ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO …
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ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO INDUSTRIAL EN LAS ETAPAS DE PRE Y POST COSECHA EN COLOMBIA LINA MARITZA MEJIA RIVERA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial para optar el título de MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Santafé de Bogotá, D.C.Noviembre 2000
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ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO INDUSTRIAL EN LAS ETAPAS DE PRE Y POST COSECHA EN
COLOMBIA
LINA MARITZA MEJIA RIVERA
TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial
para optar el título de
MICROBIÓLOGA AGRÍCOLA Y VETERINARIA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Santafé de Bogotá, D.C.Noviembre 2000
ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO INDUSTRIAL EN LAS ETAPAS DE PRE Y POST COSECHA EN
COLOMBIA
LINA MARITZA MEJIA RIVERA
____________________ _____________________ Director Trabajo de Grado Codirector Trabajo de Grado
Dr. Luis Lago Castro Dra. Sandra Molina Doctorado en Ciencias Ingeniera Agrónoma
Biológicas y Agrícolas PhD.
__________________ Asesora Dra. Marcela Franco Microbióloga
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Santafé de Bogotá, D.C. Noviembre 2000
ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO INDUSTRIAL EN LAS ETAPAS DE PRE Y POSCOSECHA EN
COLOMBIA
LINA MARITZA MEJIA RIVERA
____________________ ______________________ JURADO 1 JURADO 2 Dr. Miguel Benavidez Dra. Jimena Sánchez
Ingeniero Agrónomo Bacterióloga,M.Sc.Microbiología M.Sc. Entomología Fitopatología
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Santafé de Bogotá, D.C. Noviembre 2000
ESTUDIO DE LAS ENFERMEDADES DE LA PAPA PARA USO INDUSTRIAL EN LAS ETAPAS DE PRE Y POSCOSECHA EN
COLOMBIA
LINA MARITZA MEJIA RIVERA
______________________ ______________________ Dr. Carlos Corredor, PhD Dra. Aura Rosa Manascero Decano Académico Directora Carrera Facultad Ciencias PUJ Facultad Ciencias PUJ
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA AGRÍCOLA Y VETERINARIA Santafé de Bogotá, D.C. Noviembre 2000
Artículo 23 de la Resolución Nº 13 de julio de 1946:
¨La universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por
sus alumnos en sus tesis de grado¨
A mis padres, porque sin su entereza
y amor no habría logrado este triunfo.
A mi hermana y familia que siempre estuvieron
a mi lado brindándome su apoyo.
A mis grandes amigos Catalina y Cesar por
su inigualable amistad.
A todas aquellas personas que creyeron en mi,
me apoyaron incondicionalmente y me
brindaron su cariño impulsándome a
seguir adelante.
AGRADECIMIENTOS
A el Dr. LUIS LAGO CASTRO, Director de la investigación, por su valiosa
amistad, enseñanzas y gran apoyo durante la realización de este trabajo.
A SANDRA MOLINA Codirectora, por su dedicación y paciencia e
inmensa colaboración en las labores realizadas en el laboratorio.
A la Dra. MARCELA FRANCO docente de la Pontificia Universidad
Javeriana y asesora del trabajo, por brindarme una valiosa orientación
para la organización de este trabajo.
A JIMENA SÁNCHEZ por ser una persona tan especial y prestarme su
incondicional ayuda y colaboración de forma constante para la
investigación de este proyecto.
A Maria Eugenia y todo el personal del Laboratorio de Sanidad Vegetal
del ICA por estar siempre dispuestos a brindarme su colaboración en las
labores realizadas durante la tesis.
A todas las personas de Mac Cain Andina que me obsequiaron su tiempo y
ayuda para poder llevar acabo esta investigación.
A todas y cada una de aquellas personas que colaboraron
desinteresadamente en la realización del presente trabajo.
TABLA DE CONTENIDO
PAG.
RESUMEN
1. INTRODUCCIÓN 1
2. REVISIÓN DE LITERATURA 4
2.1 Historia 4
2.2 Morfología de la planta 6
2.3 Clasificación taxonómica 12
2.4 IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL CULTIVO DE LA PAPA 15 2.5 PATOLOGIAS DEL CULTIVO DE PAPA CON FINES DE PROCESAMIENTO 19 2.5.1 En Colombia 19
2.5.1.1 Hongos 21
2.5.1.2 Bacterias 37
2.5.1.3 Virus 45
3. JUSTIFICACIÓN 52
4. OBJETIVOS 56
4.1 General 56
4.2 Específicos 56
5. MATERIALES Y MÉTODOS 57
5.1. Materiales 57
5.1.1 Localización 57
5.1.2 Material experimental 58
5.2. MÉTODOS 59
5.2.1. Recolección de las muestras 59
5.2.2. Reconocimiento de las enfermedades 60
5.2.3. Reconocimiento visual o directo 61
5.2.4. Reconocimiento en el laboratorio 61
5.2.4.1. Técnicas de aislamiento 62
5.2.4.2. Pruebas complementarias para el diagnóstico 63
5.3. ANÁLISIS DE LOS DATOS 68
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 70
6.1. Hongos 70
6.2. Bacterias 77
6.3. INCIDENCIA DE LAS ENFERMEDADES ENCONTRADAS SEGÚN LA DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA 82 6.4. EVALUACIÓN DE Ralstonia solanacearum 96
6.5. APORTES DE LA TESIS A Mc CAIN ANDINA 97
7. CONCLUSIONES 99
8. RECOMENDACIONES 102
BIBLIOGRAFÍA 108
ÍNDICE DE TABLAS
Pág.
TABLA 1. Incidencia de enfermedades en campo en Antioquia 83
TABLA 2. Incidencia de las enfermedades en campo en Boyacá 83
TABLA 3. Incidencia de las enfermedades en campo en
Cundinamarca 83
TABLA 4. Incidencia de las enfermedades en campo en Nariño 84
TABLA 5. Incidencia de las enfermedades en bodega en
Antioquia 89
TABLA 6. Incidencia de las enfermedades en bodega en Boyacá 89
TABLA 7. Incidencia de enfermedades en bodega en
Cundinamarca 90
TABLA 8. Resultados de ELISA (NCM) 96
ÍNDICE DE FIGURAS
Pág.
FIGURA 1. Niveles de ploidia de la papa 14
FIGURA 2. Spongospora subterranea. Agallas en raíces 23
FIGURA 3. Spongospora subterranea. Verrugas en tubérculo 23 FIGURA 4. Rhizoctonia solani Esclerocios en tubérculos 29
FIGURA 5. Fusarium spp. Síntomas en tubérculos 33
FIGURA 6. Fusarium oxysporum. Síntomas en tubérculo 36
FIGURA 7. Ralstonia solanacearum. Síntomas en tubérculos 39
FIGURA 8. Erwinia carotovora var. atroseptica. Pata negra en el tallo 40
FIGURA 9. ELISA (NCM). 68
FIGURA 10. Quistosoros Spongospora subterránea (Aumento 40x) 71
FIGURA 11. Rhizoctonia solani en agar PDA 72
FIGURA 12. Hifas de Rhizoctonia solani (Aumento 45x) 72
FIGURA 13. Fusarium spp. en PDA 73
FIGURA 14. Fusarium oxysporum en PDA 74
FIGURA 15. Conidias de Fusarium spp(Aumento 45x) 74
FIGURA 16. Clamidosporas Fusarium oxysporum(Aumento 45x) 75
FIGURA 17. Geotrichum spp. en agar PDA 76
FIGURA 18. Geotrichum spp. observación microscópica 77
FIGURA 19. Colonias de Erwinia en agar nutritivo 78
FIGURA 20. Gram de Erwinia (Aumento 100x) 78
FIGURA 21. Prueba de patogenicidad en rodajas de papa 79
ÍNDICE DE ANEXOS
Pág.
ANEXO 1. Ciclo de la enfermedad de Spongospora subterránea 112
ANEXO 2. Ciclo de la enfermedad de Fusarium oxysporum 113
ANEXO 3. Ciclo de la enfermedad de Rhizoctonia solani 114
ANEXO 4. Ciclo de la enfermedad de Erwinia.. 115
ANEXO 5. Mapa zonas productoras de papa en Colombia 116
ANEXO 6. Agar Nutritivo 117
ANEXO 7. Agar PDA 118
ANEXO 8. Oxidasa. 119
ANEXO 9 Catalasa 120
ANEXO 10. Prueba de reducción de compuestos de sacarosa 121
ANEXO 11. Prueba Oxido/Fermentación (O/F). 123
ANEXO 12. Caldo para producción de indol 126
ANEXO 13. ELISA (NCM) 129
ANEXO 14. BODEGA Antioquia (Alto de las Palmas) 133 ANEXO 15. BODEGA Boyacá (Tunja) 134 ANEXO 16. BODEGA Cundinamarca (Mosquera-Funza) 135
ÍNDICE DE GRÁFICAS
GRÁFICA 1. Incidencia de las enfermedades en campo en
Antioquia
GRÁFICA 2. Incidencia de las enfermedades en campo en Boyacá
GRÁFICA 3. Incidencia de las enfermedades en campo en Cundinamarca GRÁFICA 4. Incidencia de enfermedades en bodega en Antioquia
GRÁFICA 5. Incidencia de las enfermedades en Boyacá
GRÁFICA 6. Incidencia de las enfermedades en bodega en Cundinamarca
RESUMEN
En Colombia no han existido experiencias que incluyan el almacenamiento
de papa con fines de su utilización o consumo posterior, pues no existe
una cultura preventiva en cuanto a fitosanidad se refiere, por lo tanto el
presente trabajo se realizó con la empresa Mc Cain Andina S.A. con el
objetivo de dar a conocer las principales enfermedades causadas por
bacterias y hongos, que afectan al tubérculo de papa Solanum tuberosum
spp. andigena variedad Diacol Capiro, para fines de procesamiento
comercial, tanto en las bodegas de almacenamiento como en la etapa de
precosecha; en los departamentos de Cundinamarca, Boyacá, Antioquia y
Nariño.
La evaluación de los tubérculos se llevo a cabo por medio de un muestreo
al zar de los cargamentos que llegaban a las diferentes bodegas y
cultivos. Para el diagnóstico de laboratorio de las diferentes patologías se
implementaron técnicas bacteriológicas y de patogenicidad para la
identificación de bacterias del género Erwinia. Para el caso de la bacteria
Ralstonia solanacearum se emplearon dos métodos de evaluación: la
prueba de ELISA-NCM (Prueba Inmunoenzimática) con el fin de
utilizarse como prueba de diagnóstico para detectar la presencia de la
bacteria en planteles comerciales, ya que no se había realizado con
anterioridad este tipo de muestreo. Y el de Hot Box o caja caliente a
30°C, el cual se logró implementar gracias a este trabajo, como una
herramienta que permite evidenciar la expresión de síntomas latentes
causados por esta bacteria.
Como resultado de este trabajo se obtuvo finalmente el aislamiento de las
bacterias; Erwinia carotovora var. carotovora, Erwinia carotovora var.
atroseptica, Erwinia chrysantemi, y de los hongos Rhizoctonia solani,
Fusarium spp., F. oxysporum, Geotrichum spp. y Spongospora subterranea
este último identificado a partir de agallas de raíces.
1. INTRODUCCIÓN
La palabra PAPA es un vocablo Quechua que significa tubérculo, la papa
cultivada tiene más especies silvestres (228) afines que cualquier otro
cultivo, las cuales están ampliamente distribuidas en América, desde la
región Suroeste de Estados Unidos hasta el extremo sur de la cordillera
Andina, La especie más común es la Solanum tuberosum variedad andigena
(Fedepapa, 2000).
La papa es oriunda de los Andes peruanos y bolivianos, y cultivada por los
incas fue introducida en Europa por los españoles en la segunda mitad del
siglo XVI. Destinada en un principio a la alimentación del ganado; el
hombre europeo comenzó a consumirla a raíz de la crisis agrícola de fines
del siglo XVIII; a mediados del siglo XIX era ya, después de los cereales,
el principal producto de la dieta alimenticia de las clases populares, tanto
en Europa como en América.
Es uno de los principales productos cultivados en el país, especialmente en
la región Cundi-boyacense alcanzando en el año de 1.997 una producción
neta de 4`000.000 de toneladas, pero presentando un considerable
descenso a 2`686.621 toneladas en 1.999, significando por lo tanto una
pérdida del 32% en la producción (Arévalo, 1997, Fedepapa, 2000).
Una de las causas de las pérdidas en producción están dadas por
enfermedades de tipo bacteriano como pudrición blanda (Erwinia
carotovora) y pudrición parda (Ralstonia solanacearum) que afectan de
gran manera al tubérculo durante su almacenamiento, así mismo, la
pudrición negra y la costra negra ocasionadas por hongos son
enfermedades de sumo interés para los agricultores y la industria de la
papa frita (Arévalo, 1997).
Lo anterior nos hace notar claramente que se hace necesario la
implementación de un estudio que brinde una herramienta útil para la
identificación de las patologías que se presentan en el momento del
almacenaje del producto para procesamiento industrial.
No es conveniente almacenar los tubérculos bajo condiciones ambientales
con un exceso de humedad porque favorece el desarrollo de hongos y
bacterias, ocasionando pérdidas por pudriciones; aunque se ha observado
también que en la mayoría de los casos estas enfermedades provienen de
una previa infección en campo (Hooker, 1980).
