Detrminacion de Peroxidasa
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Introducción Las per oxi das as es t án am pl i am ente d i st ri b ui d a s e ntre l as pl an t a s su p e ri o res, part e de su i m por t anci a se debe a que cat al i zan l a oxi da ci ón de var i os f en ol es donadores de el ect r one s en presenci a de pe r óx idodehi dr óge no , ge ner an do r ad i ca l es libr es que r ea cci on an en tresíyprod uce n dí m eros. Laperoxi da sa d er áb anoes un una enzima m uy efectiva para oxidaciones or g áni ca se i n or g á n i ca s p erosu u tilizaci ón est á li m i t a d a a un a sol a f u en t e com e rci a l, q u e ti en e un al t o costo y en ocasion es ti en e li m itada capa ci dad par a r econ ocernuevos sus t r at os. A l gunas de l as f unci ones fi si o ló g i ca s del a s pe r ox i d a sa s enl a s p l an t a s so n:su pa rtici pa ción en la bi os ín t esis de l etilen o , lad e f e n sa co n t rai n f e cc i o n e s, enl a cu r a ci ó n d e h e ri d a s y e n l a l i g ni fi ca ci ó n d e l a p a re d ce l u l a r. Materiales y métodos 1 .- Secor t an par t esde2.5cm delamuestr a E sca l d a r la m u estraEl m at e ri a l (mu e str a ) se coloca en caj aPetri A dici on ar5 m l de l a solucióndegu ayaco l al 1% ha stacubrirel m aterial A dicionar5ml de agu aoxi ge na da R ep osa r 3min S e con t r ol ael de sar rolloen l a s s u p er fi ci e s c o rtad a s y e nl a so l u ciónl L a inactivi da d y act ivi da d de la en zi ma se de termi n a co nel de sa rr ol lodel co lo r E st án pr ue base con si de ra qu e ha y act ivi da d de l a pe r oxi da sa ( i nsu fi ci en te esca l da do ) siel co l o r e sr o j ol a d rilloLa p r u e b ase co n si d e r a qu e n o h ay a cti vi da d d e l a p e roxida sa cu an do no ha y d es a rro l l o d e al g ú n co l o r. 2 . - 1.E scal dar 10g de m uestra,colocar l a m uestr a en una gasa y sum er gi rla en un b añ o M ar í a a 80 * C M an t en iéndola du r an te 40 seg orealizarel esc al de a di f erentes t i em pos según natur al eza de l a muestra a anal izar 2. C ol ocar en un m or tero l a m ue st ra, añ ad ien do un po c o de arena fi na y 5 m l de ag ua de sti l ad a pa ra f ac i l i t ar l a m acer ac i ón 3. Tr i t u r ard ur an t e do sminut os 4.R ea l iza rel m i sm o pr ocedi m i ento con 5g de muestr a f resca 5. A di ci onar por separ ado en el m or tero 25 m l de agua de s t i l ad a, ho mog en ei zar y fi l t rar enmant a de ci el o l as m u estr a s 6 . S i n A g i t a r, a d i ci on a r a t r e s t u b os
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Introducción
Las peroxidasas están ampliamente
distribuidas entre las plantas superiores,
parte de su importancia se debe a que
catalizan la oxidación de varios fenoles
donadores de electrones en presencia de
peróxido de hidrógeno, generando radicales
libres que reaccionan entre sí y producen
dímeros. La peroxidasa de rábano es un una
enzima muy efectiva para oxidaciones
orgánicas e inorgánicas pero su utilización
está limitada a una sola fuente comercial, que
tiene un alto costo y en ocasiones tiene
limitada capacidad para reconocer nuevos
sustratos. Algunas de las funciones
fisiológicas de las peroxidasas en las plantas
son: su participación en la biosíntesis del
etileno, la defensa contra infecciones, en la
curación de heridas y en la lignificación de la
pared celular.
Materiales y métodos
1.-
Se cortan partes de 2.5cm de la muestra
Escaldar la muestra El material (muestra) se
coloca en caja Petri Adicionar 5 ml de la
solución de guayacol al 1% hasta cubrir el
material Adicionar 5 ml de agua oxigenada
Reposar 3 min Se controla el desarrollo en
las superficies cortadas y en la solución l La
inactividad y actividad de la enzima sedetermina con el desarrollo del color Están
prueba se considera que hay actividad de la
peroxidasa ( insuficiente escaldado) si el
color es rojo ladrillo La prueba se considera
que no hay actividad de la peroxidasa cuando
no hay desarrollo de algún color.
