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9 de octubre de 2009.Facultad de Ciencias Exactas y Naturales

Universidad de Belgrano- ProfitocoopFarm . Erica Wilson

Control de calidad de fitoingredientes

Medicamentos/fitoterpicos Cosmtica

Suplementos dietarios Alimentos

Materia prima

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CONTROL DE CALIDADMedicamentos:

Generalmente son extractos con un contenido relativamente alto enactivos o con activos con actividad farmacolgica con una ventanateraputica estrecha.

Son tratados prcticamente como un principio activo sinttico.

Mtodo: en Farmacopeas.

Ensayos de identificacin: Cromatogrficos (por TLC o por HPLC/GC

Determinacin cuantitativa: de los principios activos por mtodosespectrofotomtricos /HPLC/GC

CONTROL DE CALIDAD Fitoterpicos:

Categora de medicamentos que contiene exclusivamente productos botnicos o sus preparados.

Mtodos de control: Farmacopeas Ensayos de identificacin: TLC/HPLC Ensayos de pureza: Valoracin: espectrofotometra UV-Vis HPLC/GC

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CONTROL DE CALIDAD Suplementos dietarios: Argentina: pueden incluir preparados botnicos

junto con minerales y/vitaminas.

No se exigen prcticamente controles.

EEUU/UE: estos productos se someten a los mismos controles que un fitoterpico por ejemplo, en Mercosur

CONTROL DE CALIDADCosmticosSe realizan ensayos: Microbiolgicos. Verificacin de la ausencia de contaminantes

txicos. NO se exige ningn ensayo ni de identidad ni

valoracin en las materias primas. Slo en producto terminado: se debe identificar el

ingrediente que figura como claim (declaracin) en la etiqueta del producto.

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MATERIAS PRIMAS DE ORIGEN VEGETAL

Drogas enteras, en trozos o polvo

Extractos: tinturas, extractos lquidos, extractos secos

Aceites esenciales

Aceites fijos

Resinas, ltex

MATERIAS PRIMAS DE ORIGEN VEGETAL

Productos con composicin relativamente fija Productos con composicin muy variable

Drogas enteras

Aceites fijosAceites esenciales

Resinas

Ltex

Extractos:

Lquidos:- hidroalcholicos

- oleolados

-glicoclicos

Secos

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QU VALORAR?

PRODUCTO

PRINCIPIOS ACTIVOS

IDENTIFICADOS

GRUPO DE COMPUESTOS

MARCADORESUNO O MS

COMPUESTOS (generalmente identificados)

CMO VALORAR?

EL ACTIVO TIENE

ACTIVOS IDENTIFICADOS(generalmente 1-3

compuestos)HPLC/

GC

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BOLDO, hojas Se valora la boldina por HPLC

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cido cafeico cido qunico

cido clorognico cido chicrico Cinarina

Echinacsido

ECHINACEA: principios activos y/o marcadores

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Un enfoque posible: De estos compuestos, el c. clorognico es el ms accesible. Se valoran

los dems compuestos en funcin a este:

Tiempo de retencin relativo:

cido caftrico 0.93 - 0.96cidoclorognico 1.0

Echinacsido 1.5 - 1.6

cido chicrico 2.2 - 2.4

PANAX GINSENG, raz: principios activos Panaxadiol Panaxatriol

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GINSENGSe valoran algunos de los ginsensidos ms

importantes.

Cmo valorar?

El producto tiene

Un grupo de compuestos

UV/VISHPLC/GC

(hidrlisis previa)

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Gingko biloba- hojas Biflavonoides

Glicsidos flavonoides

Gingko biloba- hojas

Gingklidos

Biloblidos

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Ginkgo Se hidroliza la muestra con HCl 6M y se valoran los

aglucones principales contra quercetina (un patrn fcil de conseguir).

Quercetina: F = 756.7/302.2 = 2.504Kaempferol: F = 740.7/286.2 = 2.588Isoramnetina: F = 770.6/316.2 = 2.437

Extracto de GINKGODeterminacin de lactonas terpnicas

(ginkglidos/ biloblido Extraccin con buffer fosfato 5.8 (calentamiento 30, 90C) x 3 Columna de slica y elucin con acetato de etilo. Evaporacin de residuo. Redisolucin HPLC con deteccin ELSD Cuantificacin con curva de calibracin de Standards USP de

Lactonas Terpnicas de Ginkgo. Registro de las reas de picos pertinentes. Graficacin de logaritmo de concentracin y de respuesta del

detector, determinacin de la lnea de regresin con un anlisis de mnimos cuadrados (R2 < 0.995).

