Coordinación científica:

Dr. Rafael López López

Complejo Hospitalario Universitario de Santiago de

Compostela

Organizado por: Sede:

San Francisco Hotel Monumento

Campillo de San Francisco, 3 - Santiago de

Compostela

Del laboratorio al paciente. CTCs en cáncer colorrectal: Resultados preliminares del ensayo VISNÚ

Dr. Javier Sastre

Servicio de Oncología Médica

HC San Carlos de Madrid

jsastrev@salud.madrid.org

> 2 CTCs were detected in 30%

of patients with metastatic

colorectal cancer.

The median number of CTCs in

gastrointestinal tumors is relatively

low compared with other

carcinomas.

Patients with nonmalignant

diseases had < 2 CTCs

Cuestiones clínicas relevantes sobre

CTCs ¿Tienen relación con variables clínico-patológicas?

¿Tienen valor pronóstico o predictivo de respuesta al tratamiento?

¿Se pueden encontrar en la enfermedad limitada como dato indicativo de diseminación tumoral?

¿Es un factor predictivo de recurrencia en enfermedad limitada?

Methods

97 consecutive patients and 30 controls were included Blood samples were collected at:

From 4-12 weeks after surgery and immediately before adjuvant chemotherapy (if indicated) for patients diagnosed in stage I-III.

Immediately before palliative chemotherapy in patients with advanced disease.

Samples were stored in CellSave Preservative tubes for not more than 72h Enumeration of CTCs in 7.5ml of blood was carried out with the Cell Search System (Veridex) A cut-off of > 2 CTCs was chosen to define the test as positive for CTCs presence

ULN: Upper Limit Normal

Table II. Correlation among CTCs and clinical / morphological variables

p = 0.153

6 (46.2%)

46 (66.7%)

7 (53.8%)

27 (33.3%)

LDH levels

> 1 x ULN

< 1 x ULN

p = 0.079

9 (45%)

46 (66.7%)

11 (55%)

23 (33.3%)

CEA levels

> 5 ng/ml

< 5 ng/ml

p = 0.364

12 (57.1%)

34 (72.3%)

1 (100%)

9 (42.9%)

13 (27.7%)

0

Grade of differentiation

Well

Moderate

Undifferentiated

p = 0.329

26 (74.3%)

2 (33.3%)

6 (66.7%)

18 (58.1%)

8 (66.7%)

9 (25.7%)

4 (66.7%)

3 (33.3%)

13 (41.9%)

4 (33.3%)

Tumor location

Ascending

Transverse

Descending

Sigmoid

Rectum

4 (50%)

23 (79.3%)

22 (75.9%)

11 (39.3%)

4 (50%)

6 (20.7%)

7 (24.1%)

17 (60.7%)

Stage

I

II

III

IV

< 2 CTCs > 2 CTCs

p value Number of CTCs/ 7.5 ml Clinical or pathological variables

p =0.005

CTCs > 2 per 7.5ml were not found in controls

CTCs enumeration as prognostic and

predictive factor in CRC: prospective studies

El recuento de CTCs por Veridex CellSearch es un factor pronóstico de la enfermedad

Sastre J et al. The Oncologist 2012

Esquema global de los programas VISNU

Objetivos

1. Analizar la correlación entre la expresión del panel de biomarcadores y la cuantificación de CTCs en el cribado de población del programa VISNU.

2. Analizar la correlación entre la expresión del panel de biomarcadores y la cuantificación de CTC con variables pronósticas clínico-patológicas de pacientes incluidos en los estudios VISNU-1 y VISNU-2.

Métodos (I)

Se seleccionaron 1208 pts para CTCs y mutación RAS y 590 de ellos

fueron elegibles para los estudios VISNU-1 y VISNU-2.

Evaluación de CTC en sangre periférica:

Muestra: 10 ml de muestra de sangre basal.

Técnica de análisis: método Cell Search® (Menarini Silicon Biosystems, Incl.)

Métodos (II)

Determinación del estado mutacional KRAS-NRAS-BRAF-PIK3CA,

Muestra: Bloques de tejido fijados en parafina.

Técnica de análisis:

KRAS exones 2 y 3, BRAF y Pi3K: COBAS test ®, utilizando los siguientes kits:

Prueba de mutación Cobas 4800 KRAs

Prueba de mutación Cobas 4800 BRAF V600

Prueba de mutación Cobas 4800 PIK3CA

Exones KRAS exón 4 y NRAS 2,3 4: técnica pirosecuenciación Qiagen utilizando kit

Qiagen NRAS y kit Ras extensión piro. En 2016, ambos kits fueron reemplazados por

"therascreen RAS Extensión Pyro Kit".

La determinación se realizó regionalmente en 5 laboratorios centrales, excepto para MSI que fue por PCR en 2

laboratorios centrales. Se recogieron las características clínicas y patológicas de todos los pacientes incluidos

en los estudios VISNU-1 y VISNU-2.