2.-
1. Escaldar 10g de muestra, colocar la
muestra en una gasa y sumergirla en un
baño María a 80*C
Manteniéndola durante 40seg o realizar el
escalde a diferentes tiempos según
naturaleza de la muestra a analizar 2.
Colocar en un mortero la muestra, añadiendo
un poco de arena fina y 5 ml de agua
destilada para facilitar la maceración 3.
Triturar durante dos minutos 4. Realizar el
mismo procedimiento con 5g de muestra
fresca 5. Adicionar por separado en el
mortero 25ml de agua destilada,
homogeneizar y filtrar en manta de cielo las
muestras 6. Sin Agitar, adicionar a tres tubos
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de ensayo lo sig. 7. Tapar el tubo y mezclar
cuidadosamente por inmersión 8. Observar
los posibles cambios en casa tubo
determinando el tiempo en que se observe
algún cambio y registrarlo
Rectivo Tubo
1
Tubo
2
Tubo 3,
Muestra
sin
escaldar
Agua
destilada
20ml 22ml 20ml
Filtrado
del paso
5
2ml 2ml 2ml
Guayacol
al 0.5%
1ml 0 ml 1ml
Peróxido
de
hidrogeno
1ml 0ml 1ml
Resultados y discusión
La muestra fue un chayote a 70 grados
centígrados.-Principalmente la primera
muestra que fue los trozos de manzana se
colorearon así que se procedió a hacer la
segunda muestra en esta se encontró que:
Reacción Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3
Obtuvomenos
color que
el tubo
3y el 2
Seobtuvo
un color
blanco ya
que no
se le
agrego
reactivó
Se obtuvouna
coloració
n rojo
ladrillo
más
intenso
La velocidad de formación del color rojo
ladrillo puede ser utilizada como medida de la
actividad enzimática por lecturas
espectrofotométricas de las absorbencias en
relación con el tiempo.
La peroxidasa presenta como grupo
prostético un grupo Hem, cuyo átomo central
de hierro forma complejos con diferentes
compuestos, como los cianuros y la
hidroxilamina, inhibiéndose su actividad
enzimática.
La actividad enzimática depende del vegetal
(los rábanos picantes son especialmente
activos), del substrato oxidable que se
emplea como reactivo y del pH y temperatura
a que se trabaja.
Conclusiones
La peroxidasa es una enzima que cataliza la
oxidación de ciertos compuestos dadores de
hidrógeno, como fenoles (guayacol, pirogalol)
y aminas aromáticas (o-fenilendiamina) por
medio de peróxidos (). El substrato oxidable
más usado es el guayacol, que es oxidado a
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un complejo coloreado de tetra guayacol en
presencia de peroxidasa La investigación de
la peroxidasa ha sido usada para evaluar la
eficiencia del escaldado o blanqueo de
verduras. Como la mayoría de las enzimas, la
peroxidasa puede ser inactivada por el calor,
siendo una de las que precisa mayor
temperatura y más tiempo para su
inactivación. Posee, además, la propiedad
peculiar de la regeneración enzimática. Este
fenómeno consiste en que al inactivarla por
medio del calor recupera parcialmente su
actividad después de un cierto tiempo. Esto
ha sido explicado, aduciendo que la fracción
proteica de la enzima sufre una
desnaturalización sólo parcial, con pérdida de
su estructura terciaria, si el calor se aplica un
tiempo muy cortó, produciéndose luego una
reversión de la proteína a su estado normal
por recombinación de sus grupos hidrógenos
o sulfhidrílicos.
Preguntas:
![TRATAMIENTO BIOLÓGICO ULTRASÓNICO NUEVA ALTERNATIVA … · 2019-06-09 · extracelulares tales como; manganeso peroxidasa (MnP), lignino peroxidasa (LiP), lacasas, etc. [5, 6].](https://static.fdocuments.ec/doc/165x107/5f10bb177e708231d44a8ae9/tratamiento-biolgico-ultrasnico-nueva-alternativa-2019-06-09-extracelulares.jpg)
