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DETERMINACIÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD DEL MOSQUITO
AEDES AEGYPTI A LOS INSECTICIDAS DE USO EN SALUD PÚBLICA EN ÁREAS
DE RIESGO DE TRANSMISIÓN DE DENGUE Y DENGUE HEMORRÁGICO
MINISTERIO DE SALUDINSTITUTO NACIONAL DE SALUDCENTRO DE INFORMACIÓN Y DOCUMENTACIÓN CIENTÍFICA
2005
BLGO. ROSARIO BALTA LEÓN
BLGO. PABLO E. VILLASECA CASTRO.
SERIE INFORMES TÉCNICOS Nº28
DETERMINACIÓN DE LA SUSCEPTIBILIDAD DEL MOSQUITO AEDES AEGYPTI A LOS INSECTICIDAS DE USO EN SALUD PÚBLICA EN ÁREAS DE RIESGO DE TRANSMISIÓN DE DENGUE Y DENGUE HEMORRÁGICO
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INFORME FINAL
Aedes aegypti (foto RBL05)
I. TITULO DEL DOCUMENTO.
“Determinación de la susceptibilidad del mosquito Aedes aegypti a los insecticidas de uso en Salud Pública en áreas de riesgo de transmisión de dengue y dengue hemorrágico”. (C. OGITT : 2-01-05-04-071)
II. AUTORES.
Blgo. Rosario Balta León.
Blgo. Pablo E. Villaseca Castro.
Mercedes Rosario Balta León Instituto Nacional de Salud- Lima Perú
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Telefono: 2516151 anexo 548 celular 98963456
Correo electronico [email protected]
III. INDICE.
I. Titulo 1
II. Autores 1
III. Índice 1
IV. Resumen en español 1
V. Resumen
VI. Introducción 2
VII. Antecedentes 2
VIII. Objetivos 2
IX. Metodología. Determinación de la susceptibilidad de las larvas de mosquitos Aedes
aegypti a los insecticidas (WHO/VBC/81.807). 3
Determinación de la susceptibilidad a insecticidas para mosquitos adultos
(WHO/VBC/81.807, WHO/MAL /95.1073, WHO/CTD/VBC/95.998) 4
X. Resultados 5
XI. Discusión 6
IV. RESUMEN EN ESPAÑOL
Planteamiento del problema: De las enfermedades transmitidas por mosquitos culicideos,
el dengue presenta un incremento paulatino en la década de los 90s, con Aedes aegypti
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como vector principal, en el Perú1. Por otro lado, a partir de 1998 la transmisión del
dengue ha representado un gran problema por la dispersión del vector y posteriormente
en el 2002 por haberse detectado casos de dengue hemorrágico. En nuestro país se ha
utilizado las dosis diagnósticas de 0.1% para especimenes adultos, de 6 insecticidas y de
1 ppm para las larvas, utilizando la técnica de la OMS 19812.
Objetivo: Determinar la susceptibilidad del mosquito Aedes aegypti a diferentes
insecticidas de uso en salud pública en áreas con riesgo de transmisión de dengue y
dengue hemorrágico en el Perú.
Material y Métodos: Para este estudio descriptivo y de cohorte transversal se utilizaron
poblaciones de zancudos Aedes aegypti adultos criados desde larvas en el laboratorio,
tanto larvas como adultos, para estos últimos se utilizaran papeles OMS siguiendo el
procedimiento WHO/VBC/81.807) y con las correcciones de 1996
(CTD/WHOPES/IC/96.1) 4 y de 1998 5 .
Se estudiaron 8 insecticidas, de los cuales 04 eran piretroides (Lambdacyalotrina,
deltametrina, cyflutrina, permetrina) 01 organofosforado (malation) y 03 carbamatos
(propoxur, carbaryl, bendocarb). En 8 localidades del pais. Para cada bioensayo se
utilizaron 400 especimenes. Los bioensayos se realizaran entre 20 y 30 °C y 70 a 90 %
de HR.
Este estudio permitirá evaluar el programa de control y permitirá iniciar un monitoreo de la
susceptibilidad y delinear estrategias de control eficaces, para cortar la transmisión del
dengue y dengue hemorrágico a nivel local.
