1. ALERGIA MECANISMOS INMUNOLOGICOS METODOS DE DIAGNOSTICO Dr. Edgar Matos Benavides Inmunologo Alergologo

2. PREVALENCIA DE LAS ENFERMEDADES ALERGICAS EN LA POBLACION PEDIATRICA GENERAL En la actualidad se estima que: un 3% de los nios son alrgicos a alimentos un 8 % presentan dermatitis atpica entre un 8 % y un 10% padecen asma casi un 20 % sufren de rinitis o rinoconjuntivitis. 3. El Pas, martes 24 de junio de 2003 4. ENFERMEDAD ALERGICA: ETIOLOGIA Predisposicin GENETICA Exposicin a ALERGENOS ENFERMEDAD ALERGICA CONTAMINACION HUMO TABACO VIRUS-BACTERIAS 5. ALERGIA Reaccin exagerada de defensa a una sustancia particular, que puede ser inhalada, ingerida o inoculada en nuestro cuerpo y provocar una respuesta inmunolgica de tipo inflamatorio. 6. Alergia una Enfermedad Sistmica RINITIS ALERGICA CONJUNTIVITIS SINUSITIS OTITIS RGE ALERGIA ALIMENTARIA DERMATITIS ATOPICA ASMA BRONQUIAL Alergia URTICARIA ANGIOEDEMA PRURIGO POR INSECTOS 7. histamina, factor quimiotctico de los eosinfilos factor quimiotctico de los neutrfilos leucotrienos prostaglandinas y tromboxanos factor activador de las plaquetas IL- 4 e IL- 5 vasodilatacin aumento de la permeabilidad vascular postcapilar edema contraccin de la musculatura lisa aumento de la secrecin de las glndulas mucosas 8. Componentes principales que se requieren para que la reaccin alrgica se desencadene IgE ALERGENOS Mastocitos Histamina Leucotrienos 9. 1 Identificar y relacionar la clnica del paciente con los posibles alrgenos: HISTORIA CLNICA Etapas diagnsticas 2 Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE para el o los alergenos sospechoso: P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA 3 Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de la clnica: P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADA TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS 10. PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA 11. PRUEBA CUTANEA INTRAEPIDERMICA + Dimetro 3 mm 15 minutos 12. solo estn indicadas en el estudio de la alergia medicamentosa y venenos 13. Prick-Film. Lectura de prick test con Escner 14. Prick-Film. Lectura de prick test con Escner 15. Aplicacin Alergenos Puncin con Lanceta Secado Piel Espera de Reaccin Contorneado de Habones Traslado a Hoja Codificada Lectura Escner Impresin Resultados 16. FUNDAMENTO La prueba se basa en el principio del anlisis del immunoblot. Los alrgenos especiales estn pegados a la superficie de las membranas de la nitrocelulosa que se colocan en un canal de reaccin. . 17. B NBT B B NBT Comparacin con el mtodo de referencia (IgE): Comparacin con el skin-prick test: Sensibilidad: 84.3 % Sensibilidad: 95.1 % 18. FUNDAMENTO immulite.pdf IMMULITE 2500 3gAllergy IgE Especfica es un anlisis enzimoinmunomtrico quimioluminiscente en fase slida, en dos pasos, Se basa en cinticas en fase lquida en formato de bola10,11 . Representa un avance significativo sobre los mtodos convencionales basados en la unin de los alrgenos a un soporte slido, como los discos de papel. Los alrgenos se unen covalentemente a una matriz polmero/copolmero soluble, la cual a su vez est marcada con un ligando. El uso de un copolmero aminoacdico aumenta la cantidad de alrgeno que puede soportar la matriz. 19. FA S 20. E E 4MUP E 4MUP 21. Tecnologa ImmunoCAP CAP System ImmunoCAP 22. ImmunoCAP Capacidad de ligando: tubo recubierto; disco papel; esponja celulosa Tubo recubierto ImmunoCAP Disco papel activado Esponja celulosa activada 1 50 150 Fases slidas: 23. IgE del paciente Alergenos (Anti-IgE acoplado al ImmunoCAP) Anti-IgE paciente unido a enzima -Galactosidasa Complejo: Alergeno-IgE paciente Sustrato de la enzima -Galactosidasa Complejo: Alergeno-IgE paciente-Anti-IgE Reaccin enzimtica: -Galactosidasa Sustrato no fluorescente Sustrato fluorescente Deteccin FEIA: Fluoroenzimoimmunoensayo 24. N. Liappis, A. Starke, Allergologie, Jahrgang 20; no 6/1997: 291-295 Reproducibilidad del Sistema ImmunoCAP 25. Patrn WHO 75/502 Tecnologa ImmunoCAP WHO El primer test alergolgico del mundo con calibracin directa segn patrones 2 IRP WHO 75/502 pera IgE. 26. Similitudes y diferencias entre la tecnologa Phadia ImmunoCAP in vitro y la prueba cutnea in vivo Caractersticas Tecnologa Phadia ImmunoCAP Prueba cutnea in vivo Alta sensibilidad S S Alta especificidad S S /No Alta reproducibilidad S No Resultados cuantitativos S S /No Calibrado segn la OMS S No Programa con garanta de calidad S No Prueba utilizable con independencia S No del tratamiento farmacutico Prueba utilizable con independencia S No del estado cutneo del paciente (es decir, dermatitis atpica) Referencia: From In Vitro Veritas Broschyre 27. IG E Especifica 28. Tests de screening 29. Tests de screening 30. Tests de screening 31. Tests de screening 32. Tests de screening 33. 