ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS …
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ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR, GUÍAS, FORMATOS DE REGISTROS E INSTRUCTIVOS DEL CEPARIO DE HONGOS DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA. TATIANA BURGOS MORA TRABAJO DE GRADO Presentado como requisito parcial Para optar al título de: MICROBIOLOGA INDUSTRIAL. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA FACULTAD DE CIENCIAS DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL BOGOTÁ D.C 2014
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ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR,
GUÍAS, FORMATOS DE REGISTROS E INSTRUCTIVOS DEL CEPARIO DE
HONGOS DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
TATIANA BURGOS MORA
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito parcial
Para optar al título de:
MICROBIOLOGA INDUSTRIAL.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGÍA
CARRERA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
BOGOTÁ D.C
2014
NOTA DE ADVERTENCIA
Artículo 23 de la resolución No. 13 de julio 1946.
“La Universidad no se hace responsable por los conceptos emitidos por sus
alumnos en sus trabajos de tesis. Sólo velará porque no se publique nada
contrario al dogma y a la moral católica y porque las tesis no contengan ataques
personales contra persona alguna, antes bien se vean en ellas el anhelo de buscar
la verdad y la justicia”
ELABORACIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR,
GUÍAS, FORMATOS DE REGISTROS E INSTRUCTIVOS DEL CEPARIO DE
HONGOS DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
TATIANA BURGOS MORA
APROBADO
Marcela Franco C. PhD.
Directora.
Nubia Lorena Valencia.
Jurado.
ELABORACIO DE LOS PROCEDIMIENTOS OPERATIVOS ESTÁNDAR, GUÍAS,
FORMATOS DE REGISTROS E INSTRUCTIVOS DEL CEPARIO DE HONGOS
DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
TATIANA BURGOS MORA
APROBADO
Concepción Puerta B., PhD Marcela Franco Correa PhD.
Decana Facultad de Ciencias Directora del Programa
Microbiología Industrial
TABLA DE CONTENIDO
1. Introducción
2. Marco teórico.
2.1. Colección de Microrganismos.
2.2. Cepario de Hongos.
2.3. Procedimiento.
2.4. Calidad.
2.5. Sistemas de gestión de calidad.
2.6. Documentación.
2.7. Documentación de sistemas de calidad.
2.8. Procedimientos documentados
2.9. Procedimiento Operativo Estándar (P.O.E).
2.10. Instructivo.
2.11. Formato de Registro.
3. Justificación.
4. Objetivos.
4.1. Objetivo General.
4.2. Objetivos Específicos.
5. Metodología.
5.1. Estructuración de los elementos documentales.
5.2. Elaboración de procedimiento operativo estándar.
5.3. Elaboración de instructivos.
5.4. Elaboración de formatos de registro.
6. Procedimiento Operativo Estándar.
6.1. Reactivación de cepas y verificación de pureza.
6.2. Siembras para docencia
6.3. Confirmación de pureza de cepas de hongos pertenecientes al
cepario de hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
6.4. Mantenimiento del banco de trabajo de cepas de hongos
pertenecientes al cepario de hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana.
6.5. Conservación por congelación de hongos filamentosos y
levaduriformes pertenecientes a la colección de microrganismos del
cepario de hongos.
7. Instructivos.
7.1. Uso de cabina de flujo laminar.
7.2. Uso del microscopio.
7.3. Elaboración de láminas para microscopía.
7.4. Selección de medios de cultivo.
8. Formato de registro.
8.1. Formato de hoja de vida.
8.2. Formato de transferencia de cepas a monitoria.
8.3. Formato de transferencia de cepas para investigación.
9. Discusión.
10. Conclusión.
11. Referencias bibliográficas.
1. INTRODUCCIÓN.
La Colección de Microorganismos del Departamento de Microbiología de la
Pontificia Universidad Javeriana fue organizada con el fin de realizar actividades
de conservación de cepas microbianas que apoyaran la enseñanza en docencia e
investigación, promoviendo la preservación de microorganismos con interés
Biotecnológico, Ambiental, Clínico e Industrial, fundada en 2001, y haciendo parte
de la Federación Mundial de Colecciones de Cultivos (Rey & Trespalacios, 2013).
La colección subdivide sus actividades según los microorganismos a conservar,
con el fin de establecer de manera adecuada el manejo y la elaboración de las
actividades.
El Cepario de Hongos haciendo parte de la Colección de Microorganismos del
Departamento de Microbiología de la Pontificia Universidad Javeriana, tiene como
principal objetivo la conservación, reactivación, caracterización e identificación, y
mantenimiento de cepas de Hongos, y así mismo, desarrolla actividades basadas
en la prestación de servicios de investigación y docencia. Dentro de sus
actividades, la conservación de cepas juega un papel fundamental, ya que en este
se desarrollan diferentes procedimientos con el fin de mantener la viabilidad a
través del tiempo de las Cepas de Hongos que hacen parte del Cepario de
Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
Para establecer y estandarizar los procesos en un laboratorio, es importante la
estructuración de una serie de documentos que se ajusten a las actividades que
en él se desarrollan. Si bien esta documentación no garantiza la calidad en los
resultados finales, define la organización y la información de cada uno de los
procesos llevados a cabo por el personal encargado, e igualmente, una correcta
aplicación en la documentación estructurada facilita el desempeño en los
procedimientos dentro de un laboratorio, y puntualiza la información establecida
para cada uno de ellos (ISO 10013:2003). De esta forma, la documentación se
encarga de brindar seguridad en la elaboración de los procedimientos, es decir,
define que cada una de las actividades que se desenvuelven para dar
cumplimiento a un procedimiento desarrollado de manera adecuada, dé como
resultado que dicho procedimiento elabore consigo buenos resultados, como el
apropiado uso de todos los elementos que en cada uno de los procedimiento se
encuentran involucrados.
Dentro de la documentación, se describen objetivos que resaltan la capacidad de
proveer información, evidencias, y dar una base al orden de los procesos de una
organización. Esta documentación se implementa a través de una jerarquía que
define la importancia de las etapas de un procedimiento, con la finalidad de
comunicar y facilitar información detallada del buen desarrollo de una actividad
para dar cumplimiento a un proceso, conservando la homogeneidad de este
dentro del laboratorio (ISO 10013:2003). Por este motivo, teniendo en cuenta que
“Los resultados en microbiología dependen más de la capacidad y la experiencia
del usuario que de las reacciones mismas” (Tobar, 2008), la documentación no
declara la eficiencia en la emisión de resultados confiables, pero si organiza y
capacita al personal encargado en la manera sobre cómo llevar a cabo un
procedimiento.
Con relación a lo anterior, el Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana exige una serie de procedimientos y documentación claramente
definidos para su adecuado funcionamiento con el fin de llevar a cabo de manera
clara, organizada y definida las actividades que en este laboratorio se desarrollan.
La correcta implementación de la documentación necesaria define la forma sobre
cómo desempeñar organizada y estructuradamente los procesos para la mejora
en los procedimientos y actividades que se llevan a cabo dentro del Cepario. Es
decir dicha documentación amplia el objeto de la correcta ejecución de
procedimientos operativos, guías, instructivos y formatos de registro entre otros,
pueden llegar a garantizar un correcto funcionamiento en el laboratorio por parte
del personal encargado.
La documentación tiene a su cargo brindar las herramientas necesarias para
determinar la importancia de llevar un orden y una secuencia en la realización de
las actividades llevadas a cabo en el Cepario de Hongos y que puedan llegar a
hacer parte de la garantía en la emisión de resultados confiables que garanticen el
correcto funcionamiento del laboratorio y todo lo que se desenvuelve en este.
Con este fin se desea Documentar los procedimientos operativos estándar,
instructivos, guías y formatos de registro del Cepario de Hongos perteneciente a la
Colección de Microrganismos de la Pontificia Universidad Javeriana, para
establecer y organizar la información necesaria para la realización de las
actividades que en este se desarrollen.
