Observaciones y Resultados

Factores que alteran la solubilidad proteica

Muestra ObservacionesL1 Se aclaro; transparenteL2 Precipitado blanquecino; 2 fases superior transparenteL3 No hubo cambiosL4 Se enturbioH1 Coloración blanquecinaH2 2 fases; superior grumos blancos, inferior transparenteH3 Tono durazno con sólidos en el medioH4 Tonalidad blanca; sólidos

Cuantificación de Proteínas

No. Tubo 1 2 3 4 5 6 7 8C (mg) 0 0.5 1.5 2.5 5 7.5 - 2.9*Absorbancia 0 0.005 0.009 0.031 0.090 0.072 - 0.034

* Obtenida por interpolcación

Cuantificación de Proteínas

Concentración (mg) Absorbancia0 0

0.5 0.0051.5 0.0092.5 0.0315 0.09

7.5 0.71

Cuantificación de Proteínas (Regresión Lineal)

Concentración (mg) Absorbancia0 -0.001

0.5 0.0041.5 0.0162.5 0.0285 0.053

7.5 0.088

Cálculos para determinar la concentración de proteínas

Con 0.1 ml de Albumina

Con 0.3 ml de Albumina

Con 0.5 ml de Albumina

Con 1 ml de Albumina

Con 1.5 ml de Albumina

La concentración del tubo 8 se obtuvo interpolando en la grafica de regresión lineal.

Análisis de Resultados

Factores que alteran la solubilidad proteica

Los factores que pueden afectar la solubilidad de una proteína son la fuerza iónica del medio (concentración de sales), el pH, la temperatura y la constante dieléctrica del solvente (polaridad).

Cuando hay un cambio de cualquiera de estos factores, la proteína responde con una intensidad proporcional al cambio, esto es, que puede afectar la estructura proteica de una manera superficial o lo puede llegar a hacer tan intensamente que provoca una desnaturalización irreversible.

En la práctica se añadió tanto a la muestra de huevo como a la muestra de leche los siguientes reactivos que cambiaron la solubilidad proteica dando lugar a la precipitación de proteínas.

HCl 2%

Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos, pero además de afectar a la envoltura acuosa de las proteínas también afectan a la carga eléctrica de los grupos ácidos y básicos de las

cadenas laterales de los aminoácidos. Esta alteración de la carga superficial de las proteínas elimina las interacciones electrostáticas que estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitación. La solubilidad de una proteína es mínima en su punto isoeléctrico, ya que su carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsión electrostática que pudiera dificultar la formación de agregados.

el sobrenadante y la albumina; por eso es que en ambos casos se observa un pequeño precipitado en ambos tubos.

Acetona

La adición de disolventes orgánicos como el etanol o la acetona, disminuye la permeabilidad de cualquier medio acuoso. Aumentan asi las fuerzas electrostaticas intra e intermoleculares, repulsivas y atractivas. Las interacciones intramoleculares electrostaticas repulsivas promueven el desplegamiento de la molecula proteica. En el estado desplegado la permeabilidad favorece la formacion de puentes de hidrogeno intermoleculares entre los grupos péptidos expuestos y las interacciones electrostaticas intermoleculares entre grupos con carga de signo opuesto. estas interacciones polares intermoleculares conducen a la precipitacion de la proteina en los disolventes orgánicos.

Es por ello que al adicionar acetona a las 2 muestras se presentan precipitados más pesados y más evidentes.

(NH4)2NO4 Sulfato de amonio

La precipitación salina de las proteínas es una técnica en donde se logra la precipitación de una fracción de proteínas mediante el aumento de la fuerza iónica del medio. Grandes cantidades de una sal agregada a una solución de proteínas, disminuye la interacción proteína- H2O porque quita la capa de solvatación, predominando la interacción proteína-proteína y generando la precipitación de las mismas. La concentración salina a la que se produce la precipitación no es igual para todas las proteínas, lo que permite usar ésta propiedad para la separación y purificación de proteínas particulares a partir de mezclas complejas. Comúnmente se usa sulfato de amonio (NH4)2SO4 para tal fin, a causa de su gran solubilidad (760 g de sulfato de amonio/1000 ml. de agua a una temperatura de 20°C) y porque el ión sulfato divalente permite alcanzar altas fuerzas iónicas. La adición gradual de ésta sal permite el fraccionamiento de una mezcla de proteínas, las cuales son precipitadas pero no desnaturalizadas.

Aumento de temperatura

Cuando la temperatura es elevada aumenta la energía cinética de las moléculas con lo que se desorganiza la envoltura acuosa de las proteínas, y se desnaturalizan. Asímismo, un aumento de la temperatura destruye las interacciones débiles y desorganiza la estructura de la proteína, de forma que el interior hidrofóbico interacciona con el medio acuoso y se produce la agregación y precipitación de la proteína desnaturalizada.

Cuantificación de Proteínas

Para poder conocer la concentración de proteínas de la solución problema se realizo una interpolación.

Para esto primero se grafico los resultados obtenidos. Se observo que la gráfica no era recta y se procedió a sacar una regresión lineal para reducir el error.

Una vez realizada la regresión lineal la grafica ya era muy similar a una recta y ahí se realizo la interpolación. La cual nos permitió determinar la cantidad de proteínas en la solución problema, la cual era de 2.9 mg.

En el tubo 7 en el que se analizo el sobrenadante de la leche que son lactoalbuminas y lactoglobulinas, son sensibles al calor. Cuando se calentaron en el baño de agua sufrieron una alteración en su estructura ya que en esta parte se desnaturalizan por calor. Lo cual afecto su lectura de absorbancia en el espectrofotómetro y no se pudo medir su absorbancia con exactitud.

Conclusiones

Mediante esta experimentación se logro ver cómo funcionan las pruebas de identificación de proteínas, principalmente la de Biuret.

También se aprendió como determinar la cantidad de proteínas mediante el uso de un espectrofotómetro y la interpolación, en el caso del tubo problema.

De iigual forma, se pudo comprobar como los factores que alteran la solubilidad proteica, afectan a una mezcla que contenga a estas biomoleculas, haciendo que estas se desnaturalicen y pierdan su estructura nativa, haciendo que la solubilidad baje y por ende aparezcan como precipitados en la solucion.