un fluido no newtoniano formado por plasma y varios componentes celulares: glóbulos rojos y blancos, plaquetas, etc.

Su fluidez depende mucho de los glóbulos rojos; de su propiedad para agregarse formando rodillos y su gran capacidad para deformarse.

Paso de glóbulos rojos, a través de Paso de glóbulos rojos, a través de microporosmicroporos en en una membrana de una membrana de policarbonatopolicarbonato

Definición de viscosidadDefinición de viscosidad

Es el cociente entre tensión tangencial (T) Es el cociente entre tensión tangencial (T) y gradiente de velocidad (y gradiente de velocidad (γγ))

F

F AX

dX

T = F/A

µ

γ = dµ/dx

η = T/γ

Viscosidad sanguínea Viscosidad sanguínea Viscosidad aparente sangre y plasmaViscosidad aparente sangre y plasma

Viscosímetro rotatorio conoViscosímetro rotatorio cono--placaplaca

Análisis de la Análisis de la viscosidad a un viscosidad a un gradiente de gradiente de velocidad velocidad definido para definido para toda la muestratoda la muestra

Viscosidad relativaViscosidad relativaηrel = ηsangre / ηplasmaηrel = ηsangre / ηplasma

uuPerfil de velocidadesPerfil de velocidades

ττ = F/A= F/Aγγ = = dudu/dx/dx

ηη = = τ τ / / γγ

Perfil del gradiente Perfil del gradiente de velocidadde velocidad

γγ

uuFF AAdxdx

dudu

Aportación reológica de la fracción celular

Aportación reológica de la fracción celular

VISCOSÍMETRO ROTATORIO CONO- PLACA

Análisis de la viscosidad a un gradiente de velocidad definido para toda la muestra.

MATERIAL Y MÉTODOSMATERIAL Y MÉTODOS

EQUIPO: Viscosímetro EQUIPO: Viscosímetro BrookfieldBrookfield LV II.LV II.

POBLACIÓN DE ESTUDIO: POBLACIÓN DE ESTUDIO: �� Población control: sujetos sanos que viven en la Población control: sujetos sanos que viven en la

altura (estudiantes de la UMSA).altura (estudiantes de la UMSA).�� Población de estudio: Pacientes con Población de estudio: Pacientes con eritrocitosiseritrocitosis

excesiva (pacientes que asisten al IBBA).excesiva (pacientes que asisten al IBBA).�� Se ha determinado un tamaño de muestra de 30 para Se ha determinado un tamaño de muestra de 30 para

cada grupo.cada grupo.

ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS MUESTRAS DE SANGREMUESTRAS DE SANGRE

CMS

EE

SANGRE

6-8 ml

CONTROL

(sujetos sanos)

HEMATOLOGÍA

WBC, RBC, HGB, HCT,

MCV, MCH, MCHC, PLT

Recuento de Reticulocitos.

CENTRIFUGACIÓN

3 ml. REOLOGÍAVISCOSIDAD0,5 mL

WBC, G. blancos x uL de sangreRBC, Hematíes x uL de sangreHGB, conc. Hb, g-dLHCT, microhematocrito, %MCV, volumen corpuscular medio,

FLMCH, Hemoglobina corpuscular

media, pgMCHC, Concentración de Hb

corpuscular media, g-dLPLT, Plaquetas x uL

ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS ESQUEMA DEL PROTOCOLO A SEGUIR CON LAS MUESTRAS DE SANGREMUESTRAS DE SANGRE

CENTRIFUGACIÓN

Plasma

VISCOSIDAD0,5 mL

Proteínas Tot.Fibrinógeno.

