Practica V: EnzimasPractica VI: Saturación de

Acido Ascórbico

Tommy Paul Guerrero 1059755Eustacio Aguilera 1060066

Las enzimas son moléculas de naturaleza proteica y estructural

que catalizan reacciones químicas, siempre que sean termodinámicamente posibles.

Las enzimas actúan sobre unas moléculas denominadas sustrat

os, las cuales se convierten en moléculas diferentes denominadas

productos.

Al igual que ocurre con otros catalizadores, las enzimas no son consumidas por las reacciones que catalizan, ni alteran su equilibrio químico.

Sin embargo, las enzimas difieren de otros catalizadores por ser más específicas.

La actividad de las enzimas puede ser afectada por• Otras moléculas. (Inhibidores enzimáticos).

• Por su nivel de pH• Temperatura extrema.

• Concentración propia de enzima o sustrato• y otros factores fisicoquímicos

Los inhibidores son moléculas que regulan la actividad enzimática, inhibiendo su actividad. A grandes rasgos, pueden clasificarse en reversibles e irreversibles. Las irreversibles se unen covalentemente a la enzima sin posibilidad de revertir la modificación, siendo útiles en farmacología.

Clasificación• Ligasas: catalizan la degradación o síntesis de los enlaces denominados "fuertes" mediante el acoplamiento a moléculas de alto valor energético como el ATP.  • Isomerasas: catalizan los cambios de posición de un grupo en determinada molécula obteniendo formas isoméricas. • Liasas: catalizan reacciones en las que se eliminan grupos H2O, CO2 y NH3 para formar un doble enlace o añadirse a un doble enlace. • Hidrolasas: catalizan reacciones de hidrólisis con la consiguiente obtención de monómeros a partir de polímeros. • Transferasas: transfieren grupos activos (obtenidos de la ruptura de ciertas moléculas) a otras sustancias receptoras.• Oxidorreductasas: catalizan reacciones de oxidorreducción o redox. 

Co-EnzimasUn cofactor es un componente no proteico, termoestable y de baja masa molecular, necesario para la acción de una enzima. El cofactor se une a una estructura proteica, denominada apoenzima, y el complejo apoenzima-cofactor recibe el nombre de holoenzima.

Aquellos cofactores que están covalentemente unidos a la apoenzima son denominados grupos prostéticos, ya sean orgánicos (coenzimas) o inorgánicos.

Los cofactores son básicamente de dos tipos, iones metálicos y moléculas orgánicas, denominadas coenzimas.

Función Biológica• Son indispensables en la transducción de señales y en procesos

de regulación.

• También son capaces de producir movimiento.

• Los virus también pueden contener enzimas implicadas en la infección celular.

• Una importante función de las enzimas es la que presentan en el sistema digestivo de los animales.

• Varias enzimas pueden actuar conjuntamente en un orden específico, creando así una ruta metabólica. En una ruta metabólica, una enzima toma como sustrato el producto de otra enzima.

Práctica de hoyFundamentoLa digestión del almidón es catalizada por la enzima amilasa, la cual se encuentra en la saliva. Como todas las enzimas la amilasa presenta su máxima actividad dentro de ciertas escalas de pH y temperatura.

El efecto de la amilasa y el estudio de diferentes condiciones sobre la digestión del almidón se determinaran paso a paso usando la reacción de yodo. A mediad que se efectúa la digestión. El color azul se torna cada vez mas pálido, hasta que por ultimo, el color que se obtiene es el color del reactivo de yodo simplemente diluido en agua.

Equipos:• Baño María.• Hot plate.

Materiales:• Tubos de ensayos.• Pipetas.• Termómetros.• Envase con hielo.

Procedimiento:• En un Beaker de 25-30mL. Coloque

5mL de saliva y añada 25mL. De agua destilada, mezcle bien el contenido.

Reactivos:• Almidón al 1%.• Solución de yodo.• Agua destilada.• Soluciones amortiguadoras

pH=5; pH=7 y pH=9.

Objetivos: • Determinar el pH óptimo de la

enzima.• Determinación de la

temperatura óptima de la Enzima.

• Determinación de concentración óptima de la Enzima.

SEGUNDA PARTE

Vitaminas• Son sustancias orgánicas, de

naturaleza y composición variada.• Se necesitan en pequeñas

cantidades, aunque su presencia es imprescindible para el desarrollo normal del organismo.

• Las necesidades vitamínicas varían según las especies, con la edad y con la actividad.

• Los vegetales, hongos y microorganismos son capaces de elaborarlas por sí mismos. Los animales, salvo algunas excepciones, carecen de esta capacidad, por lo que deben obtenerlas a partir de los alimentos de la dieta. En algunos casos los animales obtienen algunas vitaminas a través de sus paredes intestinales, cuya flora bacteriana simbionte las producen.

Definición• El ácido ascórbico, o

Vitamina C, es una vitamina hidrosoluble, emparentada químicamente con la glucosa.