2. MARCO TEORICO.
2.1. Colección de Microrganismo.
La colección de Microrganismos de la Pontificia Universidad Javeriana, es una
entidad de interés clínico, biotecnológico, industrial, ambiental y de docencia, que
realiza actividades de conservación y mantenimiento de cepas garantizando la
viabilidad de las mismas a través del tiempo. Cuenta con microrganismos que
poseen características potenciales y de mayor interés en las diferentes áreas, así
mismo hace cumplimiento a actividades de identificación y caracterización de
microrganismos basados en los conocimientos de las personas a cargo (Rey &
Trespalacios, 2013).
2.2. Cepario de Hongos.
El cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana, hace parte de uno de
los laboratorios encargados de la conservación y mantenimiento de Hongos de la
Colección de Microrganismos; actualmente cuenta con aproximadamente 45
géneros y 38 especies identificados taxonómicamente, así mismo presta servicios
de docencia, brindando información que cumpla con dichos fines (Rey &
Trespalacios, 2013).
2.3. Procedimiento.
Un proceso hace referencia a una serie de etapas para dar cumplimiento a
diferentes actividades y los elementos que se enlazan entre sí, con el fin de
garantizar la calidad del trabajo que se desarrolla en una organización. Así mismo,
brinda una serie de conocimientos para el desarrollo del proceso con el fin de
crear actividades homogéneas (ISO 10013.2003). Los procedimientos operativos
estándar encierran una serie de documentos que recopilan información,
normalizan la actividad y evitan el surgimiento de problemas en la manera de
cómo se desarrollan las actividades que hacen parte del procedimiento con el fin
de reducir y prevenir el fallo en la realización del mismo (E.S:2002).
2.4. Calidad.
La calidad es todo aquello que envuelve la competitividad de los procesos de una
organización, define la capacidad de organizar y estandarizar dichos
procedimientos con el fin de cumplir con estándares superiores (Ponsati &
Campos, 2010). Dicha organización está precisada en la estructuración
documental jerárquica necesaria que proporciona la facilidad en la capacidad de
desarrollar las actividades en una entidad más competitiva. Para un laboratorio la
calidad se define como el conjunto de elementos que son necesarios para la
emisión de resultados confiables y fundamentados por medio de documentos que
estén basados en diferentes sistemas de gestión de calidad (NTC-ISO
9000:2000).
2.5. Sistema de gestión de calidad.
Hace referencia a un conjunto de elementos que se relacionan entre sí en una
organización, con el propósito de establecer la administración de la misma,
estructurando la jerarquía, estableciendo responsabilidades y detallando la
manera adecuada de cómo llevar a cabo una actividad (NTC-ISO 9000:2000). Un
sistema de gestión de calidad se apoya en diferentes documentos con el fin de
recopilar la información necesaria, siguiendo normas de calidad (Londoño, 2007).
2.6. Documentación.
La documentación es el seguimiento de los procesos de una organización, o la
estructura de la misma, cumple con el objetivo de organizar toda información que
haga parte de esta, con el fin de garantizar la calidad del trabajo realizado. Así
mismo, esta debe cumplir con una estructura que proporcione una mejor
distribución, organización y descripción de las actividades que se lleven a cabo
dependientes de la capacidad y la competencia del personal de la organización
(ISO 10013, 2003). Se pueden evaluar 3 niveles básicos para el uso adecuado e
implementación de la documentación en donde se encuentran documentos
técnicos que detallan la realización del proceso y el registro de los resultados,
como el desarrollo de la información que se debe proporcionar para llevar a cabo
cada uno de los procesos (Gil & Rojas, 2012).
2.7. Documentación de Sistema de Calidad.
La documentación de un sistema de calidad se fundamenta en la realización de
Buenas Prácticas de Laboratorio definiendo parámetros que ayuden con el buen
funcionamiento del Laboratorio. Entre la documentación que se implementa en un
laboratorio se encuentran normas, instrucciones, guías, gráficos, catálogos,
informes, entre otros (ISO 10013:2003). Toda esta documentación hace referencia
a como un laboratorio debe desempeñar las actividades que en este se
desarrollan y poder definir la calidad en la emisión de resultados confiables.
2.8. Procedimientos documentados.
Se refiere al formato de los procedimientos, es decir la forma de organizar la
información relacionada con estos, llevando a cabo una serie de textos,
diagramas, o especificaciones según lo demande el procedimiento a documentar
proveyendo la información necesaria con el fin de estandarizar dicha actividad, y
determinando el desarrollo de la misma de una manera organizada y definida (ISO
10013, 2003).
2.9. POE (procedimiento operativo estándar).
Los procedimientos operativos estándar, documentan de forma detallada la
elaboración de procedimientos que se realizan en un laboratorio, no solo con el fin
de garantizar la calidad de los mismos, sino también la reproducibilidad, la
homogeneidad y estandarización de las actividades que hacen parte del
procedimiento, con el fin de evitar fallas y garantizar la correcta elaboración (ISO
10013.2003).
2.10. Instructivos.
Las instrucciones de trabajo son todas aquellas pautas adaptables al laboratorio
que se deben tener en cuenta en el desarrollo de una actividad, capacitando al
personal que se encuentra a cargo de ella con el fin de evaluar las afectaciones
que estas tengan durante la realización del trabajo, como la evaluación y
disminución de fallas a través del mismo. Haciendo referencia a la descripción
detallada de la actividad, y brindando la información necesaria (ISO 10013.2003).
2.11. Formatos de registros.
Son una herramienta descriptiva de apoyo a las actividades que se describen
dentro del procedimiento documentado, cumpliendo la función de organizar y
archivar información necesaria que defina el desarrollo y los elementos que cada
proceso demande (ISO 10013: 2003).
3. JUSTIFICACIÓN.
El Cepario de Hongos perteneciente a la Colección de Microorganismos de la
Pontificia Universidad Javeriana lleva a su cargo una serie de actividades que se
desarrollan en torno a la conservación, reactivación, caracterización e
identificación, y mantenimiento de cepas de Hongos.
Actualmente el Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana, cuenta
con instalaciones y personal altamente calificado para cumplir con el desarrollo
óptimo de las actividades que se desarrollan en este. Pero a su vez no cuenta con
una documentación clara que recopile toda aquella información que ayude con
una manera adecuada y homogénea de realizar los procedimientos en el
Laboratorio.
Con este fin se desea elaborar un diseño jerárquico de la documentación
necesaria para un óptimo desarrollo en el Laboratorio, diseñando los diferentes
procedimientos operativos estándar, instructivos y formatos de registros que
mantengan el buen funcionamiento del Cepario.
4. OBJETIVOS
4.1. Objetivo general.
Diseñar la estructura documental de los procedimientos operativos estándar,
instructivos, y formatos de registro del Cepario de Hongos de la Pontificia
Universidad Javeriana.
4.2. Objetivos específicos.
4.2.1. Diseñar los procedimientos operativos estándar del Cepario de Hongos
de la Pontificia Universidad Javeriana
4.2.2. Documentar los instructivos de las actividades derivadas de los
procedimientos operativos estándar del Cepario de Hongos de la
Pontificia Universidad Javeriana.
4.2.3. Diseñar los formatos de registro para la transferencia de cepas y hojas
de vida de los Microorganismos pertenecientes al Cepario de Hongos de
la Pontificia Universidad Javeriana.
5. METODOLOGIA.
5.1. Estructuración de los elementos documentales. (Que son
necesarios en el Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana).
En el diseño de la estructura jerárquica de la documentación necesaria para el
buen funcionamiento del Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana, es necesario llevar a cabo una recopilación de la información que se
maneja en este, sus funciones y las personas que están a cargo de desarrollar
dichas funciones. Con el fin de desarrollar de una manera adecuada las
actividades llevadas a cabo en el Cepario de Hongos y mantener el orden, la
seguridad y el flujo de información del mismo.
