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Diagnóstico Molecular Veterinario Distemper canino Neospora caninum Peritonitis infecciosa felina Rickettsiales Brucella sp.

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Diagnóstico Molecular Veterinario"

•  Distemper canino"•  Neospora caninum!•  Peritonitis

infecciosa felina"

•  Rickettsiales"•  Brucella sp."

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Antecedentes"Distemper canino:!•  Caninos vacunados que

mueren por distemper"•  Detección temprana

oportunidad de tratamiento y sobrevida"

•  Limitaciones pruebas rápidas detección de antígeno"

!"#$%&&'''()*+$,-.(/*01

Prueba Rápid del Antígeno del Virus del Distemper canino CDV Ag

El Kit del Test Rápido Anigen para CDV Ag es un inmunoensayo

cromatográfico para la detección cualitativa del antígeno del virus de Moquillo en conjuntiva, orina, suero o plasma. El Kit del Test como la línea del test y como la línea de control en la superficie del dispositivo. Estas dos líneas no se harán visibles en la ventana de resultados antes de aplicar las muestras. La línea de control de usa para control procedimental y deberá aparecer en todo momento si el procedimiento del test se ha realizado correctamente y los reactivos de control del test están funcionando bien. En la ventana de resultado aparecerá la línea del test de color púrpura si existen en la muestra suficientes antígenos del virus de Moquillo Canino. Los anticuerpos del virus de Moquillo Canino especialmente seleccionados se usan en la banda de test tanto como materiales de captura como materiales detectores. Ello permite al Kit del Test Rápido Anigen para CDV Ag identificar el antígeno del virus de Moquillo canino en conjuntiva, orina, suero o plasma con un alto grado de exactitud.

1) Diez (10) Kits (cassettes) del Test Rápido Anigen para CDV Ag 2) Diez (10) Tubos para muestra que contienen el buffer del diluyente 3) Diez (10) hisopos para recolección de muestras 4) Diez (10) Goteros desechables 5) Una hoja de (1) Instrucciones de Uso

1) Exclusivamente para uso de diagnóstico veterinario. 2) Para mejores resultados, se requiere seguir estrictamente las instrucciones 3) Todas las muestras deben manipularse como material potencialmente infeccioso. 4) No abra ni extraiga el kit del test de sus bolsas individualmente selladas

herméticamente hasta inmediatamente antes de usarlas. 5) No use el kit del test si la bolsa está dañada o el sello hermético está roto. 6) No re-utilice el kit del test. 7) Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente antes de efectuar la prueba. 8) No use los reactivos después de la fecha de vencimiento marcada en la etiqueta 9) Los componentes de este kit han sido sometidos a prueba de control de

calidad como unidad de lote estándar. No mezcle componentes de diferentes números de lote.

El kit se pude conservar a temperatura ambiente (2~30 ) o refrigerado. El kit del test estable hasta la fecha de vencimiento que aparece marcada en la etiqueta del empaque. NO CONGELE EL KIT. No se almacene bajo la luz solar directa.

1) El test debe efectuarse de conjuntiva, orina, suero o plasma. 2) Después de recolectar la muestra con un hisopo, la muestra debe extraerse y

someterse al test inmediatamente. 3) Si las muestras no se someten al test inmediatamente, deben refrigerarse a

2~8 . Para mantenerse en almacenamiento no más de 48 horas, congele la muestra a -20 o aún a menor temperatura.

1) Recolecte las muestras de conjuntiva, u orina, usando un hisopo para recoger muestras pre-humedecido con solución salina. Tratándose de muestras de suero o plasma, puede usar un gotero. 2) Inserte el hisopo en el tubo para muestras que contiene 300 ul de diluyente de la prueba. Para el caso de suero o plasma, agregue 2 3 godas de suero o plasma en el tubo para muestras que contiene 300 ul de diluyente de la prueba usando el gotero. 3) Mezcle las muestras de hisopo con el diluyente de la prueba en el pozo de extracción. 4) Extraiga el dispositivo del test de la bolsa de papel aluminio y colóquelo en una superficie plana y seca. 5) Agregue cuatro (4) gotas de la muestra mezclada en el orificio de la muestra usando el gotero, gota a gota y lentamente.

6) Al comenzar el test, se verá el color púrpura moverse en la ventana de resultados en el centro del dispositivo del test. Si transcurrido 1 minuto, no se

ha observado aún la migración, agregue una gota más de la muestra mezclada en el pozo de la muestra.

7) Interprete los resultados del test a los 5-10 minutos.