• Solamente es una vitamina para el hombre, los primates superiores, el cobaya, algunos murciélagos frugívoros y algunas aves.

¿Por qué ácido?

• La acidez no se debe a un grupo carboxílico, sino a la posibilidad de que se ionice el hidroxilo situado sobre el carbono 3, formando un anión que queda estabilizado por resonancia.

Fuentes• El ácido ascórbico solamente

se encuentra en concentraciones significativas en los vegetales.

• En muchas frutas se encuentra en concentraciones elevadas (50 mg/100g en los cítricos), pero para muchas personas el aporte principal se obtiene de verduras y hortalizas, como repollo o coliflor.

• Las papas nuevas contienen unos 30 mg/100mg, aunque lo van perdiendo durante el almacenamiento.

Sensibilidad a la oxidación• El ácido ascórbico es

particularmente sensible a las reacciones de oxidación, destruyéndose con gran facilidad durante el procesado de los alimentos en presencia de oxígeno.

• Inicialmente en la oxidación pasa de ascorbato a dehidroascorbato, en una reacción que es reversible, por lo que el dehidroascorbato mantiene en principio el valor como vitamina C. • La lactona correspondiente al dehidroascorbato es mucho menos estable que la del ascorbato, por lo que se hidroliza con gran facilidad para producir ácido 2, 3 dicetogulónico, que posteriormente puede degradarse por descarboxilación.

Escorbuto

Las consecuencias clínicas van desde la debilidad de las encías a las hemorragias diseminadas en todo el organismo. Descrita en textos del siglo XIII, desde el punto de vista histórico el escorbuto fue muy importante, especialmente por su incidencia en las flotas de los siglos XVI al XVIII, época en la que causaba más bajas entre las tripulaciones que las propias batallas navales. Entre otros casos, tres cuartas partes de los tripulantes de la expedición de Magallanes murieron por causa del escorbuto

La deficiencia de ácido ascórbico produce una enfermedad conocida como escorbuto, con daños relacionados con la síntesis del colágeno, ya que el ácido ascórbico es un cofactor esencial en este proceso.

Practica de hoy

Objetivo

Determinar le estado nutricional con relación al acido ascórbico mediante la prueba de saturación del acido ascórbico, se basa en administrar una cantidad estándar de acido ascórbico al paciente y luego medir la cantidad de acido ascórbico eliminado en orina. Fundamento:

Cuando la cantidad de la vitamina en la dieta es suficiente se dice que los tejidos del cuerpo están saturados de esta vitamina. En este caso, la cantidad de acido ascórbico excretado en la orina depende del ingerido. En una persona normal, la excreción de vitamina C en 24 horas esta en el orden de 10-60mg, valores por debajo de 10mg/día indican una deficiencia de la vitamina.

Practica de hoyFundamento:

La recolección de muestras de orina cada 24 horas no es muy conveniente y es mas recomendable medir la excreción de acido ascórbico en la orina después de ingerir una dosis altas de la vitamina.

Después de suministrar el acido ascórbico a la persona se mide la excreción máxima 4 o 6 horas después de ingerida la dosis. Si la excreción es menor de 40-50mg, se repite la prueba hasta que se logre la saturación.

En el caso de personas adultas normales , la saturación debe lograrse en 2 o 3 días, pero en casos de escorbuto se necesitan hasta 2-3 semanas. Periodos entre estos dos indican algún grado de deficiencia de vitamina C.

Practica de hoy

Reactivos:

• Solución estándar de indofenol.

• Solución de acido acético-meta fosfórico.

Materiales:

• Tubos de ensayo.

• Pipetas.• Buretas.• Beaker.• Ácido ascórbico

(tabletas).• Colector de

orina.

Practica de hoy

Colecta de muestra:

1. Se escogerán 4 estudiantes, dos fumadores y dos ni fumadores para evaluar s si existe alguna diferencia entre ambos grupos (Estos no han debido ingerir frutas o alimentos que contengas acido ascórbico el día de la practico)

2. Al inicio de la practica se les entregara a los estudiantes un colector de orina conteniendo 3ml de acido meta fosfórico en el cual deben de orinar antes de ingerir la vitamina C.

3. Después de ingerir la tableta, en un periodo de 30min se le suministrara otro colector con acido meta fosfórico para la segunda toma de orina.

4. Transcurrida una hora los estudiantes tomaran de nuevo otro colector para la tercera y ultima muestra de orina.

Practica de hoyProcesamiento de muestras:

1. En un beaker medir 10ml de orina de cada muestra (V1), proceder a la titulación de cada muestra con la solución de indofenol (V2).

2. La titulación habrá culminado una vez el color rosado permanezca durante al menos 5 segundos.

Análisis de datos:

[ ]1= Concentración estándar de indofenolV1= Volumen de orinaV2= Volumen gastado de indofenol Partiendo que =

Donde es mi incógnita

Donde es la masa de ácido ascórbico

[ ]2=𝑉 2×[ ]1𝑉 1

𝑚=𝑉 1×[ ]2

Ya se acabóA jetudiar