VI. INTRODUCCIÓN.
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El ministerio de salud a través de DGSP y DIGESA para romper la transmisión del
dengue, ha venido realizando el control de culícidos, utilizando el insecticida temephos
para la fase larvaria y piretroides para la fase adulta.
Existe poca información sobre las evaluaciones de los programas de control en relación a
la susceptibilidad por eso es necesario ordenar estas actividades, lo que va a influir en la
salud de la población y hará más atractiva las ciudades para el desarrollo turístico.
Este nuevo conocimiento permitirá contar con la información operativa para planificar y
priorizar las compras de insecticidas.
VII. ANTECEDENTES
Se propone evaluar la susceptibilidad del Aedes aegypti vector principal del dengue frente
a los principales insecticidas de uso en salud Publica, iniciándose con la realización de la
línea base para conocer el grado de susceptibilidad en las áreas de transmisión de
dengue y dengue hemorrágico para iniciar una vigilancia de la susceptibilidad, uno de los
problemas que debemos solucionar es la falta de materiales y falta de sostenibilidad en
esta actividad.
El control químico con insecticidas es el más utilizado en Salud Pública para el control
vectorial pero no cuenta con evaluaciones periódicas para detectar la resistencia a
insecticidas, por ello debemos reforzar la implementación de este sistema. Igualmente en
la década de los 90s se ha incrementado en nuestro país la transmisión del dengue,
teniendo a Aedes aegypti como vector.
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En nuestro país Balta et al en 2001, desarrollo la prueba de susceptibilidad usando la
dosis diagnóstica frente a 7 insecticidas (Cipermetrina 0.1 %, betaciflutrina 0.1 %,
alfacipermetrina 0.1 % Lambdacyalotrina 0.1 %, deltametrina 0.1 %, cyflutrina 0.1 % y
temephos) con la metodología de la OMS 1981 en 7 DISAS (Tumbes, Piura I, Piura II; La
Libertad, San Martín, Loreto, Ucayali) , resultando susceptibles en el 64% de ellas,
algunos utilizados hasta el momento y otros insecticidas alternativos para tener
herramientas disponibles para el control.
VIII. OBJETIVOS
Determinar la susceptibilidad del mosquito Aedes aegypti a insecticidas de uso en Salud
Pública en áreas de transmisión de dengue y dengue hemorrágico.
IX. METODOLOGÍA
Determinación de la susceptibilidad de las larvas de mosquitos Aedes aegypti a
los insecticidas (WHO/VBC/81.807).
Esta metodología puede hacerse con larvas del campo o las criadas en laboratorio
resultado de adultos criados en laboratorio.
Equipo de prueba.- 20 vasos de vidrio, 2 goteros o coladores pequeños, 2 baguetas, 1
micropipeta de 1 ml, 1 termohigrómetro.
Condiciones previas.- Se realizan colectas de larvas del III estadio y/o aquellas que
recién han pasado al IV estadio luego son transportados al laboratorio. Las larvas que
van a ser utilizadas en el bioensayo se colocan en 25 ml de agua declorada. Mientras que
se preparan vasos con 224 ml de agua sin cloro. Para efectuar una prueba completa con
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un insecticida, se seleccionaran 500 larvas de mosquitos. Se desechan las larvas que
presenten anomalías.
Procedimiento.- Una prueba consiste en preparar 20 vasos con 249 ml de agua. Se podrá
usar agua destilada, de lluvia, de pozo, de arroyo o del caño, pero sin cloro, sin
impurezas orgánicas, que no contengan insecticidas, la forma de los recipientes debe ser
tal que el agua contenida en ellos alcance una altura de 2,5 a 7,5 cm.
Se deben realizar 4 tratamientos y un control con 4 repeticiones (debe decir 5
repeticiones. Se agrega acetona o alcohol absoluto al testigo y luego se agrega 1 ml de
solución de insecticida empezando por la más diluida y se deja en exposición durante una
hora. Realizar la prueba entre 20 y 30 ° Celsius. A las 24 horas de iniciada la prueba se
harán los recuentos de mortalidad. Para determinar la mortalidad se suman las larvas
muertas y moribundas, se consideran moribundas las larvas que al ser perturbadas, no
son capaces de alcanzar la superficie y son contadas como muertas, estas pueden flotar
o presentar cambios de color, adoptar posiciones no acostumbradas, pueden tener
rigidez, temblores o movimientos descoordinados.
Las larvas que se transforman en pupas durante la prueba quedan excluidas del
recuento. Cuando se produzca la metamorfosis de más del 10% de las larvas testigos en
el curso del experimento, se anulará la prueba. Siempre que la mortalidad en los testigos
sea superior al 20% la prueba se invalida y deberá repetirse.
Resultados.- Cuando la mortalidad en los testigos esté comprendida entre el 5% y el
20%, convendrá corregir los porcentajes de mortalidad mediante la fórmula correctiva de
Abbot.
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Mortalidad corregida = % mortalidad de la prueba - % mortalidad del control x 100,
100 - % mortalidad del control
Cabe sospechar la aparición de una resistencia en las larvas de mosquito siempre que la
DL50 pase a ser de 10 a 15 veces superior a su valor primitivo o cuando la concentración
más fuerte del insecticida no sea capaz de matar a la totalidad de los individuos.
Determinación de la susceptibilidad a insecticidas para mosquitos adultos
(WHO/VBC/81.807, WHO/MAL /95.1073, WHO/CTD/VBC/95.998)
Introducción.- Los mosquitos adultos para los bioensayos pueden provenir de colecciones
obtenidas a partir de larvas o su descendencia (generaciones en laboratorio F1, F2, etc).
Aunque ocurre raramente una gran diferencia en la susceptibilidad entre los sexos, deben
usarse los mosquitos hembras exclusivamente en las pruebas de campo. Las
comparaciones de los datos de la prueba de susceptibilidad de un solo lugar a través del
tiempo son útiles para indicar las tendencias de resistencia, así como las comparaciones
de mosquitos de diferentes lugares en un solo momento, nos sirve para evaluar su
distribución.
Composición del equipo de prueba.- 25 tubos marcados con puntos verdes, 20 para la
espera y 5 para dejar en espera el control, 4 tubos marcados con puntos rojos para
portar los papeles impregnados, 20 correderas y 8 anillos dorados y 40 anillos plateados,
40 hojas de papel limpio (12 x 14.8 centímetro) para los tubos de espera, 02 capturadores
manuales, La hoja de la instrucción, 8 papeles impregnado 12 x 14.8 cm, Dos pinzas de
punta fina, 01 termohigrómetro, vasos colectores de 500 ml de capacidad (22), solución
azucarada al 5%.
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Papeles impregnados con insecticidas.- Los papeles impregnados provienen de la
Universidad de Sains Malasia, Penang, Malasia (en nombre de OMS), vienen en la
presentación de cajas de plástico; cada caja contiene 8 papeles y se conservan a 4 °
Celsius.
Los factores generales que afectan la prueba de susceptibilidad de la OMS.- Cambios de
resistencia con la edad difieren dependiendo del mecanismo de resistencia involucrado,
con algunos insectos que se ponen más susceptible con el tiempo. El estado fisiológico
de las hembras adultas (es decir si ellos están faltos de alimento, alimentados con
sangre, semi-grávidas o grávidas) tiene un efecto notable en la susceptibilidad a los
insecticidas y la expresión del fenotipo de resistencia. La prueba debe realizarse entre 20
y 30 ° Celsius. La relación entre la temperatura y la mortalidad por la toxicidad es directa.
La temperatura y la humedad relativa deben registrarse durante la exposición al
insecticida y los períodos de espera.
Condiciones generales a ser reunidas.- El condicionamiento de los mosquitos en vasos
con el número que ira en cada tubo debe realizarse aproximadamente 10 horas antes de
realizarse la prueba, donde reposarán en condiciones optimas entre 20 y 30 grados
Celsius y 75 a 85 % de HR. Para la prueba se pueden usar hembras alimentadas con
sangre o no con 24 a 48 horas después de haber emergido. Un número mínimo de 400
mosquitos debe probarse para cualquier insecticida a una concentración dada, con 4
replicas de 25 mosquitos por tubo de la prueba. Dónde no es posible ensayar con el
número apropiado pueden continuarse los ensayos durante los días necesarios para
lograr este ideal.
Prueba de susceptibilidad de la OMS.- Se deben usar los tubos en posición vertical. La
posición horizontal evita el rápido knock down en los piretroides y DDT, la recuperación
sub- secuente de mosquitos pero con un riesgo de elevada exposición al insecticida. Las
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pruebas deben llevarse a cabo preferentemente entre 20 ° y 30 ° Celsius y entre 70 y 80
% de humedad relativa (HR), nunca a las temperaturas superiores a 30 ° Celsius. Si
menos del 80% KD se observa después de 60 minutos, entonces KD también debe
anotarse después de 80 minutos, por ejemplo dejar otros 20 minutos, en el tubo de
exposición, Después de 10 minutos de exposición, contar el número de mosquitos de KD
moviendo suavemente el fondo del tubo. Donde la resistencia por el knock down (kdr)
esta envuelto el índice de KD es un indicador sensible para el descubrimiento temprano
de la resistencia del piretroide. De las lecturas de KD de varios intervalos, se puede
realizar un análisis probit por computadora o una línea de regresión sobre papel probit,
obteniendo el KD 50, así como el KD 95 así mismo obteniendo su gráfica. Los mosquitos
adultos pierden a menudo las piernas durante las pruebas con el piretroide, sobre todo
cuando están expuestos a concentraciones altas y deben ser considerados como vivos si
ellos pueden volar sin tener en cuenta el número de piernas que permanecen.
Los papeles impregnados con piretroides no deben usarse más de 5 veces.
La interpretación de resultados de prueba de susceptibilidad .- Cuando la mortalidad
ocurre entre el 98 y 100%, indica que es susceptible. Si ocurre una mortalidad entre el
80 y 97%, indica que los mosquitos de esa área se encuentran en vigilancia, pero cuando
la mortalidad es menor al 80%, indica que existe un grado de resistencia.
Cuando el porcentaje de mortalidad en el testigo es menor al 5% no se usa la formula de
Abbott. Cuando la mortalidad del control está entre 5% y 20%, el promedio observó la
mortalidad se corrige por la fórmula de Abbott. Cuando la mortalidad de los testigos es
mayor de 20 % se anula la prueba y se repite.
Mortalidad corregida = % mortalidad de la prueba - % morta!idad del control x 100
100 - % mortalidad del control
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X. RESULTADOS.
Pruebas con Piretroides
Insecticida DISA Localidad Mortalidad Resultado
Tumbes Andres Araujo 84.6 Vigilancia
San Martín 9 de Abril 100 Susceptible
Piura II Mancora 99 Susceptible
Deltametrina 0.05 %
La Libertad Trujillo 100 Susceptible
Tumbes Andres Araujo 41.7 Resistencia
Lima Norte Sn. Juan de Lurigancho 99 Susceptible
Permetrina 0.75 %
La Libertad Trujillo 100 Susceptible
Cyflutrina 0.15 % Lima Norte Sn. Juan de Lurigancho 100 Susceptible
Lambdacyalotrina 0.05 % La Libertad Trujillo 100 Susceptible
Pruebas con organofosforados.
Insecticida DISA Localidad Mortalidad Resultado
La Libertad Trujillo 96 VigilanciaMalation 5 %
Tumbes Andres Araujo 100 Susceptible
Pruebas con carbamatos.
Insecticida DISA Localidad Mortalidad Resultado
Propoxur 1 % La Libertad Trujillo 35 Resistencia
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Tumbes Andres Araujo 73.4 Resistencia
Carbaryl 0.8 % Tumbes Andres Araujo 0 Resistencia
Bendiocarb 0.1 % La Libertad Trujillo 36 Resistencia
Areas con riesgo de transmisión de dengue y dengue hemorrágico, donde se evaluó la susceptibilidad del mosquito Aedes aegypti frente a los insecticidas de uso en Salud Pública en el 2005.
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MOSQUIT Aedes
XI. DISCUSION
En La Libertad – Trujillo los mosquitos Aedes aegypti son susceptibles al insecticida
Deltamethrina 0.05 %, Lambdacyalothrina 0.05 %, permethrina 0.75 % con una
mortalidad de 100% y susceptibles a Malation 5 % con una mortalidad de 96 %.