[I lustración de la Secuencia del procedimiento del test]

En la sección izquierda de la ventana de resultados aparecerá una banda de color para indicar que el test está funcionando correctamente; es la banda de control. La sección derecha de la ventana de resultados indica los resultado del test. Si aparece una banda de color diferente en la sección derecha de la ventana de resultados, es la banda del test.

1) Resultado negativo La presencia de una sola banda en la ventana de resultados indica un

resultadonegativo

2) Resultado positivo La presencia de dos bandas de color

indica un resultado positivo.

3) Resultado Inválido

Si la banda púrpura no aparece en la ventana de resultados después de haber realizado el test, el resultado se considera inválido. Es posible que no se hayan seguido correctamente las instrucciones o el test pudo haberse deteriorado. Se recomienda volver a realizar el test para esa muestra.

itaciones del test Aunque el Kit del Test Rápido para la detección del Antígeno del virus del

Moquillo Canino, puede ocurrir una baja incidencia de resultados falsos. Si se obtienen resultados cuestionables, se deben realizar otras pruebas clínicamente disponibles. Como sucede con todas los tests diagnósticos, un diagnóstico clínico definitivo no debe basarse en los resultados de un solo test, sino que debe formularlo un veterinario después de haber evaluado todos los hallazgos clínicos y de laboratorio.

Doc. No. : 1103-3/SP

Issued date : Jun. 25, 2009

!

Kit para la detección del Antígeno de virus del Moquillo Canino

Producido por Bionote, Inc. 2-9, Seogu-dong, Hwaseong-si Gyeonggi-do, Korea 445-170 Tel : +82 70 8280 6111, Fax: +82 31 8003 0618 Web: www.bionote.co.kr

Firma: __________________________ Jin Shik-Oh/DVM, Ph.D

Director Técnico Bionote, Inc.!

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Brucella sp.:"•  Riesgo zoonótico"•  Dificultad de aislamiento"•  Serología""

Neospora caninum: "•  Riesgo transmisión a""bovinos"

•  Serología - IFA"

Antecedentes…"

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Rickettsiales:!•  Riesgo zoonótico"•  Dificultad de diagnóstico

diferencial (Anaplasma sp., Ehrlichia sp., Rickettsia sp.)"

•  Alta morbilidad y mortalidad""

Peritonitis infecciosa felina: !•  Dificultad de diagnóstico ""temprano"

•  Diagnóstico post-mortem"

Antecedentes…"

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Antecedentes…"

2*3,.4,*15677&85961

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¿Qué es el diagnóstico molecular?"

http://www.bbc.co.uk/bitesize/higher/biology/cell_biology/viruses/revision/1/"

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¿Para que sirve el diagnóstico molecular?"

•  Detección temprana del agente infeccioso"

•  Detección específica y altamente sensible – bajas concentraciones del microorganismo"

•  Detección rápida: 24-48h"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?"

Muestra depende de patogenesis de la enfermedad"C

M

Y

CM

MY

CY

CMY

K

introducido2.pdf 1 15/10/14 7:57

LCR (1ml) - Orina"

Sangre en EDTA (5ml)"Efusión abdominal y torácica"

LCR (1ml)"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Extracción DNA o RNA"

Homogenizar y lisar"

Unir "ADN/ARN"

Lavar"

Eluir "ADN/ARN"

Precipitar ADN/ARN"

!"#$%&&'''(/I*3,-/!(/*01111J4)4#,-)K1

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación DNA"

•  PCR multiplex para Brucella sp. y rickettsiales"•  PCR anidado para Neospora caninum "

Denaturación"""""Anillado""""""Extensión"

!"#$%&&'''(3-L(/*0&4##IM/4N*3$1J4)4#,-)K1

Amplificación exponencial"

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cine strain was readily distinguished from other B. melitensisstrains by a specific additional 218-bp fragment. B. canis wasdistinguished by the absence of the 794-bp fragment and B.neotomae by the absence of the 152-bp fragment. Finally, whenDNA from Brucella strains isolated from marine mammals (B.pinnipedialis and B. ceti) was used, a specific additional1,320-bp fragment was amplified whereas the 450-bp fragmentwas absent. The same results presented in Fig. 1 were obtainedwith all Brucella strains assayed, with the only exception beingsome B. canis strains. Nine out of 21 B. canis strains showedthe same PCR profile as B. suis. Typing of these nine strainswas confirmed by classical typing and multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (data not shown). Interest-ingly, these B. canis strains with a B. suis-like profile wereresistant to basic fuchsin and safranin (a variant of the classicalB. canis phenotypic pattern). However, these findings do notdetract from the utility of the Bruce-ladder PCR, since it is

very simple, using sensitivity to dyes and phage susceptibility todifferentiate B. canis (a rough species) from B. suis (a smoothspecies). In addition, B. canis is always isolated from dogs, andB. suis has never been found in this host.

