Desarrollo de Una Sincronización Basada GnRH

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DESARROLLO DE UNA SINCRONIZACIÓN BASADA GNRH- PGF2A-PROGESTERONA- PROTOCOLO CON ECG PARA INDUCIR LA OVULACIÓN SENCILLO Y DOBLE EN EL GANADO VACUNO Los experimentos fueron diseñados para investigar el efecto de diferentes dosis y el momento de un tratamiento eCG dado durante los protocolos de sincronización basada en GnRH sobre la dinámica folicular y la fertilidad en el ganado. En el Exp. 1, vaquillas Angus (n = 50) recibieron una 7-d Ovsynch + progesterona protocolo (en d 0, GnRH y el inserto de la progesterona se administraron; en d 7, insertar la progesterona se retiró y PGF2a se inyectó; y en d 9.5, GnRH era inyectada 56 h después de la eliminación de progesterona) con eCG (0, 300, 500, 700, o 1.000 UI) administrada en d 7. En el Exp. 2, vacas Angus (n = 27) recibieron el mismo protocolo que el Exp. 1 y fueron asignados al azar para recibir 0 ó 400 UI eCG im en d 2 o 7. En el Exp. 3, vacas Angus (n = 18) recibieron un Ovsynch + progesterona protocolo 6-d y fueron asignados al azar para recibir 0 ó 800 UI eCG en el día 3 del protocolo (Exp. 3a). Una prueba de campo piloto también se realizó con los mismos tratamientos en vacas Angus cruzadas amamantados (n = 72; Exp. 3b). En el Exp. 4, novillas de carne (n = 200) fueron asignados al azar a los mismos tratamientos que en el Exp. 3, pero no se le dio la segunda GnRH, con toros Holstein introducidas en el día 6. En el Exp. 5, vacas Angus (n = 12) recibieron el mismo tratamiento que en el Exp. 3, pero no fueron inseminadas. Las concentraciones de progesterona fueron evaluados en el plasma recolectado durante el ciclo estral siguiente sincronización. La ecografía se utiliza para controlar la dinámica de ovario y de diagnosticar el embarazo. En el Exp. 1, el número medio de ovulaciones se vio afectada (P <0,02) por la dosis de eCG y la etapa de desarrollo folicular cuando administrado. El tratamiento con eCG en d 2 tendió (P <0.08) para ampliar el intervalo de PGF2a a la ovulación, pero no tuvo éxito en la inducción de ovulaciones dobles. Por el contrario, eCG en d 3 aumentó (P <0.01) im el número de vacas con doble ovulación cuando se administra y una mayor (P <0.04) la tasa de embarazo en un solo ovulando vaquillas después de la cría de toros (68,0 vs. 53,1%).

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Biotecnologia utilizacion de ecg para aumaentar el hermanamiento

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DESARROLLO DE UNA SINCRONIZACIÓN BASADA GNRH-PGF2A-PROGESTERONA- PROTOCOLO CON ECG PARA INDUCIR LA OVULACIÓN SENCILLO Y DOBLE EN EL GANADO VACUNO

Los experimentos fueron diseñados para investigar el efecto de diferentes dosis y el momento de un tratamiento eCG dado durante los protocolos de sincronización basada en GnRH sobre la dinámica folicular y la fertilidad en el ganado. En el Exp. 1, vaquillas Angus (n = 50) recibieron una 7-d Ovsynch + progesterona protocolo (en d 0, GnRH y el inserto de la progesterona se administraron; en d 7, insertar la progesterona se retiró y PGF2a se inyectó; y en d 9.5, GnRH era inyectada 56 h después de la eliminación de progesterona) con eCG (0, 300, 500, 700, o 1.000 UI) administrada en d 7. En el Exp. 2, vacas Angus (n = 27) recibieron el mismo protocolo que el Exp. 1 y fueron asignados al azar para recibir 0 ó 400 UI eCG im en d 2 o 7. En el Exp. 3, vacas Angus (n = 18) recibieron un Ovsynch + progesterona protocolo 6-d y fueron asignados al azar para recibir 0 ó 800 UI eCG en el día 3 del protocolo (Exp. 3a). Una prueba de campo piloto también se realizó con los mismos tratamientos en vacas Angus cruzadas amamantados (n = 72; Exp. 3b). En el Exp. 4, novillas de carne (n = 200) fueron asignados al azar a los mismos tratamientos que en el Exp. 3, pero no se le dio la segunda GnRH, con toros Holstein introducidas en el día 6. En el Exp. 5, vacas Angus (n = 12) recibieron el mismo tratamiento que en el Exp. 3, pero no fueron inseminadas. Las concentraciones de progesterona fueron evaluados en el plasma recolectado durante el ciclo estral siguiente sincronización. La ecografía se utiliza para controlar la dinámica de ovario y de diagnosticar el embarazo. En el Exp. 1, el número

medio de ovulaciones se vio afectada (P <0,02) por la dosis de eCG y la etapa de desarrollo folicular cuando administrado. El tratamiento con eCG en d 2 tendió (P <0.08) para ampliar el intervalo de PGF2a a la ovulación, pero no tuvo éxito en la inducción de ovulaciones dobles. Por el contrario, eCG en d 3 aumentó (P <0.01) im el número de vacas con doble ovulación cuando se administra y una mayor (P <0.04) la tasa de embarazo en un solo ovulando vaquillas después de la cría de toros (68,0 vs. 53,1%). Este tratamiento también eleva las concentraciones de progesterona durante el ciclo estral siguiente sincronización. Así, el mecanismo por el cual la administración de eCG en el día 3 de las tasas de embarazo de sincronización aumento puede ser a través de apoyar el desarrollo de un folículo sano y cuerpo lúteo posterior capaz de secretar aumento de las concentraciones de progesterona durante el embarazo temprano. En conclusión, la administración estratégica de ECG durante un protocolo de sincronización se puede utilizar para mejorar el rendimiento de reproducción mediante el aumento de las tasas de embarazo en animales ovulando individuales, así como la inducción de ovulaciones dobles para el hermanamiento.

INTRODUCCIÓN

El protocolo Ovsynch (Pursley et al., 1995) facilita la IA a tiempo fijo (IATF) con la fertilidad aceptable en vacas lecheras en producción, pero no en los productos lácteos (Pursley et al., 1997) y la carne (Martínez et al., 2002) novillas o en baja condición corporal lácteos (Meléndez et al, 2006;.. Stevenson et al, 2006) y las vacas de carne (Cordero et al., 2001). La administración de progesterona entre la primera inyección de GnRH y PGF2a (es decir, Ovsynch + protocolo de progesterona) ha aumentado las tasas