Las temperaturas entre 10 y 15 °C predominantes en las principales áreas
productoras de papa en Colombia son aptas para el almacenamiento de los
tubérculos, por lo que no se hace necesaria la utilización de frigoríficos,
como en otros países, pero esto no evita que surjan problemas de índole
fitosanitario (Lago, L. 2000).
2. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
2.1 HISTORIA
Aunque se desconoce su antigüedad, de acuerdo con las evidencias
botánicas y culturales, la papa fue domesticada por los Collas hoy
Aymaras de la cultura Tiahuanco que se desarrolló al Oeste de Bolivia en
la región comprendida entre los lagos Titicaca y Poopó unidos por el río
Desaguadero. Desde su centro de origen, las papas cultivadas fueron
difundidas en Suramérica a través de la interconexión de los pueblos
andinos (Rodríguez, 1997).
Los españoles conocieron la papa en su entrada al Nuevo Reino en 1537, en
las lindes de la Confederación Muisca. La papa fue introducida a España
entre los años de 1565 a 1570 y de allí se difundió al resto del Continente
Europeo. De España la papa fue llevada a Italia donde fue reportada
creciendo en jardines de ese país. Aunque a Inglaterra llegó hacia 1580,
no fue común hasta 1700, en este país su aceptación fue muy lenta. A
finales del siglo XVIII, llegó a ser parte de la agricultura en Francia. La
papa llegó a Irlanda en 1663 y fue allí donde aparentemente fue cultivada
por primera vez, con el fin del aprovechamiento de los tubérculos. En
Colombia, la papa fue descubierta por la expedición de Gonzalo Jiménez
de Quesada en la provincia de Vélez, en 1537. (Rodríguez, A. 1997,
Cevipapa, 2000).
Aparentemente, la primera referencia impresa de la papa fue del catálogo
de Jhon Gerard publicado en 1596. En el mismo año, Gaspar Bahuin en su
Phytopinax dio a la papa el nombre científico de Solanum tuberosum, el
mismo que adoptó Linneo en 1753 (Porras, 1996).
2.2. MORFOLOGÍA DE LA PLANTA
RAÍCES
La planta puede desarrollarse de dos formas; de una semilla sexual,
formando una delicada raíz axonomorfa con ramificaciones laterales, o de
un tubérculo; formando raíces adventicias fibrosas, primero en la base de
cada brote y luego encima de los nudos en la parte subterránea de cada
tallo (Rodríguez, 1997).
El sistema radical de la papa es frondoso y débil, por lo que sus raíces son
sensibles a la falta o exceso de agua en el terreno de cultivo, puede
alcanzar un tamaño de hasta 1.50 metros lateralmente, aunque esto varía
según la especie o variedad. Un buen desarrollo del sistema radical
favorece la planta con una mayor área de absorción de agua y nutrientes,
además, ofrece mayor tolerancia a enfermedades y plagas que atacan las
raíces (Rodríguez, 1997. Hernández, 1992).
TALLOS
El sistema consta de dos tallos principales, estolones y tubérculos. Las
plantas provenientes de una semilla sexual tienen un solo tallo principal,
mientras que las que provienen de tubérculos pueden producir varios
tallos. Los tallos aéreos son herbáceos, erguidos o ligeramente postrados
y resultan del desarrollo de las yemas localizadas en los ojos de los
tubérculos, pueden alcanzar una altura de 1 metro, su diámetro oscila
entre 5 y 25 milímetros. El color varía desde el verde claro hasta el
púrpura. En una planta joven los tallos son macizos con una médula
formada por células de paredes delgadas, mientras que en uno adulto, la
médula generalmente desaparece quedando el centro hueco. La epidermis
puede ser glabra o pubescente (Hernández, 1992).
ESTOLONES
Son tallos laterales que crecen horizontalmente dentro del suelo a partir
de las yemas de la parte subterránea de los tallos principales. Son más
gruesos y carnosos que las raíces y comienzan a desarrollarse cuando la
planta tiene aproximadamente 10 centímetros de altura. El estolón
aparece en los nudos de la parte subterránea del tallo rodeado por encima
de 2 a 5 raíces. Puede ser simple, con nudos en los cuales salen las raíces
o ramificado produciendo estolones laterales que se originan en los nudos.
Crecen en posición horizontal formando pequeñas hojuelas, botones
laterales y un botón terminal, este último comienza a hincharse en un
extremo inmediatamente después de una curvatura del estolón para
formar el tubérculo (Tuberización), este proceso se encuentra controlado
por factores genéticos y medioambientales como bajas temperaturas,
fotoperiodos cortos y bajos niveles de fertilización nitrogenada
(Rodríguez, 1997) .
TUBÉRCULOS
Morfológicamente los tubérculos son tallos subterráneos, originados en la
curvatura subapical del estolón. Son órganos de almacenamiento que
contienen entre el 70 a 85% de la materia seca por la planta. El
crecimiento y desarrollo del tubérculo está íntimamente ligado a la
síntesis y translocación de carbohidratos (Hernández, 1992).
En la anatomía del tubérculo se distinguen las siguientes zonas
(Hernández, 1992);
• Peridermo: Llamado cáscara o piel. Tiene la función de controlar la
pérdida de humedad e impedir la entrada de patógenos. Consta de 6
a 14 capas de células.
• Corteza: Es una capa de tejido parenquimatoso localizada debajo
del peridermo. Las capas más externas contienen proteínas,
gránulos de almidón y pigmentos de diferentes colores.
• Anillo vascular: Constituido por el xilema y el floema por el cual
circula el agua y los elementos fotosintetizados respectivamente.
• Parénquima de reserva: Es el tejido de almacenamiento que abarca
la mayor parte del tubérculo.
MÉDULA
Es la parte central del tubérculo. Está constituida por células grandes y
transparentes las que forma el parénquima medular (Hernández, 1992).
BROTES
Crecen de las yemas que se encuentran en los ojos de los tubérculos. El
extremo basal de los brotes forman normalmente la parte subterránea
del tallo y se caracteriza por la presencia de lenticelas (Rodríguez, 1997).
HOJAS
Las hojas de la planta adulta son generalmente compuestas, y
regularmente imparipinadas, la superficie puede ser opaca o brillante, de
color verde oscuro, púrpura, violáceo o verde claro. El folíolo es de mayor
tamaño que los laterales. La pubescencia puede estar compuesta de pelos
simples o glandulares (Rodríguez, 1997).
FLORES
El pedúnculo de la inflorescencia está dividido generalmente en dos
ramas, cada una de las cuales se subdivide en otras dos formando una
inflorescencia llamada cima. La flor de la papa es hermafrodita y consta
de cáliz. Por su forma la corola puede ser rotácea, estrellada o pentágona.
El color de la corola es muy variable, hay flores blancas, amarillas,
rosadas, púrpura violáceas o azules. El androceo está formado por cinco
estambres que forman una columna alrededor del pistilo. Cada estambre
consta de antera y filamento que está unida al tubo de la corola. El color
de las anteras varía de amarillo claro a naranja intenso. El gineceo de la
flor consta de un solo pistilo que está compuesto de un solo pistilo que
está compuesto de ovario, estilo y estigma. El ovario es superior porque
los sépalos, pétalos y estambres están pegados al receptáculo debajo del
ovario. El estilo es una prolongación del pistilo que conecta al estigma y el
ovario. El estigma es la parte receptiva del pistilo, donde germinan los
granos de polen para crecer a través del estilo. Después de la
fertilización, los óvulos se desarrollan para convertirse en semillas
(Rodríguez, 1997).
FRUTO
Es una baya de diferente tamaño que puede ser esférica, globular, ovoide
o cónico alargada, de color verde pálido u oscuro. El tamaño varía de 1 – 4
centímetros de longitud (Hernández, 1992).
SEMILLA
Las semillas que se extraen de las bayas pueden ser aplanadas, ovaladas o
arriñonadas, generalmente amarillentas. Cada semilla está envuelta en una
capa llamada testa que protege al embrión y un tejido de reserva llamado
endospermo. El embrión tiene dos polos opuestos, la radícula y la plúmula
que contiene dos cotiledones (Hernández, 1992).
2.3. CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
La papa cultivada, es una planta herbácea, dicotiledónea, constituida por
un número de especies o híbridos, que pertenecen a la familia Solanaceae,
sección Tuberarium, la cual comprende aproximadamente 150 especies
tuberíferas. La más común de las papas Solanum tuberosum L. es un
tetraploide (2n = 48 cromosomas), a la que se considera compuesta por las
subespecies (ssp.) tuberosum y andigena (Alvarado, 1998).
La subespecie andigena la más ampliamente cultivada en Sudamérica;
Tiene ojos profundos, es a menudo pigmentada y produce tubérculos bajo
condiciones de días cortos (Alvarado, 1998).
Dentro de la botánica sistemática su clasificación es la siguiente (Lujan, L.
1991):
DIVISIÓN : Angiosperma
CLASE : Dicotiledoneae
SUBCLASE : Metaclamidea
ORDEN : Tubifloras
FAMILIA : Solanaceae
TRIBU : Solaneae
GÉNERO : Solanum
SUBGÉNERO : Papa
SECCIÓN : Petota
SUBESPECIE : Papa
Con base en el número básico de cromosomas haploide (X=12) la papa se
clasifica por niveles de ploidía, desde diploides (X=24) hasta pentaploides
(X=60) en papas cultivadas y hexaploides (X=72) en papas silvestres
(Fedepapa, 2000).
A continuación se muestran las relaciones evolutivas de las papas
cultivadas y sus niveles de ploidia.
Figura1. Niveles de ploidia de la papa.
Fuente: Fedepapa. Centro de Información Virtual. 2000
2.4. IMPORTANCIA ECONÓMICA DEL CULTIVO DE LA PAPA
Hoy en día la papa es una parte importante de la dieta debido a que, es
una buena fuente de vitamina C, tiamina y niacina, además de fibra,
carbohidratos y proteína (Hooker, 1980).
La papa es el producto de origen agrícola mas apetecido por los
colombianos posiblemente a su bajo precio, abundancia, valor nutritivo,
facilidad de cocción y la posibilidad de ser consumida en diferentes
formas. Aporta aproximadamente un 3.5% de las proteínas y el 4.1% de
las calorías del total de los alimentos. Convirtiéndola en un producto de
gran rentabilidad en su producción y comercialización (López, 2000).
En el mundo se siembran alrededor de 22 millones de hectáreas en papa,
con una producción de 300 millones de toneladas. Cultivo considerado
cuarto en importancia después del trigo, arroz y maíz. En el ámbito
mundial Colombia ocupa el puesto numero 18 en volumen de producción y el
13 en área sembrada (Porras, 1996).
En el país la papa se cultiva principalmente en clima frío y páramo, de
acuerdo con el concepto general de los pisos térmicos más conocidos como
zonas de vida o ecosistemas de Holdrige (Polo, 1997). El área potencial de
producción de papa comprende zonas localizadas entre 1.500 y 4.000
metros de altitud. La producción comercial se realiza entre 2.000 y 3.500
metros y la zona de producción óptima, determinada en función de
cantidad y calidad del producto corresponde a zonas localizadas entre
2.500 y 3.000 metros (Arévalo, 1997).
En la zona intermedia de los departamentos de Cundinamarca, Boyacá y
Nariño, se produce papa para consumo de excelente calidad y buena
conservación y es apta para la industria de papa frita. Aproximadamente
el 90% de la producción comercial se concentra en los departamentos de
Cundinamarca (35%), Boyacá (30%), Nariño (15%) y Antioquia (10%), el
restante se distribuye en las zonas de Caldas-Tolima, Santanderes y
otras zonas de menor importancia (Porras, A. 1996, Arévalo, 1.997).
Actualmente, de la cosecha anual (1.999) de 2´686.621 de toneladas de
papa, el 80% es destinado para consumo fresco, 8% en la industria de
papa frita, 5% como semilla y un 7% se desperdicia (Fedepapa, 2000).
Durantes los últimos diez años (1990-1999), según cifras publicadas por la
Oficina de Información y Estadística del Ministerio de Agricultura y
Desarrollo Rural, se ha mantenido entre 146.000 y 185.000 hectáreas de
siembra, la producción ha fluctuado entre 2.281.000 y 2.938.000
toneladas (López, 2000).
La industria de la papa ha presentado un notable crecimiento con la
aparición de nuevas empresas de procesamiento, especialmente pequeñas
y, con la llegada y el establecimiento de las principales multinacionales de
la fabricación de pasabocas y congelados como Savoy, Fritolay y Mac Cain
Food Limited (López, 2000).
El consumo de productos procesados a partir de la papa durante la última
década, aumento como el reflejo de los cambios en los hábitos
alimentarios, tanto por el ingreso de la mujer al mercado laboral como por
la preferencia de consumir alimentos de preparación rápida (López,
2000).
Las industrias que procesan papa exigen tres parámetros mínimos de
calidad. El primero de ellos es el contenido de azúcares reductores que es
responsable del color del producto terminado. La industria permite un
máximo de 3 miligramos por gramo de peso fresco limites de
ennegrecimiento de la papa cuando se frita. El segundo parámetro es el
contenido de materia seca que debe ser superior al 20% que influye en el
tiempo de fritado y el tercer parámetro tiene que ver con el tamaño y la
forma del tubérculo. Para hojuelas se requieren tubérculos de forma
redondeada de tamaño medio superior a 40 milímetros de diámetro con
piel clara y ojos superficiales, mientras que para papa a la francesa se
requieren tubérculos de tamaño medio a grande, ojos superficiales y
forma alargada. Las pérdidas que sufre el tubérculo de papa durante su
almacenamiento se relacionan con la pérdida de peso y la calidad,
afectando así su valor comercial (Arévalo, A. 1.997).