1.-La identificacin precoz de los nios que padecern asma persistente es de capital importancia 2.-La atopia es el principal factor de riesgo en el padecimiento de asma 3.-Es posible reconocer la atopia, desde muy temprana edad, identificando la sensibilizacin a alimentos y a inhalantes 4.-En nios con dermatitis atpica, la presencia de esta sensibilizacin tiene un alto valor pronstico de evolucin futura a asma Conclusiones 34. 1 Identificar y relacionar la clnica del paciente con los posibles alrgenos: HISTORIA CLNICA Etapas diagnsticas 2 Demostracin de sensibilizacin mediada por IgE para el o los alergenos sospechoso: P CUTNEA, IgE SRICA ESPECFICA 3 Confirmacin de que el alrgeno es el responsable de la clnica: P de PROVOCACION o EXPOSICIN CONTROLADA TEST DE ACTIBACION DE BASOFILOS 35. COMO SE Dx ALERGIAS 2PRUEBAS CUTANEAS Ig E Srica 1 HISTORIA CLINICA 3PRUEBAS DE PROVOCACION TEST DE ACTIVACION BASOFILOS BASOFILOS TAB 36. CITOMETRIA DE FLUJO 37. CITOMETRIA DE FLUJO Procedimiento que mide caractersticas de dispersin y fluorescencia que poseen las clulas conforme pasan por un rayo de luz Las clulas interaccionan con un rayo de luz causando dispersin dependiendo del tamao y la complejidad 38. CITOMETRIA DE FLUJO DIGITALIZACION REPRESENTACION GRAFICA ANALISIS LABORATORIO DE CITOMETRIA DE FLUJO Y BIOLOGIA MOLECULAR IHEMATEC 39. Test de Activacion de Basofilos (TAB) Es una herramienta til en el diagnstico in vitro de las reacciones de hipersensibilidad inmediata a los Alergenos, Medicamentos, si estas son causados por mecanismos dependientes de IgE u otros mecanismos que conduzcan a la liberacin de histamina. 40. MARCADORES CELULARES CD63 CD203c Es una protena granular tetraespan de 53 Kda Est anclada en los grnulos de la membrana de los basfilos Por CM se detecta Anti CD63 PE y anti IgE FITC Es un Ag de superficie, expresado en basfilos humanos recientemente reconocida por el Acm 97A6 Es una ectoenzima multifuncional llamada pirofosfatasa ectonucleotide phophodiesterase 3 (E- NPP3) 41. La poblacin celular de inters se marca con anticuerpos monoclonales en presencia del alrgeno. Previamente al anlisis por citometra de flujo, los eritrocitos se someten a lisis. A continuacin se excluyen los linfocitos T (clulas positivas CD3) y despus se analizan los basfilos utilizando la expresin de CRTH2 y CD203c. Los basfilos no activados y en reposo se identifican como CRTH2posCD203cdimCD3neg, mientras que los basfilos activados in vitro se identifican como CRTH2posCD203cbrightCD3neg. FUNDAMENTO 42. muestra HISTOGRAMA DE MUESTRA SANGUINEA MUESTRA CON METAMIZOL 1mg/2ml CONTROL POSITIVO CONTROL NEGATIVO 43. MODELO DE RESULTADO DE TAB 44. TEST DE ACTIVACIN DE BASFILOS USANDO CD203C VERSUS PRUEBAS CUTANEAS EN LA DETERMINACION DE REACCIONES ADVERSAS A METAMIZOL: UN ESTUDIO PILOTO Matos Edgar1, Loyola-Sosa Steev1,2, Paredes Jos1, Inocente Rosario1, Paiva Mario1, Ros Hugo1, lvarez Marco1 1 Instituto de Hemafresis y Terapia Celular (IHEMATEC) 2 Universidad Peruana Cayetano Heredia 45. Mtodos y Materiales Participaron 40 pacientes: 75.0% (30/40) con historia clnica positiva. Historia Clnica de RAM AINE AINE no MetamizolMetamizol Pruebas Cutneas Test de Activacin de Basfilos CD203c Prick Test Intradermorreaccin 46. Resultados PRUEBAS CUTNEAS Prick Test Intradermorreacin TAB CD203c Positivo Negativo Positivo Negativo Positivo 0 4 (FN) 1 3 (FN) Negativo 0 36 0 36 TOTAL 0 40 1 39 % sensibilizacin por RAM a Metamizol (30/40) segn: Prick Test: 0.0% (0/30) Intradermorreacin: 3.3% (1/30) TAB CD203c: 13.3% (4/30) 47. Resultados PT vs. TAB-CD203c: Sensibilidad: 0.0% Especificidad: 100.00% Valor Predictivo Negativo: 90.0% IR vs. TAC-CD203c: Sensibilidad: 25.0% Especificidad: 100.00% Valor Predictivo Negativo: 92.3% Valor Predictivo Positivo: 100.0% 48. Conclusiones Se tiene exitosamente una primera fase de evaluacin de desempeo del TAB-CD203c. TAB-CD203c presenta mejor performance para determinar alergia a frmacos; tipo Metamizol, frente a pruebas cutneas. Es necesario realizar estudios que evalen el costo-beneficio del uso del TAB-CD203c. 49. DISCUSION La BAT constituye una herramienta diagnstica valiosa de inters en el estudio de reacciones de hipersensibilidad inmediata a los medicamentos. Reproduce in vitro mecanismos de hipersensibilidad involucrados en reacciones alrgicas inmediatas. Tambin permite el diagnstico de reacciones alrgicas y pseudoalrgicas, particularmente por medicamentos que a menudo no son detectables por tcnicas serolgicas como la determinacin de IgE especfica. 50. DISCUSION La reproducibilidad intra-ensayo es muy notable en la alergia a medicamentos con coeficiente de variacin intra-ensayo de 0.89 (P