Alteraciones moleculares en la población de screening (1202pts)

CTCs

> 3

< 3

40.8%

59.2%

RAS

Nativo

Mutado

48.6%

51.4%

BRAF

Nativo

Mutado

92.5%

7.5%

PIK3CA

Nativo

Mutado

88.7%

11.3%

MSI

MSI-H

MSI-L / MSS

1.7%

98.3%

Correlación CTCs , RAS, BRAF, PIK3CA (1202 pts)

MACRO: Cox Multivariate Analysis for OS

Univariate and Multivariate Significant Factor Not Significant Factor

PARAMETER

UNIVARIATE ANALYSIS MULTIVARIATE ANALYSIS

Prob H. R. 95% CI Hazard Ratio Prob H. R. 95% CI Hazard Ratio

KRAS(MT vs WT) 0.017 1.606 1.089 2.369 0.006 1.755 1.171 2.628

CTC(≥3 vs <3) 0.007 1.703 1.158 2.504 0.001 2.063 1.361 3.127

Age (≥70 vs <70) 0.079 1.426 0.960 2.120 0.338 1.234 0.803 1.897

Sex (Female vs Male) 0.853 0.963 0.645 1.438 0.834 0.957 0.636 1.439

PS (2 vs 0-1) 0.843 0.867 0.211 3.564 0.826 0.850 0.200 3.620

# Affected organs (≥2 vs 1) 0.245 1.262 0.853 1.869 0.099 1.449 0.933 2.251

Group (XELOX-BEV vs s/a_BEV) 0.875 1.031 0.703 1.514 0.449 1.173 0.781 1.761

J. Sastre et a. Clin Colorectal Cancer 2013

Overall survival according to CTCs-KRAS

Refence cell:

CTC<3&WT KRAS

Hazard

Ratio

95% Hazard Ratio

Confidence Limits Prob > χ2

CTC<3 & MT KRAS 1.555 0.885 2.734 0.1248

CTC≥3 & WT KRAS 1.656 0.982 2.794 0.0587

CTC≥3 & MT KRAS 3.253 1.829 5.784 <.0001

13.5m 28.8m

J. Sastre et a. Clin Colorectal Cancer 2013

MSI N (%) < 3 CTC (N=231) >3 CTC (N=331) P value

MSI-HIGH 7 (3.0) 3 (0.91) 0.1005

MSI-S or LOW 224 (97) 328 (99)

Gender N (%) < 3 CTC (N=240) >3 CTC (N=350) P value

Male 164 (68) 238 (68) 0.9320

Female 76 (32) 112 (32)

ECOG N (%) < 3 CTC (N=240) >3 CTC (N=350) P value

0 141 (59) 166 (47) 0.0069

1 99 (41) 184 (53)

Primary location N (%) < 3 CTC (N=239) >3 CTC (N=349) P value

Right 50 (21) 89 (26) 0.4273

Right and left 3 (1.3) 5 (1.4)

Left 186 (78) 255 (73)

Correlación CTCs , Características clínico-patológicas (590 pts)

Correlación RAS - Características clínico-patológicas (590 pts)

Correlación BRAF - Características clínico-patológicas (590 pts)

Correlación PI3K - Características clínico-patológicas (590 pts)

Correlación MSI-H - Características clínico-patológicas (590 pts)

Existe correlación entre MSI-H y BRAF mutado (p 0.0011)

Limitaciones del estudio

1. Exclusión de los pacientes con < 3 CTCs + RAS mutado

2. Limitación de la edad de inclusión a < 70 años

3. La baja incidencia de algunas de las mutaciones ( BRAF, PIK3CA) y de la presencia de MSI-H

Conclusiones (I)

1. Los porcentajes de pacientes con CTCs > 3 (40.8%), RAS mutado (51.4%), BRAF mutado (7.5%), PIK3CA mutado (11.3%) y con MSI-H (1,7%) están dentro de los rangos de lo publicado en la literatura.

2. No existe correlación entre presencia de CTCs elevadas y mutaciones de RAS, BRAF, PIK3CA o MSI-H.

3. Existe correlación entre BRAF mutado y MSI-H.

Conclusiones (II) 4. La presencia de CTCs > 3 y las mutaciones de RAS se correlacionan

con factores clínicos clásicamente relacionados con mal pronóstico como:

Peor ECOG

Estadio IV al diagnóstico

Afectación hepática

Mas de 2 localizaciones metastásicas

CEA elevado

Localización derecha (solo RAS mut)

5. Las mutaciones de BRAF se correlacionan con MSI-H, localización derecha, afectación hepática, peritoneal y ganglionar a distancia y alta tendencia con género femenino.

