Efecto de Bacterias Promotoras de Crecimiento Vegetal (PGPR) Asociadas a Pennisetum Clandestinum en...

7/22/2019 Efecto de Bacterias Promotoras de Crecimiento Vegetal (PGPR) Asociadas a Pennisetum Clandestinum en El Altipla

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2012 Corporacin Colombiana de Investigacin Agropecuaria

Revista Corpoica - Ciencia y Tecnologa Agropecuaria (2012) 13(2), 189-195

ARTCULO CIENTFICO

M ICROBIOLOGA DEL SUELO

Effect of plant growth-promoting rhizobacteria(PGPR) associated to Pennisetum clandestinumin

the altiplano cundiboyacense

A B S T R A C T

Pennisetum clandestinum(kikuyo) is a commonpasture in the altiplano cundiboyacense silvopastoral

systems, which possesses high nutritional value.Therefore, studies to improve the production process

in both economic and environmental terms are veryimportant. The role of inoculation with plant growth-

promoting bacteria was evaluated on the growth ofkikuyu grass. The 4K and 5B strains were identified,

through amplification and analysis of their 16S rDNA,as members of the Stenotrophomonasand Pseudomonas

genera, respectively. They were characterized in vitrofortheir efficiency of biological nitrogen fixation, productionof indole compounds, and phosphate solubilization. Fourtreatments were evaluated under greenhouse conditions.

Furthermore, the biomass was evaluated at differentstages of the plant (70, 100 and 130 days). The 4K strain

demonstrated a root dry weight that increased by 50% at70 and 100 days and the 5B strain showed a statisticallysignificant behavior for plant and root dry weight with

an increase of 50% at 130 days. The most important

effect was presented after 100 d where treatments, TQ,TB1 and TB2, exceeded more 80% to absolute control

in the fresh weight of the air. These results showed thatinoculation with PGPR represents a biotechnological

alternative to promote growth of P. clandestinum, as weobserved relevant effects on biomass production 100

days after planting.

Key words: silvopastoral system, grasses, biologicalnitrogen fixation, indolic compounds, phosphate

solubilization

Fecha de recepcin: 02-03-2012

Fecha de aceptacin: 22-10-2012

1 Centro de Investigacin Tibaitat, Corporacin de Investigacin Agropecuaria(Corpoica). Mosquera (Colombia). [email protected]

Efecto de bacterias promotoras decrecimiento vegetal (PGPR) asociadasa Pennisetum clandestinumen elaltiplano cundiboyacense

Paola Jimena Criollo

1

, Melissa Obando

1

,Leonardo Snchez M.1, Ruth Bonilla1

R E S U M E N

Pennisetum clandestinum(kikuyo) es una pastura comn enlos sistemas silvopastoriles del altiplano cundiboyacense,con altas propiedades nutritivas. Por tanto estudios quepermitan mejorar el proceso de produccin en trminoseconmicos y ambientales reviste gran importancia.En este estudio se evalu el papel de la inoculacin con

bacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR)sobre el crecimiento de pasto kikuyo. Las cepas 4K y 5Bfueron identicadas mediante amplicacin y anlisisdel 16S rADN, como Stenotrophomona ssp. y Pseudomonassp., respectivamente, caracterizadas por su ecienciain vitroen la jacin biolgica de nitrgeno, produccinde compuestos indlicos y solubilizacin de fosfatos. Seevaluaron las cepas en condiciones de invernadero en trestiempos de crecimiento de la planta (70, 100 y 130 das). Seevidenci que la cepa 4K increment el peso seco radicularde la planta en 50% a los 70 y 100 das, mientras que lacepa 5B mostr un comportamiento similar en el peso secoareo y radicular con aumentos de hasta el 50% a los 130d. El efecto ms importante se present despus de 100 d

donde los tratamientos TQ, TB1 y TB2, superaron en msdel 80% al testigo absoluto en el peso fresco de la partearea. Estos resultados demostraron que la inoculacinde PGPR representa una alternativa biotecnolgica parapromover el crecimiento de P. clandestinum, con efectosrelevantes en produccin de biomasa 100 das despus dela siembra (dds).

