Curso análisis de semen según los criterios de la OMS-2010 (2ª parte)
description
Transcript of Curso análisis de semen según los criterios de la OMS-2010 (2ª parte)
Curso análisis de semen según los criterios de la OMS-
2010 (2ª parte)
Mariam Cortés Tormo
R2 Análisis clínicos
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
¿ Qué hacemos con la muestra recogida?
Identificar la muestra
Introducirla en estufa 37ºC
Si es posible someter a rotación con un agitador orbital
Iniciar la observación preferiblemente a los 30 min
Nunca después de 1 h.
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
La licuefacción se ensaya visualizando la muestraUna muestra normal es una muestra licuada y homogéneaTras la eyaculación el semen es una muestra semisólida coaguladaA los pocos minutos comienza a licuarse y a homogeneizarse
¿Qué pasa sí encontramos hilos de moco y cuerpos gelatinosos?
Sin importancia clínicaDificultan el análisisIntentar eliminarlos a la hora de manipular la muestra para las diferentes pruebas
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Ocurre, normalmente, dentro de los primeros 15min. a Tª
ambiente Si en 60min. no ha licuado hay que reseñarlo Si hay dudas sobre la licuefacción, se puede observar al
microscopio
Típica imagen de una muestra no licuada
Manchas que recuerdan acúmulos de grasa
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción¿ Qué ocurre si no licua a los 60 min.? Hay que licuarla
Evitar la formación de burbujas para no alterar la muestra
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
Ensayo de la viscosidad:Con pipeta pasteur, dejando caer la muestra gota a gotaIntroduciendo varilla de vidrio en la muestra
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
ViscosidadUna muestra con viscosidad es homogénea. No
confundir con licuefacciónAlta viscosidad interfiere con las determinaciones
de movilidad, concentración, anticuerpos antiespermatozoide y bioquímica
Se elimina igual que en el caso de no licuefacción
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
Un semen normal debería ser homogéneo, gris opalescente
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
Mediante pesada:
Densidad = 1
Masa= Volumen
Pesar el recipiente (con etiqueta)= A
Pesar el recipiente con el semen = B
(B – A) = nº gramos = nº ml
Recipientes de recogida graduados:
Medida directa del volumen
No medir el volumen mediante transferencia a pipetas, jeringas o probetas, etc
La transferencia da lugar a mayores errores que con métodos anteriores
Análisis de semenEvaluación inicial macroscópica
Licuefacción Viscosidad AparienciaVolumenpH
Refleja el balance entre las diferentes secreciones, principalmente entre el pH alcalino de las vesículas seminales y el ácido de la próstata
Usar tiras 6.0-10
Chequear el color antes de 30 sg
Chequear las tiras reactivas con soluciones patrón de pH
Límite inferior de referencia = 7.2
pH < 7.0 + oligo/azoospermia + volumen bajo
Sugiere agenesia u obstrucción de vesículas seminales y/o conductos deferentes
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
Microscopio de contraste de fases (se aconseja atemperado a 37 ºC
Observación a 100x (10x10)
Agregaciones
Aglutinaciones
Células no espermáticas
Observación a 200x-400x (10x20; 10x40)
Estimación de la dilución para calcular la concentración espermática
Movilidad espermática
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
Muestra a 37º C
Homogeneizar bien la muestra:
Ideal utilizar agitador orbital
Aspirar la muestra 10 veces con pipeta de plástico de 1,5 mm diámetro
Una falta de homogeneización provocará:
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
Agregaciones Adherencia de espermatozoides (inmóviles o móviles) a
células no espermáticas o detritos Son no específicas. Ninguna significación clínica
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
AglutinacionesEspermatozoides móviles unidos a otros spz. Móviles
Son específicas. Pueden tener significación clínica
No son evidencia suficiente para deducir presencia de Ac antiespermatozoides, pero sí nos sugieren investigar su presencia
Análisis de semenEvaluación inicial microscópica
Células no espermáticas
Análisis de semenMovilidad
Clasificación
PR: espermatozoides con movimiento progresivo, bien lineal o círculos amplios , independientemente de la velocidad
Análisis de semenMovilidad
Protocolo
Contar al menos 5 campos/porta
Contar al menos 200 spz/portaHacer doble contaje
Análisis de semenMovilidad
Evaluación de resultados
Se utiliza la gráfica del intervalo de confianza del 95% para diferencias entre dos porcentajes
Es el máximo error esperado entre dos contajes en el 95% de los casos cuando el único error es atribuible al contaje
Sí es >, preparar y contar 2 nuevas preparaciones de la muestra
Análisis de semenMovilidad
Evaluación de resultadosEjemplo:
Muestra (x2) en porta 400x
IM : 1º =38 ; 2º =50
Supera la diferencia máxima admisible que está alrededor de 9
Análisis de semenMovilidad
Evaluación de resultados
Análisis de semenConcentración
Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración
Análisis de semenConcentración
Observación previa
Análisis de semenConcentración
Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración
Material necesario:
Pipetas de desplazamiento directo
Pipetas automáticas normales, de desplazamiento por aire
Medio de dilución Weigman
Análisis de semenConcentración
Dilución según observación
Análisis de semenConcentración
Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración
Cámaras de recuento recomendadas:
Hemocitómetro (100 μm de profundidad)
Muestras fijadas
Cámaras de recuento NO recomendadas:
Cámaras de pequeño volumen= pocos spz
Cámaras llenadas por capilaridad= llenado desigual
Muestras no fijadas= spz móviles
Análisis de semenConcentración
Contaje en cámara por duplicado
Análisis de semenConcentración
Contaje en cámara por duplicado
Empezar a contar en la rejilla 5 hasta 200 spzContar filas completasSi en una fila no llegamos a 200 spz seguir por la otra filaSi en mitad de una fila llegamos a 200 spz hay que seguir contando hasta acabar la filaSi con la 5 no completamos los 200 spz seguimos por la 4 y luego por la 6Cuando se hace la dilución ½ hay que contar todas las rejillas
Análisis de semenConcentración
Contaje en cámara por duplicado
Análisis de semenConcentración
Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración
Si la diferencia entre los dos contajes supera el límite permitido habrá que empezar desde el principio, preparar dos nuevas diluciones y realizar de nuevo el doble contaje
Análisis de semenConcentración
Observación previaDilución según observaciónContaje en cámara por duplicadoEvaluar resultadosCálculo final de la concentración
Análisis de semenConcentración
Valores límite y su IC 95%
Análisis de semenConcentración
Cámara Makler Fácil de usar
Se carga con 10μl de semen
Se cuenta toda la cuadrícula el resultado divido entre 10 es la concentración en millón/ml
Se evalúa a la vez concentración y movilidad
¿Por qué la OMS no aconseja su uso?