Although this PCR assay cannot differentiate among biovarsfrom the same species, Bruce-ladder was species specific andall the strains and biovars from the same Brucella species gavethe same profile. The practical interest of Bruce-ladder fortyping purposes is evident since some of the cumbersome andlong-lasting microbiological procedures currently used couldbe avoided. The specificity of the Bruce-ladder PCR has beentested previously (10), using as targets DNA from 30 strainsphylogenetically or serologically related to Brucella. TheBruce-ladder PCR worked equally well irrespective of the cul-tural conditions, DNA extraction methods, or thermocyclersused. The same results were obtained in seven different labo-ratories with brucellae obtained from the five continents and

TABLE 1. Oligonucleotides used in Bruce-ladder multiplex PCR assay

Primera Sequence (5!–3!) Ampliconsize (bp) DNA target Source of genetic differences Reference(s)

BMEI0998f ATC CTA TTG CCC CGATAA GG

1,682 Glycosyltransferase, genewboA

IS711 insertion in BMEI0998 inB. abortus RB51 and deletionof 15,079 bp in BMEI0993–BMEI1012 in B. ovis

9, 15

BMEI0997r GCT TCG CAT TTT CACTGT AGC

BMEI0535f GCG CAT TCT TCG GTTATG AA

450 (1,320)b Immunodominantantigen, gene bp26

IS711 insertion in BMEI0535–BMEI0536 in Brucella strainsisolated from marine mammals

5

BMEI0536r CGC AGG CGA AAA CAGCTA TAA

BMEII0843f TTT ACA CAG GCA ATCCAG CA

1,071 Outer membraneprotein, gene omp31

Deletion of 25,061 bp inBMEII826–BMEII0850 inB. abortus

17

BMEII0844r GCG TCC AGT TGT TGTTGA TG

BMEI1436f ACG CAG ACG ACC TTCGGT AT

794 Polysaccharidedeacetylase

Deletion of 976 bp in BMEI1435in B. canis

13

BMEI1435r TTT ATC CAT CGC CCTGTC AC

BMEII0428f GCC GCT ATT ATG TGGACT GG

587 Erythritol catabolism,gene eryC (D-erythrulose-1-phosphatedehydrogenase)

Deletion of 702 bp inBMEII0427–BMEII0428 inB. abortus S19

14

BMEII0428r AAT GAC TTC ACG GTCGTT CG

BR0953f GGA ACA CTA CGC CACCTT GT

272 ABC transporter bindingprotein

Deletion of 2,653 bp in BR0951–BR0955 in B. melitensis andB. abortus

11, 12

BR0953r GAT GGA GCA AAC GCTGAA G

BMEI0752f CAG GCA AAC CCT CAGAAG C

218 Ribosomal protein S12,gene rpsL

Point mutation in BMEI0752 inB. melitensis Rev.1

6

BMEI0752r GAT GTG GTA ACG CACACC AA

BMEII0987f CGC AGA CAG TGA CCATCA AA

152 Transcriptionalregulator, CRP family

Deletion of 2,203 bp inBMEII0986–BMEII0988 inB. neotomae

13

BMEII0987r GTA TTC AGC CCC CGTTAC CT

a Designation are based on the B. melitensis (BME) or B. suis (BR) genome sequences. f, forward; r, reverse.b Due to a DNA insertion in the bp26 gene, the amplicon size in Brucella strains isolated from marine mammals is 1,320 bp.

VOL. 46, 2008 NOTES 3485

¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación DNA"

•  PCR multiplex para Brucella sp."

cine strain was readily distinguished from other B. melitensisstrains by a specific additional 218-bp fragment. B. canis wasdistinguished by the absence of the 794-bp fragment and B.neotomae by the absence of the 152-bp fragment. Finally, whenDNA from Brucella strains isolated from marine mammals (B.pinnipedialis and B. ceti) was used, a specific additional1,320-bp fragment was amplified whereas the 450-bp fragmentwas absent. The same results presented in Fig. 1 were obtainedwith all Brucella strains assayed, with the only exception beingsome B. canis strains. Nine out of 21 B. canis strains showedthe same PCR profile as B. suis. Typing of these nine strainswas confirmed by classical typing and multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (data not shown). Interest-ingly, these B. canis strains with a B. suis-like profile wereresistant to basic fuchsin and safranin (a variant of the classicalB. canis phenotypic pattern). However, these findings do notdetract from the utility of the Bruce-ladder PCR, since it is

very simple, using sensitivity to dyes and phage susceptibility todifferentiate B. canis (a rough species) from B. suis (a smoothspecies). In addition, B. canis is always isolated from dogs, andB. suis has never been found in this host.

