ESTADO ACTUAL Y PERSPECTIVAS DE LA … - Estado actual y... · Número de cuerpos lúteos ......

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ESTADO ACTUAL Y ESTADO ACTUAL Y PERSPECTIVAS DE LA PERSPECTIVAS DE LA REPRODUCCIÓN CAPRINA REPRODUCCIÓN CAPRINA ZARAZAGA ZARAZAGA L.A L.A . . UNIVERSIDAD DE HUELVA, UNIVERSIDAD DE HUELVA, Campus Campus de La de La R R á á bida bida Crta Crta . Palos de la Frontera, s/n, 21819 Huelva . Palos de la Frontera, s/n, 21819 Huelva

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ESTADO ACTUAL Y ESTADO ACTUAL Y PERSPECTIVAS DE LA PERSPECTIVAS DE LA

REPRODUCCIÓN CAPRINAREPRODUCCIÓN CAPRINAZARAZAGA ZARAZAGA L.AL.A..

UNIVERSIDAD DE HUELVA, UNIVERSIDAD DE HUELVA, CampusCampus de La de La RRáábidabida

CrtaCrta. Palos de la Frontera, s/n, 21819 Huelva. Palos de la Frontera, s/n, 21819 Huelva

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1. INTERÉS DE CONTROLAR LA 1. INTERÉS DE CONTROLAR LA REPRODUCCIÓN CAPRINA.REPRODUCCIÓN CAPRINA.

2. EL COMPORTAMIENTO DE LOS 2. EL COMPORTAMIENTO DE LOS MACHOS E INSEMINACIÓN MACHOS E INSEMINACIÓN ARTIFICIAL.ARTIFICIAL.

3. TRATAMIENTOS FOTOPERIÓDICOS.3. TRATAMIENTOS FOTOPERIÓDICOS.

4. BIOTECNOLOGÍA EMBRIONARIA.4. BIOTECNOLOGÍA EMBRIONARIA.

5. CONCLUSIÓN.5. CONCLUSIÓN.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Producir machos hijos de hembras de Producir machos hijos de hembras de éliteélite, para la , para la I.AI.A..Creación y mejora del progreso genético.Creación y mejora del progreso genético.Reducción del intervalo generacional.Reducción del intervalo generacional.Difusión de la mejora genética.Difusión de la mejora genética.Facilitar los intercambios internacionales de Facilitar los intercambios internacionales de material genético. material genético. Disminuir los riesgos de transmisión de Disminuir los riesgos de transmisión de enfermedades.enfermedades.Preservar genotipos en peligro de extinción.Preservar genotipos en peligro de extinción.Usos comerciales.Usos comerciales.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SELECCIÓN DE DONANTESSELECCIÓN DE DONANTESValor genéticoValor genético--aptitudes zootécnicas.aptitudes zootécnicas.

Haber tenido un parto en la época reproductiva Haber tenido un parto en la época reproductiva anterior y transcurrir 2 a 5 meses antes de iniciar el anterior y transcurrir 2 a 5 meses antes de iniciar el tratamiento.tratamiento.

Rechazar animales con alteraciones reproductivas.Rechazar animales con alteraciones reproductivas.

Posibilidad de embarazo (Posibilidad de embarazo (pseudogestantespseudogestantes).).

Capacidad de respuesta a Capacidad de respuesta a superovulaciónsuperovulación..

Presencia de anticuerpos (Presencia de anticuerpos (eCGeCG, , FSHpFSHp).).

Hembras Hembras nulíparasnulíparas, desarrollo corporal adecuado , desarrollo corporal adecuado (60% PV adulto; 8(60% PV adulto; 8--10 meses).10 meses).

Enfermedades contagiosas.Enfermedades contagiosas.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SINCRONIZACIÓN DE SINCRONIZACIÓN DE DONADORASDONADORAS

Progestágeno (FGA, MAP) 11- 12d

Inserción

D0

Inyección de oFSH o pFSH 16-20 mg

6 dosis bi-quotidianas y decrecientes durante los 3 últimos días del tratamiento progestágeno

Análogo PgF2α

Retirada

D10 D11 D12 D13 D14

Colecta embriones (J7)

Inicio celo (=J0)

IA

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

VARIABILIDAD DE RESPUESTAVARIABILIDAD DE RESPUESTA

02468

1012141618

Caprina(n=9)

Ovina(n=10)

Porcina(n=9)

Origen FSH

Número de cuerpos lúteos

N° Tratamiento12

34

5

( n cabras)

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

RESULTADOS DE FECUNDACIÓNRESULTADOS DE FECUNDACIÓN

30

40

50

60

70

80

90% ovocitos fecundados

<15 ≥15 <15 ≥15 <15 ≥15 n CL/cabra

Monta IA exocervical IA intra-uterina

Baril et al., 1993

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.

