ESPECTROFOTOMETRIA1. ¿Qué es la espectrofotometría y cuál es su objetivo?

ESPECTROFOTOMETRÍA: Técnica de medición de la cantidad de energía radiante que absorbe o transmite un sistema químico en función de la longitud de onda; es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones químicas y bioquímicas.

OBJETIVO: Permitir medir la densidad óptica o absorbancia, así como la tramitancia.

2. Partes funcionales del equipo. Conocer el esquema de la distribución y que hace cada parte.La absorbancia y la tramitancia de una sustancia en disolución se miden con un aparato denominado espectrofotómetro, el cual consta básicamente de los siguientescomponentes:Fuente de luz: Lámpara que emite una mezcla de longitudes de onda.Colimador: Conjunto de lentes que enfocan la luz convirtiéndola en un haz de rayos paralelosMonocromador: Dispositivo que selecciona luz de una única longitud de onda.Detector fotoeléctrico: Transductor de luz en electricidad. La luz provoca el desplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corriente eléctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.Registrador: Mide la señal del detector, la compara y genera una medida en una escala determinada.

3. Concepto y formula de Tramitancia y absorbanciaAbsorbancia: Cantidad de radiación que absorbe una solución. Es adimensional.A= axbxc

I=Intensidad del haz que abandona la celda.I0= Intensidad de la luz que incide sobre la celda.a= cte. De proporcianalidad de absortividadb= longitud interna de la celda (1cm)c= concentración de las especies absorbentes.

Tramitancia: Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y la energía o luz incidente (Po) sobre ella. Tanto la energía radiante incidente como la transmitida deben ser medidas a la misma longitud de onda.

%T = 100 P / P0

4. Ley general de la espectrofotometría, definición formula y descripción de cada parte de la formulaLa ley se refiere a la Ley de Lambert-Beer que permite hallar la concentración de una especie química a partir de la medida dela intensidad de luz absorbida por la muestra.Esta ley se puede expresar en términos de potencia de luz o de intensidad de luz, asumiendo luz monocromática, como:

  I0, es la intensidad de la luz que incide sobre la muestra y que proviene de la fuente. e, es el coeficiente de absortividad molar en unidades de M-3. cm-1b, es la longitud de la trayectoria del haz de luz a través de la muestra o el espesor de la celda en cm o lo que se conoce como paso óptico.

5. Graficas: Espectro de absorción, espectro de transmisión y curva de calibración. Que representan, como se construyen para que sirve.Espectro de absorciónCurva de calibración: gráfica que relaciona la concentración de al menos cinco soluciones de estándar de concentraciones conocidas, con la absorbancia de cada uno de ellos a la longitud de onda máxima (λ max)Sirve para para determinar la concentración de una muestra problema.

6. Factor de calibración: como se halla y en qué casos se utiliza.

El factor de calibración se halla dividiendo la concentración del estándar sobre la absorbancia estándar. Es adimensional. Cumple con la curva de calibracion

En pruebas de determinación: glucosa, colesterol, etc