PRACTICA N° 4

CULTIVOS MICROBIANOS

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ALTIPLANOFACULTAD DE CIENCIAS BIOLOGICASARPASI ORDOÑO Dennys Alfredodealfred_111@hotmail.com

RESUMEN:

Los medios de cultivo constituyen la herramienta fundamental en los laboratorios de

Microbiología, por lo que realizar pruebas de control de calidad a los medios preparados

es vital, con el fin de comprobar si estos cumplen con sus especificaciones y si la

metodología empleada en su preparación es satisfactoria. Teniendo así como objetivos:

Establecer los fundamentos teóricos para la preparación de medios de cultivo, Aprender la

clasificación y uso de los medios de cultivo y Preparar medios de cultivo y manejar

adecuadamente la autoclave (olla a presión). Metodología: Esterilización y preparación de

medio de cultivo (técnicas por disolución, puntos y exposición de placa). Los resultados

obtenidos aun no son definidos, ya que no se observo si realmente crecieron los

microorganismos. Pero si se llego a la conclusión de que existen diferentes maneras de

cultivar o sembrar microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de

cultivo, Para ello tenemos que saber los fundamentos teóricos para la preparación de

medios de cultivo.

Palabras Clave.- Cultivo microbiano, Disolución, Exposición, Plaqueado.

ABSTRACT

The culture media are the fundamental tool in microbiology labs , so testing quality control

is vital media prepared in order to check whether they meet your specifications and

whether the methodology used in their preparation is satisfactory. Taking and objectives :

To establish the theoretical foundations for the preparation of culture media , Learning

classification and use of culture media and culture media Prepare and properly handle the

autoclave ( pressure cooker ) . Methodology: Sterilization and preparation of the culture

medium (by dissolution techniques, and plate exposure points). The results are not yet

defined, since it was not observed if actually grew microorganisms. But if I conclude that

there are different ways to cultivate or sow microorganisms, according to the use and need

for culture media, for this we need to know the theoretical basis for the preparation of

culture media.

Keywords.- Microbial culture, Dissolution, Exhibition, plating.

I. INTRODUCCION

En biología, y específicamente en microbiología, un cultivo es un método para la

multiplicación de microorganismos, tales como bacterias, hongos y parásitos, en el que se

prepara un medio óptimo para favorecer el proceso deseado. Un cultivo es empleado

como un método fundamental para el estudio de las bacterias y otros microorganismos

que causan enfermedades en medicina humana y veterinaria ( Restrepo et al, 2003)

A los cultivos microbianos originalmente se les designaba como prebióticos, sin embargo,

en 1989 la Administración de Fármacos y Alimentos (FDA de Estados Unidos de

Norteamérica) estableció que no era adecuado el nombre de probiótico; por lo tanto, se

modificó la nomenclatura a “cultivos microbianos proporcionados directamente” o “cultivos

microbianos” (González 1995).

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe

reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de

oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de

cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar

exento de todo microorganismo contaminante. [1]

Hubert (1987), Jones y Thomas (1987) mencionan que los cultivos de levadura presentan

varias características importantes: 1) No son patógenos, ni tóxicos, 2) No se absorben en

el tracto digestivo, 3) No dejan residuos en los tejidos animales, 4) Se utilizan en

pequeñas cantidades, 5) Proliferan in vivo e in vitro, 6) Promueven el crecimiento de

bacterias celulolíticas, 7) Son estables a temperaturas elevadas y 8) No causan mutación.

La elaboración de medios de cultivo requiere proporcionar los elementos antes citados en

una forma asimilable. Así, por ejemplo, el C debe estar en forma de carbono orgánico

para los heterótrofos y como CO2 para los autótrofos, el N en forma de NH4, de NO3 o de

NO2 o en forma de aminoácidos a los que se pueda tomar su grupo amino. [2]

II. ANTECEDENTES:

Estos antecedentes, no son exactos pero tiene similitud con nuestra practica ya q para

estas investigaciones se utilizaron cultivos microbianos.

Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosférico de vida

libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petróleo, hongos totales

y hongos degradadores de petróleo se encontraron en sistemas rizosféricos de los

pastos alemán y cabezón, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame

reciente, en Gleysol con derrame crónico y muy contaminado y en Gleysol no

contaminado con petróleo.