Paquete de hematíes

Suspensión deHematíes normalesen plasmaHcto = 45%

Suspensión deHematíes normalesen solución de Ringer-albúmina.Hcto = 45%

Suspensión deHematíes fijados con glutaraldehidoHcto = 45%

VISCOSIDADNP VISCOSIDAD

NA

VIVISCOSIDAD

DA

LA VISCOSIDAD DE LA SANGRELA VISCOSIDAD DE LA SANGRE

NP

DA

NA

agregación

deformaciónorientación

Viscosidad(mPa·s)

Gradiente de velocidad (s-1)Gradiente de velocidad (s-1)

1000

100

10

1

100010001001001010110,10,10,010,01

Recuento de Recuento de ReticulocitosReticulocitosAzul brillante de Azul brillante de cresilocresilo

Estructura del EritrocitoEstructura del Eritrocito

Diagrama del citoesqueleto y proteínas integrales del plasmalema eritrocítico.

Se determinará el diámetro de los GR de los sujetos normales y de los pacientes con eritrocitosis excesiva mediante micrometria.

Datos de referencia:Datos de referencia:

El 70 % de pacientes con El 70 % de pacientes con HctoHcto ≥≥ a 48 %, pero ninguno a 48 %, pero ninguno de ellos llegde ellos llegóó a 70%.a 70%.Se estandarizaron todas las tSe estandarizaron todas las téécnicas para la cnicas para la determinacideterminacióón de la viscosidad sangun de la viscosidad sanguíínea.nea.Se Se estestáánn realizando pruebas de hematologrealizando pruebas de hematologíía. a. Se deben estandarizar pruebas complementarias como Se deben estandarizar pruebas complementarias como la determinacila determinacióón de proten de proteíínas totales (nas totales (LowryLowry), ), cuantificacicuantificacióón de n de fibrinfibrinóógenogeno y globulinas (electroforesis y globulinas (electroforesis de protede proteíínas).nas).Se dispone del material para determinar el diSe dispone del material para determinar el diáámetro de metro de los eritrocitos.los eritrocitos.El estudio serEl estudio seráá concluido en el mes de septiembre del concluido en el mes de septiembre del presente apresente añño. o.

Perspectivas de colaboración entre Perspectivas de colaboración entre Europa y América Latina �Europa y América Latina �

Conclusión del proyecto: �Conclusión del proyecto: �Estudio de reología sanguínea en sujetos Estudio de reología sanguínea en sujetos normales y pacientes con eritrocitosis excesivanormales y pacientes con eritrocitosis excesiva� UMSA � UMSA �� UB.UB.Publicación de artículos del trabajo realizado.Publicación de artículos del trabajo realizado.Presentación y defensa del trabajo en la Maestría en �BioquímicaPresentación y defensa del trabajo en la Maestría en �BioquímicaClínica y Gerencia de Servicios en Laboratorio� UMSA.Clínica y Gerencia de Servicios en Laboratorio� UMSA.Determinar la evolución de los cambios de la viscosidad sanguíneDeterminar la evolución de los cambios de la viscosidad sanguínea a en el desarrollo de la patología.en el desarrollo de la patología.Ensayar la eficacia de distintas estrategias terapéuticas.Ensayar la eficacia de distintas estrategias terapéuticas.“Determinación de la viscosidad sanguínea en ratas crónicamente “Determinación de la viscosidad sanguínea en ratas crónicamente hipoxicas”hipoxicas” (IBBA, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y (IBBA, Facultad de Ciencias Farmacéuticas y Bioquímicas (UMSA) y Universidad de Barcelona.Bioquímicas (UMSA) y Universidad de Barcelona.��Estudio de reología sanguínea en sujetos que viven a diferentes Estudio de reología sanguínea en sujetos que viven a diferentes alturasalturas�. UMSA �. UMSA �� Univ. Cayetano Heredia, Lima Univ. Cayetano Heredia, Lima �� Perú, UB.Perú, UB.Tesis Doctoral en Educación Superior : �Tesis Doctoral en Educación Superior : �La innovación Docente La innovación Docente desarrollando procesos de aplicación de nuevas tecnologías y Edesarrollando procesos de aplicación de nuevas tecnologías y E--learning y didáctica universitaria en la carrera de Bioquímica dlearning y didáctica universitaria en la carrera de Bioquímica de la e la UMSAUMSA�, bajo la tutoría del Dr. Ginés Viscor (UB).�, bajo la tutoría del Dr. Ginés Viscor (UB).

MUCHAS GRACIAS �