Palabras clave: sistemas silvopastoriles, gramneas,jacin biolgica de nitrgeno, compuestos indlicos,solubilizacin de fosfato

I N T R O D U C C I N

En Colombia, Pennisetum clandestinumHochst. ex Chiov(Kikuyo) es una pastura comn en muchos ambientes yse asocia principalmente a los sistemas silvopastoriles enel altiplano cundiboyasense con diferentes especies arb-reas. Debido a su rpida tasa de crecimiento se utiliza parala alimentacin de ganado, adems es un pasto apetecibley altamente digerible, con alto valor proteico, bajo conte-


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nido de bra y altas propiedades nutritivas (Marais et al.,1992), tambin se emplea en la recuperacin de suelos de-gradados en ambientes fros, para el control de la erosin,aplicados como cobertura del suelo. Numerosos reportesindican que P. clandestinumes tolerante al estrs abiticocomo la salinidad, la sequa, el anegamiento y la acidezdel suelo (Sidari et al., 2004).

El suelo es un ecosistema con una gran variedad y canti-dad de microorganismos bencos. La fraccin del suelodonde inuye la proliferacin de estos microorganismospor la presencia del sistema de races de las plantas se leconoce como rizsfera (Cassn et al., 2009). Las diferentespoblaciones bacterianas presentes en la rizsfera, se lla-man rizobacterias o bacterias promotoras de crecimientovegetal - PGPR (por su siglas en ingls Plant growth-pro-moting rhizobacteria) y poseen la capacidad de colonizar elsistema radicular de las plantas o su entorno ms cercano;clasicndose en tres grupos principales, las que puedencolonizar el tejido de la planta formando ndulos (simbi-ticas), las que se hospedan en estructuras internas de laplanta (endofticas) y las que se encuentran cerca del siste-ma radicular de la planta (bacterias de vida libre) (Kloep-per et al., 1989).

Mltiples estudios han publicado que las PGPR se asociancon cultivos importantes tales como Oryiza sativa, Triticumspp., Sorghum spp, Sacharum ofcinarum, Zea mays (Okon,2005; James, 2000; Andrews et al., 2003; Berg, 2009) y pas-turas (Lugtenberg y Kamilova, 2009). Dentro de las PGPRms referenciadas son Azospirillumsp., Bacillussp., Rhizo-bium sp., Burkholderia sp., Enterobacter sp., Azotobacter sp.,

Erwiniasp., Herbaspirillumsp., Klebsiellasp., Pseudomonassp.y Xanthomonassp. (Cassn et al., 2009; Bashan et al., 2012).

Inoculaciones de PGPR en cultivos de inters agronmicohan demostrado el aumento del nitrgeno, fsforo ylos niveles de algunos minerales menores que se hacendisponibles para la planta (Bashan y Holgun, 1997;Egamberdieva et al., 2004). Una amplia variedad se haencontrado que estimula mediante diversos mecanismosel desarrollo de numerosas gramneas. El objetivo de estainvestigacin fue determinar de forma preliminar el efectode la inoculacin de Stenotrophomonas y Pseudomonas

(PGPR) en la promocin del crecimiento de P. clandestinumen tres etapas de desarrollo de la planta bajo condicionesde invernadero.

M A T E R I A L E S Y M T O D O S

Microorganismos y condiciones de crecimiento

Los microorganismos autctonos de sistemas silvopasto-riles previamente aislados se preservaron en el Banco de

Trabajo del Laboratorio de Microbiologa del CBB (Centrode Biotecnologa y Bioindustria) - Corporacin Colom-

biana de Investigacin Agropecuaria (Corpoica). Para elpresente trabajo se utilizaron las cepas 4K y 5B. Las cepasfueron crecidas en medio de cultivo Luria Bertani (LB)(Bertani, 1952; Bertani, 2004) durante 24 h y se agitaron a120 rpm a 30C para procedimientos posteriores. Los con-

troles de calidad presentaron 100% de pureza y la concen-tracin celular de 108ufc/mL.

