diagnóstico de procesos respiratorios en bovinooferta de diagnóstico casos clínicos panel...

diagnósticode procesos respiratorios en bovino

procesos no infecciosos

nutrición

causas predisponentes de manejotemperaturaventilacióndensidad de los animalesestrés por transporteencalostramiento deficiente

procesos infecciosos

bacteriasMycoplasma bovisHistophilus somniPasteurella multocidaMannheimia haemolyticaBibersteinia trehalosi

virusHerpesvirus bovino tipo 1 (IBR)Virus de la diarrea vírica bovina (BVD)Parainfluenza 3 (PI3)Virus sincitial respiratorio bovino (BRSV)Coronavirus bovino

parásitosDictyocaulus vivaparus

cuadro etiológico

Los procesos respiratorios en ganado bovino son patologías multifactoriales en las que están implicados diferentes factores.

Es muy importante realizar un diferencial mediante el análisis laboratorial para detectar los agentes implicados y de esta manera tomar medidas efectivas.

Además del panel diferencial de los agentes más importantes, hay que tener en cuenta otros agentes infecciosos que se han relacionado con procesos respiratorios: virus (adenovirus, influenza, calicivirus, reovirus, rinovirus…), bacterias que pueden actuar como agentes secundarios (Trueperella pyogenes, Escherichia coli, Streptococcus spp., Salmonella spp…) y otros agentes parasitarios (lesiones pulmonares por echinococcosis, ascaridiasis o incluso fasciolosis).

pulmonesse requiere material y conocimientos de necropsia

permite un diagnóstico completo: cultivo microbiológico, real time PCR e histopatología

requiere animales muertos recientemente o sacrificados

el envío de muestras de un único animal puede no ser representativo del grupo

hisopos nasales profundosmuestreo sencillo

diagnóstico: cultivo microbiológico y real time PCR

puede dar un diagnóstico erróneo por aislamiento cepas no patógenas en vías altas

es posible no detectar agentes presentes en pulmón

lavados broncoalveolaresse requiere material específico y personal entrenado

diagnóstico: cultivo microbiológico y real time PCR

aporta información de los agentes presentes en pulmón en animal vivo

permite un estudio más representativo de la explotación a muestrear

sueros sanguíneosse requiere material para extracción de sangre

es un buen sistema de monitorización por seroperfiles (serología)

indica la presencia de anticuerpos, no del agente infeccioso

no se diferencia la respuesta vacunal de la infección natural (excepto en vacunas tipo DIVA)

toma de muestras

técnicas de diagnóstico

cultivo microbiológico

permite la obtención de la cepa para realizar estudios de sensibilidad antibiótica, tipado, autovacunas, etc.

concentración mínima inhibitoria (CMI)

muestra la concentración más pequeña de antibiótico que impide la multiplicación de la bacteria. Nos permite conocer cuál es el antibiótico más efectivo en la dosis adecuada, evitando subdosificar o sobredosificar

antibiograma

realizados mediante la técnica de Kirby Bauer (antibiograma en disco) dónde se indica si una bacteria es sensible, resistente o tiene sensibilidad intermedia frente a un antibiótico

real time PCR

permite confirmar la presencia de virus y bacterias implicadas

histopatología

de interés para valorar la importancia de cada uno de los agentes implicados en el complejo respiratorio bovino

tipado de cepas

se puede realizar el tipado por qPCR tanto de las cepas aisladas como directamente de la muestra obtenida del pulmón. El tipado es de gran interés a la hora de realizar estudios epidemiológicos en la explotación, elección de vacunas o diseños de autovacunas

serología

permite valorar la presencia de anticuerpos como respuesta a la exposición a los agentes infecciosos o vacunaciones preventivas

oferta de diagnóstico

casos clínicos

panel respiratorio bovino

tipado capsular de Pasteurella multocida

identificación de serotipos de Mannheimia haemolytica

panel serología respiratorio


qPCR: Pasteurella multocida tipos A, B, D, E, F

qPCR: Mannheimia haemolytica serotipos 1, 2 y 6

ELISA: BVD p80, IBR gE, PI3, BRSV, Mycoplasma bovis

qPCR: Pestivirus, IBR, BRSV, Parainfluenza 3, Coronavirus bovino , Mycoplasma bovis, Histophilus somni, Pasteurella multocida, Mannheimia haemolytica, Bibersteinia trehalosiantibiograma de bacterias de interés

caso 1: procesos respiratorios por Pasteurella multocida en bovino de leche

caso 3: proceso mixto vírico y bacteriano en terneras de recría

caso 5: problemas por Histophilus somni en terneros de aptitud cárnica

caso 2: complejo respiratorio en terneros de cebo por Mycoplasma bovis, Pasteurella multocida y BVD

caso 4: procesos respiratorios en novillas

muestras recibidas

un pulmón de un ternero de cuatro días de edad

procesos respiratorios por Pasteurella multocida en bovino de leche

cinco lavados transtraqueales de novillas de leche

caso1cultivo microbiológico

crotal

pulmón

lavado 1

lavado 2

lavado 3

lavado 4

lavado 5

identificación

Pasteurella multocida*

Sin crecimiento

Sin crecimiento


Enterobacterias*

Sin crecimiento

diagnóstico solicitado: panel respiratorio bovino

antibiograma: Bacteria y crotal: Pasteurella multocida aislada en Pulmón

Antibiótico Resultado Diámetro (mm) Referencia (mm)

D-Amoxicilina Sensible 34,6 14 21

D-Ampilicina Sensible 27,5 16 17

D-Cloxacilina Sensible 15,7 10 13

D-Penicilina Sensible 29,1 29 29

D-Bacitracina Intermedia 12 8 13

D- Trimetoprim/sulfametoxazol Sensible 23,7 10 16

D-Tetraciclina Resistente 8,3 18 23

C-Apramicina Resistente 11,5 19 23

C-Gentamicina Sensible 18,6 12 16

C-Neomicina Sensible 17,5 12 17

C-Espectinomicina Sensible 17,2 10 14

C-Estreptomicina Resistente 0 11 15

C-Amoxicilina + ácido clavulánico Sensible 31,3 13 18

C-Florfenicol Sensible 27,1 14 19

C-Tianfenicol Resistente 0 12 18

C-Cefalotina Sensible 30,6 14 18

C-Clindamicina Resistente 0 14 21

C-Eritromicina Resistente 0 13 23

C-Gamitromicina Resistente 0 11 15

C-Tilmicosina Resistente 0 10 14

C-Tilosina Resistente 11,7 22 26

B-Ceftiofur Sensible 37,7 17 21

B-Colistina-sulfato Sensible 17,5 8 11

B-Enrofloxacina Intermedia 19,6 16 21

B-Marbofloxacina Sensible 20,5 14 20

histopatología

diagnóstico emitido por Micros Veterinaria

A nivel histológico se comprueba la existencia de una neumonía exudativa aguda, de carácter fibrinoso que se caracteriza por una intensa congestión, con hemorragias, edema y exudado hacia los alveolos de fibrina y abundantes células inflamatorias (linfocitos, neutrófilos y macrófagos, los cuales aparecen en elevada densidad, lo que provoca la distorsión de su morfología, apareciendo como células en “grano de avena”. Mediante la tinción de gram se observan algunas colonias de cocobacilos gram negativos de pequeño tamaño en las áreas lesionadas.

real time PCR

determinaciones

Pestivirus

IBR

BRSV

PI3

Mycoplasma bovis

Histophilus somni

Pasteurella multocida

Mannheimia haemolytica

muestras

P

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (37,05)

Neg.

Lav 1-5

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (23,64)

Neg.

Como ambas muestras fueron

positivas a Pasteurella

multocida se decidió hacer

el tipado capsular

tipado capsular de Pasteurella multocida

comentario del caso

muestras

P

Lav 1-5

cepa P

cepa Lav 3

resultado

Pasteurella multocida capsular tipo B (34,96)

Pasteurella multocida capsular tipo A (23,06)

Pasteurella multocida capsular tipo B

Pasteurella multocida capsular tipo A

ternero: proceso causado por P. multocida serotipo capsular B

aislado en el cultivo e identificado por MALDI-TOF

identificado por qPCR el serotipo capsular en cepa y muestra

implicación de P. multocida en las lesiones confirmada por histopatología

novillas: proceso causado por P. multocida serotipo capsular A

aislado en el cultivo e identificado por MALDI-TOF

identificado por qPCR el serotipo capsular en cepa y muestra

Dentro de las medidas

de tratamiento y control, se recomendó el uso de una autovacuna combinada con ambas cepas de Pasteurella multocida aisladas en esta explotación.

muestras recibidas observaciones macroscópicas

dos fragmentos de pulmón de terneros de 2,5 - 3 meses de edad

fragmento 1: congestión, enfisema y engrosamiento de la pleura

fragmento 2: consolidación rojiza, enfisema, engrosamiento de la pleura y presencia de fibrina cubriendo la superficie

complejo respiratorio en terneros de cebo por Mycoplasma bovis, Pasteurella multocida y BVDcaso2


crotal

pulmón 1

pulmón 2

identificación

Mycoplasma sp.