La variedad Diacol capiro en mas del 90%, es utilizada como la materia
prima ideal; reúne mejores cualidades para procesamiento, en términos de
materia seca (superior al 20%), contenido de azucares reductores (menor
al 0.1%), tamaño, profundidad de ojos y forma (López, 2000).
2.5. PATOLOGÍAS DEL CULTIVO DE PAPA CON FINES DE
PROCESAMIENTO
2.5.1 EN COLOMBIA
Patologías ocasionadas por hongos (Hooker, 1980. Agrios, 1996):
• Roña de la papa (Spongospora subterranea)
• Pudrición acuosa (Pythium spp)
• Gota o tizón tardío (Phytophthora infestans)
• Costra negra (Rhizoctonia solani)
• Gangrena (Phoma exigua)
• Pudrición seca (Fusarium solani, Fusarium spp)
• Marchitez (Fusarium oxysporum)
Patologías ocasionadas por bacterias (Hooker, 1980. Agrios, 1996):
• Pierna negra (Erwinia carotovora pv. atroseptica)
• Pudrición blanda (Erwinia carotovora var. carotovora)
• Ojo rosado (Pseudomonas fluorescens)
• Marchitez bacteriana - Pudrición parda (Ralstonia solanacearum)
Patologías ocasionadas por virus (Buriticá, 1999):
• Virus del enrollamiento de las hojas (PLRV)
• Virus del Mosaico severo (PVYc)
• Virus X del Mosaico latente (PVX)
• Virus del Moteado Andino (PAMV)
• Virus del amarillamiento de las nervaduras (PYVV)
• Virus latente andino (APLV)
• Virus S (PVS)
2.5.1.1 HONGOS
ROÑA O SARNA POLVOSA (Spongospora subterránea (Waltr)
Lagerth)
La enfermedad roña de la papa causada por el hongo Spongospora
subterránea ha cobrado mucha importancia en los últimos años debido a
los daños económicos que produce, al disminuir los rendimientos y calidad
de la papa a niveles superiores al 50% (Guerrero, O. 1998).
Clasificación taxonómica según Agrios, 1996:
REINO: Fungi
DIVISIÓN: Myxomycota
CLASE: Plasmodiophoromycetes
ORDEN: Plasmodiophorales
GÉNERO: Spongospora
ESPECIE: subterranea
La roña o sarna polvosa de la papa es causada por el hongo Spongospora
subterránea (Wallr), un miembro de los Plasmodiophorales, sus
quistosoros son ovoides, irregulares o alargados, de 19-85 micras de
diámetro, constituidos por una masa de esporas (quistes) de descanso
fuertemente aglutinadas. Con zoosporas primarias y secundarias las
cuales son uninucleadas, de forma ovoide a esférica, de 2.5 - 4.6 micras
de diámetro, con 2 flagelos (Radke, 1991).
Se encuentra reportado en el país en los departamentos de Antioquia,
Boyacá, Caldas, Cundinamarca y Nariño (Buriticá, 1999).
ETIOLOGÍA
Se encuentra ampliamente distribuido en los suelos, donde hiberna en
estado de esporas latentes. El tiempo requerido desde el inicio de la
infección de las raíces y tubérculos, hasta la formación de las agallas es
de menos de 3 semanas a una temperatura de 16 a 20 °C y en suelos con
pH entre 4.7 y 7.6 (Agrios, 1996. Radke, 1991).
SÍNTOMAS
La infección de los tubérculos se presenta como pústulas de color castaño
de 0.5 a 2 mm de diámetro, formando algunas veces lesiones levantadas
en forma de verrugas o granos. Durante el almacenamiento, la roña puede
producir una pudrición seca o dar lugar a la formación de un mayor número
de pústulas o úlceras. Estas lesiones pueden facilitar el ingreso de
patógenos como Phytophthora infestans y Fusarium spp (Guerrero, O.
1998).
Figura 2.S.Subterránea. Figura 3. S. Subterránea Agallas en raíz. Verrugas en tubérculo.
CICLO DE LA ENFERMEDAD
Cuando las condiciones ambientales son favorables, la espora produce una
zoospora que infecta el pelo radicular y produce un plasmodio, el cual se
transforma en zoosporangio que produce abundantes zoosporas
secundarias que penetran a la raíz o en los tubérculos de papa, producen
un plasmodio ocasionando la enfermedad característica (Anexo1). Este
último vive a expensas de las células del hospedero que ha invadido sin
destruirlas. Por el contrario, algunas células adyacentes a las invadidas,
son estimuladas por la invasión del patógeno para que se dividan y sufran
una hiperplasia, formando las agallas (Hokker, 1980).
PUDRICIÓN ACUOSA (Pythium spp.)
ETIOLOGÍA
Este hongo forma esporas esféricas de pared lisa y gruesa, los
esporangios son esféricos, de 12 a 29 micras cuando se forman
terminales, o de barril y de 17 a 27x14 a 24 micras si son intercalarios, no
producen zoosporas, sino que germinan directamente emitiendo un tubo
germinativo (Hooker, 1980).
SÍNTOMAS
Las especies de Pythium son patógenas de heridas que atacan solamente a
los tubérculos. Alrededor de las heridas que se producen en la epidermis,
se presentan una áreas decoloradas, húmedas, y a medida que avanza la
enfermedad los tubérculos parecen hinchados con la cáscara humedecida.
Interiormente, la pulpa afectada está claramente demarcada del tejido
sano por una línea bien definida (Dickinson, 1987).
En los montones de almacenaje todo lo que queda de los tubérculos
infectados es la parte externa, constituida por una delgada capa de la
cáscara que tiene apariencia de piel. Si la pudrición comienza en el
almacén se debe aumentar el movimiento del aire con el objeto de enfriar
y secar el producto (Guerrero, 1994).
GOTA O TIZÓN TARDÍO (Phytophthora infestans)
El tizón tardío es probablemente la enfermedad más importante de la
papa en el mundo. Sus daños pueden ser muy intensos, primero en el
campo y después en el almacén, por contaminación de los frutos y
tubérculos (Hooker, 1.980).
ETIOLOGÍA
Los esporangios (conidias) son hialinos, tienen forma de limón, de pared
delgada, de 21 a 38 x 12 a 23 micras. El esporangióforo se caracteriza
por la presencia sucesiva de hinchamientos en los puntos donde se
formaron los esporangios. Las oosporas miden 24 a 46 micras de diámetro
y germinan por medio de un tubo germinativo que forma un esporangio
apical. La germinación de las conidias se hace de dos formas distintas;
indirecta y directa: por el primer método la conidia produce en su interior
varias zoosporas provistas de dos pestañas; después se rasga quedando en
libertad, éstas pierden sus flagelos y emiten un tubo promicélico que
penetra en la planta; en la germinación directa es la propia conidia la que
emite el tubo promicélico, es la más frecuente el primer modo de
germinación. DeBARY demostró que el micelio es capaz de invernar en los
tubérculos (Polo, 1997. Agrios, 1996).
SÍNTOMAS
Las papas muestran al principio pequeñas manchas pardas sobre la piel,
después se profundiza la parte atacada, penetrando en la masa carnosa.
Cortando por la mitad un tubérculo atacado, se ven zonas pardas que
resaltan de la parte sana, blanca o amarilla, en correspondencia con las
depresiones externas de la epidermis (Dickinson, C.H. 1987).
Esta infección de los tubérculos puede manifestarse poco tiempo después
de la recolección, pero también es frecuente que se desarrolle más tarde
en el almacén, por contagio de unos tubérculos a otros. En condiciones de
almacenamiento frío y húmedo, las lesiones se desarrollan lentamente y
pueden volverse hundidas después de varios meses, puede también
producirse una infección secundaria (hongos y bacterias) que provoca una
completa desintegración del tubérculo, haciéndose difícil el diagnóstico
(Hooker, 1980).
COSTRA NEGRA (Rhizoctonia solani (kuhn))
Clasificación taxonómica según Agrios:
REINO: Fungi.
DIVISIÓN: Eumycota.
SUBDIVISIÓN: Deuteromycotina.
CLASE: Agonomycetes.
ORDEN: Agonomycetales (Myceliales).
GÉNERO: Rhizoctonia.
ESPECIE: solani
ETIOLOGÍA
Las hifas de Rhizoctonia son capaces de anastomosarse (fusión de hifas).
El micelio es casi siempre de color canela a castaño oscuro y las hifas
generalmente tienen entre 8 a 10 micras de diámetro. Las hifas jóvenes
tienen sus células multinucleadas y se ramifican cerca de la septa distal
de la célula (Dickinson, 1987).
SÍNTOMAS
En la superficie de tubérculos maduros se forman esclerotes de color
negro o castaño oscuro, pueden ser chatos y superficiales o grandes e
irregulares en forma de terrones, de ahí el nombre de COSTRA NEGRA
(Agrios, 1996).
Figura 4. Rhizoctonia solani. Esclerocios en tubérculos.
CICLO DE LA ENFERMEDAD
El patógeno se mantiene en su forma de esclerote en el suelo y sobre los
tubérculos. Cuando las condiciones son favorables, los esclerotes
germinan e invaden los tallos de papa o los brotes emergentes,
especialmente a través de heridas. La formación de esclerocios sobre los
tubérculos nuevos se realiza en cualquier momento, sin embargo, el
desarrollo máximo ocurre después de que se ha matado la planta, cuando
los tubérculos permanecen aún enterrados (Hooker, 1980. Radke, 1991).
GANGRENA (Phoma exigua (Desm))
ETIOLOGÍA
Las picnidias son generalmente globosas, de color castaño oscuro a negro,
subepidérmicas a errumpentes que arrojan picnidiosporas hialinas,
unicelulares, cilíndricas de 4 a 5 x 2 a 3 micras (Agrios, 1996).
Antes de la cosecha los tubérculos se infectan a través de las lenticelas,
sin embargo, la gangrena se desarrolla en forma más intensa después de la
cosecha, por efecto de los daños causados en la epidermis de los
tubérculos. Temperaturas bajas de almacenaje incrementan la incidencia
de la gangrena (Rodríguez, 1980).
SÍNTOMAS
Pequeñas depresiones de color oscuro en la superficie del tubérculo,
generalmente en las heridas, ojos o lenticelas y pueden agrandarse hasta
convertirse en lo que se conoce como huellas del dedo pulgar o lesiones
irregulares más grandes de bordes definidos. Excepcionalmente las
lesiones pueden restringirse al grosor de la epidermis o volverse
extensivas, oscuras y de forma irregular, condición que se conoce como
necrosis de la cáscara (Hooker, 1.980).
PUDRICIÓN SECA (Fusarium solani (Mart), Fusarium spp.)
Clasificación taxonómica (Agrios, G. 1996):
REINO: Fungi
DIVISIÓN: Eumycota
SUBDIVISIÓN: Deuteromycotina
CLASE: Hyphomycetes
ORDEN: Hyphales (Moniliales)
GÉNERO: Fusarium
ESPECIES: spp
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Boyacá, Caldas, Cauca,
Cundinamarca, Tolima y Valle (Buriticá, 1999).
ETIOLOGÍA
El patógeno no tiene la capacidad de infectar el peridermo o lenticelas de
los tubérculos enteros; necesita de vías de entrada como las heridas
causadas durante la cosecha, almacenaje o transporte. EL hongo, en
general ocasiona sólo esporas asexuales, estas se forman en
esporodoquios e incluyen microconidios formados por 1 ó 2 células, así
como los macroconidios que consisten de 3 a 9 células, levemente
encorvados y con extremos mas o menos puntiagudos. También produce
clamidosporas de pared gruesa y formadas por una o dos células que
soportan la sequía y las bajas temperaturas (Agrios, G. 1.996).
SÍNTOMAS
La pudrición seca por Fusarium afecta a los tubérculos en almacenaje y a
los que se usan como semilla propagativa. En los tubérculos las lesiones
que se inician en las heridas, se hacen evidentes alrededor de un mes
después del almacenaje. La infección se extiende lentamente y el
peridermo correspondiente a las partes lesionadas se hunde y arruga,
formando a veces anillos concéntricos a medida que el tejido se va
secando. Del peridermo muerto pueden emerger pústulas que contiene
micelio y esporas. La necrosis interna toma un color castaño, con el borde
ligeramente necrosado que se distingue por una coloración más oscura
(Alvarado, 1998. Radke, 1991).
Cuando la humedad relativa de almacenaje se aproxima al punto de
saturación, los tubérculos son invadidos por Erwinia spp. como infección
secundaria. El líquido que emana como producto de la pudrición blanda y
que contiene inoculo puede infectar a los otros tubérculos adyacentes
(Dickinson, 1987).
Figura 5. Fusarium spp Síntomas en tubérculos.
CICLO DE VIDA
Habita normalmente en el suelo y allí pueden vivir varios años, pero el
inóculo primario se mantiene en la semilla a partir de la cual se propaga en
el almacenamiento. Yace en el suelo en forma de micelio y en cualquiera
de sus formas de esporas, pero lo hace con mayor frecuencia en forma de
clamidosporas, sobre todo en las regiones templadas frías. La infección se
realiza a través de las raíces y progresa hacia el tallo. El suelo, el viento y
el agua que corren dispersan el inóculo. Crecen a temp eraturas de 20 a
30°C (Agrios, G. 1996).