Identificacin molecular por secuenciacin parcial de16S rDNA

El ADN bacteriano fue extrado mediante el uso deDNeasy Blood and Tissue Kit (Qiagen, Alemania) segn lasinstrucciones del fabricante. El ADN genmico extrado sediluy en agua estril Milli-Q antes de llevar a cabo el anlisisde PCR bajo las siguientes condiciones: 25 mL de mezclade PCR que contena 1X Taq DNA polimerasa tampn(Invitrogen, USA), 2,5 mM MgCl

2

, 0,2 mM de trifosfato dedesoxinuclesido, 25 pmol de primer (forward - reverse), 1 Ude ADN polimerasa (Invitrogen, USA), y 1L del extractodiluido de ADN como molde. Casi genes completos del16S rADN fueron amplicados con cebador forward27F (5-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3) y el cebadorreward 1492R (5-GGTTACCTTGTTACGACTT-3). ElADN se amplic con un termociclador iCycler (BioRad,USA) con el siguiente programa: 4 min de precalentamientoa 95C, 35 ciclos de 30 s de desnaturalizacin a 95C, 30 sde hibridacin del cebador a 57C, 2 min de elongacin a72C, y 10 min de paso de extensin a 72C. Cada mezclade amplicacin (5 L) se analiz por gel de agarosa

(1,5% w/v) de tampn de electroforesis TAE (0,04 M Tris-acetato, 0,001 M EDTA) que contena 20 g mL-1(w/v) de

bromuro de etidio. El ADN amplicado fue puricadoutilizando el PureLink kit de gel extraccin rpida(Invitrogen, USA) segn las instrucciones del fabricante.La secuenciacin automatizada de los productos de PCRpuricado se realiz utilizando el kit de secuenciacinBigDye Terminator y el secuenciador de ADN ABI 310(Applied Biosystems, USA) de acuerdo a las instruccionesdel fabricante. Las secuencias parciales obtenidas fueroncomparadas con las secuencias de nucletidos presentesen el GenBank utilizando el programa BLAST (Altschul

et al. 1990) y las quimeras fueron detectadas utilizando elprograma PINTAIL (Ashelford et al., 2005).

Caracterizacin de las capacidades bacterianas depromocin de crecimiento vegetal in vitro

Fijacin biolgica de nitrgeno. La actividad nitrogenasa serealiz por medio del ensayo de reduccin de acetilenoen tubos de ensayo de 10 mL, conteniendo 5 mL demedio Ashby semislido (libre de nitrgeno). Despus se


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Efecto de bacterias promotoras de crecimiento vegetal (PGPR) asociadas a Pennisetum clandestinumen el altiplano cundiboyacense

Revista Corpoica - Ciencia y Tecnologa Agropecuaria(2012) 13(2), 189-195

agregaron 50 L de suspensin bacteriana y se incubarona 30C por 48 h. Posteriormente, se sustituy el 10% de laatmsfera por acetileno durante 1 h. La jacin biolgicade nitrgeno fue cuanticada mediante cromatografa degases (Perkin Elmer, USA) con detector de ionizacin dellama y una columna Poropak N 200/300 mesh de 6 pies y3 mm de dimetro (Eckert et al., 2001).

Produccin de hormonas indlicas. A partir de la fermen-tacin lquida en medio K - Lactato suplementado contriptofano (100 ug mL-1), se tomaron 4 mL de cultivo, secentrifugaron a 7378 G 10 min, se tom 1mL del sobre-nadante y se llev a reaccin con 1mL del reactivo deSalkowsky modicado. La reaccin se incub por 30 minen completa oscuridad por triplicado. Una vez pasado eltiempo de reaccin, se determin la absorbancia de cadatubo en un espectrofotmetro a 540 nm. Con los datos deabsorbancia se obtuvo el promedio de las rplicas y sereemplazaron los datos en la ecuacin de la recta de lacurva patrn para determinar la produccin de ndolestotales (Carreo et al., 2000).

Solubilizacin de fosfato. El mtodo cuantitativo defosfomolibdato fue empleado para determinar el fosfatodisponible. Para esto, cada cepa fue crecida en medio SRS(Sundara y Sinha, 1963) sin indicador e incubada por 120 h/150 rpm. Posteriormente, se tom 1 mL de alcuota de cadaerlenmeyer, incluyendo los controles y se centrifugaron a7378 G 10 min y nalmente 500 L del sobrenadante seemplearon para el anlisis (Fiske y Subbarow, 1925).