Trueperella pyogenes***

Escherichia coli*

Streptococcus sp*

Mycoplasma sp.

Bacillus sp.*


real time PCR

determinaciones

Pestivirus

IBR

BRSV

PI3

Mycoplasma bovis

Histophilus somni



muestras

P 1+2

Positivo (27,98)

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (17,57)

Neg.

Positivo (30,88)

Neg.

comentario del caso

agente principal:

Mycoplasma sp. la detección de Mycoplasma bovis en concentración muy alta y el aislamiento en ambos pulmones sugieren que es el principal agente causante del proceso.

otros agentes causales:

BVD (pestivirus) indica una base vírica, por lo que se debe revisar el plan de vacunación y valorar la posible presencia de animales permanentemente infectados (PI).

Trueperella pyogenes se ha aislado en cultivo masivo en uno de los pulmones. Es una bacteria piogénica que actúa de manera secundaria u oportunista. Su presencia en los pulmones es indicativa de la cronicidad del proceso.

Pasteurella multocida se detecta en concentración media-baja, siendo negativo el cultivo. Si bien no es el agente mayoritario, no se puede descartar su participación en el proceso.

Proceso respiratorio causado por varios agentes etiológicos, tanto víricos como bacterianos, de los cuales Mycoplasma bovis es el principal implicado.

muestras recibidas

3 lavados broncoalveolares de terneras de 2 - 4 meses que presentan signos respiratorios

proceso mixto vírico y bacteriano en ternera de recríacaso3


crotal

lavado 1

lavado 2

lavado 3

identificación

Mycoplasma sp.

Bacillus sp*


Staphylococcus coagulasa negativo

Mycoplasma sp.


Bacillus sp.*

Enterobacterias*


antibiograma: Bacteria y crotal: Pasteurella multocida aislada en Lavado 2






D-Bacitracina Resistente 0 8 13

D- Trimetoprim/sulfametoxazol Sensible 35,6 10 16

D-Tetraciclina Sensible 34,6 18 23


C-Gentamicina Sensible 17,5 12 16

C-Neomicina Sensible 18,7 12 17

C-Espectinomicina Sensible 20,3 10 14

C-Estreptomicina Intermedia 14,8 11 15


C-Florfenicol Sensible 34,1 14 19

C-Tianfenicol Sensible 37,5 12 18

C-Cefalotina Sensible 33 14 18

C-Clindamicina Resistente 0 14 21

C-Eritromicina Intermedia 20,3 13 23

C-Gamitromicina Sensible 22,7 11 15

C-Tilmicosina Sensible 14,1 10 14




B-Enrofloxacina Sensible 37,7 16 21


real time PCR

determinaciones

Pestivirus

IBR

BRSV

PI3

Mycoplasma bovis

Histophilus somni



muestras

Lav 1-3

Neg.

Neg.

Positivo (22,31)

Neg.

Positivo (23,02)

Neg.

Positivo (27,67)

Positivo (35,12)

comentario del caso

En el caso actual se detectaron los siguientes agentes implicados en el complejo respiratorio bovino:

Virus: BRSV en concentración alta

Bacterias: Mycoplasma bovis en concentración alta Pasteurella multocida en concentración media Mannheimia haemolytica en concentración baja

En conclusión se trata de un proceso mixto con base vírica (BRSV) e implicación bacteriana (principalmente por Mycoplasma bovis).

Se recomendó revisar el protocolo de vacunación frente a agentes víricos e instaurar medidas de control y tratamiento frente a Mycoplasma bovis, Pasteurella multocida y Mannheimia haemolytica.

muestras recibidas

situación de la explotación

5 sueros para estudio serológico completo de novillas con problemas respiratorios

Los problemas se detectan tras el parto, pues no se produce la cantidad de leche esperada.

No responden al tratamiento antibiótico con eritromicina, penicilina y enrofloxacina.

No se detectan problemas en vacas de 2º parto.

Los terneros tienen problemas pero responden bien al tratamiento.

La explotación vacuna frente a IBR con vacuna marcada y frente a enterotoxemia.

procesos respiratorios en novillascaso4

diagnóstico solicitado: panel serológico respiratorio

S1

S2

S3

S4

S5

70% Positivo

41% Positivo

29% Positivo

91% Positivo

23% Neg.

100% Neg.

100% Neg.

100% Neg.

100% Neg.

100% Neg.

81% Neg.

82% Neg.

87% Neg.

100% Neg.

87% Neg.

10% Neg.

18% Neg.

12% Neg.

10% Neg.

16% Neg.

Positivo +++

Positivo +++

Positivo +++

Positivo +

Positivo ++

sueros BRSV BVD p80 IBR gE M. bovis PI3

serología

comentario del caso

En esta ocasión el veterinario responsable sospechaba de un proceso vírico al no haber obtenido respuesta con el tratamiento antibiótico. Puesto que los animales solo estaban vacunados con IBR marcada se realizó el envío de sueros de animales afectados para su valoración.

Los resultados son contundentes mostrando la respuesta serológica de todos los animales frente al virus respiratorio sincitial bovino (BRSV) y Parainfluenza 3 (PI3), indicando la infección de los animales por estos virus. Se descartó la presencia de anticuerpos frente a los siguientes agentes respiratorios: BVD, IBR (anticuerpos frente a virus campo) y Mycoplasma bovis.

Se recomendó la vacunación frente a BRSV y PI3. Se solicitó el envío de muestras de lavados broncoalveolares para valorar la posible participación de otros agentes respiratorios para los que no está disponible el estudio serológico como Histophilus somni, Pasteurella multocida y Mannheimia haemolytica.

Es importante remarcar que la utilidad del estudio serológico está muy limitada por el protocolo vacunal que hayan recibido los animales. En caso de animales vacunados con vacunas no marcadas, no es posible diferenciar entre anticuerpos frente a virus campo o anticuerpos vacunales, siendo el estudio serológico de poco valor diagnóstico.

muestras recibidas

5 hisopos nasales profundos de terneros de 2-3 meses de vida que presentan fiebre, mocos y tos

han sido tratados con tilmicosina vía intramuscular y antiinflamatorios no esteroideos y vacunados frente a BRSV

problemas por Histophilus somni en terneros de aptitud cárnicacaso5


crotal

hisopo 1

hisopo 2

hisopo 3

hisopo 4

hisopo 5

identificación

Histophilus somni*

Histophilus somni*

Staphylococcus coagulasa negativo*

Bacillus sp.*

Sin crecimiento

Staphylococcus coagulasa negativo*


antibiograma: Bacteria y crotal: Histophilus somni aislado en Hisopo 2






D-Bacitracina Intermedia 9,5 8 13

D- Trimetoprim/sulfametoxazol Sensible 30 10 16

D-Tetraciclina Sensible 25,6 18 23


C-Gentamicina Resistente 0 12 16

C-Neomicina Intermedia 12,2 12 17

C-Espectinomicina Resistente 0 10 14

C-Estreptomicina Sensible 17,1 11 15


C-Florfenicol Sensible 24 14 19

C-Tianfenicol Resistente 0 12 18

C-Cefalotina Sensible 34,3 14 18

C-Clindamicina Resistente 12,5 14 21

C-Eritromicina Intermedia 14 13 23

C-Gamitromicina Intermedia 13,4 11 15

C-Tilmicosina Sensible 20,2 10 14




B-Enrofloxacina Sensible 38 16 21


real time PCR

determinaciones

Pestivirus

IBR

BRSV

Parainfluenza 3

Mycoplasma bovis

Histophilus somni



muestras

His 1-5

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Neg.

Positivo (30,16)

Neg.

Neg.

comentario del caso

Histophilus somni fue el único agente del complejo respiratorio bovino detectado mediante PCR.

Se consiguió su aislamiento en 2 de las 5 muestras, pudiendo realizar el estudio de sensibilidad antibiótica y conservando la cepa para futuros estudios y/o producción de autovacuna.

Polígono Río Gállego D/850840, San Mateo de Gállego

Zaragoza, España

+34 976 69 45 25

+34 650 16 03 08

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