Although this PCR assay cannot differentiate among biovarsfrom the same species, Bruce-ladder was species specific andall the strains and biovars from the same Brucella species gavethe same profile. The practical interest of Bruce-ladder fortyping purposes is evident since some of the cumbersome andlong-lasting microbiological procedures currently used couldbe avoided. The specificity of the Bruce-ladder PCR has beentested previously (10), using as targets DNA from 30 strainsphylogenetically or serologically related to Brucella. TheBruce-ladder PCR worked equally well irrespective of the cul-tural conditions, DNA extraction methods, or thermocyclersused. The same results were obtained in seven different labo-ratories with brucellae obtained from the five continents and

TABLE 1. Oligonucleotides used in Bruce-ladder multiplex PCR assay

Primera Sequence (5!–3!) Ampliconsize (bp) DNA target Source of genetic differences Reference(s)

BMEI0998f ATC CTA TTG CCC CGATAA GG

1,682 Glycosyltransferase, genewboA

IS711 insertion in BMEI0998 inB. abortus RB51 and deletionof 15,079 bp in BMEI0993–BMEI1012 in B. ovis

9, 15

BMEI0997r GCT TCG CAT TTT CACTGT AGC

BMEI0535f GCG CAT TCT TCG GTTATG AA

450 (1,320)b Immunodominantantigen, gene bp26

IS711 insertion in BMEI0535–BMEI0536 in Brucella strainsisolated from marine mammals

5

BMEI0536r CGC AGG CGA AAA CAGCTA TAA

BMEII0843f TTT ACA CAG GCA ATCCAG CA

1,071 Outer membraneprotein, gene omp31

Deletion of 25,061 bp inBMEII826–BMEII0850 inB. abortus

17

BMEII0844r GCG TCC AGT TGT TGTTGA TG

BMEI1436f ACG CAG ACG ACC TTCGGT AT

794 Polysaccharidedeacetylase

Deletion of 976 bp in BMEI1435in B. canis

13

BMEI1435r TTT ATC CAT CGC CCTGTC AC

BMEII0428f GCC GCT ATT ATG TGGACT GG

587 Erythritol catabolism,gene eryC (D-erythrulose-1-phosphatedehydrogenase)

Deletion of 702 bp inBMEII0427–BMEII0428 inB. abortus S19

14

BMEII0428r AAT GAC TTC ACG GTCGTT CG

BR0953f GGA ACA CTA CGC CACCTT GT

272 ABC transporter bindingprotein

Deletion of 2,653 bp in BR0951–BR0955 in B. melitensis andB. abortus

11, 12

BR0953r GAT GGA GCA AAC GCTGAA G

BMEI0752f CAG GCA AAC CCT CAGAAG C

218 Ribosomal protein S12,gene rpsL

Point mutation in BMEI0752 inB. melitensis Rev.1

6

BMEI0752r GAT GTG GTA ACG CACACC AA

BMEII0987f CGC AGA CAG TGA CCATCA AA

152 Transcriptionalregulator, CRP family

Deletion of 2,203 bp inBMEII0986–BMEII0988 inB. neotomae

13

BMEII0987r GTA TTC AGC CCC CGTTAC CT

a Designation are based on the B. melitensis (BME) or B. suis (BR) genome sequences. f, forward; r, reverse.b Due to a DNA insertion in the bp26 gene, the amplicon size in Brucella strains isolated from marine mammals is 1,320 bp.