Las poblaciones de bacterias totales, bacterias fijadoras de N atmosférico de vida

libre, bacterias asimiladoras de N, bacterias degradadoras de petróleo, hongos totales

y hongos degradadores de petróleo se encontraron en sistemas rizosféricos de los

pastos alemán y cabezón, establecidos en Gleysoles contaminados con derrame

reciente, en Gleysol con derrame crónico y muy contaminado y en Gleysol no

contaminado con petróleo. (Rivera M. et al, 2002).

Se obtuvo mejores resultados por el método del papel filtro y aceite esencial no

encapsulado, con un halo de inhibición de 1.7 cm, no se evidenció diferencias

respecto al tipo de cultivo (levadura pura o mohos y levaduras presentes en tomate).

Respecto al empleo del aceite esencial encapsulado se puede decir que no tuvo un

efecto significativo ya que el medio de cultivo se encontraba con una humedad muy

elevada, humedeciendo excesivamente las cápsulas de la β-ciclo dextrina diluyendo la

liberación y acción del aceite esencial. (Chamorro A. et al, 2010).

Se observa también un efecto de la variedad de papa sobre las poblaciones de estos

microorganismos en la rizósfera, lo que confirma la influencia de los exudados de la

planta sobre las poblaciones rizosféricas. Del total de 17 muestras procesadas se

obtuvieron 63 aislamientos de Bacillus spp., 29 (46%) de Huancavelica y 34 (54%) de

Puno; 37 aislamientos de Actinomicetos, 32 (87%) de Huancavelica y 5 (13%) de

Puno y 50 aislamientos de Azotobacter spp., 37 (74%) de Huancavelica y 13 (26%) de

Puno, observándose para estos dos últimos casos una mayor diversidad en suelos de

pH ácido. (Calvo P. et al, 2008).

III. OBJETIVOS:

Establecer los fundamentos teóricos para la preparación de medios de cultivo.

Aprender la clasificación y uso de los medios de cultivo.

Preparar medios de cultivo y manejar adecuadamente la autoclave (olla a presión)

IV. MATERIAL Y METODOS:

4.1.- Materiales:

- mecheros Bunsen

- Aza de siembra

- 5 placas petry

- 1 matraz de 500 mL

- 1 balanza

- 1 espátula

- 1 probeta de 250 mL

- 2 tubos de ensayo

- Cinta Masking tape

- Agar Saboraud

- Plumón indeleble

- Trapo

- Muestras de hongos

- Muestras de tierra.

- Agua destilada

Figura 1

4.2.- Métodos:

4.2.1.- ESTERILIZADO:

Se realiza el mismo proceso, utilizado en la anterior practica (preparación de medios y

esterilización de materiales)

1.- Lavar material con detergente líquido, enjuagar con abundante agua de la llave y al

final con agua destilada.

2.- Secar el material de vidrio de preferencia en horno, si no es posible secar al aire.

3. En las pipetas poner un filtro de algodón en la boquilla y envolver con papel Kraft.

4.- Envolver las cajas de Petri y tubos de ensayo.

5.- Introducir los hisopos en un tubo y tapar con algodón.

6.- Identificar con nombre y marcar el volumen en el papel de las pipetas.

7.- Listo para ser esterilizado.

4.2.2.-PREPARACION DE MEDIO DE CULTIVO:

1.- Leer cuidadosamente el membrete del medio de cultivo (leer las indicaciones para el

preparado)

2.- Calcular la cantidad necesaria para preparar 120 ml de Agar Saboraud

Exactamente seria:

65g AS ---------------------- 1L

X ---------------------- 120 ml

X= 7.8 g AS

Figura 2.

3.- Disolver el medio en 100mL de agua destilada y una vez disuelto completar el volumen

a 120mL. (Dejar reposar 1 a 2 minutos)

4.- Tapar el matraz y calentar hasta disolver totalmente durante 1 a 2 minutos.

5.- Alistar tubos de ensayo y vaciar equitativamente la solución, luego taparlo con algodón

y etiquetarlos.

Figura 3. Procedemos a esterilizar todo.

4.2.3.- EMPEZAMOS A PLAQUEAR.

A) Técnicas de disoluciones:

- Para ello se preparo una muestra, aparte de

tierra (1 g de tierra y 9ml de agua destilada)

Figura 4.

- Luego se empezó a colocar en las placas.

- Para ellos se saco la muestra ya preparada con una pipeta, Seguidamente se

coloco la muestra en el centro de la placa y se cubrió con el agar preparado.