Volumen bajo (profundidad 10 μm) Mayor dificultad movimiento spz
Menos exacto en concentración
Dificultad para fijar el cubre Mayor riesgo de error
EstandarizaciónControl de calidad
Análisis de semenMorfología
Protocolo Muestras por duplicado Limpiar vigorosamente los portas con papel e identificar
Análisis de semenMorfología
Protocolo
Análisis de semenMorfología
ProtocoloTinciones
Análisis de semenMorfología
Protocolo Tinción Diff-Quik
Observación en 100x (inmersión)Contar al menos 200spzMuestras por duplicado
Análisis de semenMorfología
Clasificación
Análisis de semenMorfología
Clasificación
v
No se cuentan ni los flagelos ni las cabezas sueltas
Análisis de semenMorfología
Evaluación de resultados
Si el error es mayor, no es necesario volvera repetir las preparaciones pero sí el contaje
El límite inferior de referencia en este nuevo manual es del 4%, a diferencia del 15 % del manual anterior
Análisis de semenVitalidad
FundamentoEs una medida indirecta del estado de la membrana
plasmática
Espermatozoide intacto = membrana intacta
Espermatozoide muerto = membrana dañada
Debe realizarse rutinariamente en todas las muestras
Es importante cuando la movilidad progresiva es < 40%
Análisis de semenVitalidad
Fundamento
No existe un alto grado de correlación entre Test colorantes y Test hipoosmóticos ya que miden efectos característicos distintos de la membrana plasmática
Análisis de semenVitalidad
Fundamento colorantes
Análisis de semenVitalidad
Eosina
Análisis de semenVitalidad
Eosina/NigrosinaMejor contraste de la imagen Permite guardar y reevaluar la muestra
Análisis de semenVitalidad
Imágenes de la coloración
Si sólo se tiñe la zona del cuello o la cabeza tiene una ligera coloración rosa se considerará el spz como vivo
Análisis de semenVitalidad
Fundamento hipoosmótico
Análisis de semenVitalidad
Asociación de las dos técnicas
Miden el estado estructural de la membrana plasmática
Miden estado funcional de la membrana plasmática
Análisis de semenVitalidad
Evaluación de resultados
El límite inferior de referencia en este nuevo manual es de 58% a diferencia del 75% del manual anterior
Análisis de semenVitalidad
Utilidad evaluación resultados movilidad
descartar problemas recogida muestra
sdme kartagener
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
El nuevo manual de la OMS: Sigue manteniendo la obligatoriedad de realizar el estudio de AAE en
todos los seminogramas
Es importante su realización en movilidad baja o presencia de aglutinaciones
No siempre que hay aglutinaciones hay AAE
Se considera que existe un factor inmunológico cuando más del 50% de los spz móviles de un eyaculado presentan AAE
En casos positivos se estudiará: Isotipos presentes
Intensidad de la respuesta
Localización Ac
Encontrar Ac no implica necesariamente facto inmunológico. Realizar pruebas funcionales
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
MAR test directo
Emplea semen completo Test rápido, fácil y sensible Menor información que IBT Muestras de menos movilidad que IBT Permite detectar IgG e IgA de origen
secretor
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
MAR test directo
Análisis de semenAnticuerpos antiespermatozoide
IB test directo
Matriz poliacrilamida Emplea semen lavado Detecta IgG como IgA tanto
de origen secretor como no secretor
Más información al no interferir el líquido seminal
Análisis de semenOtras células
Un número alto de estas células puede ser debido a:
Procesos inflamatorios
Alguna patología o alteración testicular
Análisis de semenOtras células
Análisis de semenOtras células
Células espermatogénesis inmaduras
Fin segunda parte