Fecundación de donadoras: monta, Fecundación de donadoras: monta, I.AI.Aintraintra--uterina, endoscopia. uterina, endoscopia.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MÉTODOS DE DETECCIÓN DEL MÉTODOS DE DETECCIÓN DEL CELOCELO--11

MACHOS ENTEROSMACHOS ENTEROSRebaños pequeños y son de valor genético reducido.Rebaños pequeños y son de valor genético reducido.Con mandil.Con mandil.

MACHOS VASECTOMIZADOSMACHOS VASECTOMIZADOSEvita cubriciones no deseadas.Evita cubriciones no deseadas.No modifica el comportamiento sexual del macho No modifica el comportamiento sexual del macho (testosterona).(testosterona).Usarlos tras 5 eyaculaciones una vez operados.Usarlos tras 5 eyaculaciones una vez operados.Irreversible: escaso valor genético.Irreversible: escaso valor genético.Animales que tengan un buen comportamiento sexual y se Animales que tengan un buen comportamiento sexual y se reduce la motivación sexual.reduce la motivación sexual.Tiempo de recuperación largo.Tiempo de recuperación largo.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MÉTODOS DE DETECCIÓN DEL MÉTODOS DE DETECCIÓN DEL CELOCELO--22

HEMBRAS ANDROGENIZADAS O MACHOS HEMBRAS ANDROGENIZADAS O MACHOS CASTRADOS.CASTRADOS.

Evita inconvenientes precedentes.Evita inconvenientes precedentes.Inyección diaria o por implante de esteroides Inyección diaria o por implante de esteroides (testosterona o estrógenos). 50 (testosterona o estrógenos). 50 mgmg de de propionatopropionato de de testosterona diariamente durante 18 días o implante testosterona diariamente durante 18 días o implante subcutáneo con los mismos esteroides. Animales viejos.subcutáneo con los mismos esteroides. Animales viejos.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MOMENTO DE REALIZACIÓN DE LA MOMENTO DE REALIZACIÓN DE LA I.AI.A..EN CELO NATURALEN CELO NATURAL

Una sola I.A. a las 24 horas tras la identificación del Una sola I.A. a las 24 horas tras la identificación del celo; en grandes rebaños (número suficiente de celo; en grandes rebaños (número suficiente de animales).animales).

CONTROL DEL CELO Y DE LA OVULACIÓNCONTROL DEL CELO Y DE LA OVULACIÓNNecesaria para obtener buenos resultados en la Necesaria para obtener buenos resultados en la segunda parte del celo, antes de que se produzca la segunda parte del celo, antes de que se produzca la ovulación.ovulación.Necesario sincronizar el celo de las hembras cíclicas Necesario sincronizar el celo de las hembras cíclicas o inducirlo si no están cíclicas.o inducirlo si no están cíclicas.Tratamientos hormonales.Tratamientos hormonales.

Obtener producciones en el momento más interesante por Obtener producciones en el momento más interesante por precio en el mercado.precio en el mercado.I.A.I.A.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MOMENTO DE LA I.A.MOMENTO DE LA I.A.VARÍA ENTRE LAS DISTINTAS RAZASVARÍA ENTRE LAS DISTINTAS RAZAS

Se debe testar previamente o determinar el momento del pico Se debe testar previamente o determinar el momento del pico preovulatoriopreovulatorio de LH.de LH.CABRAS ALPINAS Y SAANENCABRAS ALPINAS Y SAANEN

43 43 ±± 2 y 45 2 y 45 ±± 2 horas, respectivamente.2 horas, respectivamente.Cabras Cabras nulíparasnulíparas: 45 : 45 ±± 2 horas.2 horas.

RESUMEN DE REALIZACIÓNRESUMEN DE REALIZACIÓNUna sola inseminación a las 45 horas de la retirada de la Una sola inseminación a las 45 horas de la retirada de la esponja.esponja.Con dos inseminaciones: a las 30 y a las 48 horas de la retiradaCon dos inseminaciones: a las 30 y a las 48 horas de la retirada..Con detección del celo natural: a las 12 y 24 horas de la primerCon detección del celo natural: a las 12 y 24 horas de la primera a detección.detección.Se tiende cada vez más a una sola inseminación.Se tiende cada vez más a una sola inseminación.Número de espermatozoides:Número de espermatozoides:

Semen fresco: 150 millonesSemen fresco: 150 millonesSemen congelado: 100 millones por pajuela.Semen congelado: 100 millones por pajuela.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

INSEMINACIÓN ARTIFICIALINSEMINACIÓN ARTIFICIALTRANSCERVICALTRANSCERVICAL

Más sencilla que en la oveja.Más sencilla que en la oveja.