5.2. Elaboración de los procedimientos operativos estándar.
5.2.1. Recopilación de información de las actividades y demás elementos
necesarios para llevar a cabo el desarrollo de los procedimientos
operativos estándar. (Dentro de los elementos es importante definir
principalmente el personal a cargo de cada una de las actividades
realizadas en el Cepario de Hongos, equipos, y material)
5.2.2. Determinar objetivos, alcance y frecuencia del procedimiento operativo
estándar a documentar.
5.2.3. Puntualizar definiciones, procedimiento y metodología con el fin de
garantizar la homogeneidad en el procedimiento operativo estándar.
5.2.4. Organizar la información recopilada en un formato.
5.2.5. Documentar el procedimiento operativo estándar.
5.3. Elaboración de instructivos.
5.3.1. Determinación de las actividades derivadas de los procedimientos
operativos estándar que requieran de instructivos dentro del Cepario de
Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
5.3.2. Estandarización de las actividades de las cuales se va a realizar el
instructivo.
5.3.3. Organización de la información.
5.3.4. Documentación del instructivo.
5.4. Elaboración de formato de registro.
5.4.1. Determinar el formato a realizar dentro del Cepario de hongos de la
Pontificia Universidad Javeriana.
5.4.2. Diseñar el formato de registro.
6. PROCEDIMIENTO OPERATIVO ESTANDAR (P.O.E).
6.1. REACTIVACIÓN DE CEPAS DEL BANCO PRIMARIO Y
VERIFICACIÓN DE PUREZA.
6.1.1. OBJETIVO.
Ejecutar procedimientos para llevar a cabo la correcta reactivación de Cepas de
Hongos, cumpliendo con procedimientos para su manipulación, que garanticen su
pureza y viabilidad posterior a su reactivación.
6.1.2. ALCANCE.
Es aplicable a cepas de hongos conservados y que hagan parte del banco
primario del Cepario de Hongos de la Colección de Microorganismos de la
Pontificia Universidad Javeriana.
6.1.3. DEFINICIONES.
6.1.3.1. Colección de Microorganismos: Se define como una entidad sin
ánimo de lucro según el decreto Real 1716/2011, que acoge
Colecciones de característica biológicas y aprobado por el Banco
Nacional de cepas (Lozano. 2012).
6.1.3.2. Banco de referencia: Hace referencia a los microorganismos
definidos, por lo menos a nivel de género y especie, mediante
pruebas Bioquímicas, morfológicas y moleculares estandarizadas
(ISO11133-1:2000).
6.1.3.3. Pureza: Es la determinación garantizada por medio de repiques
sucesivos en diferentes medios de cultivos (véase instructivo de
medios de cultivo), con el fin de asegurar que el microorganismo
está en un cultivo puro (Cahuasqui, 2011).
6.1.3.4. Viabilidad: Es la capacidad de un Microorganismo de multiplicarse
en un medio sólido (Giraldo, 2012). Esto implica el uso de diferentes
métodos en donde se evalúa de forma cualitativa el crecimiento de
un microorganismo sobre un Agar durante un periodo de tiempo o de
forma cuantitativa determinando en cantidades la concentración del
mismo (Davey, 2011).
6.1.4. FUNDAMENTO.
Este procedimiento se fundamenta en la aplicación de metodologías
estandarizadas para la reactivación de Cepas de Hongos que pertenecen al
Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
6.1.5. CONDICIONES GENERALES.
6.1.5.1. FRECUENCIA.
Este procedimiento se deberá realizar cuando se realice la reactivación y
verificación de pureza y viabilidad de las Cepas de Hongos, por lo menos una vez
al año.
6.1.5.2. MATERIALES
6.1.5.2.1. MEDIOS DE CULTIVOS.
Medios de cultivo (véase instructivo de medios de cultivo).
Criotubos estériles.
Láminas porta objetos para microscopía.
Laminillas cubre objetos para microscopía.
6.1.5.2.2. REACTIVOS.
Azul de lactofenol.
6.1.5.2.3. EQUIPOS.
Cabina de flujo laminar.
Microscopio (véase instructivo de uso de Microscopio).
Micropipetas graduadas.
6.1.6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO.
RESPONSABLE
No. DESCRIPCIÓN UNIDAD CARGO
1. Siembra en los medios de cultivos
determinados para cada uno de los
Microrganismos (Véase instructivo
de Medios de cultivo), haciendo uso
de la Cabina de flujo laminar.
Cepario de
Hongos
Profesional I
2. Haciendo uso de la incubadora,
incubar a 25°C
Cepario de
Hongos
Profesional I
3. Dejar por un periodo de una hora, una
caja con medio abierta e incubar a 25
°C.
Cepario de
Hongos
Profesional I
4. Incubar el medio seleccionado a una
temperatura de 25°C, sin realizar
siembra y observar cada 24 horas
Cepario de
Hongos
Profesional I
5. Revisar la siembra cada día (12
horas), para verificar que no haya
contaminación de tipo bacteria u
Hongo.
Cepario de
Hongos
Profesional I
6. Observar las características de
crecimiento visibles, en la caja de
Petri.
Cepario de
Hongos
Profesional I
7. Observar las características por medio
del montaje de láminas utilizando azul
de lactofenol. Hacer uso de claves
taxonómicas para la verificar y
asegurar la pureza de Cepas.
Cepario de
Hongos
Profesional I
6.1.7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Instructivo de Medios de Cultivos
Instructivo para el uso correcto del funcionamiento del Microscopio.
6.1.8. ANEXOS.
Instructivo de medios de cultivo.
Procedimiento operativo estándar para conservación de Cepas de Hongos.
Procedimiento operativo estándar de verificación de pureza
6.2. SIEMBRAS PARA DOCENCIA.
6.2.1. OBJETIVO.
Realizar un procedimiento estandarizado para la manipulación del material con
fines de prestar servicios de docencia, solicitado por cada una de las
asignaturas que necesitan cepas de hongos, dictadas en la Pontificia
Universidad Javeriana.
6.2.2. ALCANCE.
Va dirigido a cada una de las asignaturas dictadas en la Pontificia Universidad
Javeriana que requieran en uso de Cepas de Hongos para su manipulación
con fines de docencia.
6.2.3. DEFINICIONES.
6.2.3.1. Hongos: Microorganismo Eucariota, unicelulares o pluricelulares y
presentan nutrición por absorción (Prats, 2006). Su reproducción se
da por micelio, esporas o conidias. Capaces de realizar diferentes
procesos de biorremediación en la naturaleza por la segregación de
enzimas. Presentan una amplia variabilidad morfológica, se clasifican
en Levaduras y Hongos Filamentosos, se pueden encontrar en la
naturaleza de forma macroscópica y microscópica, siendo un
componente esencial para el ecosistema como protagonistas del
ciclaje de nutrientes en el suelo (Moore-Landecker, 1996).
6.2.3.2. Levaduras: organismos heterótrofos que precisan de una fuente de
energía orgánica, unicelulares y no filamentosos. Su morfología es
ovoide, de gran tamaño aproximadamente 3 a 8 µm, con una amplia
biodiversidad en la naturaleza se encuentran distribuidas en el suelo,
los alimentos, ambientes acuáticos, entre otros (García, 2004),
capaces de crecer en ambientes de microaerofilia o aerobio, y
poseen un amplio interés al ser utilizadas en la industria (Ramírez,
2011).
6.2.3.3. Hongos filamentosos: Microorganismos eucariotas, aerobios
facultativos, su reproducción está dada por esporas de manera
sexual o asexual, denominado Hongo filamentoso, por la presencia
de su estructura hifal, el cual al agregarse forma un conjunto de hifas
denominado micelio que le permiten tomar los nutrientes necesarios
para su crecimiento y adaptándose fisiológicamente a diferentes
ambientes, con un alto interés a nivel ambiental, de salud, industrial
entre otros (Cifuentes & Espinosa, 2008).
6.2.3.4. Docencia: Hace referencia a la actividad que promueve
conocimiento, ejecutado por un docente capaz de llevar a cabo
diferentes actividades de acumulación de diversos saberes
enfocándose en establecer conocimiento y enseñanza al estudiante,
mediante procesos educativos y de información garantizada (Pavié,
2011).
6.2.4. FUNDAMENTO.
Dicho procedimiento se basa en la correcta manipulación de cada una de las
Cepas que se encuentran en el Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana, garantizando la utilización de las mismas en fines de docencia que
conlleven a responder a las necesidades solicitadas por el Docente a cargo, para
brindar bases confiables y visibles en la educación de los estudiantes.
6.2.5. CONDICIONES GENERALES.
6.2.5.1. FRECUENCIA.
Este procedimiento se debe realizar cada vez que se requiera prestar un servicio
de docencia donde se solicite material proveniente del cepario de Hongos de la
Pontificia Universidad Javeriana.
6.2.5.2. MATERIALES
6.2.5.2.1. MEDIOS DE CULTIVOS.
Medios de cultivo (véase instructivo de medios de cultivo).
Láminas porta objetos para microscopía.
Laminillas cubre objetos para microscopía.
6.2.5.2.2. REACTIVOS.
Azul de lactofenol.
6.2.5.2.3. EQUIPOS.
Cabina de flujo laminar.
Microscopio (véase instructivo de uso de Microscopio).
6.2.6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO.
RESPONSABLE
No. DESCRIPCIÓN UNIDAD CARGO
1. Realizar un cronograma, con el fin de
realizar la programación de siembras.
Cepario de
Hongos
Monitor
2. Recepción del material solicitado a
Monitoria, utilizado en actividades de
docencia y solicitado con anterioridad.
Cepario de
Hongos
Monitor
3. Utilizando la cabina de flujo laminar se
realizan las siembras programadas. Se
debe sembrar con al menos 15 días de
Cepario de
Hongos
Monitor
anterioridad, o de acuerdo a los
requerimientos del Docente
4. Incubar a 25°C haciendo uso de la
incubadora, así mismo realizar
controles de calidad del
funcionamiento de la incubadora y de
los medios de cultivos utilizados con el
fin de garantizar la pureza del cultivo.
Cepario de
Hongos
Monitor /
Supervisión del
Profesional I.
5. Evaluar que las características propias
de las Cepas solicitadas se mantengan
durante el periodo de incubación.
Cepario de
Hongos
Monitor /
Supervisión del
Profesional I.
6. Garantizar mediante las
características macroscópicas y el
montaje de láminas para microscopía
la pureza de la Cepa y sus
características.
Cepario de
Hongos
Monitor /
Supervisión del
Profesional I.
7. Empacar las cepas solicitas para ser
utilizadas con fines de docencia y
almacenar a temperatura ambiente
hasta el momento de la entrega.
Cepario de
Hongos
Monitor
8. Con ayuda de un formato de registro,
realizar la entrega de las cepas
solicitadas a la persona encargada que
designe el profesor para recogerlas.
Cepario de
Hongos
Monitor /
Supervisión del
Profesional I.
6.2.7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Instructivo de Medios de Cultivos
Instructivo para el uso correcto funcionamiento del Microscopio.
Formato de registro para la entrega de Cepas de Docencia.
6.2.8. ANEXOS.
Instructivo de medios de cultivo.
Procedimiento operativo estándar de verificación de pureza.
Formato de registro para la entrega de Cepas de Docencia.
6.3. CONFIRMACIÓN DE PUREZA EN CEPAS DE HONGOS DEL
CEPARIO DE HONGOS DE LA PONTIFICIA UNIVERSIDAD
JAVERIANA.
6.3.1. OBJETIVO.
Tiene como fin garantizar la pureza de cepas de hongos de la Pontificia
Universidad Javeriana, mediante la utilización de claves taxonómicas, y pruebas
bioquímicas (hongos levaduriformes), determinando que la cepa evaluada esté
correctamente identificada, caracterizada y libre de contaminantes de tipo bacteria
y/o hongo.
6.3.2. ALCANCE.
Está diseñado para ser utilizado en cepas de hongos del Cepario de Hongos de la
Pontificia Universidad Javeriana que sean utilizados en cualquier actividad
prestada por este.
6.3.3. DEFINICIONES.
6.3.3.1. Hongos: Microorganismo Eucariota, unicelulares o pluricelulares y
presentan nutrición por absorción (Prats, 2006). Su reproducción se
da por micelio, esporas o conidias. Capaces de realizar diferentes
procesos de biorremediación en la naturaleza por la segregación de
enzimas. Presentan una amplia variabilidad morfológica, se clasifican
en Levaduras y Hongos Filamentosos, se pueden encontrar en la
naturaleza de forma macroscópica y microscópica, siendo un
componente esencial para el ecosistema como protagonistas del
ciclaje de nutrientes en el suelo (Moore-Landecker, 1996).
6.3.3.2. Levaduras: organismos heterótrofos que precisan de una fuente de
energía orgánica, hongos unicelulares, no filamentosos. Su
morfología es ovoide, de gran tamaño aproximadamente 3 a 8 µm,
con una amplia biodiversidad en la naturaleza se encuentran
distribuidas en el suelo, los alimentos, ambientes acuáticos, entre
otros (García, 2004), capaces de crecer en ambientes de
microaerofilia o aerobio, y poseen un amplio interés al ser utilizadas
en la industria (Ramírez, 2011).
6.3.3.3. Hongos filamentosos: Microorganismos eucariotas, aerobios
facultativos, su reproducción está dada por esporas de manera
sexual o asexual, denominado Hongo filamentoso, por la presencia
de su estructura hifal, que forma agregados denominados micelio
que le permiten tomar los nutrientes necesarios para su crecimiento
y adaptándose fisiológicamente a diferentes ambientes, con un alto
interés a nivel ambiental, de salud, industrial entre otros (Cifuentes &
Espinosa, 2008).
6.3.3.4. Pureza: Hace referencia al desarrollo de microorganismos de un
mismo tipo que se originan a partir de una sola célula (Peñaranda,
2003), por medio de diferentes técnicas que determinan el
crecimiento homogéneo en diferentes medios de cultivos (véase
instructivo de medios de cultivo), con el fin de asegurar que el
microorganismo está en un cultivo puro (Cahuasqui, 2011).
6.3.3.5. Clave taxonómica: Hace referencia a un procedimiento
metodológico que guía en la identificación y caracterización de una
especie según su morfología tanto microscópica como
macroscópica, dando a conocer de manera establecida y adecuada
según la información necesaria y obtenida en una investigación que
se haya realizado previamente, que garantice la caracterización
correcta de especie a analizar (Borges & Moreno, 2004).
6.3.4. FUNDAMENTOS
Se fundamenta en el uso de técnicas, metodologías estandarizadas, material
educativo y de investigación para la verificación de pureza en Cepas de Hongos
que pertenecen al Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
6.3.5. CONDICIONES GENERALES.
6.3.5.1. FRECUENCIA.
El procedimiento de verificación de pureza deberá ser aplicado a las cepas de
hongos que pertenezcan al Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana, antes de ser entregados como servicios de docencia y/o investigación,
o cuando se realice una metodología de conservación de la cepa o una vez al año
como verificación del funcionamiento del banco de conservación (ver
procedimiento operativo estándar de conservación).
6.3.5.2. MATERIALES Y/O EQUIPOS.
6.3.5.2.1. MEDIOS DE CULTIVOS.
Medios de cultivo (véase instructivo de medios de cultivo).
Láminas porta objetos para microscopía.
Laminillas cubre objetos para microscopía.
6.3.5.2.2. REACTIVOS.
Azul de lactofenol.
6.3.5.2.3. EQUIPOS.
Cabina de flujo laminar.
Microscopio (véase instructivo de uso de Microscopio).
6.3.6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN UNIDAD CARGO
1 Siembra en los medios de cultivos determinados
para cada uno de los Microrganismos (Véase
instructivo de Medios de cultivo), haciendo
uso de la Cabina de flujo laminar.
