Correlación Infertilidad - Cáncer Testicular

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Cromosoma Y. Microdeleciones de AZF. Correlación Infertilidad - Cáncer Testicular. Introducción. Últimos 30-50 años:. 50% en la concentración y motilidad espermática. En la incidencia de los TGCT ( tumores de células germinales de testículo). - PowerPoint PPT Presentation

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Diapositiva 1

Correlacin Infertilidad - Cncer TesticularMicrodeleciones de AZF

Cromosoma Y En la incidencia de los TGCT (tumores de clulas germinales de testculo)

50% en la concentracin y motilidad espermticaIntroduccinltimos 30-50 aos: En promedio, un 25% de los casos de infertilidad masculina poseen microdeleciones en una regin especfica del Yq Principales causas de infertilidad masculina:Desrdenes endcrinosDesrdenes genticosInfecciones, agentes qumicos, etc.2Numerosos estudios desarrollados por diversos centros especializados en fertilidad, en ms de 17000 hombres frtiles indican que entre Importancia del brazo largo del cromosoma Y (Yq) en la espermatognesisInfertilidad masculina y deleciones del cromosoma YEstudios citogenticosTiepolo, L. & Zuffardi, O. (1976) Hum. Genet. 34, 119Descubrimiento de familias de genes asociados al Yq necesarios para espermatognesis normal. Ej: DAZ, DBY, etc.)Estudios genticos(varios, 1995-1997)AZF (Azoospermic factor)Descubrimiento de las regiones AZFKent-First, M. et al. (1999)3

Las regiones AZF estn involucradas en la regulacin de la espermatognesisFases de la espermatognesisMutaciones en algunos loci de las regiones AZF conducen a defectos en la espermatognesisAzoospermia: falla en la produccin de clulas germinales maduras, reflejada por ejemplo en ausencia de motilidad espermtica en el eyaculadoOligozoospermia: bajo nmero de espermatozoides, o morfologa anormal4Correlacin entre microdeleciones en cada regin e histologa testicular:Expresin genes AZFa proliferacin de clulas germinales AZFb progresin meitica AZFc activos durante la meiosis tarda o en las espermtidas 1999, Kent-First Existencia de una 4 regin AZFd (AZFc proximal)

Regiones AZF1996, Vogt Existencia de 3 regiones dentro de AZFAZFa (proximal)AZFb (central)AZFc (distal)Se ubican en Yq11 del cromosoma Y humano y coinciden con zonas funcionales asociadas con la espermatognesis. Brazo largo AZFd5Deleciones en AZFaMicrodeleciones AZF e infertilidad masculinaFalta de espermatognesis o espermatognesis parcial asociada con oligozoospermia severa. Deleciones en AZFb y cAzoospermia y oligozoospermia. Deleciones en AZFdRango de conteo de esperma entre normal y azoospermia, con morfologa anormal. 6Incidencia de cncer testicularCncer de testculo, 1% de los tumores en hombres.

Forma ms comn de cncer en varones jvenes (15-40 aos).

La frecuencia de aparicin exhibe una curva de 3 puntos con picos en la niez, adultos jvenes y ancianos.6-8 hombres cada 100.000 por ao.

Las poblaciones de origen africano poseen una menor incidencia que las de otros origenes.

La incidencia ms alta se observa entre los hombres del norte de Europa.Microdeleciones AZF y cncer testicular7Criptorquidia

Hernia inguinal congnita

Bajo peso al nacer

Estrgenos

Malformacin de los rganos sexuales

SK Riesgo a desarrollar tumores primarios de clulas germinales de testculo. Familias c/antecedentes 2%