VOL. 46, 2008 NOTES 3485

cine strain was readily distinguished from other B. melitensisstrains by a specific additional 218-bp fragment. B. canis wasdistinguished by the absence of the 794-bp fragment and B.neotomae by the absence of the 152-bp fragment. Finally, whenDNA from Brucella strains isolated from marine mammals (B.pinnipedialis and B. ceti) was used, a specific additional1,320-bp fragment was amplified whereas the 450-bp fragmentwas absent. The same results presented in Fig. 1 were obtainedwith all Brucella strains assayed, with the only exception beingsome B. canis strains. Nine out of 21 B. canis strains showedthe same PCR profile as B. suis. Typing of these nine strainswas confirmed by classical typing and multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis (data not shown). Interest-ingly, these B. canis strains with a B. suis-like profile wereresistant to basic fuchsin and safranin (a variant of the classicalB. canis phenotypic pattern). However, these findings do notdetract from the utility of the Bruce-ladder PCR, since it is

very simple, using sensitivity to dyes and phage susceptibility todifferentiate B. canis (a rough species) from B. suis (a smoothspecies). In addition, B. canis is always isolated from dogs, andB. suis has never been found in this host.

Although this PCR assay cannot differentiate among biovarsfrom the same species, Bruce-ladder was species specific andall the strains and biovars from the same Brucella species gavethe same profile. The practical interest of Bruce-ladder fortyping purposes is evident since some of the cumbersome andlong-lasting microbiological procedures currently used couldbe avoided. The specificity of the Bruce-ladder PCR has beentested previously (10), using as targets DNA from 30 strainsphylogenetically or serologically related to Brucella. TheBruce-ladder PCR worked equally well irrespective of the cul-tural conditions, DNA extraction methods, or thermocyclersused. The same results were obtained in seven different labo-ratories with brucellae obtained from the five continents and

TABLE 1. Oligonucleotides used in Bruce-ladder multiplex PCR assay

Primera Sequence (5!–3!) Ampliconsize (bp) DNA target Source of genetic differences Reference(s)

BMEI0998f ATC CTA TTG CCC CGATAA GG

1,682 Glycosyltransferase, genewboA

IS711 insertion in BMEI0998 inB. abortus RB51 and deletionof 15,079 bp in BMEI0993–BMEI1012 in B. ovis

9, 15

BMEI0997r GCT TCG CAT TTT CACTGT AGC

BMEI0535f GCG CAT TCT TCG GTTATG AA

450 (1,320)b Immunodominantantigen, gene bp26

IS711 insertion in BMEI0535–BMEI0536 in Brucella strainsisolated from marine mammals

5

BMEI0536r CGC AGG CGA AAA CAGCTA TAA

BMEII0843f TTT ACA CAG GCA ATCCAG CA

1,071 Outer membraneprotein, gene omp31

Deletion of 25,061 bp inBMEII826–BMEII0850 inB. abortus

17

BMEII0844r GCG TCC AGT TGT TGTTGA TG

BMEI1436f ACG CAG ACG ACC TTCGGT AT

794 Polysaccharidedeacetylase

Deletion of 976 bp in BMEI1435in B. canis

13

BMEI1435r TTT ATC CAT CGC CCTGTC AC

BMEII0428f GCC GCT ATT ATG TGGACT GG

587 Erythritol catabolism,gene eryC (D-erythrulose-1-phosphatedehydrogenase)

Deletion of 702 bp inBMEII0427–BMEII0428 inB. abortus S19

14

BMEII0428r AAT GAC TTC ACG GTCGTT CG

BR0953f GGA ACA CTA CGC CACCTT GT

272 ABC transporter bindingprotein

Deletion of 2,653 bp in BR0951–BR0955 in B. melitensis andB. abortus

11, 12

BR0953r GAT GGA GCA AAC GCTGAA G

BMEI0752f CAG GCA AAC CCT CAGAAG C

218 Ribosomal protein S12,gene rpsL

Point mutation in BMEI0752 inB. melitensis Rev.1

6

BMEI0752r GAT GTG GTA ACG CACACC AA

BMEII0987f CGC AGA CAG TGA CCATCA AA

152 Transcriptionalregulator, CRP family

Deletion of 2,203 bp inBMEII0986–BMEII0988 inB. neotomae

13

BMEII0987r GTA TTC AGC CCC CGTTAC CT

a Designation are based on the B. melitensis (BME) or B. suis (BR) genome sequences. f, forward; r, reverse.b Due to a DNA insertion in the bp26 gene, the amplicon size in Brucella strains isolated from marine mammals is 1,320 bp.