Conclusiones (III)

6. Las mutaciones de PIK3CA se correlacionan con localización derecha, CEA

elevado

7. La presencia de MSI-H se correlaciona con BRAF mutado, localización

derecha, localización ganglionar a distancia y menor incidencia de CEA

elevado

La relevancia y el impacto clínico de estas alteraciones moleculares están a la espera de los resultados de supervivencia libre de progresión y global de los pacientes tratados dentro del proyecto VISNÚ, que estarán disponibles próximamente

Agradecimientos

H. Universitario Central de Asturias, Dr. J. Mª. Viéitez; -H. Gregorio Marañón (Madrid), Dra. P. García Alfonso; -H. Regional Universitario (Málaga), Dra. S. Gil Calle; -H. Universitario Reina Sofía (Córdoba), Dr. E. Aranda Aguilar; -H. de Lleida Arnau de Vilanova (Lérida), Dra. A. Salud; -C. Lucus Augusti (Lugo), Dr. G. Quintero; -H. Marqués de Valdecilla (Santander), Dr. F. Rivera; -C. H. Virgen de la Macarena (Sevilla), Dr. J. J. Reina; -H. 12 de Octubre (Madrid), Dr. L. Robles; -C. H. Universitario (La Coruña), Dra. B. Graña; -H. Miguel Servet (Zaragoza), Dres. V. Alonso/ E. Polo; -H. General Universitario (Valencia), Dra. Mª J. Safont; -H. de Donostia (Guipúzcoa), Dras. A. La Casta/S. Arévalo; -H. Virgen de las Nieves (Granada), Dra. E. González Flores; -H. Ramón y Cajal (Madrid), Dra. C. Guillén; -H. Puerta de Hierro (Madrid), Dra. A. Ruiz Casado; -H. Universitario Clínico San Carlos (Madrid), Dres. E. Díaz-Rubio/ J. Sastre; -H. General Universitario (Alicante), Dr. B. Massutí; -H. Clínico de Santiago (La Coruña), Dr. R. López López; -H. General Universitario de Elche (Alicante), Dr. J. Gallego; -H. Son Espases (Palma de Mallorca), Dra. M. Guillot; -H. Virgen del Rocío (Sevilla), Dra. Mª J. Flor; -C. H. Universitario (Orense), Dra. M. Salgado; -H. Ciudad de Jaén, Dra. R. Dueñas; -H. C. Universitario Lozano Blesa (Zaragoza), Dra. P. Escudero; -H. Nuestra Señora de Valme (Sevilla), Dra. A. López-Ladrón; -H. C. Univ. Virgen de la Victoria (Málaga), Dra. E. Torres Sánchez; -H. Universitario La Fe (Valencia), Dr. J. Aparicio; -H. San Joan de Reus (Tarragona), Dra. I. Cabezas; -H. Arnau de Vilanova (Valencia), Dra. A. Albert; -H. Son Llatzer (Palma de Mallorca), Dra. E. Falcó; -ICO. H. U. Josep Trueta (Gerona), Dr. X. Hernández Yagüe; -H. La Zarzuela (Madrid), Dr. P. Salinas; -H. Virgen de la Arrixaca (Murcia), Dr. M. Marín; -H. General de Elda (Alicante), Dra. A. Juárez; -H. del Mar (Barcelona), Dra. C. Montagut; -H. San Pedro de Alcántara (Cáceres), Dr. J. Muñoz; -C. H. La Mancha Centro (Ciudad Real), Dra. A. Mª García Tapiador; -H. Universitario de Burgos, Dr. C. García-Girón; -H. de Sagunto (Valencia), Dra. M. Gil Raga; -H. Can Misses (Ibiza), Dr. I. López; -C. Sanitari de Terrasa (Barcelona), Dr. J. Alfaro; -H. de Mataró (Barcelona), Dra. M. Zanui; -H. Universitario Quirón (Madrid), Dr. F. J. González González; -H. de Fuenlabrada (Madrid), Dr. D. Gutiérrez Abad; -H. Dr. Peset (Valencia), Dr. C. Bosch; -H. de Basurto (Vizcaya), Dra. P. Martínez de Prado; -H. Provincial (Castellón), Dr. J. Molina Saera; -C. Rotger (Palma de Mallorca), Dr. A. Arrivi; -C. Asistencial (Zamora), Dra. M. Navalón; -H. Costa del Sol (Málaga), Dra. J. Alcaide Centro de datos del TTD: I Ruiz de Mena y S. Rodríguez. Monitorización, Estadística y Proceso de datos: Pivotal Financiación: Roche Farma, S.A.

Coordinadores: Dr. E. Aranda, Dr. E. Díaz-Rubio, Dr. J. Sastre Laboratorio de CTCs del HC San Carlos Laboratorios de Biología molecular del HC San Carlos, H Reina Sofía, H Central de Asturias, H. Del Mar y H. La Fe. y al Servicio de Patología del H Gregorio Marañón Miembros del TTD participantes en el ensayo: