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  • ESCUELA SUPE OR POLITECNICA

    Facultad déc Ingenie& Marítima y Ciencias del Mar

    b#c,nción de un Modelo do hf4weión ETxperimanful e n Juve- uilc,s de Pen~eury vannamei, con eC Vibrio vulnif ieus 99

    T E S I S DE G R A D O

    PREVIA LA OBTENCION DEL TITULO DE

    ACUICULTOR

    Presentada por: MARIA AUXILIADORA SOTOMAYOR

    MACIAS

    1000

  • ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL Facultad de Ingeniería Marítima y Ciencias del Mar

    ” Obtención de un Modelo de Infección Experimental en Juveniles de Penaeus vannamei , con el Vibrio vulnificus”.

    TESIS DE GRADO

    previa la obtención del Título de:

    ACUICULTOR

    Presentada por:

    María Auxiliadora Sotomayor Macías

    2000

  • DEDICATORIA

    A Dios,

    a mis padres,

    y hermanas

  • Presidente Tribunal

    V.,Ph. D. Jorge Calderón

    Miembro del Tribunal

    Director de tesis

    Miembro del Tribunal

  • DECLARACION EXPRESA

    “La responsabilidad para los hechos, ideas y doctrinas expuestos en esta tesis, me corresponden exclusivamente; y, el patrimonio intelectual de la misma, a la ESCUELA SUPERIOR POLITECNICA DEL LITORAL”.

    (Reglamento de Exámenes y Títulos profesionales de la ESPOL)

    Maríá Aux. Sotomayor Macias

  • AGRADECIMIENTO

    A Dios, amado padre, por darme la oportunidad de conocer y vivir junto personas

    hermosas de corazón.

    A mis padres, por ser mi refugio en las tempestades y el paraíso en las alegrías, por darme

    con muchos esfuerzos todo lo que soy, gracias por quererme.

    A mami Gigi, Ruth, Eli, Pedro y Eduardo por ser mis hermanos.

    Al Centro Nacional de Acuicultura e Investigaciones Marinas y a su director Jorge

    Calderón V.,Ph D, por darme la oportunidad de realizar esta tesis.

    A Inge Visser, por darme la oportunidad y muchas facilidades para realizar esta tesis.

    A mi directora de tesis, Dra. Jenny Rodríguez, que con sus ideas ha hecho que descubriera

    un mundo diferente, a que ame a este trabajo, gracias por sus consejos, y guía .

    A mi segunda directora, Ac. Sonnya Mendoza, gracias no sólo por enseñarme y ayudarme

    en todo lo que he aprendido, sino sobre todo por convertirme en tu amiga.

    A mis mejores y queridas amigas: Meche, Lita, Bertha, Sonnya, con ustedes el trabajo me

    fue muy ligero y las tristezas menos dolorosas.

    Gracias a mis hermanos inmunólogos: Marcelo, Ricardo y Ernesto, porque cerca o lejos

    de mí han cuidado y seguido esta tesis, gracias por enseñarme y soportar a esta nueva

    integrante de la familia. Uds. son y serán el ejemplo que seguiré.

    A todos los técnicos del área sobre todo a Fanny, Rosa, Bonny, Irma, Marina, y Franklin.

    Gracias a todo el personal del CENAIM porque siempre estuvieron dispuestos a

    ayudarme.

    A todos los que conocí en este tiempo y a aquellos que seguirán .