Menor fertilidad que por la vía Menor fertilidad que por la vía laparoscópicalaparoscópica..

Respuesta menor cuanto mayor es la tasa de ovulación.Respuesta menor cuanto mayor es la tasa de ovulación.

INTRAUTERINA (POR VÍA LAPAROSCÓPICA)INTRAUTERINA (POR VÍA LAPAROSCÓPICA)Fertilidad 60% mayor con semen congelado respecto a la Fertilidad 60% mayor con semen congelado respecto a la anterior.anterior.

Menores dosis de semen.Menores dosis de semen.

Requiere más tiempo de realización.Requiere más tiempo de realización.

Muy recomendable en ovino.Muy recomendable en ovino.

Momento de realización: 45Momento de realización: 45--55 horas tras la retirada de la 55 horas tras la retirada de la esponja.esponja.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.Fecundación de donadoras: monta, Fecundación de donadoras: monta, I.AI.A intraintra--uterina, endoscopia. uterina, endoscopia. Colecta de embriones: cervical, endoscopia, Colecta de embriones: cervical, endoscopia, cirugía.cirugía.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

COLECTA DE EMBRIONES POR COLECTA DE EMBRIONES POR VÍA QUIRÚRGICAVÍA QUIRÚRGICA

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

COLECTA DE EMBRIONES POR COLECTA DE EMBRIONES POR VÍA CERVICALVÍA CERVICAL

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MÉTODOS Y RESULTADOS DE LA MÉTODOS Y RESULTADOS DE LA RECOLECTA DE EMBRIONESRECOLECTA DE EMBRIONES

Método % estructuras Autorescolectadas(1ra colecta)

Por vía cervical 35 - 50% Soonen et al 1991Flores-Foxworth, 1992

Por vía endoscópica 60 - 65% Vallet et al. 1987

Por vía quirúrgica 70 - 80% Vallet et al. 1991

65 - 80% Suyadi et al., 2000

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

MÉTODOS DE RECOLECTA DE EMBRIONES: MÉTODOS DE RECOLECTA DE EMBRIONES: VENTAJAS E INCONVENIENTESVENTAJAS E INCONVENIENTES

CervicaCervicall EndosEndoscc.. CCirugíairugía

TraTratatamiento miento PGE o PGF2PGE o PGF2αα nono nono

AnestAnesteesisiaa LocalLocal GGeenneeralral GGeenneeralral

DuraciDuracióónn 1h 1h --1h151h15 3030--40’40’ 1515--20’20’

Volumen deVolumen decolectacolecta

> 500 > 500 mlml 80 80 mlml 80 80 mlml

RepeticiRepeticióónn SSii SSii 3 3

ResultadoResultado 70 70 aa 95%95% 100%100% 100%100%

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

RECOLECCIÓN DE EMBRIONESRECOLECCIÓN DE EMBRIONES

Lavado de oviducto o los cuernos uterinos Lavado de oviducto o los cuernos uterinos con PBS.con PBS.

Antes del 4º día en el oviducto, 6ºAntes del 4º día en el oviducto, 6º--7º día en 7º día en el cuerno uterino tras el inicio del celo.el cuerno uterino tras el inicio del celo.

Siempre con la membrana Siempre con la membrana pelúcidapelúcida intacta: intacta: mórulasmórulas o o blastocistosblastocistos..

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MEDIOS DE RECOLECCIÓNMEDIOS DE RECOLECCIÓNSSoluciolucióónn 11 MgMg/L/L Solución 2Solución 2 MgMg/L/LCaClCaCl22 2H2H22OO 132,5132,5 NaClNaCl 80008000MgClMgCl22 6H6H22OO 100,0100,0 KClKCl 200200

KHKH22POPO44 200200NaNa22HPOHPO44 11501150BSABSA 40004000DD--glucosaglucosa 10001000NaNa piruvatopiruvato 3636Sulfato de Sulfato de estreptomicinaestreptomicina

5050

NaNa penicilinapenicilina--GG 1000000 U.I.1000000 U.I.Disolver losDisolver los reactivos de las soluciones 1 reactivos de las soluciones 1 (en 200 (en 200 mlml) ) y 2 (en 800 y 2 (en 800 mlml de de agua y mezclar ragua y mezclar ráápidamente). Ajustar el pidamente). Ajustar el pHpH a 7,3. La presia 7,3. La presióón osmn osmóótica tica entre 290entre 290--310 310 miliosmolesmiliosmoles. Esterilizar la soluci. Esterilizar la solucióón final por filtro de 0,22 n final por filtro de 0,22 µµm y conservar a 4m y conservar a 4ººCC..