MARCHITEZ (Fusarium oxysporum )
Según Agrios, G. su clasificación taxonómica es la siguiente:
REINO: Fungi
DIVISIÓN: Eumycota
SUBDIVISIÓN: Deuteromycotina
CLASE: Hyphomycetes
ORDEN: Hyphales (Moniliales)
GÉNERO: Fusarium
ESPECIES: oxysporum
Se encuentra reportado en los departamentos de Antioquia, Boyacá,
Caldas, Cauca, Cundinamarca, Tolima y Valle (Buriticá, 1999).
SÍNTOMAS
En la superficie de los tubérculos se forman manchas de diferentes tipos,
muerte de la zona de unión con el estolón, pudrición superficial y
decoloración interna; desmejorando así las calidades comerciales de los
tubérculos. Los síntomas se presentan a la mitad del período del cultivo,
con una marchitez violenta. El amarillamiento comienza en las hojas
inferiores y progresa hacia la parte superior de la planta. La infección de
los tubérculos a través de las heridas provoca lesiones circulares y
pudrición seca en almacenaje (Hooker, 1980. Agrios, 1996).
Figura 6. F. oxysporum. Síntomas en tubérculo.
CICLO DE LA ENFERMEDAD
La infección se realiza a través de las raíces y progresa hacia el tallo.
Puede ser por el agua que corre, semilla cortada infectada y tubérculos
infectados sembrados en campos nuevos(Anexo 2). Su capacidad de
infección se ve favorecida a 28 grados centígrados (Radke, 1991.
Schisler, 2000).
2.5.1.2. BACTERIAS
MARCHITEZ BACTERIANA, PUDRICIÓN PARDA. (Ralstonia
solanacearum. E.F. Smith)
Clasificación según Holt, J. :
REINO: Prokaryotae
DIVISIÓN: Bacteria
FAMILIA: Pseudomonaceae
GÉNERO: Ralstonia
ESPECIE: solanacearum
Es una bacteria abastonada, no formadora de espora ni cápsula, Gram
negativa, reduce nitritos, forma amoniaco y es aeróbica. No motil y
carente de flagelo polar. Se desarrolla entre 30-32 grados centígrados,
aunque algunas razas se desarrollan en temperaturas relativamente bajas.
No provoca hidrólisis del almidón y a la gelatina la licua lentamente o no
del todo (Hooker, 1980).
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Boyacá, Caldas, Huila,
Santander, Cundinamarca y Nariño (Buriticá, 1999).
Las pudriciones bacterianas aparecen con mayor frecuencia en hortalizas
que tienen tejidos carnosos de almacenamiento, tales como las papas, se
encuentran distribuidas por todo el mundo y producen pérdidas
considerables de cosechas en el campo, durante su transporte y
especialmente en el almacenamiento (Agrios, 1996).
SÍNTOMAS
La infección en el tubérculo se observa a través del peridermo como una
decoloración gris pardusca. Si se cortan transversalmente los tubérculos
muestran una decoloración vascular que puede extenderse desde el xilema
hacia la médula y hacia la corteza, en la región del anillo vascular se
observan gotas blanquecinas del moco bacteriano (Anexo 3). Los ojos que
se encuentran en la base del tubérculo se oscurecen formándose un
exudado pegajoso (López, 1993, Dickinson, 1987).
Figura 7. Ralstonia solanacearum. Síntomas en tubérculo.
PIERNA NEGRA (Erwinia carotovora pav. atroseptica (Van Hall) Dye)
En el manual de Bergey´s se encuentra clasificada de la siguiente forma:
REINO: Prokaryotae
DIVISIÓN: Bacteria
FAMILIA: Enterobacteriaceae
GÉNERO: Erwinia
ESPECIE: carotovora
VARIEDAD: atroseptica
Son bacterias abastonadas, Gram negativas, de tamaño 0.7 x 1.5 micras,
con flagelos perítricos, no formadoras de esporas y anaeróbicas
facultativas. Forman ácido a partir de maltosa alfa metil glucósido y
sustancias reductoras de sacarosa, no se desarrolla por encima de 36
grados centígrados (Hooker, 1980. Radke, 1991).
Reportada en el país en los departamentos de Caldas y Tolima (Buriticá,
1999).
SÍNTOMAS
Los tubérculos muestran síntomas que van desde una ligera decoloración
vascular al extremo del estolón hasta una pudrición que abarca todo el
tubérculo, lo más común es la pudrición blanda de la mé dula o región
medular, que partiendo de la base del estolón se extiende hacia
profundidades diversas del tubérculo (Agrios, 1996. Hooker, 1980).
Figura 8. Erwinia c. atroseptica. Pierna negra en tallo.
CICLO DE VIDA
La infección se realiza por lenticelas, agrietaduras o heridas del
tubérculo o por el estolón que se comunica con la planta, puede sobrevivir
en tubérculos contaminados durante todo el período de almacenaje. El
inoculo primario se encuentra sobre o dentro de la semilla. Después de la
siembra, el tubérculo madre o porción de semilla fraccionada se van
deteriorando durante el desarrollo de la planta, liberando hacia el suelo
gran cantidad de bacterias que se mueven con el agua y contaminan
tubérculos vecinos. La bacteria persiste en el suelo por períodos cortos,
pero esto depende de las condiciones de temperatura y la humedad del
suelo; ya que estos favorecen su crecimiento (Anexo 4). Crece en climas
fríos, el ataque se produce en el almacén o en el suelo antes de la cosecha
y los tubérculos se deterioran después de la siembra (López, C. 1993).
PUDRICIÓN BLANDA (Erwinia carotovora var. carotovora (Jones)
Dye)
Clasificación según manual de Bergey´s:
REINO: Prokaryotae
DIVISIÓN: Bacteria
FAMILIA: Enterobacteriaceae
GÉNERO: Erwinia
ESPECIES: carotovora
VARIEDAD: carotovora
Erwinia carotovora var. carotovora es una bacteria abastonada, Gram
negativa, de 0.7 x 1.5 micras, con flagelos perítricos, no forman espora y
son anaeróbicas facultativas (Agrios, 1996. Hooker, 1980).
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Caldas y Cundinamarca
(Buriticá, 1999).
ETIOLOGÍA
El período de supervivencia de las células de Erwinia en el suelo es
aproximadamente de 0.8 días a -29 °C, 5.6 días a 7 °C, 0.8 días a 18 °C y
0.6 días a 24 °C. Las bacterias invaden los espacios intercelulares donde
se multiplican y producen enzimas pectolíticas, incluyendo pectin-metil-
esterasa, depolimerasa y pectin liasa, las primeras, maceran el tejido,
destruyendo la lámina media y las enzimas celulolíticas reblandecen la
celulosa de la pared celular (Agrios, 1996).
SÍNTOMAS
El ataque a los tubérculos se produce en el almacén o en el suelo antes de
la cosecha. La infección se realiza a través de las lenticelas, heridas o por
el extremo del estolón que se comunica con la planta madre. Las lesiones
asociadas con las lenticelas se presentan en formas de áreas circulares
húmedas, de color canela a castaño, de aproximadamente 0.3 a 0.6
centímetros de diámetro. El tejido afectado es húmedo, de color crema a
canela y de consistencia blanda, con una clara demarcación entre le tejido
sano y enfermo, por lo que la parte afectada puede desprenderse
fácilmente. A medida que la pudrición avanza adquiere un olor
desagradable y toma consistencia pegajosa, debido a la invasión con
organismos secundarios (Hooker, 1.980).
La licuefacción de las sustancias pécticas y la exósmosis del agua de los
protoplastos (acción de las enzimas), en los espacios intercelulares, da
como resultado el ablandamiento de los tejidos invadidos y su
transformación en una masa mucilaginosa. Esta masa se encuentra llena de
innumerables bacterias, que pueden salir, por agrietaduras de la
epidermis, e infectar a otros órganos (Agrios, 1996).
La falta de maduración de los tubérculos, heridas, temperatura y
humedad elevadas, condiciones anaeróbicas, etc., favorecen la incidencia
de pudrición blanda en los tubérculos. La descomposición de los tubérculos
es favorecida por temperaturas superiores a 10 °C (Dickinson, 1987.
López, 1993).
OJO ROSADO (Pseudomonas fluorescens)
Es una bacteria abastonada, de 1 a 1.3 micras, Gram negativa, de células
mótiles, con flagelo polar, y pueden ocasionalmente ser no mótiles
(Hooker, 1980).
SÍNTOMAS
La enfermedad se presenta en la forma de áreas rosadas que circundan
los ojos, y posteriormente toma una coloración castaña. Las áreas
decoloradas son particularmente abundantes en la parte apical del
tubérculo, y pueden extenderse a una profundidad de 0.8 mm o más,
dentro del tubérculo. Cuando la humedad relativa del almacén es baja, el
tejido afectado se deshidrata rápidamente, tornándose escamoso e
inconspicuo. Aunque la enfermedad no tiene mucha incidencia es
importante almacenar los tubérculos en ambiente seco y fresco con el
objeto de desecar el tejido atacado y prevenir que la infección avance
durante el almacenaje (Hooker, 1.980).
2.5.1.3 VIRUS
VIRUS DEL ENROLAMIENTO DE LAS HOJAS (PLRV)
Pertenece a la familia de los Luteovirus. Tiene partículas icosaédricas de
24 nm de diámetro El virus puede ser transmitido por tubérculos
enfermos o por vectores como áfidos (Myzus persicae) en el período de
almacenamiento (Hooker, 1980).
Presenta varias cepas que se pueden llamar severas, moderadas o leves.
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Tolima, Caldas,
Cundinamarca y Nariño (Buriticá, 1999).
SÍNTOMAS
La necrosis reticulada interna se puede apreciar a simple vista cuando se
corta el tubérculo (Hooker, 1980).
VIRUS DEL MOSAICO SEVERO (PVYc)
Es un virus de partículas flexuosas helicoidales de 730 x 11 nm, de la
familia Potyvirus. Se conocen varios grupos de cepas que pueden
diferenciarse de acuerdo a los síntomas que producen; PVYo (cepa común),
PVYC (cepa que corresponde al tipo de virus C), entre otras. Se mencionan
por lo menos 25 especies de áfidos que pueden ser vectores, entre los
cuales figura el Myzus persicae (Hokker, 1980).
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Caldas, Cundinamarca y
Nariño (Buriticá, 1999).
SÍNTOMAS
En algunas variedades provoca rayado fino y las plantas afectadas se
quedan enanas y mueren prematuramente. Existe generalmente una
correlación entre los síntomas del follaje y del tubérculo. Puede inducir
necrosis interna y externa del tubérculo (Agrios, 1996. Hooker, 1980).
VIRUS X DEL MOSAICO LATENTE (PVX)
Pertenece a los Potexvirus. Las partículas de PVX son filamentos
flexuosos de 515 x 13 nm, con subestructura helicoidal. El ARN de que
está constituido es de hebra simple, con peso molecular de 2.1 x 106. Se
puede transmitir por contacto entre raíces, entre brotes, en el campo
cuando el viento o maquinaria hacen que las plantas se rocen (Dickinson,
1987).
SÍNTOMAS
Es el virus de mayor diseminación y a menudo infecta completamente
ciertos planteles comerciales con una reducción en el rendimiento
estimada entre 0 hasta más de 15%. Causa necrosis de los tubérculos. Se
encuentra en los departamentos de Antioquia, Caldas, Cundinamarca y
Nariño (Buriticá, 1999. Hooker, 1980).
VIRUS DEL MOTEADO ANDINO (PAMV)
Este virus es un miembro del grupo del mosaico del caupi (Comovirus).
Tiene partículas isométricas de aproximadamente 28 nm de diámetro. Los
dos tipos de proteína que posee, pequeña y grande tienen un peso
molecular de 20.000 y 40.000 daltons respectivamente. Su transmisión es
por contacto. Se encuentra en los departamentos de Antioquia y
Cundinamarca (Buriticá, 1999. Dickinson, 1987).
SÍNTOMAS
Normalmente se presenta un moteado secundario severo, deformación de
las hojas y enanismo severo (Hooker, 1980).
VIRUS DEL AMARILLAMIENTO DE LAS NERVADURAS (PYVV)
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Cundinamarca y Nariño.
No se tienen certeza si pertenece a los Geminivirus. El virus tienen
partículas isométricas de 26 nm de diámetro. No se ha identificado
vector, se transmite por injerto (Buriticá, 1999. Hooker, 1980).
SÍNTOMAS
Los síntomas son mucho más visibles en las hojas, las plantas infectadas
tienen una apariencia muy llamativa, debido a la intensidad del color
amarillo Los tubérculos se deforman debido a que los ojos se proyectan
hacia fuera en forma de nudosidades que sugieren el síntoma de
crecimiento secundario. Los daños pueden causar la reducción de
rendimiento en un 50% (Hooker, 1980).
VIRUS LATENTE ANDINO (APLV)
Se encuentra en los departamentos de Antioquia, Cundinamarca y Nariño.
Tiene semejanza con los miembros del grupo del mosaico amarillo del
nabo. Es de partículas isométricas de 28 nm de diámetro
aproximadamente. El peso molecular de las subunidades es de 19.600 a
20.700 daltons. Se transmite por contacto entre plantas. (Buriticá, 1999.