  • ii

    TABLA DE CONTENIDOS

    Tabla de contenidos

    Indice de figuras

    Indice de tablas

    Abreviaturas

    Resumen

    Introducción

    1. Antecedentes

    1.1 Enfermedades producidas por bacterias en el cultivo de camarón en el Ecuador

    1.1.1 Generalidades

    1.1.2 Vibrios marinos asociados a enfermedades bacterianas en el camarón

    1.1.3. Características y Biología del Vibrio vuZrzzjks

    1.2. Antibióticos y resistencia bacteriana.

    1.2.1. Clasificación de los antibióticos de acuerdo a su actividad

    1.2.3. Mecanismo de acción de los antibióticos

    1.2.4. Resistencia bacteriana a los antibióticos

    1.2.5 Mecanismos bioquímicos implicados en la resistencia a antibióticos

    1.3. Sistema inmunitario del camarón y sus mecanismos de defensa

    1.3.1. Mecanismos de defensa a mediación celular: Hemocitos

    1.3.2. Mecanismos de defensa humoral

    1.4. Patogenicidad bacteriana y sus mecanismos

    1.5. Infecciones experimentales realizadas en Peneidos

    1.5.1. Interacción huésped -patógeno

    1.5.2. Modelos de infecciones experimentales

    2. Materiales y Métodos

    2.1. Interacción patógeno - huésped

    ii

    V

    .*. Vlll

    X

    ..* x111

    1

    3

    4

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    28

    37

    37

    39

    41

  • . . . 1 1 1

    2.1.1. Protocolo para preparar bacterina

    2.1.2. Protocolo para preparar periplasma

    2.1.3. Producción de Anión Superóxido

    2.1.4. Cuantificación de la Actividad Fenoloxidasa

    2.15. Actividad Antibacteriana

    2.2. Infecciones

    2.2.1. Aumento de la virulencia bacteriana

    2.2.1.1. Confrontación con el Sistema inmune del camarón

    Selección de bacterias con capacidad de crecer en el plasma

    Selección de bacterias que inhiben el choque respiratorio

    2.2.1.2. Selección por crecimiento en medio de cultivo

    2.2.2. Desinfección de Camarones

    2.2.2.1. Metodología de desinfección

    2.2.2.2. Técnicas bacteriológicas

    Análisis Microbiológicos

    Pruebas Bioquímicas

    2.2.2.3. Inmunoensayos

    Colony Blot

    Dot Blot

    2.2.2.4. Técnica de Biología Molecular

    2.2.2.5. Técnica de Histología

    2.2.3. Infecciones experimentales de camarones

    2.2.3.1. Primer experimento de infección

    2.2.3.2. Segundo experimento de infección

    2.2.3.3. Tercer experimento de infección

    2.2.3.4. Cuarto experimento de infección

    3. Resultados y Discusión

    3.1. Interacción patógeno- huésped

    41

    41

    42

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    44

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    5 8

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    66

    6 7

    69

    70

    72

    72

  • 3.1.1. Producción de Anión Superóxido (O- J, VS. V. vulnzjkus

    3.1.2. Estimulación del Sistema Fenoloxidasa por parte del V. vzdnificus

    3.1.3. Actividad Antibacteriana

    3.2. Optimización de un protocolo de infección en juveniles de P. vannamei

    3.2.1. Aumento de la virulencia bacteriana

    3.2.1.1. Confrontación con el sistema inmune del camarón

    3.2.2. Desinfecciones

    3.2.2.1. Primer experimento de desinfección

    3.2.2.2. Segundo experimento de desinfección

    3.2.2.3. Tercer experimento de desinfección

    3.2.2.4. Cuarto experimento de desinfección

    3.2.3. Infecciones

    3.2.3.1. Primer experimento de infección

    3.2.3.2. Segundo experimento de infección

    3.2.3.3. Tercer experimento de infección

    3.2.3.4. Cuarto experimento de infección

    3.2.3.5.Protocolo estandarizado de infección

    4. Conclusiones y Recomendaciones

    Referencias bibliográficas

    Anexos

    73

    7 4

    76

    78

    7 8

    82

    82

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    93

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    102

    109

    1 1 1

    122

  • V

    INDICE DE FIGURAS

    Fig.1.

    Fig. 2.

    Fig. 3.

    Fig. 4.

    Mecanismos de adherencia bacteriales

    Estructura de Endotoxina

    30

    3 5

    4 5

    46

    Fig. 5

    Fig. 6.

    Fig. 7.

    Fig. 8.

    Fig. 9.

    50

    6 3

    7 3

    7 5

    77

    Fig.10.

    Fig.11.

    Fig. 12.

    79

    8 0

    8 1

    Fig. 13. 8 5

    Fig. 14. 8 5

    Fig. 15.

    Aumento de la Virulencia en la Cepa V. vuZrz@cus (S2)

    Selección de bacterias por su capacidad de aumentar su crecimiento en

    plasma de camarón con elevada actividad antibacteriana

    Vista parcial de la sala de experimentación de infecciones experimentales

    Tiempos de desparafinado e hidratación

    Producción de Anión Superóxido, usándose varios tipos de estimulantes

    Estimulación de la actividad fenoloxidasa en tres muestreos

    Actividad antibacteriana del plasma y el porcentaje de inhibición de

    crecimiento de tres tipos de bacterias

    Crecimiento del V. vulnificus en dos muestras de plasmas

    Estimulación de dos cepas de V. vulnzjicus en la producción de 0,

    UFC/ ml del V. vulnzjku, sometido a varias muestras de plasma en dos

    concentraciones de cloruro de sodio en agar LB

    Presencia de bacterias observadas por histología, en animales sometidos

    a desinfección con varias concentraciones de antibióticos

    Observación histológica de túbulos normales y levemente lisados de

    animal desinfectado con el tratamiento 40 ppm de oxitetraciclina y 40

    ppm de cloranfenicol

    Observación histológica de una encapsulación hemocítica, lisis de

    túbulos en animal no desinfectado

    Concentración de bacterias medidas por turbidez en macerados de

    corazón de animales desinfectados con diferentes concentraciones de

    antibióticos

    8 5

    Fig. 16. 8 8

    Fig. 17. Porcentaje de animales desinfectados y UFC/g. de hepatopáncreas 8 9

  • VI

    Fig. 18.

    Fig. 19.

    Fig. 20.

    Fig. 21.

    Fig. 22.

    Fig. 23.

    Fig. 24.

    Fig. 25.

    Fig. 26.

    Fig. 27.

    Fig. 28.

    recuperadas