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ESTADOS DE DESARROLLO DE ESTADOS DE DESARROLLO DE EMBRIONES EN CABRA Y OVEJAEMBRIONES EN CABRA Y OVEJA

2-4 CÉLULAS 1-2 CÉLULAS

8 CÉLULAS 4-8 CÉLULAS

8-20 CÉLULAS 8-20 CÉLULAS

MÓRULA JÓVEN 20 CÉLULAS-MÓRULA JÓVEN

MÓRULA COMPACTADA-

JOVEN BLASTOCISTO

MÓRULA

BLASTOCISTO

EXPANDIDO Y FUERA DE

LA ZONA PELÚCIDA

MÓRULA COMPACTADA.

BLASTOCISTO EXPANDIDO

DÍA DE DÍA DE

RECOLECCIÓNRECOLECCIÓN

OVEJAOVEJA CABRACABRA

22

33

44

55

66

77

88 BLASTOCISTO FUERA DE

LA ZONA PELÚCIDA

BLASTOCISTO EXPANDIDO Y

FUERA DE LA ZONA PELÚCIDA

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.

Fecundación de donadoras: monta, Fecundación de donadoras: monta, I.AI.Aintraintra--uterina, endoscopia. uterina, endoscopia.

Colecta de embriones: cervical, endoscopia, Colecta de embriones: cervical, endoscopia, cirugía.cirugía.

Selección de embriones: morfología.Selección de embriones: morfología.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

SELECCIÓN MORFOLÓGIACASELECCIÓN MORFOLÓGIACANo fertilizados

MorulasCompactadas

Blastocitos

Blastocitosen vía de eclosión

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS EMBRIONESEMBRIONES

Una vez recolectados se colocan en una placa de Una vez recolectados se colocan en una placa de PetriPetricon PBS filtrado con un 4% de BSAcon PBS filtrado con un 4% de BSA

La clasificaciLa clasificacióón es la siguiente:n es la siguiente:I. Excelente: EmbriI. Excelente: Embrióón ideal, esfn ideal, esféérico, simrico, siméétrico, con ctrico, con céélulas de lulas de tamatamañño, color y textura uniforme.o, color y textura uniforme.II. Bueno: embriII. Bueno: embrióón con pequen con pequeññas desigualdades entre los as desigualdades entre los blastblastóómeros, algo de meros, algo de picnosispicnosis y pequey pequeññas vesas vesíículas.culas.III. Regular: embriIII. Regular: embrióón con algunas cn con algunas céélulas degeneradas, lulas degeneradas, vesiculacivesiculacióónn y blasty blastóómeros irregulares.meros irregulares.IV. Malo: embriIV. Malo: embrióón con muchas cn con muchas céélulas degeneradas, grandes y lulas degeneradas, grandes y gran cantidad de vesgran cantidad de vesíículas.culas.

El grado de desarrollo debe ser el adecuado y no deben El grado de desarrollo debe ser el adecuado y no deben tener un retraso superior a 48 h de lo que sería normal.tener un retraso superior a 48 h de lo que sería normal.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

DESARROLLO EMBRIONARIODESARROLLO EMBRIONARIO

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

DESARROLLO EMBRIONARIODESARROLLO EMBRIONARIO

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.Fecundación de donadoras: monta, Fecundación de donadoras: monta, I.AI.Aintraintra--uterina, endoscopia. uterina, endoscopia. Colecta de embriones: cervical, endoscopia, Colecta de embriones: cervical, endoscopia, cirugía.cirugía.Selección de embriones: morfología.Selección de embriones: morfología.CriopreservaciónCriopreservación de los embriones: de los embriones: congelación lenta, vitrificación.congelación lenta, vitrificación.

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CRIOCONSERVACIÓNCRIOCONSERVACIÓNCongelación lentaCongelación lenta

Baja concentración de crioprotectores (1,5 M Baja concentración de crioprotectores (1,5 M EtilenEtilen--glicol).glicol).

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CONGELACIÓN LENTACONGELACIÓN LENTACCrioprotectorrioprotector con el medio de conservacicon el medio de conservacióón (PBS + 4n (PBS + 4%BSA%BSA) ) provoca un aumento considerable de la presiprovoca un aumento considerable de la presióón osmn osmóótica.tica.Para reducir el choque osmPara reducir el choque osmóótico, los embriones se pasan tico, los embriones se pasan sucesivamente, durante 5 a 10 minutos por 2sucesivamente, durante 5 a 10 minutos por 2--3 ba3 bañños de un medio os de un medio de conservacide conservacióón que contenga una concentracin que contenga una concentracióón creciente de n creciente de crioprotector: crioprotector:

GGlicerollicerol 0,7 M, despu0,7 M, despuéés de 10 minutos a 1,4 Ms de 10 minutos a 1,4 MEEtilenglicoltilenglicol 0,5 M, 1,0 M, y despu0,5 M, 1,0 M, y despuéés 1,5 M con pasos de 5 minutos.s 1,5 M con pasos de 5 minutos.