Agrios, 1996).
SÍNTOMAS
La infección secundaria causa normalmente mosaico suave, pero puede
inducir clorosis reticulada de las nervaduras menores y rugosidad
(Butiricá, 1999. Agrios, 1996).
VIRUS S (PVS)
Las partículas son bastones rígidos a ligeramente flexuosos de 650 x 12
nm aproximadamente. Pertenece a los Carlavirus. Se disemina por
contacto con plantas enfermas, o mecánicamente por medio de savia
infectiva. Se encuentra reportado en los departamentos de Antioquia,
Cundinamarca y Nariño (Agrios, 1996. Buriticá, 1999).
SÍNTOMAS
Es virtualmente asintomático, cuando los síntomas son evidentes se
manifiestan como una ligera profundización de las nervaduras, rugosidad
de las hojas, posible enanismo y hábito de crecimiento de la planta más
abierto (Hooker, 1980).
3. JUSTIFICACIÓN
Durante siglos la papa ha sido una importante fuente de alimento para los
seres humanos, su cultivo requiere de un adecuado control y seguimiento
fitosanitario durante todo su ciclo de vida y en su posterior almacenaje,
para evitar así perdida de la calidad del producto para procesamiento,
además de las grandes pérdidas económicas que puede generar.
En Colombia, por ser un país en el cual se puede sembrar papa durante
todo el año, no han existido buenas técnicas de almacenamiento de papa
con fines de su utilización o consumo posterior. La población colombiana
prefiere consumir tubérculos de papa frescos y no que sean el resultado
de un almacenamiento previo (Comunicación personal Lago, L. 2000).
En el país existen alrededor de unas 70 industrias entre pequeñas,
medianas y grandes, incluidas las grandes multinacionales. Se estima en un
8% de la producción nacional disponible, entre 220.000 y 250.000
toneladas, los volúmenes de papa tipo industrial que requieren los
industriales de la papa, como materia prima, en sus procesos de
fabricación de papa precocida congelada a la francesa y de hojuelas
(López, 2000).
Con la llegada y desarrollo de las industrias procesadoras en el país se
requiere un suministro estable y rentable de materia prima; tal reto
implica la necesidad de almacenar papa con fines de procesamiento,
teniendo en cuenta una adecuada temperatura y ventilación.
En el país se tiene el concepto de que el almacenamiento de papa para
consumo fresco no es importante, debido a que el consumidor es exigente
en la calidad del producto y una papa reposada o almacenada no tiene
comercio. Con el cambio del habito de consumo hacia productos
procesados la industria se ha visto avocada a fluctuaciones exageradas en
el precio de la materia prima y a una gran escasez de esta en ciertas
épocas del año, lo que ha despertado el interés del almacenamiento de la
papa (Taller Interregional de papa, 1996.)
Podría considerarse que una bodega ideal para conservar la semilla por
largo tiempo, debería tener una temperatura controlada de 4 a 6 grados
centígrados, humedad relativa del 90% y utilizar cajas de plástico para
empacar cantidades de 30 a 50 Kg. Pero las características de los climas
de las regiones paperas Colombianas, nos proporcionan condiciones
ambientales con temperaturas de 10 a 15 °C y humedad relativa de 70 a
80% (Alvarado, L. 1998).
En diferentes países la papa es almacenada con tales fines en frigoríficos,
en Colombia existen algunos disponibles pero las condiciones ambientales
favorables mencionadas anteriormente, nos brindan la posibilidad de
almacenar papa a corto plazo. Tal situación origina la necesidad de
conocer las patologías que pueden afectar y deteriorar el tubérculo de
papa durante su almacenamiento con fines de procesamiento, para poder
evitar así graves pérdidas económicas (Alvarado, 1998).
4. OBJETIVOS
4.1 GENERAL
óIdentificar las principales enfermedades que afectan al tubérculo de la
papa destinado para procesamiento durante su almacenamiento.
4.2 ESPECÍFICOS
óIdentificar mediante técnicas de laboratorio y campo las principales
enfermedades bacterianas y fungosas, que ocurren durante el
almacenamiento de la papa.
óEvaluar a través de índices de incidencia las pérdidas estimadas a causa
de la enfermedad.
5. MATERIALES Y MÉTODOS
5.1 MATERIALES
5.1.1 LOCALIZACIÓN
La toma de muestras se realizo en bodegas con temperatura promedio de
12 °C y humedad relativa del 70% - 80% con almacenamiento de los
tubérculos en arrumes de 8 bultos sobre estibas. Tanto en campo como en
bodegas los departamentos muestreados fueron (Anexo 5):
• Antioquia: En los municipios de Santa Rosa de Osos, San Pedro y
Alto de las Palmas. Presenta una temperatura promedio de 20 °C.
• Boyacá: En los municipios de Tota, Tuta, Toca, Villapinzón, Umbita
y Tunja. Con una altura promedio de 2900 metros sobre el nivel del
mar. Con una temperatura promedio de 12.5 °C.
• Cundinamarca: En los municipios de Mosquera, Neusa, Cogua,
Zipaquirá y Funza. Con una temperatura promedio de 14 °C y
altura promedio de 2600 metros sobre el nivel del mar.
� Nariño: En el municipio de Pupiales. En una altura promedio de
3000 metros sobre el nivel del mar. Con una temperatura
promedio de 10 grados centígrados.
5.1.2. MATERIAL EXPERIMENTAL
Tubérculos solanum tuberosum spp. andigena, variedad ¨Diacol capiro ¨.
Reconocimiento de los patógenos en el laboratorio
33.030 muestras: 14.510 en campo y 18.520 en bodegas.
Hot Box
80 muestras.
ELISA (NCM)
40 muestras procedentes de Antioquia y 50 procedentes de
Cundinamarca.
5.2. MÉTODOS
5.2.1. RECOLECCIÓN DE LAS MUESTRAS
El muestreo se realizó de dos formas; la primera en el terreno de cultivo
en el período previo a la cosecha (15 días antes de la cosecha), y la
segunda en el momento de recepción del producto en las bodegas de
almacenamiento propiedad de la empresa Mc Cain Andina ubicadas en los
departamentos de Cundinamarca, Boyacá y Antioquia.
En el campo se empleo un método de muestreo que consistió en escoger 5
sitios diferentes del cultivo de tres metros de longitud, en los cuales se
tomaron todos los tubérculos de seis (6) plantas para evaluar
sintomatología de los mismos (Tomado de Resolución No. 03303 del 20 de
nov. De 1.997). Teniendo en cuenta en el campo la sintomatología y
estados aéreo de las plantas, raíces, tubérculos, suelos, etc.
En el momento de la recepción del producto en el almacén, se muestreó al
azar el 2% de los sacos que conformaban el lote, valorando visualmente el
total de tubérculos que formaban la muestra, una vez detectados los
afectados se procedió a calcular el porcentaje que representaba cada
patología, tomando el 2% inicial como el 100% de la muestra.
5.2.2. RECONOCIMIENTO DE LAS ENFERMEDADES
Para el eficaz estudio e identificación de las enfermedades, es
importante dividir la investigación en dos fases: una primera que se basa
en la observación directa de los síntomas y una segunda que consta del
aislamiento de los patógenos en el laboratorio.
5.2.3. RECONOCIMIENTO VISUAL
En el momento de recepción del material en las bodegas y en las
inspecciones en campo se observaron los signos y síntomas de enfermedad
presentes en los tubérculos y en tal caso, en las plantas (follaje, raíz,
tallo), tales como costras, esclerocios, micelio, exudados, entre otros.
Para poder lograr esto se vaciaban todos los costales a evaluar y se
observaba cada tubérculo, de ser necesario se hacian cortes para obsevar
el interior del tubérculo.
Las muestras que presentaban algún síntoma se llevaron al laboratorio
para su análisis.
5.2.4 RECONOCIMIENTO EN EL LABORATORIO
Esta parte del estudio se realizó en el Laboratorio de Sanidad Vegetal del
C.I. Tibaitatá, del Instituto Agropecuario Colombiano (ICA).
5.2.4.1. TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
En el caso de daños evidentes en la epidermis de los tubérculos se
efectuaron montajes directos mediante raspados del tejido, con
posteriormente coloración con azul de lactofenol, para la observación
microscópica del microorganismo patógeno.
Las muestras a evaluar se sometieron a un proceso de desinfección :
Cortando porciones de tejido sano y afectado, sumergiéndolas en
hipoclorito de sodio al 2.5% por tres minutos, con agitación constante.
Se realizaron dos lavados con agua destilada por dos minutos, secando
posteriormente con papel filtro estéril (French, 1988). Se procedió luego,
a la siembra sobre la superficie del agar PDA (en el caso de hongos), o se
introducían porciones de tejido por 5 minutos en un tubo con 5 mililitros
de agua destilada estéril para su posterior siembra en agar nutritivo (para
bacterias) (Anexo 6), incubando a 24 grados centígrados. Finalmente, se
realizaron pases a medios de cultivo selectivos como Papa-Dextrosa-Agar
(PDA) (Anexo 7) con el fin de purificar y promover la esporulación de los
hongos encontrados .
Utilizando la metodología sugerida en los libros de BARNET, H. L.,
HUYNTER y B. B. 1.989, en estas colonias se observaron características
macroscópicas tales como coloración del micelio aéreo, crecimiento de
éste sobre el agar, formación de estructuras reproductoras, pigmentación
de las colonias, aspecto, olor, consistencia, entre otros.
5.2.4.2. PRUEBAS COMPLEMENTARIAS PARA EL DIAGNÓSTICO
Para el caso de los hongos los únicos métodos utilizados fueron el de
tinción con azul de lactofenol y observación al microscopio.
Para las bacterias luego de haber obtenido un cultivo puro en agar
nutritivo; primero se realizo una coloración de Gram, luego las pruebas
básicas para la identificación de géneros según Schaad (1988) como las
siguientes Pruebas bioquímicas :
• Oxidasa (Anexo 8)
• Catalasa (Anexo 9)
• Reducción de compuestos de sacarosa (Anexo10)
• Oxido/Fermentación (Anexo 11)
• Indol (Anexo 12)
Prueba de patogenicidad con el objetivo de comprobar los postulados de
Koch, en los cuales se permite establecer la relación causal entre el
patógeno y una enfermedad específica, se pretende confirmar que los
síntomas de la enfermedad presentes en los tubérculos enfermos de los
cuales se aisló inicialmente el patógeno, se manifiesten de igual manera en
los tubérculos inoculados.
En esta prueba se realizó una desinfección de tubérculos sanos en una
solución de hipoclorito de sodio al 5.25% durante 10 minutos, dejándolos
secar al ambiente; con el fin de reducir las poblaciones de la superficie
del tubérculo. Posteriormente, se cortaban rodajas de 7-8 milímetros de
espesor, se depositandolas en una caja de petri con papel filtro estéril.
Luego por punción se inoculó una suspensión bacterial de
aproximadamente 106 ufc/ml o con turbidez similar al tubo No. 5 de Mac
Farland de no más de 24 horas de desarrollo, incluyendo una rodaja no
inoculada como testigo. Se incubo a 24 °C durante 48 horas. El desarrollo
de la sintomatología similar a la enfermedad sobre la superficie de la
rodaja se tomó como un resultado positivo.
En el caso especifico de Ralstonia solanacearun se implemento el método
de Hot Box (Caja Caliente), el cual consiste en un cuarto oscuro de 30°C
de temperatura con anaqueles en los que se almacena la muestra del
tubérculo en bandejas. Se pretende crear una situación anormal de
almacenamiento en la cual aparezcan los problemas patológicos. Se
determina el porcentaje de infección latente que pueden tener los
tubérculos.
El método se describe a continuación:
• Se utilizó como muestra 20 tubérculos con sintomatología sospechosa
• Se usan pequeñas cajas para colocar la muestra sin orificios para evitar
contaminación de una muestra a la otra
• Incubando de 3 - 5 días para evaluar la muestra
(Comunicación personal Lago L. 2000).
Así mismo, se implemento la prueba de ELISA NCM (Prueba
inmunoenzimática en membrana nitrocelulosa) kit comercial del Centro
Internacional de La Papa (CIP). Es una prueba inmunoenzimática para la
que se usan membranas de nitrocelulosa en lugar de placas de
microtitulación como soporte para las muestras y reactivos
empleados(Figura 9). Luego del enriquecimiento, ELISA-NCM es tan
sensible como DAS-ELISA (Double-Antibody Sandwich).
La prueba consiste en:
• Colocar una pequeña cantidad de extracto del tubérculo (20 µl) sobre
la membrana de nitrocelulosa (dot-blotting),
• Bloquear el área de la membrana donde están colocadas las muestras (1
hora de incubación),
• Añadir los anticuerpos de conejo específicos de Ralstonia
solanacearum (Rs) (2 horas de incubación),
• Añadir los anticuerpos de cabra anti-conejo conjugados (=GAR-IgG
conjugado)(1 hora de incubación) y,
• Añadir el sustrato que reacciona con las enzimas y produce una
reacción de coloración (de 5-20 minutos).
Todos estos pasos se realizan a temperatura ambiente. Una coloración
moderada de la membrana de nitrocelulosa revela la presencia de
Ralstonia en las muestras. La intensidad de la coloración es proporcional a
la concentración de bacterias.
