Diagnóstico molecular de enfermedades en cítricos

Lic. Bioq. M. Sc. Andrés ÁvalosCoordinador

Laboratorio de Diagnóstico FitosanitarioDirección de Sanidad Vegetal

VISAR-MAGA

Objetivo

• Dar a conocer cómo el Ministerio de Agricultura, Ganadería y Alimentación (MAGA) puede apoyar a los citricultores del país mediante el diagnóstico certero de varias enfermedades que afectan a cítricos.

Estructura

• Introducción• Diagnóstico fitosanitario y MIP

– Interacción

• Diagnóstico fitosanitario en MAGA – Cómo lo hace el MAGA

• Diagnóstico molecular fitosanitario en MAGA– Cómo lo hace el MAGA

• Diagnóstico de enfermedades que afectan a cítricos– Cuáles se pueden detectar en MAGA

INTRODUCCIÓN• Laboratorio de

Diagnóstico Fitosanitario – LDF – (DSV-VISAR-MAGA)

• Realiza el diagnóstico de plagas y enfermedades de importancia económica y cuarentenaria

• Brinda certeza técnica para la aplicación de medidas de manejo y control fitosanitarias

• Guatemala, Quetzaltenango y Petén

Diagnóstico fitosanitario y MIP

• La NIMF 27 requiere a la ONPFhacerse responsable de “llevar a cabo” o bien de “autorizar” los servicios de identificación de plagas en apoyo al programa nacional de vigilancia y a las inspecciones.

• “El MIP permite a los agricultores vigilar y controlar las plagas en sus campos, reduciendo al mínimo absoluto la utilización de plaguicidas químicos costosos y potencialmente dañinos y peligrosos.”

• Tomar decisiones informadas• No desperdiciar recursos • Proteger

– Salud humana– Cultivos – Medio ambiente

Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura

• El LDF s un ente clave para detectar oportunamente plagas y enfermedades cuarentenarias, así como las endémicas.

• Programas internos:– Vigilancia epidemiológica y

análisis de riesgo

– Protección y sanidad vegetal

– PIPAA

– HLB

– MOSCAFRUT

Coordinación

Recepción/

Custodio

Entomología

Fitopatología

Molecular

Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura

• Diagnostica organismos de importancia económica y cuarentenaria, utilizando técnicas modernas que permiten la certeza y confiabilidad de los mismos.

• Brinda apoyo a los componentes de Programas del MAGA con el objeto de prevenir y controlar plagas y enfermedades, a través de la ejecución de planes de manejo, control y erradicación.

Diagnóstico fitosanitario en el Ministerio de Agricultura

• Coordinar con laboratorios dentro y fuera del MAGA, redes de laboratorios de diagnóstico fitosanitario, para la armonización de protocolos de diagnóstico fitosanitario.

• Participa con instituciones académicas y centros de investigación, con el objeto de mantener actualizada la información vinculada a metodologías, protocolos y ensayos de laboratorio y resultados de estudios, relacionados con el diagnóstico fitosanitario.

Taller FOCR4T @CNRF, Tecámac, Edo. México, Mayo 2017

Diagnóstico molecular fitosanitario en el Ministerio de Agricultura

• El área del LDF encargada de la puesta a punto de los protocolos de diagnóstico basados en las características genéticas de los patógenos. Surge por iniciativa del Ph.D. Ting-Hsuan Hung, con el apoyo del M.Sc. Kuo-Lin Huangen el marco del programa HLB-Taiwan ICDF liderado en Guatemala por el Ing. M.A. Guillermo Ortiz y el Ing. M.A. Anibal Pérez.

Diagnóstico molecular fitosanitario en el Ministerio de Agricultura

• 2015: HLB + Xf

• 2016: HLB + 8 enfermedades que afectan a cítricos

• 2017: HLB + 42 ensayos específicos utilizando PCR convencional + FOCR4T

Diagnóstico de enfermedades que afectan a cítricos

• Bacterias y hongos– Pseudomonassyringae

– Phytophtora spp.

• Ácaros– Brevipalpus spp.– Eryophues sheldoni– Panonychus citri– Stenotarsonemuslatus

• Insectos

– Aleurothrixusfloccosus

– Aonidiella aurantii

– Aonidiella citrina

– Icerya purchasi

– Lepidosaphes beckii

Muestreo para el diagnóstico de enfermedades comunes en cítricos

A cargo de personal experimentado

– Insectos y ácaros

• Especímenes almacenados en etanol

• Trampas adhesivas

• Hojas con daño o síntoma (ácaros)

– Hongos y bacterias

• Tejido sintomático (hojas) o planta entera

Diagnóstico de enfermedades comunes

• CAMPO: – Observación de síntomas

• LABORATORIO– Insectos y ácaros

• Observación al estereomicroscopio y microscopio

– Hongos• Cámara húmeda y observación al

estereomicroscopio y microscopio

– Bacterias• Macerado, dilución, medio selectivo y observación

al estereomicroscopio y microscopio

– Extracción de ADN y PCR convencional

Procesamiento: diagnóstico molecular

= NO DETECTADO = DETECTADO

Enfermedades que se evaluarán para la certificaciónEnfermedad

Tipo de

patógeno

Nombre del

patógenoAcrónimo

Cancrosis BacteriaXanthomonas

axonopodis pv. citriCBC

HuanglongbingBacteria

fastidiosa

Candidatus

liberibacterHLB

Clorosis VariegadaBacteria

fastidiosaXylella fastidiosa CVC

Exocortis Viroide Citrus exocortis viroid CEVd

Cachexia (Xyloporosis) Viroide Citrus cachexia viroid CCaVd

Psorosis Virus Citrus psorosis virus CPsV

Leprosis Virus Citrus leprosis virus CiLV

Tristeza Virus Citrus tristeza virus CTV

Hoja rasgada Virus Citrus tatter leaf virus CiTLV

Requerimientos de la muestra

EnfermedadTipo de

patógenoAcrónimo

RAMA +

HOJAS

HOJAS +

PECIOLOFRUTO CORTEZA VECTOR OTRO

Cancrosis Bacteria CBC 10

HuanglongbingBacteria

fastidiosaHLB 10 10

Clorosis VariegadaBacteria

fastidiosaCVC 10

Exocortis Viroide CEVd3 brotes

tiernos (1)(2) 10 tiernas

De patrón y

de injerto 10 yemas

Cachexia (Xyloporosis) Viroide CCaVd3 brotes

tiernos (1)(2) 10 tiernas 10 yemas

Psorosis Virus CPsV3 brotes

tiernos (5)

Leprosis Virus CiLV3 ramas

(4)

(20 cm)10 2

3 manchas

circulares

Tristeza Virus CTV3 brotes

tiernos (4) 10 tiernas

5 brotes

tiernos

Hoja rasgada Virus CiTLV 10

EL FIN: PLANTA SANA

Gracias por su atenciónaavalos@maga.gob.gt

andrevalos@gmail.com