DespuDespuéés del s del úúltimo baltimo bañño, es decir, cuando se alcanza la o, es decir, cuando se alcanza la concentraciconcentracióón final del crioprotector, los embriones se preparan n final del crioprotector, los embriones se preparan para la congelacipara la congelacióón normalmente en pajuelas de 0,25 n normalmente en pajuelas de 0,25 mlmlesterilizadas.esterilizadas.LLlenadolenado de las pajuelasde las pajuelas:: 3 compartimentos de l3 compartimentos de lííquido separados quido separados por burbujas de aire. Cada pajuela debe llevar 2 por burbujas de aire. Cada pajuela debe llevar 2 óó mmáás embriones, s embriones, en funcien funcióón de la carga que se desee. La primera columna de la n de la carga que se desee. La primera columna de la pajuela debe ser de PBS con crioprotector, despupajuela debe ser de PBS con crioprotector, despuéés se deja una s se deja una burbuja y se cogen los embriones, otra burbuja y se termina de burbuja y se cogen los embriones, otra burbuja y se termina de llenar la pajuela.llenar la pajuela.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

CRIOCONSERVACIÓNCRIOCONSERVACIÓNCongelación lentaCongelación lenta

Baja concentración de crioprotectores (1,5 M Baja concentración de crioprotectores (1,5 M EtilenEtilen--glicol).glicol).Enfriamiento lento: deshidratación progresiva que Enfriamiento lento: deshidratación progresiva que limita la formación de cristales de hielo intracelulares.limita la formación de cristales de hielo intracelulares.Necesidad de un aparato programable, o congelación Necesidad de un aparato programable, o congelación por vapores de nitrógeno.por vapores de nitrógeno.Tiempo necesario 2 h.Tiempo necesario 2 h.

20-25°C

-7°C

-30°C

-196°C

Inducción de la cristalisación

10 mn à -7°C

0.3°C/mn

4°C/mn

1h45

2500°C/mn

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

DESCONGELACIÓNDESCONGELACIÓN--11La descongelaciLa descongelacióón debe ser rn debe ser ráápida, de manera que se pida, de manera que se descongelan sacdescongelan sacáándolas del nitrndolas del nitróógeno lgeno lííquido y metiquido y metiééndolas en ndolas en agua a 37agua a 37ºº durante 30 segundos. durante 30 segundos.

Inmediatamente despuInmediatamente despuéés de la descongelacis de la descongelacióón, es n, es indispensable eliminar rindispensable eliminar ráápidamente el crioprotector para la pidamente el crioprotector para la supervivencia del embrisupervivencia del embrióón. No obstante, las cn. No obstante, las céélulas que lulas que presentan una concentracipresentan una concentracióón elevada de crioprotector no deben n elevada de crioprotector no deben ser colocadas directamente en un medio isotser colocadas directamente en un medio isotóónico. En tal caso, nico. En tal caso, las diferencias de presilas diferencias de presióón osmn osmóótica provocartica provocaríía una entrada a una entrada demasiado rdemasiado ráápida de agua en la cpida de agua en la céélula con el riesgo de reventar. lula con el riesgo de reventar. Es necesario proceder a la eliminaciEs necesario proceder a la eliminacióón progresiva del n progresiva del crioprotector, de manera que los flujos de salida de crioprotector, de manera que los flujos de salida de crioprotector y de entrada de agua sean compatibles con la crioprotector y de entrada de agua sean compatibles con la permeabilidad de la membrana plasmpermeabilidad de la membrana plasmáática.tica.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

DESCONGELACIÓNDESCONGELACIÓN--22MMÉÉTODOS:TODOS:

1) 1) EliminaciEliminacióón del crioprotector por etapas, se hace de forma n del crioprotector por etapas, se hace de forma inversa a la adiciinversa a la adicióón del n del criprotectorcriprotector: : etilenglicoletilenglicol: 1,5 M, 1,0 M, : 1,5 M, 1,0 M, 0,5 M y por 0,5 M y por úúltimo 0 M. La duraciltimo 0 M. La duracióón en cada ban en cada bañño es de 5o es de 5--10 10 minutos.minutos.