Antes de realizar la prueba ELISA-NCM, se debe seguir un proceso de
enriquecimiento incubando los extractos del tubérculo en un caldo semi-
selectivo (SMSA modificado). Este proceso aumenta la sensibilidad del
método casi 1 millón de veces. Esto permite la detección de Rs en
tubérculos de papa con infección latente, es decir, que no presentan
síntomas visibles (Anexo 13).
Figura 9. Elisa (NCM)
5.3. ANÁLISIS DE LOS DATOS
El estudio realizado fue de tipo descriptivo, los datos se obtuvieron
realizando un muestreo simple al azar en el que cada uno de los elementos
a analizar tenía igual probabilidad de presentar la enfermedad. Se hallo la
tasa de prevalencia de cada enfermedad por departamento.
En la prueba de ELISA (NCM) para la evaluación de Ralstonia
solanacearum los datos obtenidos se presentan en tablas explicando su
procedencia, el número total de muestras evaluadas y número de muestras
positivas.
6. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
6.1 HONGOS
ROÑA POLVOSA. SPONGOSPORA SUBTERRANEA (Wallr)
SÍNTOMAS
Los tubérculos presentaban sobre la epidermis costras de aspecto polvoso
de color café. En las raíces agallas de color café u oscuro. En el campo las
plantas presentaban retraso en el crecimiento.
RESULTADO DE LBORATORIO
Al efectuar raspado de las agallas de la raíz y teñirlo con azul de
lactofenol se pudo observar al microscopio las masa de quistosoros con
zoosporas dentro de los espacios intracelulares. La espora individual es
poliédrica, delgada, color castaño amarillenta (Figura 10).
Figura 10. Quistosoros de S. Subterránea (Aumento 40x).
COSTRA NEGRA Rhizoctonia solani (Kuhn)
SÍNTOMAS
Esclerocios de color negro; grandes e irregulares en forma de terrones en
la superficie delos tubérculos, agrietaduras, malformaciones o ¨muñecos¨
y en el cultivo tubérculos aéreos, hojas enrolladas hacia arriba y
decaimiento.
RESULTADO DE LABORATORIO
En PDA se observo un crecimiento lento, solo observable a las 48 horas;
muy pegado a la superficie del medio, de crecimiento radial, micelio de
color canela tornandose con el tiempo café y formando esclerocios (Figura
11).
Figura 11. Rhizoctonia solani en agar PDA.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Con tinción de azul de lactofenol se observo al microscopio micelio de
color café, es un hongo de micelio estéril por tener esporas ausentes,
ramificación de las hifas en ángulo recto, constricciones en el punto de
origen de la ramificación de la hifa, formación de una septa en la rama
cerca de su origen (Barnett, H. 1972).
Figura 12. Hifas de R. Solani (Aumento 45x).
PUDRICIÓN SECA. Fusarium spp., F. oxysporum SÍNTOMAS Tubérculos con copos blanco o micelio rosado sobre su superficie, en
estados más avanzados pudrición seca, es decir, momificación de los
mismos.
RESULTADO DE LABORATORIO • Fusarium spp.: Crecio rápidamente de 1 a 2 días. Con micelio aéreo
menos extenso y muy algodonoso, de color blanco totalmente, sin
producción de pigmento alguno.
Figura 13. Fusarium spp. En PDA
• Fusarium oxysporum: Creció de 2 a 3 días. Con micelio aéreo extenso y
algodonoso. La superficie del medio inicialmente era de color blanco con
un ligero tinte rosa, pero al madurar el cultivo se observó una
coloración rosa - lila. En el envés de la caja de petri se observó un
pigmento púrpura oscuro.
Figura 14. Fusarium oxysporum en PDA.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA Fusarium spp.: Produce esporas asexuales que se forman en
esporodoquios, incluye las macroconidias típicos que consisten de 3 a 9
células (a menudo 4 ó 5).
Figura 15. Conidias de Fusarium spp (Aumento 45x).
Fusarium oxysporum: Las microconidias son cortas, abundantes,
generalmente de una célula simple, ovaladas o en forma arriñonada, nacen
en cabezas falsas. Las monofiálides de donde salen las microconidias son
cortas, ramificadas y algunas no ramificadas. La principal característica
es que produce clamidosporas, son de pared gruesa y formadas por una o
dos células, son y se forman en la parte terminal del micelio más viejo.
Figura 16. Clamidospora de F. oxysporum (Aumento 45x).
La observación e identificación de las especies de Fusarium se realizaron
con base en los libros Nelson, P.E. 1981, Singleton, L.D. 1992 y Barnett H.
1972.
PUDRICIÓN GOMOSA Geotrichum spp.
SÍNTOMAS
La pudrición se desarrollaba desde la superficie hacia el interior del
tubérculo. Tomando una consistencia de goma o caucho que se tornaba a
color rosado con la exposición al aire.
RESULTADO DE LABORATORIO
Creció rápidamente de 2 a 3 días. Forma una colonia color blanco, grande
redondeada que crece de forma muy adherida sobre el medio, su
consistencia es cremosa.
Figura 17. Geotrichum spp en PDA.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA El micelio es septado, conidióforos ausentes. Las colonias llamadas
artrosporas son hialinas, cortas, cilíndricas y con las terminaciones
cerradas formadas por la segmentación de las hifas (Barnett, H. 1972).
Figura 18. Geotrichum spp. Observación microscópica (Aumento 40 x).
6.2 BACTERIAS
PIERNA NEGRA. Erwinia carotovora var. atroseptica. (Van Hall) Dye. SÍNTOMAS Los tubérculos presentaban mal olor, pudrición blanda y pegajosa. En el
cultivo se observo decaimiento de las plantas y coloración oscura en la
base del tallo.
RESULTADO DE LABORATORIO Las bacterias crecieron en agar nutritivo a 22°C a las 24 horas. Las
colonias eran pequeñas, cremosas, color blanco crema, lisas.
Figura 19. Colonias de Erwinia en Agar Nutritivo.
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Al realizar la coloración de Gram se observaron bacilos Gram-negativos
rectos y pequeños.
Figura 20. Gram Erwinia. (Aumento 100x).
PRUEBA DE PATOGENICIDAD
Se realizaron pruebas de patogenicidad para confirmar sintomatología y
se obtuvieron resultados positivos en todos los casos. Luego se procedió a
realizar las respectivas pruebas bioquímicas.
Figura 21. Prueba de patogenicidad en rodajas de papa.
• Catalasa: Positivo
• Oxidasa: Negativo
• O/F: F
• Indol: Negativo
• Reducción de compuestos de sacarosa: Positivo
PUDRICIÓN BLANDA. Erwinia carotovora var.carotovora. E.C.C .
Erwinia chrysantemi. E.CR.
SÍNTOMAS
Los tubérculos presentaban lesiones de formas circulares, húmedas,
ligeramente hundidas, de color canela a castaño. El centro de los
tubérculos huecos y el tejido con consistencia blanda, viscosa y pegajosa
producto del exudado bacteriano, de color crema a café oscuro. Olor
desagradable.
RESULTADO DE LABORATORIO
Las bacterias crecieron en agar nutritivo a 22°C a las 24 horas. Las
colonias eran pequeñas, cremosas, color blanco crema, lisas (Figura 19).
OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA
Al realizar la coloración de Gram se observaron bacilos Gram-negativos
rectos pequeños (Figura 20).
PRUEBA DE PATOGENICIDAD
Se realizaron pruebas de patogenicidad para confirmar sintomatología y
se obtuvieron resultados positivos en todos los casos. Luego se procedió a
realizar las respectivas pruebas bioquímicas.
E.C.C. E.Cr.
• Catalasa: Positivo Positivo
• Oxidasa: Negativo Negativo
• O/F: F F
• Indol: Negativo Positivo
• Reducción de sacarosa: Negativo Negativo
6.3 INCIDENCIA DE LAS ENFERMEDADES ENCONTRADAS SEGÚN
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA
Los porcentajes de incidencia aquí reportados, fueron obtenidos con base
en las muestras positivas del total de tubérculos examinados por los
municipios muestreados en cada departamento:
• Cundinamarca: Mosquera, Neusa, Cogua, Zipaquirá,y Funza.
• Boyacá: Tota, Tuta, Toca, Umbita, Villapinzón y Tunja.
• Antioquia: Santa Rosa de Osos, San Pedro y Alto de las Palmas.
• Nariño: Pupiales.
EN CAMPO
El total de muestras evaluadas fue de 14.510, distribuidas :
ANTIOQUIA: 2.740 Muestras en cinco cultivos.
Tabla 1. Incidencia de enfermedades en campo en Antioquia.
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 100 36.4 3.64% Pudrición blanda 230 83.9 8.39% Pudrición seca 0 0 0% Costra negra 2 0.72 0.07% Roña polvosa 4 1.45 0.14% Pudrición gomosa 0 0 0%
BOYACÁ: 7.180 Muestras en cinco cultivos.
Tabla 2. Incidencia de las enfermedades en campo en Boyacá ENFERMEDAD CASOS
POSITIVOS TASA
PREVALENCIA PORCENTAJE
Pierna negra 0 0 0% Pudrición blanda 20 0.13 0.001% Pudrición seca 70 9.74 0.09% Costra negra 93 12.9 1.29% Roña polvosa 120 16.7 1.67% Pudrición gomosa 5 0.7 0.07%
CUNDINAMARCA:4.275 muestras en cuatro cultivos.
Tabla 3. Incidencia de las enfermedades en campo en Cundinamarca
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 3 0.7 0.07% Pudrición blanda 320 74.9 7.49% Pudrición seca 30 7 0.7% Costra negra 86 20.1 2.01% Roña polvosa 0 0 0% Pudrición gomosa 0 0 0%
NARIÑO: 315 Muestras en un cultivo.
Tabla 4. Incidencia de las enfermedades en campo en Nariño
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 0 0 0% Pudrición blanda 0 0 0% Pudrición seca 0 0 0%
Costra negra 0 0 0% Roña polvosa 1 0.31 0.003% Pudrición gomosa 0 0 0%
Aunque el presente estudio esta centrado a definir las patologías que se
pueden presentar en el período de almacenamiento, es importante tener
en cuenta la incidencia de las enfermedades en el campo ya que se pueden
presentar infecciones latentes de patógenos que posteriormente
ocasionen problemas en las bodegas al expresar sus síntomas con las
condiciones favorables de temperatura y humedad que se generan en el
almacén.
El microorganismo que presentó mayor incidencia a nivel de campo fue
Erwinia carotovora var. carotovora, según al análisis de incidencia de
Pudrición Blanda, el mayor porcentaje se presentó en los municipios de
Antioquia con un 8.3% (Gráfica 1), esto puede ser porque en el momento
de los muestreos el clima era el más favorable para el desarrollo de la
enfermedad (Hooker, 1980. French et al., 1993), ya que la precipitación
alcanzo los 700 milímetros y temperatura promedio de 13 ºC, además de
poseer suelos de tipo arcilloso y con poco drenaje; esto ocasiona
retención de las aguas lluvias generando que las lenticelas de los
tubérculos se abran y permitan la entrada de agentes patógenos,
especialmente de bacterias (López, C.A. 1993).
En segundo lugar de incidencia para esta enfermedad se observo en los
municipios muestreados del departamento de Cundinamarca con un 7.49%
(Grafica 3).
Es importante señalar que esta enfermedad es un problema en Colombia
porque además de generar pérdidas económicas en el momento de la
cosecha, al disminuir el rendimiento del cultivo, también es un patógeno
que puede diseminarse por aguas y permanecer en los suelos
convirtiéndolos no aptos para el cultivo de la papa (Hooker, 1980.
Dickinson, 1987).
Otro patógeno importante encontrado fue Erwinia carotovora var.
atroseptica causante de la enfermedad Pierna Negra con un 3.6% en los
municipios muestreados del departamento de Antioquia. Esta bacteria es
de mayor importancia en el campo que en el almacenamiento (Guerrero, O.
1997) pero también puede bajar el rendimiento de la cosecha al dañar
totalmente los tubérculos en estados avanzados de la infección.
Tanto en los municipios de Antioquia, Boyacá y cundinamarca un patógeno
importante encontrado es Rhizoctonia solani, pues, aunque presentó
porcentajes relativamente bajos, 0.07%, 1.29% y 2.% respectivamente
(Gráficas 1,2,3), es importante resaltar que este hongo puede permanecer
latente (en forma de esclerocios) en los suelos por largos períodos de
tiempo (Alvarado, 1998) ocasionando problemas si se quiere utilizar el
cultivo para obtener semilla de papa. Esta enfermedad (Costra Negra) no
es de mayor importancia para la industria de la papa frita, pero si puede
convertirse en un grave problema para los proveedores de semilla
En Nariño se identifico el hongo Spongospora subterreanea causante de
la enfermedad Roña Polvosa, pero la cantidad de muestras tomadas no
son significativas para representar un porcentaje de consideración
(0.003%), necesario mencionar que este patógeno puede permanecer
latente entre 3 – 10 años en forma de quistosoros en el suelo (Hooker,
1980) generando un peligro para la siembra de papa con el objetivo de
semilla ya que en el país este patógeno se considera agente cuarentenado
(Polo, 1997).
En los municipios de los departamentos de Antioquia y Boyacá se encontró
este patógeno en los porcentajes de 0.14% y 1.67% respectivamente,
deduciendo que Spongospora subterranea es un problema creciente de
importancia por los problemas que puede ocasionar como anteriormente se
mencionó.