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de embarazo (Cordero et al., 2001; Martínez et al., 2002; Meléndez et al, 2006;. Stevenson et al., 2006 ; McDougall, 2010). La adición de eCG en inyección de PGF2a (Navanukraw et al, 2004;.. Colazo et al, 2005) también ha aumentado el número de vacas de carne en anestro ovulando en respuesta al tratamiento (Duffy et al, 2004;.. Colazo et al, 2005) y las tasas de embarazo en ganado de carne (Mulvehill y Sreenan, 1977;. Mialot et al, 2003), con resultados contradictorios en los productos lácteos (Bryan et al, 2009;. Kenyon et al, 2012;. Polea et al, 2013). y carne (Marquezini et al., 2013) ganado. Administración Estratégica eCG con la emergencia de la onda folicular controlada puede proporcionar un protocolo de sincronización para inducir ovulaciones individuales y / o dobles para el hermanamiento de ganado. Aunque el hermanamiento en el ganado proporciona una oportunidad para mejorar las tasas de reproducción mediante el aumento de la fecundidad manada, no ha sido ampliamente aceptada (Nielen et al., 1989; Echternkamp y Gregory, 1999a; Kirkpatrick, 2002). Curiosamente, una vaca con terneros gemelos ha sido clasificada como la clase económicamente más eficiente de ganado de carne (Morris et al., 1994). Los primeros intentos de usar los tratamientos hormonales para inducir hermanamiento produjeron mayores no deseado nacimientos múltiples (Johnson et al., 1975). El conocimiento actual de la fisiología ovárica y el desarrollo folicular, sin embargo, puede resolver los problemas relacionados con la inducción hormonal de gemelos. El principal objetivo fue desarrollar un protocolo que podría ser utilizado para la sincronización de la ovulación simple o doble, mientras que el aumento de las tasas de concepción en ganado de carne

MATERIALES Y METODOS

La aprobación de los experimentos descritos en las solicitudes de Nos. 11702, 11980, 12201, y 12566 fue concedida por el Comité de Ética Animal del Centro Agrícola Invermay de acuerdo con el Reglamento de la Ley de Bienestar Animal de Nueva Zelanda (NZ). Todas las inyecciones se administraron en el cuello del animal, im o por vía subcutánea dependiendo del experimento.

Experimento 1

Este experimento fue diseñado para determinar el efecto de diferentes dosis de eCG dadas durante un protocolo Ovsynch + progesterona sincronización (Fig. 1) en ultrasónicamente cambios detectables en la dinámica folicular ovárica y la tasa de ovulación. Primales cíclica vaquillas Angus Negro (373,0 ± 35,7 kg), mantenidos en condiciones de pastoreo de la zona sur de la Isla Sur de Nueva Zelanda (rye grass y trébol blanco pastos), con libre acceso al agua, se utilizaron en 2 repeticiones. Veinticinco novillas fueron utilizadas en cada réplica. Las vaquillas recibieron una inyección de 100 mg de GnRH (Ovurelin; Bomac Laboratories Ltd, Auckland, Nueva Zelanda) dados im y una progesterona intravaginal insertar (1,38 g de progesterona, Ganado CIDR Insertar; Zoetis New Zealand Limited, Auckland, Nueva Zelanda), administrado en el día 0 (inicio del experimento), seguido de 500 mg cloprostenol (PGF2a, Estrumate; MSD Animal Health Ltd , Wellington, Nueva Zelanda) im simultáneamente con la extracción del dispositivo en el día 7 y un im segunda inyección de GnRH 100 mg dada en el día 9 (56 h después de la PGF2a). Las vaquillas fueron asignados al azar a 5 tratamientos para recibir 0, 300, 500, 700, o 1.000 UI eCG (Folligon; MSD Animal Health Ltd) im en el momento de la inyección de PGF2a. Las vaquillas fueron

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controlados por ultrasonografía (Aloka SSD 900- equipado con un transductor lineal de matriz de 7,5 MHz; Aloka Japan Co., Tokio, Japón) una vez al día desde el día 0 al 9, y luego cada 12 h hasta la ovulación. El mismo equipo de ultrasonido se utilizó para el resto de los experimentos, a menos que se indique lo contrario. Las muestras de sangre se recogieron de la vena yugular una vez al día desde d 0 a la ovulación.

Experimento 2

Este experimento fue diseñado para determinar el efecto del momento de un tratamiento eCG dado durante un protocolo Ovsynch + progesterona en los cambios en el desarrollo folicular y la ovulación en vacas de carne. Veintisiete no embarazadas vacas Angus Negro, con un peso 697,0 ± 75,5 kg, con un BCS de 3 a 4 en una escala de 1 a 5, se mantuvieron en las mismas condiciones pastorales como novillas de Exp. 1. Las vacas recibieron el mismo protocolo de sincronización de la ovulación se describe en el Exp. 1 (Fig. 1). Las vacas fueron asignadas al azar para recibir ningún tratamiento (Control) o un im inyección de 400 UI eCG (Pregnecol; Bomac Laboratories Ltd, Auckland, Nueva Zelanda) en d 2 o 7 del experimento. Las vacas fueron monitoreados por ecografía una vez al día desde d 0 a 9 (segunda inyección de GnRH), y luego cada 12 h hasta la ovulación. Las muestras de sangre se recogieron de la vena yugular una vez al día desde d 0 a la ovulación.

Experimento 3

En el Exp. 2, la regresión de la segunda más grande del folículo se produjo antes de la retirada de la progesterona en el día 7, y por lo tanto, se lograron sólo ovulaciones individuales. Además, el tratamiento eCG en el día 2 del protocolo en el Exp. 2 resultó en un intervalo prolongado de la eliminación de la

progesterona a la ovulación, que no mostró resultados prometedores. Por lo tanto, un aumento de la dosis de eCG y un intervalo acortado entre eCG e inyección PGF2a fueron exploradas. Experimento 3a. Dieciocho vacas Angus Negro, con un peso 684,0 ± 17,5 kg, recibieron un dispositivo CIDR (1,38 g de progesterona, Ganado CIDR Insertar; Zoetis Nueva Zelanda Ltd.) y 100 g de GnRH (Ovurelin; Bomac Laboratories Ltd.) en el día 0 (inicio del protocolo de sincronización), 500 mg cloprostenol (Estrumate; MSD Animal Health Ltd) en el día 6, y un segundo tratamiento con 100 mg de GnRH en d 8 (56 h después de la PGF2a; Fig. 2). La inseminación artificial se realizó simultáneamente con la segunda inyección de GnRH utilizando semen congelado / descongelado de 1 toro comprado a un proveedor comercial (LIC Ltd., Hamilton, Nueva Zelanda). Las vacas fueron asignadas aleatoriamente a 2 tratamientos para recibir ningún tratamiento adicional (Control) o un im inyección de 800 UI eCG (Pregnecol; Bomac Laboratories Ltd.) en el día 3 del protocolo de tratamiento (Fig. 2). La ecografía se utiliza para controlar la dinámica de ovario una vez al día a partir d 0-8 y dos veces al día a partir de entonces hasta la ovulación. La ecografía también se utilizó para detectar la presencia del cuerpo lúteo (CL) aproximadamente 7 días después de la ovulación y para diagnosticar un embarazo 30 d después de la IA. Tomaron muestras de sangre de la vena yugular una vez al día por la mañana de d 0 a la ovulación. 3b Experimento. Este ensayo fue diseñado para evaluar el efecto del tratamiento con eCG en el día 3 de un 6-d Ovsynch + progesterona protocolo sobre la incidencia de doble ovulación y la fertilidad a la IA en vacas de carne amamantó posparto. Setenta y dos amamantó Negro Angus × vacas Wagyu con condición corporal

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subóptima (aproximadamente 2 de una escala de 1 a 5) fueron asignados al azar a 2 tratamientos a recibir el mismo protocolo de tratamiento y la cría como en el Exp. 3a (Fig. 2). La ecografía (sistema de ultrasonido FBC equipado con un transductor de 5 MHz; BCF Ultrasonido Australasia Ltd, Auckland, Nueva Zelanda) por CL contar y diagnóstico de gestación se realizó una sola vez, 40 d después de la IA.