2) 2) La eliminaciLa eliminacióón del crioprotector por efecto de la sacarosa, el n del crioprotector por efecto de la sacarosa, el principio es acelerar el flujo de salida. La molprincipio es acelerar el flujo de salida. La moléécula de sacarosa cula de sacarosa no penetra en la cno penetra en la céélula por simple difusilula por simple difusióón lo que su presencia n lo que su presencia en el medio crea un aumento de la presien el medio crea un aumento de la presióón osmn osmóótica del medio tica del medio extracelular, favoreciendo la difusiextracelular, favoreciendo la difusióón masiva de crioprotector n masiva de crioprotector en el compartimiento intracelular. Los embriones en el compartimiento intracelular. Los embriones descongelados se depositan directamente en una solucidescongelados se depositan directamente en una solucióón de n de PBS que contiene de 0,25 a 0,5 M de sacarosa y luego en 2 PBS que contiene de 0,25 a 0,5 M de sacarosa y luego en 2 óó 3 3 babañños de PBS antes de ser examinados.os de PBS antes de ser examinados.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

DESCONGELACIÓNDESCONGELACIÓN--33MMÉÉTODOS:TODOS:

3) 3) TambiTambiéén se puede eliminar el crioprotector por efecto de la sacarosa n se puede eliminar el crioprotector por efecto de la sacarosa directamente en el interior de la pajuela. Para ello, durante eldirectamente en el interior de la pajuela. Para ello, durante el llenado de la llenado de la pajuela antes de la congelacipajuela antes de la congelacióón, los embriones aspirados en una gota de n, los embriones aspirados en una gota de medio de congelacimedio de congelacióón (n (etilenglicoletilenglicol 1,5M en PBS con 20 SVF) son separados 1,5M en PBS con 20 SVF) son separados por burbujas de aire y una solucipor burbujas de aire y una solucióón de PBS con sacarosa 0,25M. Despun de PBS con sacarosa 0,25M. Despuéés de s de la descongelacila descongelacióón se sacude la pajuela para mezclar las soluciones de n se sacude la pajuela para mezclar las soluciones de etilenglicoletilenglicol y de azy de azúúcar, permitiendo de esta forma la difusicar, permitiendo de esta forma la difusióón del n del crioprotector al exterior de las ccrioprotector al exterior de las céélulas en poco minutos. En el caso de lulas en poco minutos. En el caso de transplante por endoscopia, esta ttransplante por endoscopia, esta téécnica permite transplantar directamente cnica permite transplantar directamente el contenido de la pajuela en el el contenido de la pajuela en el úútero sin previa observacitero sin previa observacióón ni manipulacin ni manipulacióón n del embridel embrióón.n.

Tras la eliminaciTras la eliminacióón se valora la calidad de los embriones n se valora la calidad de los embriones con lupa a 80 aumentos y scon lupa a 80 aumentos y sóólo se transplantarlo se transplantaráán los que n los que presenten unos contornos celulares npresenten unos contornos celulares níítidos.tidos.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

CRIOCONSERVACIÓNCRIOCONSERVACIÓNCongelación rápida: vitrificaciónCongelación rápida: vitrificación

La vitrificaciLa vitrificacióón consiste en someter a los embriones a concentraciones n consiste en someter a los embriones a concentraciones elevadas de crioprotectores con el fin de aumentar la viscosidadelevadas de crioprotectores con el fin de aumentar la viscosidad del medio del medio intraintra y extracelular. En este caso, es posible enfriar ry extracelular. En este caso, es posible enfriar ráápidamente los pidamente los embriones sin que se produzca la formaciembriones sin que se produzca la formacióón de cristales y se consigue n de cristales y se consigue introduciendo directamente la pajuela en nitrintroduciendo directamente la pajuela en nitróógeno lgeno lííquido. (50%)quido. (50%)Para la realizaciPara la realizacióón prn prááctica, se equilibra primero el embrictica, se equilibra primero el embrióón a 20n a 20ºº durante 10 durante 10 minutos en una mezcla de glicerol (10%) y minutos en una mezcla de glicerol (10%) y propilenglicolpropilenglicol (20%) en una (20%) en una solucisolucióón de PBS con 10% de SFB o de un 6% de BSA. Seguidamente se n de PBS con 10% de SFB o de un 6% de BSA. Seguidamente se sumerge durante un tiempo muy corto (1 minuto) en una mezcla de sumerge durante un tiempo muy corto (1 minuto) en una mezcla de glicerol glicerol al 25% y al 25% y propilenglicolpropilenglicol a 25%.a 25%.Viscosidad importante: estado vidrioso sin formación de cristaleViscosidad importante: estado vidrioso sin formación de cristales de hielo.s de hielo.Toxicidad de los crioprotectores a concentración elevada.Toxicidad de los crioprotectores a concentración elevada.Enfriamiento rápido. Enfriamiento rápido. No se necesita aparato.No se necesita aparato.Tiempo necesario: 10’.Tiempo necesario: 10’.Para la descongelaciPara la descongelacióón, se sumergen en agua a 20n, se sumergen en agua a 20ºº y luego en una soluciy luego en una solucióón n de sacarosa 1M en PBS durante 10 minutos. Inmediatamente despude sacarosa 1M en PBS durante 10 minutos. Inmediatamente despuéés se s se hidratan los embriones pashidratan los embriones pasáándolos por dos bandolos por dos bañños sucesivos de PBS con os sucesivos de PBS con SFB.SFB.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