Ensayo en invernadero

El suelo y el material vegetal se obtuvieron deCorpoica, Centro de Investigacin Tibaitat, Mosquera(Cundinamarca). Fueron utilizadas bolsas de plstico concapacidad de 3 kg con 2,5 kg de suelo. Los estolones deP. clandestinumfueron seleccionados y desinfectados conetanol al 70% en 5 min y luego con solucin de hipocloritode sodio 3% a 5 min. Para este estudio, el suelo fuefertilizado de acuerdo al anlisis de suelo, con nitrgeno(100 kg ha-1 en forma de urea) en los tratamientos quelo requeran. El anlisis del suelo utilizado se describe acontinuacin (Tabla 1).

Se implementaron cuatro tratamientos para evaluar larespuesta de P. clandestinuma la inoculacin de dos cepas

con capacidad de promocin de crecimiento vegetal. Lostratamientos fueron los siguientes: TA: testigo absoluto,TQ: control qumico, TB1: inoculacin con la cepa 4K +50% de la dosis de nitrgeno (en forma de urea) y TB2:inoculacin con la cepa 5B + 50% de la dosis de nitrgeno.Los muestreos se realizaron a los 70, 100 y 130 dasdespus de la siembra (dds) y las variables evaluadas

fueron longitud area, peso fresco y seco de la partearea y radicular. As mismo, se determin el contenidode nitrgeno y fsforo total en el tejido vegetal a los 130dds mediante el mtodo Kjeldahl (Norma AOAC 988.05)y Bray II respectivamente (Bray y Kur, 1945).

Diseo y anlisis estadstico

Para el diseo, se establecieron cuatro tratamientos con12 rplicas mediante bloques completos al azar. Losdatos fueron analizados utilizando el anlisis de varianzaANOVA y Tukey HSD (P 0,05) empleando el softwareestadstico SPSS17.0 para Windows.

R E S U L T A D O S Y D I S C U S I N

Identificacin molecular de las cepas 4K y 5B

El anlisis comparativo de las secuencias obtenidas conlas registradas en la base de datos del NCBI mostr quela cepa 4K se acerc a un porcentaje del 98% de identidadcon la secuencia de Stenotrophomonassp. bA22 (JF772548.1)y la cepa 5B present un porcentaje del 97% de identidadcon la secuencia de Pseudomonassp. KVS86 (HQ591435.1).Las Gamaproteobacterias estuvieron representadas

en este estudio por el orden de las Xanthomonadalesy Pseudomonadales con la cepa 4K (pertenecientes algnero Stenotrophomonas) y 5B (pertenecientes al gneroPseudomonas)identicadas mediante la amplicacin del16S rDNA.

Las especies del gnero Pseudomonas se han reportadoampliamente como PGPR de diversas plantas incluyen-do gramneas (Doty et al., 2009; Okon, 2005; Andrewset al., 2003). Con respecto a Stenotrophomonas sp., al-gunas especies han sido identicadas como patgenashumanas. Sin embargo, sta especie ha sido aislada de

plantas sanas y descrita como una bacteria promotorade crecimiento de varios cultivos de importancia agro-nmica (Idris et al., 2009).

Tabla 1.Anlisis qumico del suelo del altiplano cundiboyanse

P(mg kg-1)

SCa Mg K

Na(cmol

(+)kg-1)

Fe Cu Mn Zn BMateriaorgnica

pH

68,3 50,1 10,6 4,32 0,62 0,65 736 5,9 25,6 29,8 0,32 6,4 5,3


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Caracterizacin de las capacidades bacterianas depromocin de crecimiento vegetal in vitro

Las dos cepas en estudio son capaces de producir ndoles,jar nitrgeno y son ecientes en la solubilizacin defosfato. La descripcin de las capacidades de las cepas 4Ky 5B se muestran en la Tabla 2.

Tabla 2.Caracterizacin de las capacidades bacterianas de promocin de

crecimiento vegetal in vitrode las cepas 4K y B5

CepaSolubilizacin

de fsforo(g (PO

4)

3mL-1)

Produccinde ndoles(g mL-1)

Fijacinde nitrgeno

(nmol C2H

2mL h-1)

4K 68,10 0,22 b 0,72 0,009 b 184,47 3,29 a

5B 96,01 0,03 a 1,15 0 a 183,42 6,15 a

Medias en la misma columna con la misma letra no presentan diferencias significativas, segn la prueba deTukey HSD (P 0,05). Las variaciones corresponden a desviacin estndar.