Es importante resaltar que la enfermedad Pudrición Gomosa causada por
el hongo Geotrichum spp fue positiva en cinco (5) muestras tomadas en el
departamento de Boyacá, no representa un porcentaje significativo
(0.07%), pero es un patógeno que no se encuentra reportado en el país.
Es de mucha importancia en la etapa de almacenamiento puesto que a
pesar de ser un habitante común del suelo, penetra en los tubérculos a
través de heridas y después de la cosecha puede ocasionar pudrición de
los tubérculos, crece como microorganismo secundario cuando hay
pudriciones húmedas causadas por Erwinia carotovora. Igualmente
aparece cuando hay problemas de pudriciones secas causadas por
Fusarium. El exudado que se escapa de los tubérculos afectados puede
causar pudrición húmeda a los tubérculos adyacentes (Asscheman, E.
1996). No existe tratamiento ya que el control químico no es posible.
Los porcentajes de incidencia reportados para los municipios de Boyacá
son más bajos que en los otros tres departamentos pero se debe tener en
cuenta que el número de muestras (7180) tomadas allí es muchísimo mayor
que en los otros municipios muestreados.
EN BODEGAS
En promedio se evaluaron 4 sacos por cada cargamento (2% del total de
cada lote). El total de muestras evaluadas fue de 18.520, distribuidas así:
ANTIOQUIA: 1.500 Muestras en dos bodegas, con temperatura
promedio de 14 ºC y humedad relativa de 80% (Anexo 14 ).
Tabla 5. Incidencia de las enfermedades en bodega en Antioquia.
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 10 6.6 0.06% Pudrición blanda 32 21.3 2.13% Pudrición seca 27 18 1.8%
Costra negra 0 0 0% Roña polvosa 0 0 0% Pudrición gomosa 0 0 0%
BOYACÁ: 9.230 Muestras en cuatro bodegas (Anexo 15) con temperatura
promedio de 12 ºC y humedad relativa de 80%.
Tabla 6. Incidencia de las enfermedades en bodega en Boyacá
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 0 0 0% Pudrición blanda 0 0 0% Pudrición seca 290 31.4 3.14% Costra negra 284 30.7 3.07% Roña polvosa 7 0.75 0.007% Pudrición gomosa 0 0 0%
CUNDINAMARCA: 7.790 Muestras en tres bodegas, de lasa cuales dos
presentaban temperatura promedio de 16 ºC y humedad relativa entre
80-90%, la última era refrigerada con una temperatura de 10 ºC (Anexo
16 ).
Tabla 7. Incidencia de las enfermedades en bodega en Cundinamarca.
ENFERMEDAD CASOS POSITIVOS
TASA PREVALENCIA
PORCENTAJE
Pierna negra 4 0.5 0.005% Pudrición blanda 245 31.4 3.14% Pudrición seca 156 20 2.0% Costra negra 168 21.5 2.15% Roña polvosa 0 0 0% Pudrición gomosa 0 0 0%
Según los resultados obtenidos de las muestras tomadas en bodega, se
observó que Fusarium spp. fue el patógeno más frecuente en condiciones
de almacenamiento. Este hongo es el principal patógeno que afecta los
tubérculos en condiciones de almacenamiento (Asscheman, 1996, Schisler,
2000) ocasionando la enfermedad Pudrición Seca, siendo causante de
micotoxicosis en algunos casos y reportado como el causante de grandes
pérdidas económicas alcanzando a afectar el 6% de la producción de
tubérculos para uso industrial (Schisler, 2000) . La mayor incidencia de
todo el estudio se encontró en el muestreo de bodegas en el
departamento de Boyacá con un 3.14% (Gráfica 5). Las condiciones de
almacenamiento no eran las más óptimas para el desarrollo del patógeno,
pues la temperatura promedio era de 12 ºC y humedad relativa de 80%,
se ha demostrado que a temperaturas mayores de 14 ºC la
susceptibilidad de los tubérculos a la infección es mayor (Guzmán, 1968).
Es muy posible que en este caso la infección proviniera desde el campo, ya
que este puede sobrevivir varios años en el suelo o sobre la superficie de
los tubérculos expresando los síntomas de la enfermedad en la etapa de
almacenamiento (Hooker, 1980. Khanbari, 1996), permitiendo además la
entrada de patógenos secundarios como Erwinia spp.
La mayor incidencia de Costra negra se presentó en Boyacá con un
3.07% (Gráfica 5). Este resultado es fácilmente explicable si se tiene en
cuenta que Rhizoctonia solani se encuentra reportado en suelos de
Boyacá y Cundinamarca (Tablas 2,3), en el caso de los tubérculos para
procesamiento esta enfermedad no representa mayor problema pues no
afecta de manera considerable la calidad del producto.
En la Pudrición blanda (Erwinia carotovora var carotovora) sus síntomas
más severos se ven expresados en condiciones de almacenamiento y bajo
estas circunstancias generalmente los niveles de daño son superiores allí
que los de campo, debido a que en las bodegas la bacteria encuentra
condiciones más favorables para su multiplicación y no está expuesta a
factores naturales en el cultivo que limitan su crecimiento (López, C.
1993).
Esta patógeno presentó un porcentaje considerable (3.14%) en el
departamento de Cundinamarca (Gráfica 6), este resultado es muy
importante si se tiene en cuenta que este departamento representa el
35% de la producción nacional de papa para consumo, si se compara con el
porcentaje hallado en el departamento de Antioquia (2.13%) (Gráfica 4),
el cual produce el 10% de la producción nacional, es una cantidad a la que
se le debe prestar atención, pues se puede estar dejando pasar por alto
un problema de gran magnitud que requeriría de prontas medidas de
control.
Como se puede apreciar en las tablas de incidencia de Pudrición Blanda en
campo para los municipios de Antioquia y Cundinamarca se puede apreciar
que los porcentajes de esta enfermedad son altos, explicando los
resultados en los sitios de almacenamiento de dichos departamentos.
El departamento de Boyacá fue el único que presento incidencia de Roña
polvosa con un 0.0075% (Gráfica 5), esto no debe dejarse de lado si se
tiene en consideración que en campo si se presento y como ya se ha
mencionado es un problema creciente en el país.
Las condiciones de almacenamiento de cada uno de los departamentos es
un factor importante para explicar la presencia de cada uno de los
patógenos; en el caso de Antioquia y Cundinamarca (Gráficas 4, 6) las
bodegas presentaban humedad relativa entre 70-80% y temperatura
promedio de 15 ºC y como ya se ha mencionado estas condiciones
favorecen la aparición de bacterias más concretamente, Erwinias.
En Estados Unidos y Europa en la década de los 30´s el método para
controlar la temperatura en los sitios de almacenamiento era el manejo
manual de puertas que permitían sacar o entra aire para mantener la
temperatura en el almacenamiento. Los tubérculos no eran aceptables
para procesamiento por la mala calidad de los mismos(Sparks, 1991).
Actualmente, se utilizan sofisticados métodos para controlar la
atmósfera en los lugares de almacenamiento de tubérculos con fines de
procesamiento, se usan equipos eléctricos con sensores de temperatura,
inhibidores de germinación y sistemas de ventilación computarizados, los
cuales mantienen la temperatura entre 1 – 2 grados entre las pilas de
tubérculos, pues generan una mezcla de aire caliente del interior con aire
frío del exterior (Sparks, 1991) proveyendo la temperatura y humedad
apropiadas para conservar el producto por largos períodos de tiempo,
ayudando a sanar los daños y golpes ocasionados durante la manipulación,
reduciendo pudriciones y pérdidas económicas y sobretodo conservando
una óptima calidad de los tubérculos para el procesamiento. En Colombia
no existe la cultura de almacenar los tubérculos en sitios o bodegas con
condiciones controladas, excepto en el caso de las grandes empresas,
siendo este el mayor problema para combatir las pérdidas ocasionadas por
hongos y bacterias.
En el caso de Boyacá, la mayoría de los patógenos que afectaron los
tubérculos, se encuentran naturalmente en el suelo por lo que las
condiciones de almacenamiento permitieron el desarrollo de los síntomas.
6.4. EVALUACIÓN DE Ralstonia solanacearum
HOT BOX
De las 80 muestras de Antioquia, se encontró que después de 5 días de
incubación a 30°C el 100% no presentaron la sintomatología esperada.
Por lo que se puede deducir que las muestras evaluadas no presentaban
infección latente de la bacteria Ralstonia solanacearum.
ELISA (NCM)
De las 40 muestras de Antioquia y las 50 de Cundinamarca evaluadas por
esta prueba, todas resultaron negativas para Marchitez bacteriana.
TABLA 8. Resultados de ELISA (NCM).
DEPARTAMENTO NÚMERO DE MUESTRAS CASOS POSITIVOS
Antioquia 40 0
Cundinamarca 50 0
Los resultados negativos obtenidos en estas dos pruebas realizadas para
el diagnóstico de Ralstonia , demuestran que la incidencia de esta
enfermedad es nula en los cultivos evaluados; prueba de ello se confirma
en que este patógeno tampoco fue aislado en el laboratorio.
6.5. APORTES DE LA TESIS A McCAIN ANDINA
VISITA DE SUPERVISIÓN A ANTIOQUIA
Gracias a la experiencia adquirida a lo largo de la presente investigación ,
la empresa Mc Cain Andina propuso realizar una visita a los cultivos y
bodegas ubicados en el departamento de Antioquia; como un aporte
técnico para evaluar el estado fitosanitario en el que se encontraban los
cultivos localizados en el municipio de Santa Rosa de Osos, en uno de los
cuales se presentaban síntomas compatibles con Spongospora
subterránea pero al encontrarse en etapa de floración era difícil de
comprobar sin un adecuado análisis de laboratorio. Por tal razón se
tomaron muestras de raíces con agallas para realizar una confirmación del
diagnóstico en el Laboratorio de Sanidad Vegetal de ICA Tibaitatá.
Efectivamente se logro identificar el patógeno a partir de tinción con azul
de lactofenol de raspados de las agallas de la raíz.
7. CONCLUSIONES
• El presente estudio encontró que los patógenos que afectan los
tubérculos en el almacenamiento son: Erwinia carotovora var.
atroseptica causante de Pierna Negra por Erwinia carotovora var.
carotovora y Erwinia chrysantemi ( Pudrición Blanda), Rhizoctonia
solani (Costra negra), Spongospora subterránea (Roña Polvosa), por
Fusarium spp., Fusarium.oxysporum (Pudrición Seca) y Geotrichum
spp.(Pudrción Gomosa).
• El porcentaje de incidencia más alto en muestreos en campo fue el de
las bacterias pertenecientes al género Erwinia en los departamentos de
Antioquia con 8.3% y Cundinamarca con 7.49% (Gráficas 1,3.) .
• La enfermedad con mayor incidencia en todos los departamentos fue
Pudrición Seca ocasionada por Fusarium spp. y Fusarium oxysporum
totalizando un 7% en los municipios de los cuatro departamentos.
• En las bodegas la mayor incidencia esta representada por los hongos
Fusarium spp, Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solani
respectivamente. Y por las bacterias pertenecientes al género Erwinia
en el departamento de Cundinamarca mayoritariamente.
• Las bodegas con mayores problemas de patógenos fueron las
localizadas en el departamento de Cundinamarca debido a su excesiva
humedad relativa e inadecuadas condiciones de almacenamiento de los
tubérculos.
• Se puede concluir que las pérdidas económicas por causa de los
patógenos pueden llegar a ser considerables si se tiene en cuenta que
los síntomas de una enfermedad expresados en los tubérculos afectan
de gran manera su calidad y por ende su futura utilización como
producto de consumo humano.
• En Colombia existen grandes diferencias en los tipos de
almacenamiento, pues se pueden encontrar bodegas con temperaturas y
humedad controlados por sistemas computarizados, como almacenes sin
ningún tipo de control sobre las condiciones medioambientales y de
empaque de las tubérculos.
• Finalmente, se puede deducir que las condiciones más favorables para
el almacenamiento de papa son aquellas bajo las cuales se pueda
mantener un ambiente que inhiba el desarrollo de microorganismos
patógenos y además que conserve la calidad del producto. Temp eratura
promedio de 12 ºC y humedad relativa de 80% para el caso de Colombia
donde no se almacenan los tubérculos por más de tres meses.
8. RECOMENDACIONES
• Almacenar tubérculos en sitios que puedan proveer ventilación,
temperaturas bajas y alta humedad relativa. Una buena alternativa es
la de utilizar cajones de madera para depositar los tubérculos durante
la etapa de almacenamiento.
• Diseñar e implementar el uso de claves para la identificación de las
enfermedades de tipo bacteriano, fúngico y vírico en el campo,
observando la sintomatología de las plantas y los tubérculos en el
cultivo, para facilitar la labor de identificación de los mismos.
• Estandarizar una técnica (Bioensayos) para la detección del hongo
Spongospora subterranea tanto en tubérculos como en suelos, para
poder determinar con exactitud la presencia del patógeno para lograr
implementar un manejo cultural oportuno.
• Realizar un muestreo más amplio para la bacteria Ralstonia
solanacearum en planteles comerciales, por medio de la prueba de
ELISA (NCM), para conocer con mayor certeza el estado real de este
patógeno en el país.