Experimento 4

El objetivo fue evaluar los efectos del tratamiento eCG dadas en d 3 de 6-d Ovsynch + protocolo de la progesterona sobre la incidencia de doble ovulación, hermanamiento, y la fertilidad de toros de cría de novillas de carne. Sobre la base de cálculo de potencia, utilizando datos de los experimentos anteriores (con una diferencia esperada del 30% en el embarazo tasas de entre 2 tratamientos), dado un SD de 0,5 con una potencia nominal de 0,80 y un α = 0,05, se requirieron 93 animales por tratamiento para el estudio. Doscientos novillas de carne de un año con una media (± DE) BCS de 3,0 ± 0,3 (1-5 escala) fueron asignados aleatoriamente a recibir el mismo tratamiento que en el Exp. 3 (Fig. 2), excepto que la inyección de 800 UI de eCG; sc se administró (Pregnecol Bomac Laboratories Ltd.) y la segunda inyección de GnRH no se administró. La vía de administración de eCG fue cambiado a s.c para facilitar la administración eficiente en la granja en respuesta al consejo de administración de la explotación. Toros de dos años de edad, Holstein Friesian- se introdujeron a la manada a la reproducción natural en un uno y cuarto toro: relación de vaca. Bulls se quedaron con las vaquillas por lo menos durante 50 d. El diagnóstico de gestación a los 50 días después de la inyección de PGF2a se realizó mediante ecografía. Etapas del

embarazo se determinaron con base en longitud cráneo-caudal, tamaño de los cotiledones, y la cantidad de líquido amniótico y alantoideo (Kastelic et al., 1988; Fricke, 2002; Chavatte- Palmer et al., 2006). La mayoría de los embarazos detectados eran aproximadamente entre 45 y 50 d y por lo tanto clasificado como embarazada a los protocolos de sincronización. Los embarazos de aproximadamente 40 d o menos se distinguen fácilmente de 45 a 50 d embarazos y clasificados como no embarazada para el primer ciclo y que no respondieron a los protocolos, pero embarazada para el segundo ciclo. No había una sola vaca que fue clasificado entre los 40 y 45 d embarazada, que fue clasificado como el embarazo al segundo ciclo después de que el protocolo de sincronización, basada en la evaluación en el momento de la ecografía.

Experimento 5

Este experimento fue diseñado para determinar el efecto de un tratamiento eCG dado en d 3 de un protocolo de 6-d GnRH + progesterona basados en la concentración de progesterona en plasma durante el ciclo estral después de que el protocolo de tratamiento en vacas de carne. Doce vacas Angus Negro, con un peso de 632 ± 31.3 kg, recibieron el mismo de la ovulación protocolo de sincronización se describe en el Exp. 3 y se asignaron aleatoriamente a 2 grupos para recibir ningún tratamiento adicional o 800 UI eCG en el día 3 del protocolo (d 3 del experimento). La ecografía se realizó en la primera GnRH, PGF2a, y 8 d más tarde (5 d después de la ovulación esperado). Ayudas de detección de estro (detectores Kamar Heatmount; LIC Ltd., Hamilton, Nueva Zelanda) se colocaron en la cabeza de la cola, según lo recomendado por el fabricante en el día 14 del experimento. Las muestras de sangre se recogieron los días de la vena yugular desde d 0

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hasta el final del siguiente ciclo estral, cuando el estro comportamental se detectó mediante la observación de los detectores de Kamar activados.

Las muestras de sangre y Ensayo Hormonal

Las muestras de sangre recogidas en los tubos Vacutainer heparinizados de 10 ml (BD - Australia / Nueva Zelanda, North Ryde, Nueva Gales del Sur, Australia) se mantuvieron en hielo hasta que se centrifuga a ~ 1800 × g durante 20 min dentro de 2 h después de la recogida, y el plasma se almacenó posteriormente a -20 ° C hasta que se ensayaron para la progesterona.

La concentración de progesterona en plasma se determinó mediante un kit de doble anticuerpo humano modificado RIA (Siemens Kit RIA Coat-A-Count 06615537 progesterona; Siemens Healthcare Diagnostics Inc., Tarrytown, NY). La sensibilidad del ensayo, como se ha definido como la concentración de 2 SD por debajo del valor de unión 100%, fue 0,02 ng / mL. En Exp. 1 y 2, el intra-ensayo y los coeficientes de variación promedio de 12,4 y 13,6% para alta, media y baja concentración de plasma de referencia con concentraciones medias de 5,1, 2,6, y 0,2 ng / ml, respectivamente. En el Exp. 3, el intra-ensayo e interensayo coeficientes de variación promedio de 12,2 y 14,1% para alta, media, y baja concentración plasmática de referencia con concentraciones medias de 5,5, 2,1 y 0,5 ng / ml, respectivamente. En el Exp. 5, la intra-ensayo y interassay coeficientes de variación un promedio de 8.5 y 11.2% para alta, media y baja concentración de plasma de referencia con concentraciones medias de 5,0, 2,9 y 0,3 ng / ml, respectivamente.

El análisis estadístico

Para todos los experimentos, los datos se analizaron utilizando procedimientos

de un paquete estadístico comercial (SAS v 9.1;.. SAS Inst Inc., Cary, NC). Distribución normal de los datos se evaluó mediante la prueba y QQ parcelas de Shapiro-Wilk (PROC univariado); homogeneidad de las varianzas se evaluó por el test de Levene. Por lo tanto, esta prueba también determinó diferencias de varianza entre los grupos.

Experimento 1 se realizó como 2 repeticiones por razones logísticas y replicar efecto se incluyó en el modelo. Los datos se analizaron mediante pruebas paramétricas o no paramétricas. Se realizó un análisis inicial comparando el intervalo de la primera inyección de GnRH a la emergencia folicular onda, diámetro del folículo dominante (DF; folículo más grande creciente) en el momento de la primera inyección de GnRH y en el momento de la administración PGF2a, diámetro de CL en inyección de PGF2a, accesorio CL diámetro a la inyección de PGF2a, y el área total de CL (original más accesorios CL) en novillas y vacas que ovularon o no en respuesta a la primera inyección de GnRH. Wilcoxon rango suma de prueba (PROC NPAR1WAY) o la prueba t de Student (PROC PRUEBA.T) se utilizaron para comparar las variables en grupos que ovularon o no ovulan después de la primera GnRH. En la comparación de variables a través de los 5 tratamientos de dosis de eCG, ANOVA (PROC GLM) se utilizó para el análisis de diámetro folículo dominante en el momento de la inyección de PGF2a, en segunda inyección de GnRH, y dentro de 12 h antes de la ovulación (es decir, la exploración precedente la desaparición del folículo ovulatorio debido a la ovulación), y tasa de crecimiento del folículo dominante de PGF2a inyección para la ovulación (calculado como diferencias en el diámetro de d consecutivo), mientras

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que la prueba de Kruskal-Wallis (PROC NPAR1WAY) se utilizó para la comparación de diámetro folículo dominante en el momento de la primera GnRH, área de corpus luteum en PGF2a, y el intervalo de PGF2a a la ovulación.

Medios o filas se compararon con las pruebas de LSD o Wilcoxon rank sum, respectivamente. Los resultados se muestran como la media (± SEM). La proporción de novillas que ovularon en respuesta a la primera inyección de GnRH en todos los tratamientos se comparó mediante la prueba exacta de Fisher (FREQ PROC). La proporción de animales ovulando 1 folículo (considerado como '0' para el análisis) o múltiples folículos (considerados como '1' para el análisis) se comparó entre los tratamientos mediante el uso de la prueba exacta de Fisher. Corpus luteum área o superficie total lútea se calculó como A = πr2. Series temporales de datos de CL y la progesterona plasmática

Las concentraciones fueron analizadas por ANOVA para medidas repetidas (Proc Mixed) después de la transformación logarítmica; con autorregresivo-1 se utiliza como estructura de covarianza para las mediciones repetidas, que fue seleccionado en base a información tanto de Akaike y el criterio bayesiano de Schwarz. Datos de concentración de progesterona fueron divididos para ser analizada en 2 períodos de tiempo diferentes: las concentraciones de progesterona a partir d 0 a 7 y de d 7 a la ovulación. Para el análisis de las concentraciones de progesterona desde d 0 a 7, los efectos de la ovulación después de GnRH (ovulando vs. novillas nonovulating), d (d del experimento), replicar (1, 2), y el tratamiento × interacción d se incluyeron en el modelo. Para el análisis de las concentraciones de progesterona para d 7 a la ovulación,

los efectos del tratamiento (0, 300, 500, 700, o 1.000 UI eCG), d (d del experimento), se replican (1, 2), la ovulación a primera inyección de GnRH (sí, no), y el tratamiento × interacción d fueron incluidos en el modelo. Área media bajo la curva (AUC) de las concentraciones de progesterona en plasma se calculó como sigue:

AUC = Σ [(Cp1 + CP2)/2 × (t2- t1) + …+ ((Cpn + Cpn)/2 × (tn- tn)].Esta fórmula para la AUC se expresó como la suma de las superficies trapezoidales entre d del experimento donde Cp2 fue la concentración de una muestra tomada en el momento 2 [t2] y Cp1 fue la concentración de una muestra tomada en el tiempo de 1 [t1]). A continuación, los datos de las AUC desde d 0 a 7 se compararon entre ovulando vs. nonovulating vaquillas por la prueba de Wilcoxon rango suma (PROC NPAR1WAY) y datos de d 7 de la ovulación entre los tratamientos por ANOVA (PROC GLM). La correlación entre el diámetro CL o área y progesterona fue explorada por el coeficiente de correlación de Pearson (PROC CORR).

En el Exp. 2, los datos fueron analizados por ANOVA (PROC GLM), mientras que se utilizó la prueba de LSD para comparar las medias de tratamiento. Comparación de diámetro folículo dominante y original (CL1) y diámetros (CL2) CL inducida por GnRH-CL y el área en el momento de la inyección de PGF2a se analizaron mediante la prueba t de Student (PROC PRUEBA.T). Un análisis adicional de un solo punto de medición se realizó después de excluir 4 vacas que habían modificado los parámetros de dinámica folicular y un intervalo de PGF2a inyección para la ovulación que era más de 2 SD mayor que el intervalo medio para su respectivo tratamiento (es decir, los valores extremos). Área lútea y progesterona plasmática serie de datos de concentración se

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analizaron después de la transformación logarítmica, como en el Exp.

1. series de datos foliculares también se analizaron de manera similar. Se realizó un análisis de los folículos más grandes y segundos más grandes (es decir, dominante y grandes folículos subordinados) por separado mediante ANOVA para medidas repetidas (PROC MIXED), incluyendo la estructura de covarianza autorregresiva heterogéneo. Los efectos del tratamiento, el tiempo, y la interacción tratamiento por tiempo se incluyeron en el modelo.

En el Exp. 3, las variables en el Exp. 3a que tenía distribución normal y varianzas homogéneas se analizaron mediante la prueba t de Student (PROC PRUEBA.T), mientras que aquellos que no están distribución normal o con varianzas heterogéneas se analizaron mediante la prueba de Wilcoxon rank-sum (PROC NPAR1WAY), mediante la instrucción exacta para el cálculo de valor de probabilidad. Las concentraciones de progesterona en plasma se log-transformado y se analizaron como en el Exp. 1 (PROC MIXED). También se incluyeron los efectos del tratamiento, el tiempo y la interacción tratamiento-por-tiempo. El ABC de la progesterona entre los tratamientos se comparó mediante la prueba t de Student (PROC PRUEBA.T). Chi-cuadrado (FREC PROC) se utilizó para analizar las tasas de embarazo. En el Exp. 4, PROC PODER se utilizó para estimar el número de novillas por tratamiento necesario para el juicio. Datos binomiales se analizaron mediante regresión logística (LOGÍSTICA PROC) o Chi-cuadrado / la prueba exacta de Fisher (PROC FREQ). En el Exp. 5, CL diámetro y concentraciones de la zona y de progesterona en plasma en d 0, 6 y 14 del experimento se compararon por separado por la prueba t de

Student (PROC PRUEBA.T). Las concentraciones de progesterona en plasma se separaron para ser analizados por ANOVA para medidas repetidas. La primera parte corresponde a las concentraciones de progesterona durante el protocolo de sincronización (d de 3 a 10 del experimento) y la segunda parte corresponde a la siguiente ciclo estral (d de 10 a 30 del experimento). Las AUC se logtransformed y más tarde en comparación entre los tratamientos por la prueba t de Student (PROC PRUEBA.T).

RESULTADOS

Experimento 1

Las respuestas Folicular y lútea de novillas que ovularon (n = 24) frente a los que no ovulan (n = 26) en respuesta a la primera inyección de GnRH se muestran en Tabla 1. El diámetro del folículo más grande en el momento de la primera inyección de GnRH y la zona de CL en la inyección PGF2a fueron mayores (P <0,05) en las novillas que ovularon en respuesta a la primera inyección de GnRH que en aquellos que no lo hicieron. El intervalo de la primera inyección de GnRH a la aparición de la próxima ola folicular fue menos variable (P <0,001) y tendió (P = 0,06) a ser más corto en novillas que

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ovulado compararon a los que no ovulan.

Las respuestas Folicular y lútea entre dosis de tratamiento de eCG se muestran en la Tabla 2.

La ovulación después de la primera inyección de GnRH se produjo en 6, 5, 4, 5, y 4 vaquillas del control, 300, 500, 700, y 1.000 UI de eCG tratamientos, respectivamente (P = 0,97). No se observaron diferencias (P> 0,165) entre los tratamientos en el área de CL en la inyección de PGF2a o intervalo (h) de la inyección de PGF2a a la ovulación. Tasa de crecimiento (mm / d) del folículo dominante (P = 0,058) y el diámetro del folículo dominante en PGF2a inyección (P = 0,081) Media tendía a ser diferente entre los tratamientos. Día de la influencia la tasa de ovulación ola emergencia folicular (P = 0,004). Las vaquillas con una onda folicular emergente de 1 a 3 días después de la primera inyección de GnRH (n = 37) tenían 1 ovulación (1,0 ± 0,0), mientras que las vaquillas con un movimiento emergente en el día 4 (3 de cada 4 novillas) yd 5-7 (n = 9), ovulado 2 o más folículos. Dentro de novillas tratadas con 1,000 UI eCG, 4 novillas ovulado 2 folículos cada uno, y 1 vaca, que tenía una nueva onda folicular emergente 1 d antes del tratamiento eCG, ovulado 5 folículos. Por lo tanto, la proporción de novillas con múltiples ovulaciones después de la segunda inyección de GnRH fue mayor (P = 0,016) en novillas tratadas

con eCG 1000 IU (50%; 1,8 ± 0,4 ovulaciones) que en los otros tratamientos (0%, 1,0 ± 0,0; 10%, 1,1 ± 0,1; 0%, 1,0 ± 0,1 para las novillas tratados con 0, 300, y 700 UI de eCG, respectivamente) con las proporciones de novillas con doble ovulación tratados con ser 500 UI eCG intermedio (20%, 1,2 ± 0,1).

La media de las concentraciones plasmáticas de progesterona desde d 0 a 7 se vieron afectados por d (P <0,0001), pero no por la incidencia de la ovulación después de la primera GnRH (P = 0,76), replicar (P = 0,80), o la ovulación × interacción d (P = 0.50; Fig. 3A). La media de las concentraciones plasmáticas de progesterona a partir de d 7 a 11 fueron afectados por el tiempo (d; P <0,0001), pero no por el tratamiento (P = 0,66), replicar (P = 0,10), la incidencia de la ovulación después de la primera inyección de GnRH (P = 0,83), o tratamiento × d interacción (P = 0,40; Fig. 3B). La media (± SEM) de progesterona AUC desde d 0 a 7 no fue diferente entre ovulando (92,2 ± 9.9) y no ovulando (86,8 ± 4,7) novillas en respuesta a la primera inyección de GnRH (P = 0,77) y desde d 7 al 11 entre tratamientos (P = 0,41) siendo 16,7 ± 4,1, 18,2 ± 2,8, 14,0 ± 2,7, 12,1 ± 3,7, y 17,1 ± 4,2 para las novillas tratadas con 0, 10, 300, 500, 700, y 1.000 UI de eCG, respectivamente. Diámetro (r = 0,48) y el área calculada (r = 0,61) de la CL se correlacionaron positivamente (P <0,0001) con las concentraciones de progesterona plasmática.

Experimento 2

La administración de eCG en cualquiera d 2 o 7 no indujo ningún ovulaciones múltiples. No se observaron efectos significativos del tratamiento con eCG en la mayoría de las variables relacionadas con la dinámica del folículo (P> 0.63; Tabla 3).

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El intervalo de PGF2a inyección para la ovulación tendía a ser más largo (P <0,08) en las vacas tratadas con eCG en d 2 que en las vacas de los otros tratamientos. Además, 4 vacas tratadas con eCG tenían una segunda onda folicular, surgiendo en el día 8 (2 vacas), 9 y 11 del experimento y una ovulación retardada (es decir, los valores atípicos:> 2 SD de la media PGF2α- a la ovulación intervalo). Tres de estas vacas fueron tratados en d 2, mientras que la vaca "outlier" restante se trató con eCG en d 7. Un segundo análisis del intervalo de inyección de PGF2a a la ovulación se llevó a cabo después de la eliminación de los datos de los cuatro valores atípicos; no se encontraron diferencias (P = 0,41) en el intervalo de PGF2a-ovulación (80.0 ± 3.5, 84.0 ± 0.0 y 78.0 ± 3,2H de Control, eCG en el día 2, y el ECG en el día 7, respectivamente).

Cuando se analizaron los perfiles foliculares (Fig. 4), diámetro de la (más grande) folículo dominante media fue afectada por d (P <0,0001), pero no por el tratamiento (P = 0,51) o el tratamiento por d efecto de interacción (P = 0,48). Diámetro del folículo más grande subordinado media se vio afectada por d (P <0,0001) y el tratamiento (P = 0,03), pero no por un efecto del tratamiento por d interacción (P <0,31; Fig. 5). La media de la zona y progesterona concentraciones CL desde el día 7 al 11 (Fig. 6A) se vieron afectados por d (P <0,0001), pero no por el tratamiento (P = 0,39 y P = 0,15, respectivamente) o el tratamiento por d interacción (P = 0,93 y P = 0,89, respectivamente).

Figure 3. Mean (± SEM) plasma progesterone concentrations (A) from d 0 to 7 of a 7-d Ovsynch + progesterone synchronization protocol in beef heifers that ovulated (n = 23) or not (n = 26) in response to the first GnRH and (B) from d 7 to ovulation in heifers treated with 0, 300, 500, 700, or 1,000 IU eCG on d 7. (Exp. 1.)

Experimento 3

Experimento 3a. No hay diferencia significativa (P> 0,29) entre eCG y grupos de control se encuentra en el folículo diámetro más grande en diferentes momentos durante el protocolo, área de CL en el momento del tratamiento PGF, y el intervalo de desde el tratamiento PGF a la ovulación (Tabla 4). Diámetro del folículo más grande durante su fase de crecimiento no se vio afectada por el tratamiento (P = 0,33) o la interacción d

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treatmentby- (P = 0,81), pero fue influenciado por d (P <0,0005; datos no mostrados). Las concentraciones plasmáticas de progesterona después de 3 d del protocolo de sincronización no se vieron afectados por el tratamiento (P = 0,85) o el tratamiento por interacción d (P = 0,52), pero fueron influenciados por d (P <0,0001; Fig. 7). El AUC fue similar (P = 0,37) entre ambos tratamientos. Proporción de vacas con doble ovulación tendió (P = 0,10) a ser mayor en las vacas tratadas con 800 UI de eCG (33,3%; 1,33 ± 0,2 ovulaciones o número de cuerpos lúteos) que en el grupo control (0,0%; 1.00 ± 0.0 ovulaciones o número de cuerpos amarillos), mientras que la tasa global de embarazo (P <0,05) y de embriones de números (p = 0,013) fueron mayores en las vacas tratadas con eCG (88,9%; 1.11 ± 0.2 embriones) que los del grupo de control (33,3%; 0,33 ± 0,2 embriones). 3b Experimento. La tasa de preñez fue mayor (P <0,02; odds ratio = 3,5; intervalo de confianza = 1,2 a 10,2) en las vacas tratadas con eCG en el día 3 (37/51; 72,6%) que en el de control (09/21; 42,9%) vacas. Entre las vacas preñadas de las tratadas con eCG en el día 3 del protocolo, la proporción de esas vacas con doble ovulación fue de 29,7% (11/37) y con los gemelos fue de 16,2% (6/37). No se detectaron ovulaciones dobles o embarazos gemelares en las vacas del grupo de control.

Figure 4. Mean (SEM) diameter of the dominant follicle that ovulated (normalized to ovulation) in beef cows not treated (Control; n = 9) or treated with 400 IU eCG on d 2 (n = 6) or 7 (n = 8) during an Ovsynch+ progesterone protocol. (Exp. 2.)

Experimento 4

Los datos de 1 vaca que había recibido 2 dosis de eCG (gemelos fueron detectados en la exploración del embarazo) y 6 novillas con registros incompletos se eliminaron del análisis. No se observaron ovulaciones múltiples en el resto de los animales en exploración por ultrasonido realizado en 50 d de la inyección de PGF2a. La proporción de novillas preñadas dentro de los 5 días después del protocolo de tratamiento, según las estimaciones de diagnóstico de ultrasonido, fue mayor (P <0,04; odds ratio = 1,85; intervalo de confianza = 1,03 a 3,34) en las novillas tratadas con eCG en el día 3 (68,0% ; 66/97) que en las vaquillas de control no tratados (53,1%; 51/96). No se observó ningún efecto de la condición corporal sobre la tasa de embarazo (P = 0,57). El porcentaje total de novillas preñadas fue similar (P = 0,25; odds ratio = 1,43; intervalo de confianza = 0,77 a 2,65) en las novillas tratadas con eCG en el día 3 (73,2%; 71/97) que en

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las vaquillas de control no tratados (65,6%; 63/96).

Figure 5. Mean (SEM) diameter of the largest subordinate follicle from d 2 to 7 in beef cows not treated (Control; n = 16) or treated with 400 IU eCG on d 2 (n = 6) during an Ovsynch + progesterone protocol. The presented and analyzed data exclude outlier animals. (Exp. 2.)Experimento 5

Parámetros lútea y folicular medidos en d 6 y 14 del experimento no fue diferente entre tratamientos (P> 0.05; Tabla 5). Las concentraciones de progesterona en plasma durante el protocolo de sincronización y durante el ciclo estral después de este protocolo se muestran en la Fig. 8. Una vaca ovulado 2 folículos en el grupo tratado con eCG, según la evaluación de la

ecografía en el día 14 del experimento. Las concentraciones plasmáticas de progesterona en esta vaca fueron elevados ligeramente en d 22 (14,9 ng / ml) y 26 (15,7 ng / ml), que corresponde a d 13 y 17 del ciclo estral, cuando se compara con el perfil medio de progesterona del ECG- grupo tratado. Un efecto de d (P <0,001), pero no un efecto de tratamiento o tratamiento-by-d se encontró interacción en las concentraciones circulantes de progesterona durante el protocolo de sincronización (d 3 a 10). Por otro lado, un efecto del tratamiento (P <0,05) y D (P <0,0001), pero no hay interacción tratamiento por d (P <0,30) efecto, se encontró en concentraciones de progesterona en plasma durante el ciclo estral después de la sincronización protocolo (d 10 a 30 del experimento). El ABC de las concentraciones de progesterona durante este período también fue mayor (P <0,02) en las vacas tratadas con eCG (278,8 ± 28,9) que en las vacas de control (258,7 ± 26,0).

Figure 6. Profiles of (A) mean corpus luteum diameter and (B) progesterone from d 7 to 11 in cows not treated (Control; n = 9) or treated with 800 IU eCG on d 2 (n = 9) or 7 (n = 9). (Exp. 2.)

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DISCUSIÓN

La administración Intramuscular de eCG en un protocolo Ovsynch + progesterona 6-d resultó en 30% doble ovulación con aproximadamente el 20% de los embarazos gemelares en los animales tratados. Por lo tanto, este protocolo puede servir como un vehículo para un mayor hermanamiento en la industria de la carne. Modificaciones críticos de un protocolo Ovsynch + progesterona incluyen la duplicación de la dosis de eCG utilizado en otros informes (Mialot et al., 2003; Bó et al., 2004; Duffy et al, 2004;.. Colazo et al, 2006), así como la sincronización de la inyección de eCG en relación con la emergencia de la onda folicular y la regresión del cuerpo lúteo. Entre las razones de la búsqueda de hermanamiento ganado era el interés de algunos agricultores de Nueva Zelanda en esta tecnología y un programa de hermanamiento exitoso en ganado de carne en Canadá utilizando la genética de Clay Center, NE (Smeaton, 2009). Aunque varios estudios existen que examinó los resultados reproductivos en forma natural gemelos en ganado de carne (Hammond, 1949; Hanrahan, 1983; Davis et al., 1989;. Echternkamp et al, 1990; Gregory et al 1990a, b;. Echternkamp y Gregory, 1999a, b; Morris y Wheeler, 2002;. Echternkamp et al, 2004; Del Río et al, 2007;.. Echternkamp et al, 2007a;. Echternkamp et al, 2007b; Cummins et al, 2008;. Echternkamp et al., 2009), publicaciones recientes sobre el hermanamiento inducida por hormonas en sistemas de producción ganadera son escasos (Anderson, 1978). Hormonalmente hermanamiento inducido puede ser una herramienta para aumentar la rentabilidad de vaca de ganado en hatos de carne sin la genética individuales. Por lo tanto, el objetivo fue diseñar un protocolo que se puede utilizar para inducir

ovulaciones dobles mediante el uso de eCG. El objetivo era lograr sólo ovulaciones dobles a la dosis de eCG administrada parenteralmente en una determinada proporción de ganado sin la incidencia no deseada de más de 2 ovulaciones, que pueden conducir a la gestación de más de 2 fetos. Se esperaba que una mayor dosis de eCG, probablemente daría lugar a una mayor proporción de ovulaciones dobles en el ganado, también aumentaría el riesgo de la aparición no deseada de triple o mayor número de ovulaciones. Los primeros intentos para inducir ovulaciones múltiples usando altas dosis de eCG tuvieron éxito; sin embargo, también se indujeron nacimientos múltiples no deseadas (es decir, tripletes) (Johnson et al., 1975). El protocolo de sincronización descrito en este informe es el primero en el que eCG fue dado estratégicamente en el día 3 de un Ovsynch + progesterona protocolo 6-d, que es después de la onda emergencia y antes de la desviación folicular.

Figure 8. Plasma progesterone concentrations (ng/mL) in cows not treated (Control) or treated with 800 IU eCG on d 3 of a 6-d Ovsynch + progesterone protocol. Statistically significant differences in mean plasma progesterone concentrations between both treatments are indicated with asterisks in the graph (*P < 0.05, **P < 0.01). Day 10 of the experiment is equivalent to d of ovulation (d 1 of the oestrous cycle), while d 30 of the experiment coincides

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with the occurrence of the mean estrous day before the next cycle. (Exp. 5.)