VOL. 46, 2008 NOTES 3485

B. abortus!B. melitensis"B. ovis"

B. suis"B. canis"B. neotomae"

Vacuna RB51"Vacuna Rev1"Vacuna S19"

Mayer-Scholl A et al. 2012. J Microbiol Methods 80: 112–114"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación DNA"

•  PCR anidado de Neospora caninum!Regiones Internal Transcribed Spacer (ITS) de ADNr"

Ellis JT et al. 1999. Int J Parasitol 29: 1589-1596"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación RNA"

•  RT-PCR virus peritonitis infecciosa felina"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación RNA"

•  RT-PCR virus peritonitis infecciosa felina"!  Dificultad para diferenciar FECV RNA de FIPV RNA "!  Teoría: "

o  FECV solo se encuentra en intestino y no en tejidos"

o  FIPV se encontraría en tejidos, fluidos y sangre"

!  93% de gatos diagnosticados correctamente con PIF por detección en sangre"

!  Experimentalmente FECV fue detectado en varios órganos internos después de que la eliminación fecal cesó"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación RNA"

•  qRT-PCR virus distemper canino"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Amplificación RNA"

•  qRT-PCR y RT-PCR virus distemper canino"

Detección del gen de la

nucleocapside (N)"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Visualización resultado PCR"

PCR multiplex para Brucella sp. 1

A: B. abortus!M: B. melitensis"O: B. ovis"

S: B. suis"S19: Vacuna S19"RB51: Vacuna RB51"

Rev: Vacuna Rev1"C: B. canis"N: B. neotomae"

Mayer-Scholl A et al. 2012. J Microbiol Methods 80: 112–114"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Visualización resultado PCR"

PCR multiplex para Brucella sp. Control S1911CS111111119111119&951119&955119&955511111CD@1

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Visualización resultado PCR"

PCR anidado para Neospora caninum1

PCR anidada de un solo paso de las regiones internal transcribed spacer (ITS) del ADN ribosomal "

Ellis JT et al. 1999. Int J Parasitol 29: 1589-1596"

146bp"

200bp"

PM POS 77 78 79 80 NEG "

POS: Control positivo"NEG: Contol negativo"77: Sangre canino"78: Tejidos feto bov."79: Tejidos mortinato b "80: Tejidos mortinato b"

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¿Como funciona el diagnóstico molecular?..."Visualización resultado qRT-PCR"

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¿Que garantiza los resultados?"Implementación" Validación" Logística" Servicio al

público"

•  Equipos""  Termocicladores Biorad "

"T100 y CFX96"•  Materiales"

"  Grado molecular"•  Reactivos"

"  Certificados"•  Procedimientos operativos estándar"•  Controles positivos y negativos PCR"•  Controles internos de extracción"

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¿Que garantiza los resultados?"Implementación" Validación" Logística" Servicio al

público"

•  Muestras clínicas (77 muestras)"Distemper canino (DC), Neospora caninum (NC), Brucella sp. (B)!

•  Casos positivos por otras técnicas""  DC: 32 ""  NC: 3 ""  B: 4"

•  Casos sospechosos""  DC: 31""  NC: 5""  B: 2"

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¿Que garantiza los resultados?"Implementación" Validación" Logística" Servicio al

público"

Agente detectado"

Anigen CDV" Patología"

PCR"

Muestra" Resultado"

Distemper" NEG" Sospechoso" Hisopo conjuntival"

POS"

Distemper "(fase nerviosa)"

---" ---" Orina" POS"

---" ---" Hisopo conjuntival"

NEG"

---" ---" Sangre" NEG"

Ellia G et al. 2006. J Virol Methods 136: 171-176"

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¿Que garantiza los resultados?"Implementación" Validación" Logística" Servicio al

público"

•  Remisión de la muestra inmediatamente después de la toma"

•  Mantener refrigerada <18h"•  Extracción ADN o ARN diferenciales de

acuerdo a tipo de muestra"•  Amplificación diaria independientemente

del número de muestras remitidas"

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¿Que garantiza los resultados?"Implementación" Validación" Logística" Servicio al

público"

•  Profesionales con experiencia y formación doctoral"

•  Interinstitucional"•  Asesoría permanente de clientes"•  Disponibilidad permanente del servicio"•  Servicio a domicilio"•  Resultado vía e-mail"

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Ventajas comparativas del dx molecular con otras pruebas"

Distemper canino"Característica" Anigen rapid

CDV Ag Test Kit"Serología"

ELISA" qRT-PCR"

Nivel de detección"

Carga viral mínima no definida"

Suero"Desde 3 día post-infección"Carga viral"100 copias RNA"

Falsos negativos" Baja incidencia" No aplica" Cargas virales <1x102copias"

Decisión tratamiento precoz"

No es posible" No es posible"Tx precoz"Mejora sobrevivencia"

Paciente NO vacunado"

Resultado confiable"

Resultado confiable"

Resultado confiable"

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De 38 animales, 31 se recuperaron y 7 murieron, lo que representa un 81.6% de recuperación. En este estudio se incluyo un grupo control, el cual no recibió tratamiento con interferón y el rango de recuperación solo fue del 22%, teniendo una mortalidad del 78%.