Hermanos 1/60Mellizos 1/40Gemelos 1/10Hombres c/cncer 1/20 en un testculoFactores de riesgoPredisposicin GenticaTGCT (tumores de clulas germinales de testculo)SK = Sndrome de Klinefelter (XXY)8Microdeleciones AZF y cncer testicularOriginalmente se haba propuesto una asociacin entre deleciones AZF y la incidencia de tumores testiculares.Sin embargo, varios trabajos reportaron ausencia de deleciones AZF en pacientes con cncer testicular (Frydelund-Larsen et al., 2003; Lutke Holzik et al., 2005; Bor et al., 2006, etc.).Se debe tener en cuenta las diferencias geogrficas y poblacionales, ya que la secuencia del cromosoma Y vara entre distintas poblaciones (Y haplogrups)Por ejemplo, se encontr asociacin entre ciertos haplogrupos y deleciones AZFc en una poblacin del norte de Italia (Arredi et al., 2007) pero no en otras poblaciones (Ferlin et al., 2007). En Finlandia, un % significativo de pacientes con cncer testicular posee deleciones AZF (Richard et al., 2004).No hay una correlacin tan directa como en el caso de infertilidad (depende de la poblacin)9 Para qu puede servir? Conocer el mecanismo que produce infertilidad es importante para evaluar el tratamiento a seguir por el paciente. Ej: tratamientos hormonales vs. otros tratamientos como ICSI. Profundizacin en la investigacin del mecanismo de regulacin gentica de la espermatognesis (genes especficos, factores epidemiolgicos, etc.)Diagnstico de las deleciones: multiplex PCR Principalmente para el estudio de infertilidad masculina. Para el diagnstico preventivo de familiares del paciente.10

Regiones AZF: amplificacin por PCRSTS = Sequence tagged sites: secuencias cortas de ADN (200 a 500 pb) de localizacin nica en el genoma y cuya secuencia y posicin son conocidas.Microdeleciones: loci de AZF 4 subintervalos a-dEstrategia experimental:ADNPCR MultiplexGeles agarosa low meltingObtencin de todas las bandas individuo no delecionadoAusencia de alguna bandaPCR Duplex C+ Locus amplificadoLocus ausenteAusencia de la bandaObtencin de ambas bandas individuo no delecionadoReamplificacin con PCR como moldeC+ Locus amplificadoLocus ausenteAusencia de la banda Confirmacin final de la delecinPresencia de la banda cambio de patrn delecionado a no delecionado MOSAICO

Sistema de deteccin12Ejemplo de multiplex PCR para detectar deleciones en el cromosoma Y

Multiplex 1 (amplifica 5 fragmentos)M = Marker (PM)1 = hombre sano2 = mujerPacientesLoginova et al, 2003

IZFY/XSRYSY117SY126SY109SY118SY149SY248 S SY119ZFY/XSRY

IISY86SY155SY141SY160SY142SY231 S

IIIZFY/XSRYSY158SY105SY102SY132SY101SY100 S En general se usan varias multiplex PCRs para cubrir toda la regin AZFQu hay que tener en cuenta al disear los primers para una multiplex PCR?

Ejemplo de un screening exhaustivo

Loginova et al, 2003Resumen Importancia de la regulacin gentica en el proceso de espermatognesis. Correlacin entre deleciones AZF e infertilidad masculina. Diagnstico de deleciones AZF mediante multiplex PCR Procedimiento y visualizacin de los resultados Controles experimentales Requisitos para la seleccin de primersMultiplexLocusSTSTamao (pb)Condiciones PCR% Geles - TincinCiclado

[ primers ]

I1ZFY4951.2/100 (lBuffer 1X

Taq : 4/100 (l

DNA : 48 ngAgarosa Nusieve 2.8%

Tincin luego de la corrida:

Br. de Etidio

1.5 / 100 TBE 1X

3 Hs

95 C 5

95 C 1

60 C 1 x 35

68 C 1

68 C 5

2SRY4721.2/100 (l

3DYS 217SY 1263234/100 (l

4DYS 209SY 1172622/100 (l

5DYF 43 S1SY 1092332/100 (l

6DYS 210SY 1182182/100 (l

7DYS 211SY 1191912/100 (l

8DYS 1SY 1491332/100 (l

9DAZSY 248944/100 (l

II1ZFY4951.2/100 (lBuffer 1X

Taq : 4/100 (l

DNA : 48 ngAgarosa Nusieve 2.8%

Tincin luego de la corrida:

Br. de Etidio

1.5 / 100 TBE 1X

3 Hs

2SRY4721.2/100 (l

3DYF 53 S1SY 1553494/100 (l

4DYS 148SY 863202/100 (l

5DYS 229SY 1412902/100 (l

6DYZ 1SY 1602362/100 (l

7DYS 230SY 1421962/100 (l

8DAZSY 2311492/100 (l

MultiplexLocusSTSTamao (pb)Condiciones PCR% Geles - TincinCiclado