Figura 5 y 6.

B) Técnica por Puntos ( se realiza en una muestra ya plaqueada)

1.- Esterilizar los bordes.

2.- Alistar las placas.

3.- Esterilizar la boca del matraz

4.- Vaciar a una placa

5.- Hacer movimientos suaves

Después de plaquear, esperar a que se gelifique el Agar. Luego cargar con hongos y

empezar a colocar en distintos lugares ( en cada punto, como se muestra en la figura 8)

Figura 7 y 8.

C) Exposición de Placa (Agar Gelificado)

- Después que quedo gelificado , Destapar y

exponer la placa al medio ambiente (durante

30 minutos)

Figura 9

- Luego de todo el procedimiento. Marcar con

lapicero indeleble y Llevar a la incubadora

Figura 10.

V. RESULTADOS Y DISCUSIÓN

Bueno aun no se ha revisado los resultados, Pero de acuerdo a los pasos que hicimos,

esta claro que deberían quedarnos de este modo

Figura 11. Sembrados por disoluciones. Figura 12. Sembrado por Puntos

Tras la incubación, el número de colonias resultantes. se corresponde con el número de

células vivas que inicialmente había en la dilución de la muestra sembrada. ¡Podemos

contar células vivas! (Balsalobre J.)

VI. CONCLUSIONES.-

Se llego a la conclusión de que existen diferentes maneras de cultivar o sembrar

microorganismos, de acuerdo al uso y necesidad de los medios de cultivo, Para

ello tenemos que saber los fundamentos teóricos para la preparación de medios

de cultivo.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

Restrepo A.,Robledo J., Leiderman E., Restrepo M., Botero D. y Bedoya V. (2003)

Enfermedades Infecciosas. 6ta Edición. Ediciones Quebecor Word, Bogota S.A.

Colombia Disponible en: http://books.google.com.pe/books?id=67FIJx2qf

U8C&pg=PA14&redir_ esc=y#v=onepage&q&f=false

Avendaño, B.H., González, M.S.S., García-Bojalil, C., Mendoza, M.G.D., Bárcenas, G.R.

1995 Efecto del nivel de rastrojo de maíz y de un cultivo de levadura

(Saccharomyces cerevisiae; Yea-Sacc1026) en el valor nutritivo de dietas para bo-

rregos en crecimiento. Memorias VII Congreso Nacional AMENA, Veracruz.

Jones, C. And Thomas, C.

1987 Maintenance of strain specificity and bile tolerance when producing. In: T.P.

Lyons Ed. Biotechnology in the Feed Industry. Alltech’s. Biotechnology center.

Nicholasville, KY. USA.

Hubert, J.T.

1987 Fungal additives for lactating cows. Department of animal Sci. University of

Arizona, USA.

Rivera M., Rodríguez R., Ferrera R., Fernández L., Volke V. (2002). Adaptación y

selección de microorganismos autóctonos en medios de cultivos enriquecidos con

petróleo crudo. Disponible en: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=57320407

Chamorro A., Quispe S., Quito V., Moisés R., Beltrán Susy K. (2010). Evaluación de la

Capacidad Antimicrobiana del Aceite Esencial de Orégano (Origanum

vulgare) Micro encapsuladas en β-ciclo dextrina Aplicados en Cultivos Microbianos

Disponible en:

http://papiros.upeu.edu.pe/bitstream/handle/123456789/217/RICTAV1N102.pdf?

sequence=1

Calvo P., Reymundo L. y Zúñiga D. (2008). Estudio de las poblaciones microbianas de la

rizósfera del cultivo de papa (solanum tuberosum) en zonas alto andinas.

Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/ecol/v7n1-2/a17v7n1-2.pdf

Balsalobre J. preparación y análisis de cultivos de microorganismos con las limitaciones

de un laboratorio de secundaria Disponible en:

http://www.murciencia.com/upload/comunicaciones/34_preparacion_analaisis_culti

vos.pdf

[1] Los Cultivos en Microbiología. Pagina web:

http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm Fecha de revisión:

16/11/2013.

Buscador: www.google.com.pe

[2] Importancia de los medios de cultivo. Pagina web:

http://www.buenastareas.com/ensayos/Importancia-De-Los-Medios-De-

Cultivo/442561.html Fecha de revisión: 16/11/2013

Buscador: www.google.com.pe