Efectos de la Melatonina en Efectos de la Melatonina en la Expresión Génica de la Expresión Génica de

Células de Cáncer de MamaCélulas de Cáncer de Mama

Eva del Valle, Pedro Zuazua-Villar, Eva del Valle, Pedro Zuazua-Villar, Pedro Casado, Sofía RamosPedro Casado, Sofía Ramos

UNIVERSIDAD DE OVIEDO

Departamento de Bioquímica y Biología Molecular

MelatoninaMelatonina Hormona indólica Hormona indólica

naturalnatural Secreción circadianaSecreción circadiana Efectos fisiológicosEfectos fisiológicos

Aparato reproductorAparato reproductor Sincronización de ritmos Sincronización de ritmos

biológicosbiológicos Sistema inmuneSistema inmune Neutralización de Neutralización de

radicales libresradicales libres Efectos antitumoralesEfectos antitumorales

0

10

20

30

40

50

60

16 18 20 22 24 2 4 6 8 10

hora

pg/m

l de

mel

aton

ina

La Melatonina como Molécula La Melatonina como Molécula Antiestrogénica Antiestrogénica

Inhibe el crecimiento de células MCF-7 Inhibe el crecimiento de células MCF-7 (Cos y (Cos y Sánchez-Barceló, 1993)Sánchez-Barceló, 1993)

Bloquea el efecto mitogénico del estradiol Bloquea el efecto mitogénico del estradiol (Rato y (Rato y Cols., 1999)Cols., 1999)

Disminuye la unión del RE, estimulada por Disminuye la unión del RE, estimulada por estradiol, al ERE estradiol, al ERE (Rato y Cols., 1999)(Rato y Cols., 1999)

Inhibe específicamente al REInhibe específicamente al RE, a través de la , a través de la calmodulina calmodulina (del Río y Cols., 2004)(del Río y Cols., 2004)

Regulación por Calmodulina de los Regulación por Calmodulina de los Receptores de Estrógenos en el Receptores de Estrógenos en el Desarrollo del Cáncer de Mama Desarrollo del Cáncer de Mama

Determinar la expresión diferencial de genes Determinar la expresión diferencial de genes implicados en el desarrollo tumoral en células implicados en el desarrollo tumoral en células MCF-7MCF-7

Determinar la expresión diferencial de genes Determinar la expresión diferencial de genes implicados en el desarrollo tumoral en células implicados en el desarrollo tumoral en células con mutaciones en el sitio de unión a con mutaciones en el sitio de unión a calmodulinacalmodulina

MetodologíaMetodología

Efecto de la melatonina sobre genes de Efecto de la melatonina sobre genes de expresión temprana en células MCF-7: expresión temprana en células MCF-7: Tratamientos de 1 hora con melatonina 10Tratamientos de 1 hora con melatonina 10 -9-9M M

y vehículo hormonaly vehículo hormonal

GEArray Q Series Human Breast Cancer GEArray Q Series Human Breast Cancer and Estrogen Receptor Signalling Gene and Estrogen Receptor Signalling Gene ArrayArray

GEArray Q SeriesGEArray Q Series

Genes directamente asociados concáncer de mama

Genes asociados con la vía de señalizaciónde estrógenos

Genes asociados con el pronóstico delcáncer de mama

Genes asociados con respuestaa quimioterapia

GEArrayGEArray RNA totalRNA total

PrehibridaciónPrehibridación

Retrotranscripción, Retrotranscripción, amplificación y amplificación y marcaje conmarcaje con3232P dCTPP dCTP

Desnaturalización deDesnaturalización dela sondala sonda

HIBRIDACIÓNHIBRIDACIÓN

Análisis de los ResultadosAnálisis de los Resultados

Control Melatonina 10-9M

0

20

40

60

80

100

CM SG M

SG I SB

Scion Image

0

2

4

6

8

10

12

ERBB2 GSN HMGB1 HSP28 IL6ST KIT MKI67

Control

Melatonina

p < 0,5 p < 0,05

GENGEN NOMBRENOMBRE CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS

GSN Gelsolin (amyloidosis, Finnish Gelsolin (amyloidosis, Finnish type)  type) 

Regulación del crecimiento y Regulación del crecimiento y apoptosisapoptosis

Posible supresor tumoralPosible supresor tumoral

IL6ST Interleukin 6 signal transducer Interleukin 6 signal transducer (gp130,oncostatin M receptor)(gp130,oncostatin M receptor)

Funciones variadasFunciones variadas

Buen pronósticoBuen pronóstico

KIT v-kit Hardy-Zuckerman 4 v-kit Hardy-Zuckerman 4 feline sarcoma viral oncogene feline sarcoma viral oncogene homolog (C-kit)homolog (C-kit)

C-kit se expresa en C-kit se expresa en adenocarcinomas mamarios adenocarcinomas mamarios no invasivosno invasivos

SOBRE-EXPRESIÓN POR SOBRE-EXPRESIÓN POR MELATONINAMELATONINA

GENGEN NOMBRENOMBRE CARACTERÍSTICASCARACTERÍSTICAS

ERBB2ERBB2 v-erb-b2 erythroblastic leukemia v-erb-b2 erythroblastic leukemia viral oncogene homolog 2, viral oncogene homolog 2, neuro/glioblastoma derived neuro/glioblastoma derived oncogene homolog (avian)  oncogene homolog (avian) 

Sobre-expresado en Sobre-expresado en varios tipos de varios tipos de tumores mamariostumores mamarios

Mal pronósticoMal pronóstico

HMGB1HMGB1 High-mobility group box 1High-mobility group box 1 AntiapoptóticoAntiapoptótico

HSP28 HSP28 Heat shock 27kDa protein 1Heat shock 27kDa protein 1 Inhibidor de la Inhibidor de la apoptosisapoptosis

MKI67MKI67 Antigen identified by monoclonal Antigen identified by monoclonal antibody Ki-67 antibody Ki-67 

Marcador de Marcador de proliferaciónproliferación

REPRESIÓN POR MELATONINAREPRESIÓN POR MELATONINA

Estos resultados parecen indicar que el

tratamiento con melatonina en concentración

10-9M durante 1 hora

disminuye la expresión de algunos genes

relacionados con invasividad y aumenta la

expresión de otros genes asociados con

buen pronóstico en cáncer de mama

Sofía Ramos Pedro “The Nightmare Master” Casado

Pedro Zuazua-Villar Eva del Valle

Financiado por: ISCIII PI 04/2664