La produccin de hormonas indlicas tipo AIA, y susefectos beneciosos sobre la promocin del crecimiento

vegetal han sido ampliamente estudiados (Sevilla etal., 2001; Shokri y Emtiazi, 2010; Obando et al., 2010).Adems, la capacidad de solubilizacin de fosfatodesempea un papel fundamental en la interaccin planta-microorganismo, por la disponibilidad de nutrientes pocomviles, as como en el control biolgico sobre patgenos(Rodrguez y Fraga, 1999; Vassilev et al., 2006; Shokri yEmtiazi, 2010).

Los resultados obtenidos con la inoculacin de la cepa 5Bpresentaron diferencias estadsticamente signicativas (P 0,05) con respecto a la cepa 4K en cuanto a la capacidad

de solubilizacin de fsforo y produccin de ndoles.Por otro lado, no se presentaron diferencias en la pruebade jacin de nitrgeno. No obstante, las dos cepas sonecientes en sta capacidad de acuerdo a lo reportadopor Chowdhury et al. (2011), quienes encontraron que

Azospirillum sp. y Pseudomonas pseudoalkaligenes tienencapacidad de reducir acetileno en el orden de 18 y 11,2nmol de C

2H

4, lo cual se evidencia en este estudio con las

cepas 4K y 5B, las cuales son ecientemente superioresen relacin a previos resultados referenciados (Mehnaz yLazarovits, 2006; Eckert et al., 2001; Carcao-Montiel et al.,2006; Crdenas et al., 2010).

Diversos reportes evidencian la variabilidad de lascapacidades de promocin de Stenotrophomonas sp. yPseudomonas sp., como lo mencionan Taul et al. (2011),quienes obtuvieron nueve cepas de Stenotrophomonas sp.a partir de Saccharum ofcinarum, con producciones dehormonas indlicas entre 6,9 31,8 g mL-1 y slo unacepa (UYSO27) present jacin de nitrgeno medianteactividad de reduccin de acetileno. Con respecto aPseudomonas sp., obtuvieron 8 cepas con potencial de

promocin de crecimiento in vitro, de las cuales, las cepasUYSO14, UYSO19 y UYSO21 presentaron capacidadpara jar nitrgeno y UYSO16, UYSO17, UYSO18 yUYSO21 para producir ndoles. De acuerdo a lo anterior,la eciencia de estos gneros vara de acuerdo al ecotipoy a los factores edafoclimticos que rigen su habitat y deah la importancia de obtener cepas nativas que garanticen

su eciencia en la promocin de crecimiento mediantediversos posibles mecanismos que acten all.

Caracterizacin de la respuesta del kikuyo a lainoculacin con bacterias de promotoras de crecimiento

vegetal en invernadero

En la evaluacin realizada a los 70 dds, no se presentarondiferencias signicativas en peso fresco de parte area(PFA) entre los tratamientos TQ y TB1, los mejores valoresfueron obtenidos con respecto a TA y TB2. En el peso frescoradical (PFR), el TQ present diferencias signicativas (P 0,05) con respecto a los dems tratamientos evaluados. En

cuanto al peso seco en parte area (PSA) y radical (PSR),se presentaron diferencias signicativas (P 0,05) de TQ,seguido de TB2, con respecto a los dems tratamientosevaluados. El tratamiento TB2 mostr un incrementoporcentual de 21% en la longitud de la parte area (LA)presentando diferencias signicativas (P 0,05) conrespecto a los dems tratamientos.

Los resultados de 100 y 130 dds presentaron diferenciassignicativas (P 0,05) en los tratamientos TB1 y TB2 entodas las variables agronmicas evaluadas respecto alcontrol no inoculado (TA) (Tabla 3). El efecto promotor

de crecimiento vegetal de estos tratamientos, se evidencicuando los valores fueron iguales al tratamiento qumicoen las variables agronmicas evaluadas. Despus de 100dds, los tratamientos TQ, TB1 y TB2, presentaron valoressimilares en el peso fresco de la parte area, superandoen ms del 80% al testigo absoluto. As mismo, TB1present diferencias signicativas (P 0,05) comparadascon los dems tratamientos analizados para las variablesPFR y PSA. En las variables PSR y LA, la respuesta se viofavorecida cuando los tratamientos fueron inoculados conlas cepas 4K (TB1) y 5B (TB2), aumentando los valores enms del 50% y 25% respectivamente en comparacin con

los tratamientos TQ y TA.

Todos los tratamientos bacterianos mostraron un aumentoen sus ganancias de biomasa seca en el muestreo de 100 d,pero 30 d despus, el control qumico elev sus valoresfrente a las ganancias de biomasa seca, mostrando quelos tratamientos bacterianas tienen efectos signicativosen el crecimiento de P. clandestinumdespus de 100 d deinoculacin, igualando los valores del tratamiento qumico.Adems, todos los tratamientos superaron el tratamiento


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no inoculado que muestra el efecto de modicar laacumulacin de nutrientes y las actividades propias dela planta, que son estimulados signicativamente con lostratamientos inoculados y qumico, que incidieron en elcrecimiento de P. clandestinum.

En relacin al contenido de nitrgeno y fsforo total enel tejido vegetal no se presentaron diferencias estadsti-camente signicativas (P 0,05) a los 130 dds (Datos nomostrados).

Las PGPR, incluyendo las especies de Pseudomonassp. yStrenotrophomonasp. identicadas en este estudio, se hanreportado ampliamente por su efecto benco en diversasplantas incluyendo gramneas (Doty et al., 2009; Okon,2005; Andrews et al, 2003; Garrido et al., 2010; Crdenas etal., 2010). Las variables ms inuyentes en la evaluacinde acumulacin de nutrientes y fotoasimilados se reejaen los incrementos de biomasa seca en los tratamientos

TB1 y TB2. Mehnaz y Lazarovits (2006), encontraron unaumento de 12% en plantas de maz inoculadas con A.lipoferumN7 con respecto a las plantas no inoculadas. Dazet al. (2009), estudiaron la promocin de crecimiento enplantas de Eucalyptus globulus, estimulada por bacteriasrizosfricas de los gneros Bacillussp. y Stenotrophomonamaltophilia aisladas de E. globulus y E. nitens, las cualesprodujeron un aumento signicativo en el enraizamientoen un rango de 19,4% y 69,4% con respecto al control,adems de incrementar la formacin de estacas y elaumento de la biomasa.

En cuanto al peso fresco, los resultados muestran que lostratamientos inoculados igualan los valores obtenidos en elcontrol qumico y superan al control sin inocular, resultadosque concuerdan con los obtenidos por Rajkumar et al. (2005)quienes estudiaron la promocin de crecimiento vegetalgenerado por Pseudomonassp. y Bacillus sp. en plantas demostaza y reportaron un incremento en la longitud de laplanta y el peso fresco y seco en comparacin con las plantasno inoculadas, adems de brindarle un efecto protectorcontra la absorcin de Cromo.

Hassen y Labuschagne, (2010), revelaron que la inoculacinindividual de bacterias con potencial biofertilizante,estimulan el desarrollo de todos los estratos de la planta.La inoculacin individual de cepas nativas de B. simplex,B. cereus y Paenibacillus alvei en trigo, result en unincremento signicativo tanto en el peso fresco y seco

de los brotes y races. En la parte area, y el peso frescoaument entre el 45% y 50% y el peso seco entre 39,7% y45% respectivamente. De la misma forma, el aumento delpeso fresco radical oscil entre el 55% y el 62% y la biomasaseca aument entre el 25% y el 49%. Asghar et al. (2004),encontraron que PGPR asociadas a la rizsfera de especiesde Brassica napusaumentaron en un 58% la longitud de laraz, 39% de la parte area, y 72% del peso seco total.

Se ha reportado el efecto de PGPR en la disponiblidadde nitrgeno, fsforo y potasio en suelos decientes enstos nutrientes que se ve reejado en mayor absorcin delos mismos por plantas de maz inoculadas con cepas dePseudomonas alcaligenes(PsA15), Bacillus polymyxa(BcP26) y

Mycobacterium phlei (MbP18). (Egamberdiyeva, 2007) y enplantas de Gossipum hirsutumguisantes en una regin semi-rida de Uzbekistn (Egamberdiyeva y Hoich, 2004).

La inoculacin de PGPR en pasturas y su efecto positivoen el crecimiento y nutricin vegetal ha sido demostradopreviamente (Bonilla et al., 2010). En trabajos realizadospor Esqueda et al. (2002) se reporta un efecto positivosobre la emergencia de plantas en seis especies degramneas inoculadas conA. brasilense. Esta respuesta fueatribuida a que la bacteria propicia un ambiente benco,

incrementando la proliferacin de vellosidades de la raz,con lo que aumenta la absorcin de agua y nutrientes.

C O N C L U S I N

Las cepas 4K y 5B promovieron capacidades de crecimientovegetal de Pennisetum clandestinum a los 100 y 130 d demuestreo, incrementando el peso fresco y seco de la plantaen relacin con el control qumico, bajo condiciones deinvernadero.

Tabla 3.Parmetros agronmicos evaluados por tratamiento en pasto kikuyo (Pennisetum clandestinum), en tres pocas diferentes de muestreo

70 d 100 d 130 d

PF (g) PS (g) Long (cm) PF (g) PS (g) Long (cm) PF (g) PS (g) Long (cm)

TA Parte area 7,4 0,3 c 1,7 0,2 c 19,17 2,02 c 6,5 0,2 b 2,35 0,15 d 13,83 1,99 c 44,8 5 d 19,35 0,9 c 16,27 1,42 b

Parte radicular 6,33 0,6 c 0,95 0,15 c ND 7,1 1,2 c 1,27 0,15 c ND 22,3 2,8 b 5,47 0,8 c 40,77 5,45 b

TQ Parte area 95,85 0,3 a 20,55 0,15 a 27,6 1,1 b 87,3 13,3 a 24,67 2,96 c 26 1 b 95,9 4,28 c 32,07 1 b 42,8 5,73 a

Parte radicular 31,6 3,6 a 5,8 0,6 a ND 13,3 1,93 b 2,67 0,32 b ND ND 42,5 5,57 a 10,45 1 a 46,85 4,15 b

4K Parte area 84,25 15 ab 15,67 2,25 ab 28 2 b 90,25 12,35 a 17,15 0,95 b 35,25 1,75 a 71,17 7,78 b 24 1,8 c 19,5 1,95 b

Parte radicular 21,7 0,4 b 2,1 0,2 b ND 26,8 1,4 b 3,93 0,49 a ND 32,9 4,06 ab 7,85 0,4 bc 81,75 9,75 a

5B Parte area 71,13 10 b 17,9 0,9 b 35,25 2,75 a 99,85 6,95 a 32,45 1,55 a 32,5 2,5 a 115,45 9,95 a 42,15 3,4 a 32,87 4,56 a

Parte radicular 19,65 0,7 b 2,35 0,05 b ND 14,57 2,3 a 4 0,6 a ND 27,77 3,45 b 8,8 1,4 ab 55,83 6,37 b

ND: No determinado. Desviacin estndar. Medias con letras diferentes en la misma columna presenta diferencias significativas, segn la prueba de Tukey HSD (P 0,05). PF: Peso fresco, PS: Peso seco, Long: Longitud area


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R E C O M E N D A C I N

De acuerdo con los resultados obtenidos en el presenteestudio se recomienda continuar con estudios de inocula-cin de las especies de PGPR empleadas y dosis de fertili-zacin nitrogenada para determinar las recomendacionesde fertilizacin a emplear.

A G R A D E C I M I E N T O S

Los autores agradecen a Ins Roldn, Lady Molano yStella Mendieta por su colaboracin en el desarrollodel presente estudio y al Ministerio de Agricultura yFedegan por su apoyo y financiacin de esta investi-gacin.

R E F E R E N C I A S B I B L I O G R F I C A S

Altschul S, Gish W, Miller W, Myers W, Lipman D. 1990.Basic localalignment search tool. J Mol Biol 215 (3):403-410.

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