Estudio 2De 13 casos, 12 de los animales tuvieron una recuperación completa y uno murió, lo que representa un 92% de recuperación

Estudio 3De 22 casos, 18 presentaron recuperación, 4 murieron lo que representa una respuesta del 81.8 %En estos estudios los animales sirvieron como sus controles.Un dato relevante que evaluaron los investigadores en estos estudios, fue el rango de respuesta por días después de iniciar los signos de moquillo canino y encontraron que la aplicación del producto resultó:•muy eficaz si se aplicaba antes de 4 días de iniciados los signos, •medianamente eficaz si se aplicaba entre el día 4 y el 7,•poco eficaz después de 7 días.

Teniendo como base los resultados anteriores, se desarrolló el siguiente plan de tratamiento individual, usando el Virbagen Omega (Interferón Omega Recombinante de Origen Felino)

Objetivo:Incrementar la reactividad del sistema inmune del animal

Intervención en la fase aguda:Virbagen Omega 2 MU/animal, 3 aplicaciones a días alternos (D0, D2 y D4)Asociado a tratamiento de soporte según el caso

Evaluación:Al D7: Realizar seguimiento clínico

El tratamiento con Virbagen Omega permite:•Disminuir la mortalidad y severidad de los signos clínicos•Disminuir el riesgo de presentación de signos nerviosos en animals que se infecten de Moquillo Canino

Pauta para tratamiento con Virbagen Omega en casos de Moquillo Canino

Bibliografía1. Addie D., Buonavoglia C., Camy G., McCann T., Gunn-Moore D., Hartmann K., Hennet P., Ishida T., Jongh O., Lanore D., De Mari K., Mihaljevic S-Y., Péchereau D., Régnier A., Thiry E., Vinet C. (2004) – Veterinary Interferon Handbook. First Edition2. Appel M. Pathogenesis of canine distemper. Am J Vet Res 1969; 30:1167-1182.3. Appel MJ. Canine distemper virus. In: Horzinek M, ed: Virus Infections of Carnivores. 1- Virus Infections of Vertebrates. Amsterdam: Elsevier Science Publishers, 1987; 133-159.4. Berrios P, Durán C. Principales enfermedades virales de los caninos. Situación en Chile. Monogr. Electrón. Patol Vet 2005 2:68-955. Court L, Alfonso Dr. Aspectos generales del complejo distemper en el canino. Monografías de Medicina Veterinaria, Vol 4 (2), Diciembre 1982.6. Ernst M, Santiago, MetayerM. Foch, Martin N., Rodolfo. Factores de riesgo en la ocurrencia de algunas enfermedades infecciosas del canino: Estuidio retrospectivo de registros clínicos. Monografías de Medicina Veterinaria, Vol 9 (2), Diciembre 1987.7. Greene CE, Appel MJ. (1998) Canine Distemper. In: Greene CE, ed. Infectious Diseases of the Dog and Cat. 2nd Edition. Philadelphia: WB Saunders Co, 1998; 9 - 228. Headley SA, Graca DL. Canine distemper: epidemiological findings of 250 caes. Braz J. Vet Res and Anim Sci. 200;379. Hernandez-Villalobos A. Moquillo Canino. AMMVEPE 2006;17:197-200.10. Ingrid D. R. Pardo. Phylogenetic Characterization Of Canine Distemper Viruses. Detected In Naturally Infected North American Dogs. A Thesis presented to the Faculty of the Graduate School. University of Missouri-Columbia. Dr. Steven B. Kleiboeker, Thesis Supervisor. May 200611. Jongh O., Cadoré J.-L. (1994) La maladie de Carré dans l’espèce canine. Le point vétérinaire 1994 ; 25(158), 919 - 926. 12. M. J.G Appel and B. A. Summers. Distemper canino: estado actual ( 23-Nov-1999 ). James A. Baker Institute for Animal Health, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, New York, USA. In: Recent Advances in Canine Infectious Diseases, L. Carmichael (Ed.). Publisher: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.13. Shell L. Canine Distemper. Continuing Education 1990, 12:173-179.14. Shimamura, O., Ito K., Takayama S., Kitamura Y., et Uchino T. (1999) – Therapeutic effect of feline Interferon (rFe-IFN) on canine distemper. Proceedings of the 23rd Symposium of Japanese S.A.C. Association15. Summers BA, Greisen HA, Appel MJG. Canine distemper encephalomyelitis: variation with virus strain. J Comp Pathol 1984;94:65-75.16. Wheeler JT. El moquillo canino ¿tiene cura?. Revista Electrónica Veterinaria, 2007; 8, Junio. http://www.veterinaria.org/revistas/redvet