TRANSFERENCIA DE EMBRIONESTRANSFERENCIA DE EMBRIONES

48a

69b

39c

55d

0102030405060708090

100 %

Partos Sobrevivencia de embriones

Embriones vitrificados Embriones congeladosa vs. b; c vs.d : diferencia no significativa

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA ETAPAS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONESDE EMBRIONES

Tratamientos hormonales de preparación de Tratamientos hormonales de preparación de donadoras y receptoras.donadoras y receptoras.Fecundación de donadoras: monta, Fecundación de donadoras: monta, I.AI.A intraintra--uterina, endoscopia. uterina, endoscopia. Colecta de embriones: cervical, endoscopia, Colecta de embriones: cervical, endoscopia, cirugía.cirugía.Selección de embriones: morfología.Selección de embriones: morfología.CriopreservaciónCriopreservación de los embriones: congelación de los embriones: congelación lenta, vitrificación.lenta, vitrificación.Transferencia de los embriones congelados.Transferencia de los embriones congelados.

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INDUCCIÓN DE RECEPTORASINDUCCIÓN DE RECEPTORAS

SIMILAR AL DE LAS DONANTES:SIMILAR AL DE LAS DONANTES:Mismo estadio fisiológico donanteMismo estadio fisiológico donante--receptora.receptora.

Tratamiento Tratamiento progestativo+eCGprogestativo+eCG 48 h antes de la 48 h antes de la retirada.retirada.

Retirada de la esponja 12 h después de las Retirada de la esponja 12 h después de las donantes si se han donantes si se han superovuladosuperovulado con FSH.con FSH.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

TRANSPLANTE DE EMBRIONESTRANSPLANTE DE EMBRIONESCALIDAD DE LOS EMBRIONES.CALIDAD DE LOS EMBRIONES.NÚMERO DE EMBRIONES.NÚMERO DE EMBRIONES.MOMENTO DE REALIZACIÓN.MOMENTO DE REALIZACIÓN.TRANSPLANTE BILATERAL O UNILATERAL.TRANSPLANTE BILATERAL O UNILATERAL.LUGAR DEL TRANSPLANTE.LUGAR DEL TRANSPLANTE.SINCRONIZACIÓN DONANTE/RECEPTORA.SINCRONIZACIÓN DONANTE/RECEPTORA.RESPUESTA OVULATORIA DE LA RESPUESTA OVULATORIA DE LA RECEPTORA.RECEPTORA.MÉTODOS DE TRANSPLANTEMÉTODOS DE TRANSPLANTE

Vía quirúrgicaVía quirúrgicaEndoscopíaEndoscopíaVía cervicalVía cervical

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

FACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDADFACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDADINDIVIDUOINDIVIDUO

Estado del ovario, número de pequeños folículos. Posibilidad de Estado del ovario, número de pequeños folículos. Posibilidad de realizar un realizar un pretratamientopretratamiento para aumentar número de pequeños folículos (10 días antes para aumentar número de pequeños folículos (10 días antes del tratamiento de del tratamiento de superovulaciónsuperovulación con FSH).con FSH).

RAZARAZAESTACIÓN O ÉPOCA DEL AÑOESTACIÓN O ÉPOCA DEL AÑO

Tasa de ovulación.Tasa de ovulación.Número de embriones anómalos.Número de embriones anómalos.

ALIMENTACIÓNALIMENTACIÓNAlimentación insuficiente: Alimentación insuficiente: luteolisisluteolisis prematura.prematura.

ESTADO DE PSEUDOGESTACIÓNESTADO DE PSEUDOGESTACIÓNAparece en más del 50% de los rebaños.Aparece en más del 50% de los rebaños.Se observa en el 3Se observa en el 3--4% de las hembras.4% de las hembras.Presencia de un cuerpo lúteo persistente.Presencia de un cuerpo lúteo persistente.

100 100 µµgg de de cloprostenolcloprostenol 20 y 10 días antes de colocación esponja.20 y 10 días antes de colocación esponja.Resultados inciertos del tratamiento, disminuye la tasa de fertiResultados inciertos del tratamiento, disminuye la tasa de fertilidad.lidad.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

FACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDADFACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDAD

RESPUESTA DEL OVARIO AL TRATAMIENTO RESPUESTA DEL OVARIO AL TRATAMIENTO HORMONAL.HORMONAL.

No todas las hembras responden al tratamiento No todas las hembras responden al tratamiento progestativoprogestativo..

Incluso el 25% de las hembras no presentan elevación de las Incluso el 25% de las hembras no presentan elevación de las concentraciones de progesterona 6 días después de la retirada. Oconcentraciones de progesterona 6 días después de la retirada. Ovulación vulación tardía o tardía o luteolisisluteolisis prematura con nueva ovulación.prematura con nueva ovulación.

MOMENTO DE LA OVULACIÓN.MOMENTO DE LA OVULACIÓN.Intervalo entre el inicio del estro y pico Intervalo entre el inicio del estro y pico preovulatoriopreovulatorio de LH varía de 11,2 de LH varía de 11,2 ± ± 5,6 h.5,6 h.

El intervalo entre el pico de LH y el inicio de las ovulaciones El intervalo entre el pico de LH y el inicio de las ovulaciones es casi es casi constante de unas 22 h.constante de unas 22 h.

Muy importante para determinar momento de I.A., y sincronizaciónMuy importante para determinar momento de I.A., y sincronización con con receptoras.receptoras.

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

FACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDADFACTORES DE VARIACIÓN DE LA FERTILIDAD

MOMENTO DE LA OVULACIÓNMOMENTO DE LA OVULACIÓNAdministración de Administración de GnRHGnRH al final del tratamiento al final del tratamiento progestativoprogestativo..Varía de las 44 hasta las 68 horas de la retirada de la esponja.Varía de las 44 hasta las 68 horas de la retirada de la esponja.

REPETICIÓN DEL TRATAMIENTOREPETICIÓN DEL TRATAMIENTOAparición de anticuerpos Aparición de anticuerpos antianti--eCGeCG..Con 3 a 5 tratamientos aumenta la frecuencia (31%) de salida Con 3 a 5 tratamientos aumenta la frecuencia (31%) de salida en celo tardía (más de 30 horas tras la retirada de la esponja),en celo tardía (más de 30 horas tras la retirada de la esponja),mientras que es del 16,7% con menos de 3 tratamientos..mientras que es del 16,7% con menos de 3 tratamientos..Retraso de aparición del celoRetraso de aparición del celo retraso del pico de LHretraso del pico de LH

PROLIFICIDAD DE LAS HEMBRAS PROLIFICIDAD DE LAS HEMBRAS INSEMINADASINSEMINADAS

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Rendimientos de la transferencia Rendimientos de la transferencia de embrionesde embriones

Cabras Cabras AlpineAlpine--SaanenSaanen

Num. OvulacionesNum. Ovulaciones 1414

Estructuras colectadas (70Estructuras colectadas (70--75%)75%) 1010--1111

Embriones fertilizados Embriones fertilizados (70(70--80%) 80%) 77--99

Embriones de buena calidadEmbriones de buena calidad 66--88Embriones congelables (85 % de los fertilizados)Embriones congelables (85 % de los fertilizados)

Embriones utilizables después descongelaciEmbriones utilizables después descongelacióónn (80%) (80%) 55--66

Cabritos nacidos por donadora tratada Cabritos nacidos por donadora tratada (45(45--50%)50%) 22--33

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TÉCNICAS DE REPRODUCCIÓN TÉCNICAS DE REPRODUCCIÓN ASISTIDAASISTIDA

FIV: inseminación de los ovocitos en gotas de FIV: inseminación de los ovocitos en gotas de cultivo con los espermatozoidescultivo con los espermatozoidesICSI: microinyección de un espermatozoide ICSI: microinyección de un espermatozoide dentro de un ovocitodentro de un ovocito

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1. INTERÉS DE CONTROLAR LA REPRODUCCIÓN CAPRINA

Precio

Recogida

MESE

0,30SF M A M J J A O N D

0

10

20

30

40

0,38

0,46

0,53

0,61

Prec

io (E

uros

/litr

o)

6R

ecog

ida

(10

) lit

ros

Diferencia de precio =0,20 Euros/litro

(+53%)

Variaciones mensuales de la recogida de leche de cabra por los industrialesy del precio pagado al productor (Francia)

(Chemineau et al 1995).

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4. INTERÉS DE LA TRANSFERENCIA DE EMBRIONES

Transferencia directa vs tradicional de embriones congelados (congelación lenta)

Método de Cabritos nacidos/ Cabritos nacidos/transferencia Receptoras Partos Embriones transf. Embriones

(%) descongelados

Tradicional * 56 64a 46c 36

Directa 54 44b 34d 34

*80% (112/140) de los embriones descongelados fueron considerados transferibles

Baril et al. 2004