La dosis utilizada (es decir, 800 UI de eCG im administrada) ha dado lugar a aproximadamente 33% doble ovulación, con un aumento de 18 a 30% en tasa global de embarazo. Esta dosis se duplicó en comparación con la utilizada en los protocolos de sincronización tradicionales (Bó et al., 2004; Colazo et al, 2006;. Bryan et al, 2013;. Polea et al, 2013)., Pero menos que los utilizados inicialmente para inducir hermanamiento (Johnson et al., 1975). La dosis de eCG utilizado en el estudio actual probable proporcionado gonadotropina apoyo para estimular el crecimiento de los folículos más grandes 2 de un codominancia creación de onda y resulta en doble ovulación. Dar eCG 3 d antes de la inyección PGF2a aseguró que el folículo dominante futuro (s) estaría estimulado por la FSH y LH efectos de ECG por un período más largo antes de la ovulación en comparación con el calendario tradicional de tratamiento eCG en inyección de PGF2a. Es importante señalar que ocurrieron cuando ovulaciones dobles 800 UI de eCG se administró im en el cuello, sc mientras que la misma dosis de eCG dado resultado en sólo ovulaciones individuales. La hipótesis de que la inyección vía subcutánea de eCG dio lugar a concentraciones máximas más bajas de eCG en circulación, que eran insuficientes para dar lugar a dobles ovulaciones, pero proporciona un período de gonadotropina apoyo que resulta en un folículo sano y posterior CL. La inyección subcutánea de gonadotropina dio lugar a una absorción de hormonas más bajo que la inyección IM (Laster, 1972). Altas dosis subcutáneas de eCG (es decir, 2 dosis de 1.500 UI y 2000 UI 12 d de diferencia) se les ha dado a las vacas y dio lugar a múltiples ovulaciones y nacimientos (Turman et al., 1971).Así, tanto la ruta y dosis de eCG son probables consideraciones importantes para la inducción de hermanamiento en el ganado vacuno. El momento de la inyección de eCG también era

importante para la inducción de ovulaciones dobles. Ovulaciones dobles fueron inducidas cuando se le dio el tratamiento eCG 1 d después de la aparición esperada de la onda folicular después del tratamiento con GnRH, pero antes de la desviación folicular en el Exp. 1. Los informes preliminares también mostraron que la administración de 600 UI eCG antes de la selección del folículo dominante inducida doble ovulación en 3 de 4 vacas (Duffy et al., 2004). El intervalo del tratamiento eCG a la inyección de PGF2a también es importante, ya no hay ovulaciones dobles ocurrieron en vacas tratadas con eCG en d 2, donde folículos subordinados regresión antes de la retirada de la progesterona que ocurren 5 d después (Exp. 2). El protocolo optimizado utiliza un intervalo de 3-d entre el tratamiento y la inyección de eCG PGF2a. La FSH y la LH estimulación adicional proporcionada por la eCG, en asociación con concentraciones bajas de progesterona, permite que el folículo dominante o folículos codominantes rápidamente a madura. También se espera que los folículos codominantes tendrán ambos receptores FSH y LH para apoyar el crecimiento continuo, lo que les daría una ventaja sobre los folículos subordinados restantes. Reducción del intervalo de eCG al tratamiento PGF requiere el intervalo de GnRH-a-PGF2a inyección para ser acortado de 7 a 6 d. Esta modificación éxito se había utilizado en el ganado vacuno (Twagiramungu et al, 1995a;. Roy y Twagiramungu, 1999; Martínez et al., 2000; Grant et al, 2011;. Perry et al, 2012)., En el que las tasas de embarazo a AI fueron similares a los que después de un 7-d Ovsynch (Twagiramungu et al, 1995b;. Roy y Twagiramungu., 1999; Martínez et al, 2002; Bryan et al, 2013).. Un protocolo Ovsynch 5-d se consideró (Bridges et al., 2008), pero el 6-d Ovsynch fue elegido, ya que no requiere una dosis adicional de la prostaglandina.Dada la importancia de la administración de eCG con relación a la emergencia de la onda folicular y la

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variabilidad en la respuesta ovulatoria, y por lo tanto emergencia de la onda folicular, a una primera inyección de GnRH, el aumento de la respuesta a la primera GnRH puede dar lugar a mayores tasas de hermanamiento. La ovulación en respuesta a una única inyección de GnRH puede rango de 23 a 96% (Martínez et al., 1999; Vasconcelos et al., 1999), con aparición de una nueva onda folicular que ocurren dentro de 2 d después del tratamiento sólo en animales que ovulan (Martínez et al., 1999; Vasconcelos et . al, 1999).Sin embargo, onda emergencia puede ocurrir 6 o 7 d después de la inyección de GnRH en los animales que no logran ovular (Martínez et al., 1999). Del mismo modo, una alta variabilidad en el intervalo desde GnRH inyección a la aparición de las próximas ondas foliculares se observó en novillas que no ovulan en respuesta a la primera inyección de GnRH en el Exp. 1. La respuesta ovulatoria a la inyección de GnRH depende de la etapa del desarrollo del ciclo estral y el folículo. Se observó una alta respuesta ovulatoria (96%) a la GnRH cuando las vacas fueron tratadas del 5 al 9 d después del estro (Vasconcelos et al., 1999). Sistemas de presincronización han reducido la variabilidad en la respuesta ovulatoria a la primera GnRH en un protocolo Ovsynch (Peters y Pursley, 2.002; LeBlanc y Leslie, 2003; El-Zarkouny et al., 2004; Navanukraw et al, 2004;.. Colazo et al, 2005; Keith et al., 2005; Small et al, 2009;.. Giordano et al, 2012;. Ribeiro et al, 2012; Stevenson y Polea, 2012). El uso de estrategias para mejorar las respuestas a la primera GnRH probablemente resultará en una mayor incidencia de ovulaciones dobles, pero también aumentará presincronización manejo de los animales y los tratamientos. La observación de que el aumento de las tasas de embarazo fueron encontrados en los animales tratados con una sola ovulación nos llevó a evaluar el potencial de sc tratamiento eCG en el día 3 para mejorar las tasas de embarazo en