Cepario de
Hongos
Profesional I
2 Incubar a 25°C por 7 días. Cepario de
Hongos
Profesional I
3 Dejar por un periodo de una hora, una caja con
medio abierta en la cabina de flujo laminar e
incubar a 25 °C, con el fin de realizar controles
de calidad de la cabina de flujo laminar.
Cepario de
Hongos
Profesional I
4 Incubar el medio seleccionado a una
temperatura de 25°C, sin realizar siembra y
observar cada 24 horas, para realizarle controles
de calidad a los medios de cultivos utilizados.
Cepario de
Hongos
Profesional I
5 Revisar la siembra cada día (12 horas), para
verificar pureza periódicamente, durante su
periodo de incubación y garantizar que no haya
contaminación de tipo bacteria u hongo.
Cepario de
Hongos
Profesional I
6 Realizar una caracterización macroscópica
detallada del crecimiento en cada uno de los
medios repicados con el fin de identificar que el
crecimiento sea homogéneo de un medio al otro
Cepario de
Hongos
Profesional I
7 Observar las características microscópicas
(Véase instructivos del uso del microscopio),
por medio del montaje de láminas utilizando azul
Cepario de
Hongos
Profesional I
de lactofenol. Hacer uso de claves taxonómicas
para verificar y asegurar la pureza de Cepas.
8 Realizar pruebas bioquímicas estandarizadas,
complementarias para levaduras (Pruebas
metabólicas de fermentación y asimilación de
hidratos de carbono, prueba de ureasa, prueba
de reducción de nitratos (Prats, 2006), y
pruebas comerciales como el Rapid Yeast
identification Microscan (Linares & Cuestas,
2007)).
Cepario de
Hongos
Profesional I
9 Uso de claves taxonómicas con el fin de
verificar la pureza de la cepa evaluada.
Cepario de
Hongos
Profesional I
6.3.7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA.
Instructivo de Medios de Cultivos
Instructivo para el uso correcto del funcionamiento del Microscopio.
Formato de registro para la entrega de Cepas de Docencia.
6.3.8. ANEXOS.
Instructivo de medios de cultivo.
Procedimiento operativo estándar de verificación de pureza.
Formato de registro para la entrega de Cepas de Docencia
6.4. MANTENIMIENTO DEL BANCO DE TRABAJO DE LA CEPAS DE
HONGOS PERTENECIENTES AL CEPARIO DE HONGOS DE LA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA.
6.4.1. OBJETIVO.
Realizar procedimientos para llevar a cabo el correcto mantenimiento de Cepas de
Hongos del banco primario del Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana, con el fin de garantizar el correcto funcionamiento del mismo, mediante
el cumplimiento de procedimientos para su manipulación, que garanticen su
pureza y viabilidad.
6.4.2. ALCANCE.
Es aplicable a cepas de hongos que hagan parte del banco primario del Cepario
de Hongos de la Colección de Microorganismos de la Pontificia Universidad
Javeriana.
6.4.3. DEFINICIONES.
6.4.3.1. Colección de Microorganismos: Se define como una entidad sin
ánimo de lucro según el decreto Real 1716/2011, que acoge
Colecciones de característica biológicas y aprobado por el Banco
Nacional de cepas (Lozano, 2012).
6.4.3.2. Banco de referencia: Hace referencia a los microorganismos
definidos, por lo menos a nivel de género y especie, mediante
pruebas bioquímicas, morfológicas y moleculares estandarizadas
(ISO11133-1:2000).
6.4.3.3. Pureza: Hace referencia al desarrollo de microorganismos de un
mismo tipo que se originan a partir de una sola célula (Peñaranda,
2003), por medio de diferentes técnicas que determinan el
crecimiento homogéneo en diferentes medios de cultivos (véase
instructivo de medios de cultivo), con el fin de asegurar que el
microorganismo está en un cultivo puro (Cahuasqui, 2011).
6.4.3.4. Viabilidad: Es la capacidad de un Microorganismo de multiplicarse
en un medio sólido (Giraldo, 2012). Esto implica el uso de diferentes
métodos en donde se evalúa de forma cualitativa el crecimiento de
un microorganismo sobre un medio agarizado durante un periodo de
tiempo o de forma cuantitativa determinando en cantidades la
concentración del mismo (Davey, 2011).
6.4.4. FUNDAMENTOS.
Este procedimiento se fundamenta en la correcta manipulación de las Cepas de
Hongos, con el fin de mantener su pureza y viabilidad y de garantizar un correcto
funcionamiento del cepario de hongos perteneciente a la Pontificia Universidad
Javeriana.
6.4.5. CONDICIONES GENERALES.
6.4.5.1. FRECUENCIA.
El procedimiento de manteniendo de cepas de Banco primario deberá ser aplicado
a las cepas de hongos que pertenezcan al Cepario de Hongos de la Pontificia
Universidad Javeriana, de forma periódica (cada 6 a 12 meses) para garantizar la
pureza y viabilidad de la cepas que pertenezcan al cepario de hongos con el fin de
llevar un correcto funcionamiento del banco de trabajo.
6.4.5.2. MATERIALES Y/O EQUIPOS.
6.4.5.2.1. MEDIOS DE CULTIVOS.
Medios de cultivo (véase instructivo de medios de cultivo).
Láminas porta objetos para microscopía.
Laminillas cubre objetos para microscopía.
6.4.5.2.2. REACTIVOS.
Azul de lactofenol.
6.4.5.2.3. EQUIPOS.
Cabina de flujo laminar.
Microscopio (véase instructivo de uso de Microscopio).
6.4.6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN UNIDAD CARGO
1. Siembra periódicas (6 a 12 meses), en los
medios de cultivos determinados para cada
uno de los Microrganismos (Véase
instructivo de Medios de cultivo),
haciendo uso de la Cabina de flujo laminar.
Cepario de
Hongos
Profesional I
2. Incubar a 25 °C por 7 días para que la cepa
desarrolle su óptimo crecimiento.
Cepario de
Hongos
Profesional I
3. Dejar por un periodo de una hora, una caja
con medio abierta en la cabina de flujo
laminar e incubar a 25°C, con el fin de
realizar controles de calidad de la cabina de
flujo laminar.
Cepario de
Hongos
Profesional I
4. Incubar el medio seleccionado a una
temperatura de 25°C, sin realizar siembra y
observar cada 24 horas, para realizarle
Cepario de
Hongos
Profesional I
controles de calidad a los medios de cultivos
utilizados.
5. Observar las características macroscópicas
de crecimiento visibles, en la caja de Petri.
Cepario de
Hongos
Profesional I
6. Observar las características microscópicas
por medio del montaje de láminas utilizando
azul de lactofenol. Hacer uso de claves
taxonómicas para verificar y asegurar la
pureza de Cepas.
Cepario de
Hongos
Profesional I
7. Realizar pruebas bioquímicas
estandarizadas, complementarias para
levaduras (Pruebas metabólicas de
fermentación y asimilación de hidratos de
carbono, prueba de ureasa, prueba de
reducción de nitratos (Prats, 2006)), y
pruebas comerciales como el Rapid Yeast
identification Microscan (Linares & Cuestas,
2007)).
Cepario de
Hongos
Profesional I
8. Uso de claves taxonómicas con el fin de
verificar la pureza de la cepa evaluada.
Cepario de
Hongos
Profesional I
9. Realizar procedimientos de conservación
(ver procedimiento operativo estándar de
conservación de cepas).
Cepario de
Hongos
Profesional I
6.4.7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Instructivo de Medios de Cultivos
Instructivo para el uso correcto del funcionamiento del Microscopio.
Procedimiento operativo estándar de conservación de cepas.
6.4.8. ANEXOS
Instructivo de medios de cultivo.
Procedimiento operativo estándar para conservación de Cepas de Hongos.
Procedimiento operativo estándar de verificación de pureza
6.5. CONSERVACION POR CONGELACIÓN DE HONGOS
FILAMENTOSOS Y LEVADURIFORMES PERTENECIENTES A LA
COLECCIÓN DE MICROORGANISMOS DEL CEPARIO DE HONGOS.
6.5.1. OBJETIVO.
Determinar procedimientos para la conservación de Hongos filamentosos y
levaduriformes pertenecientes al cepario de hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana.
6.5.2. ALCANCE.
Este Procedimiento Operativo Estándar se diseñó con la finalidad de realizar la
conservación de hongos Filamentosos y Levaduriformes que pertenecen al
cepario de hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
6.5.3. DEFINICIONES.
6.5.3.1. Conservación: Hace referencia al mantenimiento de cepas por
periodos de tiempos a corto, mediano y largo plazo con el fin de
preservar una colección de microorganismos a través del tiempo. La
elección del método de conservación está ligada a diferentes
factores que garantizan la pureza, la viabilidad y estabilidad de la
misma. Con el fin de detener el crecimiento de las células del
microorganismo conservado, pero sin detener su metabolismo.
Existen diferentes tipos de conservación; entre los que se encuentra
como método de conservación a largo plazo, la congelación, que
utiliza un crio conservante como el glicerol evitando el daño a la
célula producida durante la congelación (Alarcon, 2006).
6.5.3.2. Colección de Microorganismos: Se define como una entidad sin
ánimo de lucro según el decreto Real 1716/2011, que acoge
Colecciones de característica biológicas y aprobado por el Banco
Nacional de cepas (Lozano, 2012).
6.5.3.3. Hongos: Microorganismo Eucariota, unicelulares o pluricelulares que
presentan nutrición por absorción (Prats, 2006). Su reproducción se
da por micelio, esporas o conidias. Capaces de realizar diferentes
procesos de biorremediación en la naturaleza por la segregación de
enzimas. Presentan una amplia variabilidad morfológica, se clasifican
en Levaduras y Hongos Filamentosos, se pueden encontrar en la
naturaleza de forma macroscópica y microscópica, siendo un
componente esencial para el ecosistema como protagonistas del
ciclaje de nutrientes en el suelo (Moore-Landecker, 1996).
6.5.3.4. Levaduras: organismos heterótrofos que precisan de una fuente de
energía orgánica, hongos unicelulares, no filamentosos. Su
morfología es ovoide, de gran tamaño aproximadamente 3 a 8 µm,
con una amplia biodiversidad en la naturaleza se encuentran
distribuidas en el suelo, los alimentos, ambientes acuáticos, entre
otros (García, 2004), capaces de crecer en ambientes de
microaerofilia o aerobio, y poseen un amplio interés al ser utilizadas
en la industria (Ramírez, 2011).
6.5.3.5. Hongos filamentosos: Microorganismos eucariotas, aerobios
facultativos o anaerobios, su reproducción está dada por esporas de
manera sexual o asexual, denominado hongo filamentoso, por la
presencia de su estructura hifal, que forma agregados denominados
micelio que le permiten tomar los nutrientes necesarios para su
crecimiento y adaptándose fisiológicamente a diferentes ambientes,
con un alto interés a nivel ambiental, de salud, industrial entre otros
(Cifuentes & Espinosa, 2008).
6.5.4. FUNDAMENTOS.
Se fundamenta en la aplicación de técnicas estandarizadas de conservación por
congelación de hongos filamentosos que garanticen su mantenimiento a través del
tiempo, teniendo en cuenta; la viabilidad del microorganismo, la pureza, y la
estabilidad genética de la célula (Peñaranda, 2003).
6.5.5. CONDICIONES GENERALES
6.5.5.1. FRECUENCIA
Este procedimiento se debe llevar a cabo cada vez que se realice la conservación
por congelación para cepas de hongos filamentosos y levaduriformes.
6.5.5.2. MATERIALES Y/O EQUIPOS.
6.5.5.2.1. MEDIOS DE CULTIVOS.
Medios de cultivos (ver instructivos de medios de cultivos)
Medio líquido YPG para levaduras
6.5.5.2.2. MATERIALES.
Micropipetas de 10 µl y 100 – 1000 µl
Puntas azules
Crioviales
Puntas amarillas
Láminas porta objetos para microscopía.
Laminillas cubre objetos para microscopía.
6.5.5.2.3. REACTIVOS.
Agua destilada estéril con glicerol al 20%
Agua estéril
6.5.5.2.4. EQUIPOS
Microscopio óptico
Incubadora
Cabina de flujo laminar
6.5.6. DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO.
6.5.6.1. HONGOS FILAMENTOSOS.
RESPONSABLES
No. DESCRIPCIÓN UNIDAD CARGO
1. Siembra por punción central del hongo
filamentoso en las cajas con el Agar
seleccionado (ver instructivo de medios de
cultivos).
Cepario de
hongos
Profesional I
2. Incubar por 7 días a 25°C Cepario de
hongos
Profesional I
3. Verificar las características microscópicas
(ver instructivo del uso del microscopio)
Cepario de
hongos
Profesional I
4.
Verificar características macroscópicas. Cepario de
hongos
Profesional I
5. Pasados los días de incubación del hongo y
con ayuda de una punta amarilla realizar
perforaciones del agar
Cepario de
hongos
Profesional I
6. Transferir 4 discos a cada crioviales con 1 ml
de agua destilada con glicerol al 20%
Cepario de
hongos
Profesional I
7. Congelar los crioviales a – 80° C Cepario de
hongos
Profesional I
8. Evaluación de la viabilidad y de la pureza del
método de conservación mediante la siembra
de los discos en diferentes medios de
Cepario de
hongos
Profesional I
cultivos
6.5.6.2. LEVADURAS.
1. Realizar la siembra masiva de la levadura en
Agar YPG
Cepario de
hongos
Profesional I
2. Incubar por 7 días a 37°C Cepario de
hongos
Profesional I
3. Verificar las características microscópicas (ver
instructivo del uso del microscopio)
Cepario de
hongos
Profesional I
4. Verificar características macroscópicas. Cepario de
hongos
Profesional I
5. Pasado el tiempo de incubación y posterior a la
verificación de la pureza (ver procedimiento
operativo estándar de confirmación de pureza),
dividir la caja de Petri por la mitad
Cepario de
hongos
Profesional I
6. Transferir con ayuda de un asa plástica estéril
las colonias previamente crecidas a un criovial
con medio de cultivo líquido YPG con glicerol al
20%.
Cepario de
hongos
Profesional I
7. Congelar los crioviales a – 80° C Cepario de
hongos
Profesional I
8. Evaluación de la viabilidad y de la pureza del
método de conservación mediante la siembra de
los discos en diferentes medios de cultivos
Cepario de
hongos
Profesional I
6.5.6.3. Cálculos.
Por criovial el volumen final es de 1 ml, se utiliza glicerol al 20%, la cantidad a
glicerol utilizado en cada criovial es de 0.2 ml y se completa con 0.8 ml de agua
destilada, igualmente con el agar líquido YPG.
6.5.7. DOCUMENTOS DE REFERENCIA
Instructivos de medios de cultivos
Instructivo de uso de microscopio
Procedimiento operativo estándar de confirmación de pureza
6.5.8. ANEXOS
Instructivos de medios de cultivos
Instructivo de uso de microscopio
Procedimiento operativo estándar de confirmación de pureza
7. INSTRUCTIVOS.
7.1. USO DE CABINA DE FLUJO LAMINAR.
7.1.1. OBJETIVO.
Establecer actividades estandarizadas para el uso correcto de la cabina de
flujo laminar del Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
7.1.2. DEFINICIONES.
7.1.2.1. Cabina de flujo laminar: Es un sistema cerrado estéril, evitando así
la contaminación del aire por medio del uso de filtros HEPA que
retiene partículas de 0,3 micras y un sistema de ventilación a una
velocidad 5m/seg, utilizado para la mantener la esterilidad de las
diferentes actividades realizadas en un laboratorio (López y Díaz,
2005).
7.1.2.2. Esterilidad: Hace referencia al proceso de destrucción por diferentes
agentes químicos y físicos de microorganismos en un medio o el
medio ambiente (García, 2005).
7.1.2.3. Bactoincinerador: instrumento utilizado para esterilizar por calor o
luz infrarroja, instrumentos de un laboratorio como asas
microbiológicas, disminuyendo o evitando la contaminación, tiene
una longitud de 150 mm con un agujero en el centro de 14 mm
donde su temperatura puede elevarse a 825°C (DISCORLAB).
7.1.3. CONDICIONES GENERALES.
7.1.3.1. FRECUENCIA.
Este instructivo debe ser implementado, cuando se realicen siembras, se verifique
pureza de medios o algún montaje que requiera de esterilidad.
7.1.3.2. MUESTRA.
Hongos filamentosos y levaduriformes.
7.1.4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO.
7.1.4.1. Antes del inicio del trabajo.
I. Conectar la cabina de flujo laminar.
II. Limpiar la superficie de la cabina de flujo laminar con alcohol al 70%.
III. Encender la luz ultravioleta de 10 a 15 minutos.
IV. Dejar apagada la luz y no usar antes de 15 mins sin esta.
V. Colocar el material de trabajo (cajas de Petri con los diferentes medios
a utilizar, puntas, asas para sembrar, Etc)
VI. Encender la luz ultravioleta de 10 a 15 minutos.
7.1.4.2. Durante el trabajo.
I. Apagar la luz ultravioleta y esperar 15 minutos.
II. Encender la cabina de flujo laminar
III. Realizar el trabajo dentro de esta, de forma ordenada, no realizar
movimientos bruscos.
IV. Limpiar con alcohol al 70% constantemente.
V. En caso de no hacer uso de asas desechables, conectar el
bactoincinerador a los puntos de energía ubicados dentro de la cabina
de flujo laminar (habilitándolos previamente) y encender 5 a 10 minutos
antes de comenzar a hacer uso de este.
VI. Sacar el material contaminado y descartarlo.
7.1.4.3. Después de terminar el trabajo.
I. Realizar la limpieza la cabina de flujo laminar con alcohol al 70%.
II. Dejar 5 minutos encendida la cabina para no interrumpir de forma
brusca el flujo
III. Encender la luz ultravioleta por 15 minutos.
IV. Apagar la cabina de flujo laminar.
7.2. USO DEL MICROSCOPIO.
7.2.1. OBJETIVO.
Determinar actividades estandarizadas que indiquen el correcto uso del
microscopio.
7.2.2. DEFINICIONES.
7.2.2.1. Microscopio: Es un instrumento óptico que utiliza luz visible para
observar muestras pequeñas de forma detallada y fina, define
características a mayor tamaño que el de la muestra real (Tortora et
al., 2007).
7.2.2.2. Láminas portaobjetos: Pieza rectangular de vidrio delgada de 75
mm de largo por 25 mm de ancho, destinada para colocar la
preparación que va a ser observada (TP: LABORATORIO
QUÍMICO).
7.2.2.3. Laminillas cubreobjetos: Lámina de vidrio cuadrada y delgada de
75 mm de largo por 25 mm de ancho, utilizada para cubrir la muestra
o preparación para ser observada (TP: LABORATORIO QUÍMICO).
7.2.2.4. Objetivos: Lente que amplía la imagen de la muestra, resaltando
características detalladas de forma fina y de mejor resolución
(Tortora et al., 2007).
7.2.3. CONDICIONES GENERALES.
7.2.3.1. FRECUENCIA.
Esto debe ser llevado a cabo cada vez que se haga una preparación
microscópica, con el fin de observar las características de los hongos
pertenecientes al Cepario de Hongos de forma detallada.
7.2.3.2. MUESTRA.
Preparaciones microscópicas de los Hongos pertenecientes al Cepario de
Hongos en láminas portaobjetos (Ver instructivo de elaboración de láminas).
7.2.4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO.
I. Ubicar el microscopio sobre el área de trabajo previamente limpia y
ordenada.
II. Enchufar el microscopio a una toma de corriente eléctrica.
III. Encender el microscopio.
IV. Colocar el objetivo de menor aumento (4X).
V. Situar la lámina portaobjetos sobre la platina <Previamente con la
preparación microbiológica>. (ver instructivo de preparación de láminas).
VI. Graduar el haz de luz con el diafragma.
VII. Acercar el lente a la lámina portaobjetos haciendo uso del tornillo
macrométrico.
VIII. Obtener mejor nitidez con el uso del tornillo micrométrico.
IX. Pasar a los siguiente objetivos (10X, 40X y 100X), repitiendo los pasos
anteriores en cada uno de los objetivos.
X. Desmontar la preparación microbiológica.
XI. Apagar el microscopio.
XII. Realizar una limpieza cuidadosa del equipo.
7.3. ELABORACION DE LÁMINAS PARA MICROSCOPÍA.
7.3.1. OBJETIVO.
Realizar el montaje de láminas para microscopía.
7.3.2. DEFINICIONES.
7.3.2.1. Microscopio: Es un instrumento óptico que utiliza luz visible para
observar muestras pequeñas de forma detallada y fina, define
características a mayor tamaño que el de la muestra real (Tortora et
al, 2007).
7.3.2.2. Microscopía: Método utilizado para la observación de preparaciones
microscópicas (Villanueva, 1996).
7.3.2.3. Láminas portaobjetos: Pieza rectangular de vidrio delgada de 75
mm de largo por 25 mm de ancho, destinada para colocar la
preparación que va a ser observada (TP: LABORATORIO
QUÍMICO).
7.3.2.4. Laminillas cubreobjetos: Lámina de vidrio cuadrada y delgada de
75 mm de largo por 25 mm de ancho, utilizada para cubrir la muestra
o preparación para ser observada (TP: LABORATORIO QUÍMICO).
7.3.2.5. Objetivos: Lente que amplía la imagen de la muestra, resaltando
características detalladas de forma fina y de mejor resolución
(Tortora et al, 2007).
7.3.3. CONDICIONES GENERALES.
7.3.3.1. FRECUENCIA.
Este instructivo debe ser aplicado cada vez que se haga el montaje de una lámina
para microscopía.
7.3.3.2. MUESTRA.
Hongos levaduriformes y filamentosos pertenecientes al Cepario de Hongos de la
Pontificia Universidad Javeriana.
7.3.4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO.
I. Limpiar el área de trabajo con alcohol al 70%.
II. Limpiar la lámina cubreobjetos y la lámina portaobjetos con alcohol al
70%.
III. Marcar la lámina portaobjetos.
IV. Colocar una gota de azul de lactofenol.
V. Con ayuda de una aguja de siembra delgada tomar una muestra de la
parte más interna del hongo, previamente sembrado.
VI. Con ayuda de la lámina cubreobjetos situar la muestra sobre la gota de
azul de lactofenol.
Así mismo se puede realizar otra metodología alterna para la realización de
láminas como por el método de la impronta:
I. Se debe cortar un trozo de cinta transparente de aproximadamente 50
mm de largo.
II. Realizar una impresión del hongo sujetando los extremos del trozo de
cinta y dejando que el centro toque la parte más interna del hongo
sembrado.
III. Colocar el trozo de cinta previamente con la impresión y sobre la lámina
portaobjetos con la gota de azul de lactofenol
Finalmente se siguen los siguientes pasos en cualquiera de las metodologías.
I. Colocar la lámina cubre objetos.
II. Limpiar los excesos de azul de lactofenol.
III. Sellar la lámina
IV. Esperar que se seque la lámina
V. Realizar la observación al microscopio.
7.4. SELECCIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO.
7.4.1. OBJETIVO.
Determinar el correcto uso de Medios de Cultivo en las siembras realizadas en
el Cepario de Hongos de la Pontificia Universidad Javeriana.
7.4.2. DEFINICIONES.
7.4.2.1. Medio de cultivo: sustancia que permite el crecimiento de uno o
más microorganismos brindando los componentes nutricionales y
bajo condiciones de pH y temperatura necesarios para un óptimo
desarrollo (French & Helber, 1980).
7.4.2.2. Hongos: Microorganismo Eucariota, unicelulares o pluricelulares que
presentan nutrición por absorción (Prats, 2006). Su reproducción se
da por micelio, esporas o conidias. Capaces de realizar diferentes
procesos de biorremediación en la naturaleza por la segregación de
enzimas. Presentan una amplia variabilidad morfológica, se clasifican
en Levaduras y Hongos Filamentosos, se pueden encontrar en la
naturaleza de forma macroscópica y microscópica, siendo un
componente esencial para el ecosistema como protagonistas del
ciclaje de nutrientes en el suelo (Moore-Landecker, 1996).
7.4.2.3. Levaduras: organismos heterótrofos que precisan de una fuente de
energía orgánica, hongos unicelulares, no filamentosos. Su
morfología es ovoide, de gran tamaño aproximadamente 3 a 8 µm,
con una amplia biodiversidad en la naturaleza se encuentran
distribuidas en el suelo, los alimentos, ambientes acuáticos, entre
otros (García, 2004), capaces de crecer en ambientes de
microaerofilia o aerobio, y poseen un amplio interés al ser utilizadas
en la industria (Ramírez, 2011).
7.4.2.4. Hongos filamentosos: Microorganismos eucariotas, aerobios
facultativos, su reproducción está dada por esporas de manera
sexual o asexual, denominado Hongo filamentoso, por la presencia
de su estructura hifal, que forma agregados denominados micelio
que le permiten tomar los nutrientes necesarios para su crecimiento
y adaptándose fisiológicamente a diferentes ambientes, con un alto
interés a nivel ambiental, de salud, industrial entre otros (Cifuentes &
Espinosa, 2008).
7.4.3. CONDICIONES GENERALES.
7.4.3.1. FRECUENCIA.
Se debe aplicar cada vez que se realicen siembras en el cepario de Hongos.
7.4.3.2. MUESTRA.
Hongos levaduriformes y filamentosos del Cepario de Hongos
7.4.4. DESARROLLO DEL INSTRUCTIVO
I. Identificar el Hongo que se va a sembrar.
II. Sacar de la nevera el medio de cultivo a utilizar (anexo 1.)
III. Rotular las cajas de Petri con el código de la cepa a sembrar.
IV. Realizar las siembras (ver instructivo de uso de cabina de flujo laminar)
V. Incubar las cajas por 7 días a 25°C.
VI. Realizar control de calidad del medio de cultivo, incubando una caja de
Petri con medio sin realizar siembra.
VII. Realizar revisiones cada día de la siembra con el fin de observar que no
esté contaminada (hongos que no pertenece a la siembra realizada o
bacterias).
VIII. Posterior a la siembra realizar una lámina (ver instructivo; elaboración
de láminas para microscopía), para evaluar pureza.
8. FORMATOS DE REGISTRO.
8.1. FORMATO DE HOJA DE VIDA.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
FACULTAD DE CIENCIAS
COLECCIÓN DE MICROORGANISMOS
CEPARIO DE HONGOS
FORMATO DE HOJA DE VIDA
FECHA
No.
DÍA MES AÑO
NOMBRE CIENTIFICO.
NOMBRE COMÚN
LUGAR
CÓDIGO
RIESGO BIOLOGICO
CARACTERISTICAS MACROSCÓPICAS
CARACTERISTICAS MICROSCÓPICAS
MÉTODO DE CONSERVACIÓN
QUIEN LO REALIZA
8.2. FORMATO DE TRANFERENCIA DE CEPAS A DOCENCIA
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGICA
COLECCIÓN DE MICROORGANISMOS
CEPARIO DE HONGOS
FORMATO DE TRANSFERENCIA DE CEPAS DE DOCENCIA
FECHA
No.
DÍA MES AÑO
ASIGNATURA
PROFESOR ENCARGADO
MONITORA ENCARGADA
CEPAS SOLICITAS
CEPAS CANTIDAD
ENTREGA
RECIBE
OBSERVACIONES
8.3. FORMATO DE TRANFERENCIA DE CEPAS PARA INVESTIGACIÓN.
PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
DEPARTAMENTO DE MICROBIOLOGICA
COLECCIÓN DE MICROORGANISMOS
CEPARIO DE HONGOS
FORMATO DE TRANSFERENCIA
FECHA
No.
DÍA MES AÑO
SOLICITADO POR
NOMBRE DE LA INSTITUCIÓN
ENTREGADO POR
NOMBRE DE LA INSTITUCIÓN
TOTAL DE CEPAS
USOS PERMITIDOS
GENERO ESPECIE CODIGO MEDIO CONSERVACION
Descripción breve del proyecto que solicita el depósito y conservación de los microrganismos.
Observaciones: Mediante la presente se hace constar que el material solicitado deberá ser usado para propósitos de investigación en el área de microbiología. Así mismo se solicita la referencia obligada de la Colección mediante el código proporcionado de la cepa, en caso que haya publicación.
MARCELA FRANCO C. PhD.
Nombre y firma del solicitante. Coordinadora Cepario de Hongos
cc.
Pontificia Universidad Javeriana
Fecha.
9. DISCUSIÓN.
Establecer un sistema de documentación en un laboratorio, puede determinar
modelos que permiten agrupar y constituir actividades para la realización de
procedimientos en el laboratorio, con el fin de estandarizar dichos procedimiento y
garantizar la correcta elaboración de las actividades. Así mismo, la
implementación de la documentación favorece el adecuado manejo del laboratorio.
La implementación de la documentación en el cepario de Hongos perteneciente a
la Colección de Microrganismos de la Pontificia Universidad Javeriana permite
establecer parámetros estandarizados para la realización de las diferentes
actividades que en este se desarrollen y que ejecutada de forma adecuada
optimiza el trabajo en el laboratorio y reduce riesgos en el mismo.
De igual manera la estructuración de una Documentación permite recopilar
información de manera organizada, de tal forma que las actividades que se
efectúen en el laboratorio conserven parámetros similares cada vez que estas se
lleven a cabo. Es así como por medio de este trabajo, se desarrolló un estudio de
las necesidades del laboratorio, en donde comprendía evaluar las actividades que
en este se realizan y establecer los documentos necesarios a implementar.
En la elaboración de los procedimientos operativos estándar, se logró observar
que existen cinco macro procesos, es decir reúnen diferentes actividades que
elaboradas de forma adecuada permiten el buen funcionamiento del laboratorio y
que por medio de la documentación proveen información que define el orden de
los procesos garantizando la igualdad en la preparación de los mismos por parte
del personal encargado.
Posteriormente para cada una de estas actividades se establecieron instructivos
que permiten desarrollar o identificar las herramientas que se deben emplear para
el desenvolvimiento de las actividades, disminuyendo fallas en estas y teniendo
como resultado final el correcto funcionamiento del laboratorio y la forma idónea
de llevar a cabo el trabajo.
Con la elaboración de este trabajo se busca establecer la organización de los
procesos que se adelantan en el cepario de hongos de la Pontificia Universidad
Javeriana, por medio del diseño, elaboración y desarrollo de procedimientos
operativos estándar (POE), instructivos y formatos de registros, que permiten la
homogeneidad de estos.
La realización de este trabajo logró evidenciar que existen procesos, los cuales se
desenvuelven en el Cepario de hongos de la Pontificia Universidad Javeriana y
que desglosan diferentes actividades las cuales requieren la elaboración de
diferentes procedimientos operativos estándar, instructivos y formatos de registros
y que llevan consigo un la organización y la homogeneidad de las actividades en
el laboratorio, con el fin evidenciar la unificación y trazabilidad de estas
actividades, facilitando el trabajo en el laboratorio de forma segura y confiable.
Con el diseño de la documentación se logra evidenciar los requerimientos
necesarios y características en la elaboración de cada uno de los procedimientos
operativos estándar, instructivos y formatos de registros con el fin de brindar
mayor confidencialidad en el desarrollo de las mismas.
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