• Desarrollar métodos de control biológico para el control de los
diferentes microorganismos encontrados. Se han reportado relativo
ensayos de laboratorio con cepas antagónicas para el biocontrol en la
etapa de almacenamiento de Ralstonia y Erwinia carotovora var
atroseptica (Ciampio, et al, 1989. Mc Laughlin, 1988).
• Es necesario crear programas de prevención, evaluación y control de las
enfermedades de la papa tanto en etapa de precosecha como durante
el período de almacenamiento, para evitar así pérdidas de calidad del
producto y perjuicios económicos tanto a los cultivadores como a las
empresas procesadoras de papa.
• Realizar un manual de manejo y condiciones óptimas de almacenamiento
para tubérculos con fines de procesamiento comercial.
• Para el caso de Spongospora subterránea, tener en cuenta que se
pueden utilizar prácticas de manejo antes de su utilización como
producto de consumo, pues en el momento de su procesamiento se
podrían evitar pérdidas del tejido por parte de las máquinas
peladoras.
• Cuando en las bodegas se presente un porcentaje del 2% de Pudrición
Blanda; realizar saneamiento del restante de los tubérculos del lote.
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ANEXO 1. CICLO DE VIDA DE Spongospora subterranea
Fuente Hooker, 1980.
ANEXO 2. CICLO DE VIDA DE Fusarium oxysporum
Fuente Agrios, 1996.
ANEXO 3. CICLO DE VIDA DE Rhizoctonia solani
Fuente Agrios, 1996.
ANEXO 4. CICLO DE VIDA DE Erwinia
Fuente Agrios, 1996.
ANEXO 5. MAPA DE ZONAS PRODUCTORAS DE PAPA EN COLOMBIA
Fuente Fedepapa, 2000.
ANEXO No. 6. AGAR NUTRITIVO
FÓRMULA
Peptona de carne 5 g
Extracto de carne 3 g
Agar-agar 12 g
Agua 1 L
Disolver 20 gramos/Litro y esterilizar en autoclave a 121 grados
centígrados por 15 minutos.
Las placas con medio de cultivo preparado son claras e incoloras hasta con
una tonalidad amarillenta (Merck, 1994).
ANEXO No. 7. AGAR PDA
COMPOSICIÓN gr/ml
Papa picada 25 gr
Agar - Agar 2.0 gr
Glucosa 2.0 gr
Agua destilada 100 ml
PREPARACIÓN:
Se cocina la papa en agua destilada hasta la liberación total del almidón,
luego se filtra para eliminar los residuos de papa, se lleva a 100 ml de
agua y se adiciona agar - agar y la glucosa; se calienta para homogenizar
los componentes, y se autoclava a 15 libras durante 2 horas.
Para obtener un mejor crecimiento de los hongos y evitar la contaminación
de bacterias se agrega una gota de ácido láctico a la preparación (Merck,
1994).
ANEXO No. 8. PRUEBA DE OXIDASA
Se utiliza para determinar la presencia del citocromo C en las bacterias
que lo poseen en sus cadenas respiratorias.
Se debe utilizar un inóculo de 24 horas máximo. Con un asa se toma una
colonia pura y se frota sobre un papel filtro impregnado con una solución
acuosa de tertametyl-p-fenilenediamina dehidrocloruro al 1%.
Comercialmente existen tiras reactivas.
La reacción positiva se evidencia por la aparición de un color púrpura que
se desarrolla en unos 30 segundos. Si en 60 segundos no aparece color, la
reacción es negativa.
Oxidasa positivo: Pseudomonas Solanacearum
ANEXO No. 9. PRUEBA DE CATALASA
La enzima catalasa se encuentra presente en muchos microorganismos
aeróbicos. La catalasa descompone el peróxido de hidrógeno, dando lugar
a la formación de oxígeno molecular.
Para esta prueba se utilizan cultivos jóvenes (12-24 horas) y peróxido de
hidrógeno al 3% (H2O2). La producción de burbujas de gas indica una
reacción positiva, la cual puede observarse mezclando una pequeña
cantidad de células bacteriales con una gota de H2O2 sobre una lámina
portaobjetos limpia.
2 H2O2 ⇒ CATALASA ⇒ 2 H2O + O2 (Burbujas)
ANEXO No. 10. REDUCCIÓN DE COMPUESTOS DE
SACAROSA
FORMULA
Peptona 10 gr
Sacarosa 40 gr
Agua destilada 1 Litro
Mezclar todos los ingredientes calentando suavemente para disolución
completa. Ajustar el pH a 7.0. Dispensar en tubos en cantidad de 4-5 ml.
Autoclavar a 121°C por 15 minutos.
INOCULACIÓN
Con asa redonda estéril tomar un pequeño inóculo y sembrar en el caldo
con un cultivo joven de 24 horas de crecimiento. Incubar a 26 °C por 48
horas (Concepción, 1981).
LECTURA
Después del tiempo de incubación agregar 1.5 ml del reactivo de Benedict
al tubo, colocarlo en agua hirviendo y al cabo de 10 minutos toma una
coloración amarillo lechoso que indica un resultado positivo.
Sacarosa positivo: Erwinia carotovora var atroseptica.
ANEXO No. 11. OXIDO/FERMENTACIÓN (OF)
Medio de cultivo de ensayo para el reconocimiento de la degradación
oxidativa y fermentativa de carbohidratos.
Se utiliza especialmente para la diferenciación y clasificación de
bacterias Gram negativas.
FÓRMULA
Peptona de caseina 2 gr
Extracto de levadura 1 gr
Cloruro de sodio 5 gr
Hidrógenofosfato dipotásico 0.2 gr
Azul de bromotinol 0.08 gr
Agar-agar 2.5 gr
Carbohidrato 10 gr
Agua destilada 1 Litro
Se debe disolver 11 g/L y esterilizar en autoclave a 121 °C Durante 15
minutos. Dejar enfriar aproximadamente a 50 °C e incorporar 100 ml/L de
una solución ,(esterilizando por filtración), al 10% de Dglucosa, lactosa,
sacarosa u otro carbohidrato. Ajustar el pH a 7.0.
Distribuir en cada tubo 5 ml de la solución.
Dejar enfriar.
INOCULACIÓN
Inocular relativamente pronto después de la preparación. Utilizar una
cepa fresca con un crecimiento aproximado de 24 horas. Se deben
inocular 2 tubos por carbohidrato, introduciendo una buena cantidad de
inóculo en el fondo del tubo con un aguja de platino recta.
Cubrir uno de los tubos con 1-1/2 cm. de vaselina o parafina (ESTERIL)
para crear condiciones de anaerobiosis. Incubar por 24 horas a 27 °C.
LECTURA
Reacción O Color amarillo en el tubo sin parafina
Color azul o verde en el tubo con parafina.
Pseudomonas, Xanthomonas.
Reacción F Color amarillo en ambos tubos.
Erwinia
Reacción negativa Sin cambio en ninguno de los tubos (Konemann,
E. 1983).
ANEXO No. 12. CALDO PARA PRODUCCIÓN DE INDOL
La reacción de Indol determina la producción de Triptofanasa por el
microorganismo. Cuando la enzima se produce ocurre una degradación del
triptófano presente en gran cantidad en la peptona de carne que se
utiliza. Como producto final se obtiene ácido pirúvico, amoníaco e Indol. La
molécula de Indol, una vez extraída por acción alcohol isoamílico presente
en el reactivo de Kovac`s, es coloreada por el Para-dimetil-amino-
benzaldehído formando un anillo coloreado en la superficie del caldo.
FÓRMULA
Peptona de carne 8.6 gr
Cloruro de sodio 6.4 gr
Agua destilada 1 Litro
Mezclar todos los ingredientes calentando suavemente para disolución
completa. Ajustar el pH a 7.0. Dispensar en tubos en cantidad de 4-5 ml.
Autoclavar a 121°C por 15 minutos.
INOCULACIÓN
Con asa redonda estéril tomar un pequeño inóculo y sembrar en el caldo
con un cultivo joven de 24 horas de crecimiento. Incubar a 35 °C por 24
horas.
LECTURA
Después del tiempo de incubación agregar 1 ml del reactivo de Kovac`s al
tubo, si se observa la producción de un anillo rojo en la superficie indica
positivo (Konemann, E. 1983).
Indol positivo : Erwinia chrysanthemi
Indol negatvo: Erwinia carotovora var carotovora
Erwinia carotovora var atroseptica.
REACTIVOS Y COLORANTES
REACTIVO DE KOVAC`S
Alcohol isoamílico 150 ml
Para-dimetil-amino-benzaldehído 10 gr
Ácido hidroclorhídrico concentrado 50 ml
Disolver el aldehído en el alcohol y agregar lentamente el ácido.
El reactivo de Kovac`s debe conservarse en refrigeración
aproximadamente por 2 meses en frasco ámbar.
REACTIVO DE BENEDICT
Citrato de sodio 17.3 gr
Carbonato de sodio 10 gr
Sulfato de cobre 5 H2O 1.73 gr
Agua destilada 100 ml
ANEXO No. 13. ELISA NCM (Prueba inmunoenzimática en
membrana nitrocelulosa) para Ralstonia solanacearum
Procedimiento para la extracción de las muestras:
1. Lavar los tubérculos con agua corriente y sumergirlos durante 5
minutos en 1% de hipoclorito de sodio; dejarlos secar sobre papel limpio
2. Cortar una porción delgada del estolón con una cuchilla esterilizada
después de cada muestra
3. Esterilizar la herramienta (removedor de cutícula) y retirar
fragmentos pequeños del anillo vascular en tiras de aproximadamente 2
milímetros de ancho y 1 milímetro de espesor (no más de o.5 gramos por
tubérculo)
4. Colocar los fragmentos en una bolsa de plástico y luego pesarlos
5. Agregar 2 mililitros de la solución extracción de citrato estéril por
gramo de tejido del tubérculo
6. Macerar con un rodillo o mazo de madera
7. Colocar la bolsa de plástico en forma vertical sobre hielo picado (no
más de 1 hora) para evitar la oxidación de los fenoles
8. Para la detección latente, las muestras deben incubarse en caldo de
enriquecimiento por 48 horas antes de la prueba ELISA-NCM.
REACTIVOS
• TBS 0.02m Tris = 2.42 g 1000 ml
• HCL HCL 18.5% 6 ml
• Solución de bloqueo Leche en polvo = 0.43 g 30 ml
• Tampón de anticuerpos Leche en polvo = 0.43 g 30 ml
• Tampón del conjugado Leche en polvo = 0.43 g 30 ml
• Tween 20 Tween 20 1 ml
• Tampón sustrato 0.1M Tris = 1.21 g
0.1M NaCl = 0.58 g
5Mm MgCl2 6H2O = 0.10 g 100 ml
• Anticuerpos de Rs IgG de conejo específico de Rs 0.6 ml
• Conjugado GAR-IgG Anticuerpos de cabra anti-conejo 0.6 ml
• Extran Extran MA 01 Alcalino 10 ml
• NaOH NaOH 1N 10ml
• Tampón de extracción Acido cítrico 0.1M
Citrato de sodio 0.1M 1000 ml
• SMSA 10X Bacto peptona 10 g
Glicerol 5ml
Acido casamino 1g
Sulfato de polimixina B 1% 10 ml
Cicloheximida 1% 10ml
Bacitracina 1% 2.5 ml
Penicilina G 0.1% 500 µl
Cloranfenicol 1% 500 µl
Cristal violeta 1% 500 µl
Cloruro tetrazolio trifenil
2,3,5 1% 5 ml
• Sustrato NBT Nitroblue Tetrazolio 30 mg
• Sustrato BCIP Toluidina 5-bromo4-cloro3-indolil 15 mg
• Disolvente DMF/NBT Dimetilformamida 70% 1 ml
• Disolvente DMF/BCIP Dimetilformamida 100% 1 ml
ANEXO 14. BODEGA ANTIOQUIA (Alto de las Palmas)
ANEXO 15. BODEGA BOYACÁ (Tunja)
ANEXO 16. BODEGA CUNDINAMARCA (Mosquera-Funza)
Mosquera
Funza
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
Pierna negra Pudrición blanda Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudrición gomosa
ENFERMEDADES
GRAFICA 1. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN CAMPO EN ANTIOQUIA
PORCENTAJE
0
0,2
0,4
0,6
0,8
1
1,2
1,4
Pierna negra Pudriciónblanda
Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudricióngomosa
ENFERMEDAD
GRAFICA 2. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN CAMPO EN BOYACA
PORCENTAJE
0
1
2
3
4
5
6
7
8
Pierna negra Pudrición blanda Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudrición gomosa
ENFERMEDADES
GRAFICA 3. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN CAMPO EN CUNDINAMARCA
PORCENTAJE
0
0,5
1
1,5
2
2,5
Pierna negra Pudrición blanda Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudrición gomosa
ENFERMEDADES
GRAFICA 4. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN BODEGA EN ANTIOQUIA
PORCENTAJE
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
Pierna negra Pudrición blanda Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudrición gomosa
ENFERMEDADES
GRAFICA 5. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN BODEGA EN BOYACA
PORCENTAJE
0
0,5
1
1,5
2
2,5
3
3,5
Pierna negra Pudrición blanda Pudrición seca Costra negra Roña polvosa Pudrición gomosa
ENFERMEDADES
GRAFICA 6. INCIDENCIA DE ENFERMEDADES EN BODEGA EN CUNDINAMARCA
PORCENTAJE