programas de sincronización convencionales para la monta natural o AI. Los efectos beneficiosos de eCG dado al levantamiento progestina (d 7 de la sede en la GnRH o d 9 de protocolos basados en estradiol) han sido reportados en ganado vacuno (Mulvehill y Sreenan, 1977; Mialot et al, 2003;. Baruselli et al., 2004; . Bó et al., 2004; Sa Filho et al, 2010). Las tasas de embarazo logrados con nuestro protocolo de sincronización GnRHbased fueron similares a los después del tratamiento con protocolos basados en estradiol (tratamiento eCG en d 8), que han variado desde aproximadamente 52% (Baruselli et al, 2004;.. Sa Filho et al, 2010) a 66% (BO et al., 2004). Al igual que en nuestros experimentos actuales, Small et al. (2009) observó un efecto significativo de eCG dada durante una 7-d Ovsynch + progesterona protocolo sobre las tasas de embarazo en el 37 d después de la IATF en CIDR-presincronizadas vacas primíparas tratadas con eCG (55,6%) frente a los no tratados con eCG (24,1% ). Por el contrario, ningún efecto de eCG fue encontrado después del tratamiento con eCG después de un presincronización basado en CIDR seguido de un 7-d Cosynch protocolo en novillas de carne o vacas (Colazo et al., 2006) y un 7-d protocolo Ovsynch en lactación lácteos vacas (Polea et al., 2013). Aunque se trataba de protocolos Ovsynch, la manipulación de los ciclos y foliculares olas estro fue diferente del protocolo descrito en el Exp. 3, en el que se administró ningún tratamiento presincronización. Más investigación que involucra la comparación de estos diferentes protocolos de tratamiento en los ensayos con mayor número de animales, así como diferentes tipos de ganado necesita ser realizado. Una serie de factores están involucrados en el éxito del embarazo (Atkins et al, 2010a, 2013;. Geary et al, 2013).. Por lo tanto, varios mecanismos pueden estar implicados por el cual el tratamiento eCG dado durante las primeras etapas de crecimiento del folículo puede mejorar las tasas de embarazo. Preovulatorio y eventos

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postovulatorios pueden tener una influencia en la fertilidad. Tamaño del folículo preovulatorio y su producción de estradiol se han asociado con un aumento de la competencia de los ovocitos (Jinks et al., 2013), la supervivencia del embrión y las tasas de embarazo (Geary et al., 2013). Las concentraciones de progesterona también han demostrado estar relacionada con embrión supervivencia (Carter et al, 2008;.. Geary et al, 2013). Vida preovulatorio del folículo ovulatorio posteriormente tener un efecto sobre la formación de cuerpo lúteo. Al igual que en estudios anteriores utilizando 400 UI eCG en el ganado vacuno (Mapletoft et al., 2004; Small et al, 2009;.. Kenyon et al, 2012;. Polea et al, 2013), el tratamiento con cualquier dosis de eCG estudió no afectar a la tasa de diámetro o el crecimiento del folículo dominante. En otro estudio, aunque hubo cambios sin ultrasonidos detectables en el tamaño del folículo,eCG tendió a aumentar las tasas de embarazo después de la inseminación a tiempo fijo en vacas primíparas que no habían sido presincronizadas (Small et al., 2009). Por lo tanto, ECG puede también inducir cambios fisiológicos en los folículos dominantes no detectables por ecografía. Otros factores que influyen (es decir, el estado fisiológico, la nutrición y la salud) en las tasas de embarazo deben ser tomados en consideración.Las concentraciones de progesterona en plasma de alta durante el ciclo estral posterior después se observó el protocolo de sincronización en vacas tratadas con eCG proporcionar un posible mecanismo para el aumento de las tasas de embarazo. Las altas concentraciones de progesterona también se observaron en ganado Bos indicus eCG tratado con 12 d después de la ovulación en un / protocolo de sincronización basado en progesterona estradiol (Baruselli et al., 2004) y en los receptores de embriones que llevan un embarazo exitoso (Britt y Holt, 1988), mientras que las novillas tratados con progesterona de 3 días después del

estro conseguido prolongar la alargada blastocistos 10 d después (Carter et al., 2008). También se ha planteado la hipótesis de que el efecto del tratamiento con eCG para ovulaciones individuales o múltiples resulta en alta progesterona circulante mediante el aumento de número de células lútea y orgánulos implicados en la síntesis de progesterona luteínica (Rigoglio et al., 2013). De hecho, un mayor número de células grandes lútea y de las mitocondrias esféricas que participan en la síntesis de progesterona basal se ha observado en corpora lutea de animales tratados con eCG (Rigoglio et al., 2013). El tratamiento con eCG en d 3 del protocolo de sincronización puede estimular células de la granulosa en el folículo preovulatorio para producir más estrógeno, resultando en un aumento del número de células grandes lútea que producen una mayor cantidad de progesterona durante los días después de la ovulación. En este momento, el embrión habría alcanzado el útero y se benefician de un medio uterina más favorable. Conclusiones generales en nuestros experimentos sugieren que altas concentraciones de progesterona secretadas por el CL podría ser una de las razones para el aumento de supervivencia de los embriones en novillas o vacas tratadas con eCG (con eCG im o sc dado). Alternativamente, el aumento de la progesterona observado en el ciclo posterior podría ser un reflejo de un mejor desarrollo y maduración folicular. Estudios anteriores han demostrado que el aumento de estradiol en el folículo preovulatorio se asocia con aumento de progesterona en plasma después de la ovulación (Atkins et al., 2010a, b). Además, el aumento de las concentraciones de estradiol en el folículo preovulatorio están vinculados a un aumento de la competencia de los ovocitos (Jinks et al., 2013) y la mejora de la calidad del embrión (Geary et al., 2013). Exploración de las concentraciones de estradiol y la función de los ovocitos en el folículo preovulatorio de bovinos tratados con este protocolo podría aportar nuevos

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datos sobre los mecanismos de mayor fertilidad. En resumen, la dosis y el momento de eCG junto con la etapa de desarrollo del folículo dinámica folicular afectados durante una Ovsynch + progesterona protocolo 7-d. El tratamiento con eCG en el día 2 del mismo protocolo resultó en la dinámica folicular alterados y aumentó el intervalo de la eliminación de la progesterona a la ovulación. El tratamiento con eCG en el día 3 de un Ovsynch + protocolo de progesterona 6-d aumentó significativamente las tasas de embarazo después de la IATF de vacas de carne amamantados y servicio natural de novillas de carne y dio lugar a un aumento de las concentraciones de progesterona plasmática durante el ciclo estral después del tratamiento. Cuando se administra im, eCG en el día 3 también indujo dobles ovulaciones en aproximadamente un tercio de los animales. En conclusión, nuestros resultados han demostrado diferentes resultados después del uso de eCG durante un protocolo Ovsynch + progesterona en el ganado, dependiendo de la dosis y días del protocolo en el que se administró. La dosis de 800 UI de eCG dado i.m. inducida éxito doble ovulación en ganado de carne cuando se administra estratégicamente en d 3 de un Ovsynch + progesterona protocolo 6 d. También mejoró la concepción después de un programa de IATF en vacas de carne y después de la cría de toros en novillas. Esta mayor fertilidad puede ser debido a altas concentraciones de progesterona después de la ovulación de un folículo estimulado-eCG. El protocolo fue un éxito en tanto oportuna AI y la cría monta natural.

TrascendenciaLa rentabilidad de la operación de vaca-becerro todavía puede mejorarse aumentando la productividad a través de la fecundidad y la fertilidad. El uso de protocolos de sincronización de la ovulación se ha generalizado en la última década, y el uso de esta tecnología es cada vez más importante

para los productores de ganado. El uso de un protocolo como 6-d Ovsynch + progesterona más eCG puede ser fácilmente aceptado por los productores de ganado que quieren embarazos simples o dobles a la cría artificial o toros. El protocolo puede ser prometedoras si los resultados de fertilidad se pueden repetir y justificar los costos adicionales asociados con el tratamiento con eCG y gestión de hermanamiento.