Detectándose en esta área resistencia a Propoxur 1 % y Bendiocard 0.1 %.
San Martín
Tumbes
Trujillo
Sn. Juan de Lurigancho
Máncora
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En Tumbes se encontró que los mosquitos Aedes aegypti del área de Andrés Araujo
se encuentran en Vigilancia para el insecticida Deltamethrina 0.05 % detectándose
resistencia en esta misma área a Permethrina 0.75 % propoxur 1. % y Carbaryl 0.8 % .
En Loreto en la localidad de Punchana, los mosquitos Aedes aegypti se encuentran
susceptibles a Deltamethrina 0.1 % con una mortalidad de 100 % .
En Lima el San Juan de Lurigancho se evaluaron los mosquitos Aedes aegypti con
los insecticidas Permethrina 0.75 % y Cyfluthrina 0.15 % obteniéndose como resultado
mosquitos susceptibles.
En San Martín -Tarapoto localidad 9 de Abril los mosquitos Aedes aegypti son
susceptibles con 100 % de mortalidad.
En Piura de evaluaron los Aedes aegypti en Mancora y en Chulucanas encontrándose
mosquitos Aedes aegypti susceptibles en esta s áreas.
XII. CONCLUSIONES
Por los resultados obtenidos en el presente trabajo se llega a la conclusión de que el
Aedes aegypti de las diferentes áreas evaluadas se encuentra susceptible a los
insecticidas Deltamethrina en San Martín –Tarapoto, Piura - Chulucanas y Mancora y
Loreto – Punchana.
Se detecta Resistencia del mosquito Aedes aegypti en Tumbes – Andrés Araujo y en
La Libertad Trujillo a los insecticidas propoxur 1% y Carbaryl 0.8 % y Bendicard 0.1 %.
XIII. RECOMENDACIONES
Según OMS recomienda realizar por lo menos una vez al año en las áreas donde los
mosquitos son susceptibles.
Para las áreas donde se encuentra en Vigilancia se debe evaluar dos veces al año.
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Las áreas detectadas resistencia se debe evaluar 4 veces al año dejar de usar el
insecticida y confirmar la resistencia para posteriormente determinar el mecanismo de
resistencia.
Se recomienda realizar evaluaciones para la confirmacion de la resistencia en las areas
detectadas resistencia.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFIACAS
1. MINSA .
2. OMS. “Determinación de la susceptibilidad de las larvas de mosquitos Aedes aegypti a
los insecticidas. 1981. WHO/VBC/81.807.
3. BALTA et al 2001. “Evaluaciones de susceptibilidad del Mosquito Aedes aegypti en
áreas de dengue y riesgo a Dengue en el Perú”.
4. OMS. Report of the WHO Informal Consultation on the “ Evaluation and Testing of
Insecticides” 1996. CTD/WHOPES/IC/96.1.
5. OMS. “Test Procedures for Insecticide Resistance Monitoring in Malaria Vectors, Bio-
Efficacy and Persistence of Insecticides on Treated Surfaces”.
Report of the WHO (1998) Informal Consultation. Geneva 28-30 Septempber.
6. OMS. “Chemical Methods for the Control of Vectors and Pest of Public Health
Importance” Chavasse DC y Yap HH.1997. WHO/CTD/WHOPES/97.2
7.OMS. “Suministros para el monitoreo de la Resistencia a Insecticida en los Vectores de
enfermedades”.(1995). WHO/MAL /95.1073, WHO/CTD/VBC/95.998”.
ANEXOS
Foto N° 1.- Manipulación de larvas del insectario.
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Foto N° 2.- Se muestran los tubos de exposición y reposo, para realizar las pruebas de
susceptibilidad de la OMS
Grafica N° 1.- Muestras los resultados de la susceptibilidad de los piretroides frente a
diferentes cepas de Aedes aegypti.
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Grafica N° 2.- Muestras los resultados de la susceptibilidad del organofosforado y
carbamatos frente a diferentes cepas de Aedes
100 96
73.4
35
0
36
0
20
40
60
80
100
Tumbes La Libertad
Malation Propoxur Carbaryl Bendiocarb