17. Virbac S.A. Data on File, 2007.

Virbac México, S.A. de C.V.Lote 30, Manzana 1

Parque Industrial GuadalajaraEl Salto Jalisco, CP 45690.Tel. (01-33) 50 00 25 00;Fax (01-33) 50 00 25 15

Marca la LÍNEA

01 800 024 [email protected]

www.virbac.com.mx

100%

80%

60%

40%

20%

0%INTERFERON

CONTROL

Muertos Recuperados

Porcentaje de recuperación. Comparativo entregrupo tratado con interferón y grupo control

100%

50%

0%

INTERFERONCONTROL

Muertos Recuperados

Porcentaje de recuperación. Estudios 2 y 3

92%

81.8%

ResultadosEstudio1.

D0 D2 D4 D7 D30

Intervención precozVirbagen Omega 2MU/animal

Tres aplicaciones a días alternosTratamiento sintomático

Evaluación Clínica

Supervivencia (buen estado general)82-92%

Revista Al Dia Virbagen Om.indd 1 1/4/08 5:13:50 PM

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Ventajas comparativas del dx molecular con otras pruebas"

Brucella sp."Característica" Cultivo

microbiológico" Serología" PCR multiplex"

Tiempo resultado"

Dificultades en aislamiento"3-10 días"

2-3 días" 24 h"

Falsos positivos" Altamente específica"

Reacción cruzada con diferentes Brucellas"

Diferencia 6 especies entre campo y vacunales"

Decisión tratamiento precoz"

Depende tiempo aislamiento" No concluyente"

Mejora sobrevivencia y reduce riesgo zoonosis"

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Ventajas comparativas del dx molecular con otras pruebas"

Neospora caninum"Característica" Serología - IFA" PCR anidado"

Tiempo resultado" 2-3 días" 24 h"

Falsos negativos"Detecta contacto con el parásito pero no si está aún en el hospedero"

Detecta parásito en todo su ciclo de vida"

Diferenciación coinfección"Toxoplasma-Distemper"

Altamente específica" Altamente específica"

Decisión eliminación de portadores-excretores" No concluyente" Altamente sensible"

•  Pacientes con sintomatología nerviosa"•  Perros de finca"

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Ventajas comparativas del dx molecular con otras pruebas"

Rickettsiales"Característica" SNAP 4Dx plus" Citología sangre

periférica" PCR multiplex"

Detección del agente" No, detecta Ac"

Depende del momento de toma de muestra"

Si"Alta sensibilidad"

Diferenciación entre Anaplasma sp., Rickettsia sp. y Ehrlichia sp."

Ac contra "A. platys y E. canis!No detecta Rickettsia sp.!

Depende de la experiencia del analista"

Diferencia los tres géneros"

•  Sobrediagnóstico por ausencia de pruebas diagnósticas concluyentes"

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Ventajas comparativas con otras pruebas"

Peritonitis infecciosa felina"Característica" Anatomopatología" Serología" RT-PCR"

Detección del agente"

No, "detecta lesiones post-mortem"

No, "detecta Ac" Si"

Diferenciación entre enteritis viral felina y peritonitis infecciosa felina"

Si por diferencia de lesiones"

No, inespecífico no varia con coronavirus no mutado""

Detección en sangre"

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¿Qué limitaciones tiene el dx molecular?"

•  Detección depende de la correcta selección, toma y envío de la muestra (patogenesis)"

•  Inhibidores de la PCR"•  Diagnóstico integral: Incluir para toma

de decisiones la clínica, epidemiología y pruebas complementarias"

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¿Cuánto cuesta el servicio?"11

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¿En que seguimos trabajando?"Distemper canino: (banco de ARN)"•  Amplificación y secuenciación gen H"•  Relaciones filogenéticas con cepas

vacunales"!Neospora caninum: "•  Proyecto cadena epidemiológica canino-

bovino-equino"

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¿En que seguimos trabajando?"!

Peritonitis infecciosa felina:!•  Implementación y validación de la técnica""

Parvovirus canino!Leptospirosis!