Clculo por separado de porcentajes de biloblido, ginkglido A, ginkglido B, gnkglido C.

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GINGKOEP

Identificacin: TLC/perfil Cuantificacin:

Hidrlisis de glicsidos; Extraccin Cuantificacin de 3

aglucones de los flavonoles ms abundantes: quercetina, kaempferol, isoramnetina

USP 30

Identificacin: TLC/perfil Impurezas: Lmite de cidos gingklicos Cuantificacin: Flavonoides Gingkoblidos

22-27 % de flavonoides5.4-12% de lactonas terpnicas

calculadas como la suma de biloblido, ginkglido A, ginkglido B y ginkglido C

Extracto de GINKGOLmite cidos ginkglicos

Mtodo HPLC con columna C8, termostatizada a 35C, elucin por gradiente.

Solucin testigo: Standard de cidos ginkglicos USP.

Cuantificacin: Suma de contenidos de cidos ginkglicos

LMITE: 5 ppm.

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HIPRICO (Hypericum perforatum)

Hipericina

Hiperforina y ad-hiperforina

HIPRICOEspecificacin: hipericinas e hiperforina

EP

Identificacin: TLC: Perfil e identificacin de rutina e hipersido.

Determinacin cuantitativa:Extraccin y purificacin L/L y valoracin espectrofotomtrica.

USP

Identificacin: TLC (perfil y det. de hipersido, rutina)

Determinacin cuantitativa:(contra ext. USP de hiprico para

identificacin de picos y standard de oxibenzona como standard interno)

Contenido de hipericinas y pseudohipericina.

Contenido de hiperforina

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AJO POSIBLES PRINCIPIOS ACTIVOSNo se ha comprobado cules de estos compuestos tienen actividad

El contenido de cada uno de estos compuestos o grupo de compuestos vara segn el preparado.

Cisten-sulfxidos

cidos sulfnicos (R-SOH)

Tiosulfinatos

Sulfuros de alilo voltiles

Alliinasa

Alliina

Allicina

Di y trisulfuro de dialilo

Variacin segn forma de preparacinBulbos frescos

Alliina

Allicina

Polvo deshidratado Alliina

Allicina

Aceites voltiles

Sulfuro de dialilo

Disulfuro de dialilo

Trisulfurode dialilo.

Tetrasulfurode dialilo

Oleolado

2-vinil-[4H]-1,3-ditiin,

3-vinil-[4H]-1,3-ditiin

E-ajoeno, y Z-ajoeno

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AJO- segn USP 30

Identificacin: 4 ensayos

A. Deteccin de L-metionina y alina y perfil (TLC)

B. Rn. de caracterizacin de compuestos azufrados (nitroferricianuro de sodio)

C. Coincidencia de Tr de alina en cromatograma HPLC

D. Contenido de clorogenina y Agigenina (TLC ) y perfil.

- Homogenizacin de dientes de ajo.

- Purificacin del extracto por filtracin molecular.

- Hidrlisis con H2SO4 de las saponinas

- Purificacin por filtracin molecular.

- Evaporacin del eluato/redisol.

Contenido de allina (HPLC)

Preparacin de la muestra:- Agregado de carboximetoxil-amina HCl

(para inhibicin de alliinasa)-Derivatizacin con o-ftaldehdo-FM: NaH2PO40.045M: ACN: Dioxano:

THF (69.9:25.0:2.9:2.2) Contenido de glutamil-(S)-alil-L-cistena (HPLC)

Preparacin de la muestra:-Inyeccin de extracto obtenido por

Homogeneizacin de ajo con 3 porciones de agua:metanol. Centrifugacin.

-Deteccin a 205 nm.

Especificacin: 0.5% de allina y no menos de 0.2% de glutamil-(S)-alil-L-cistena.

Arndanos (Vaccinum myrtillus) Principios activos son antocianinas

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Tres mtodos- tres resultados muy diferentes

Valoracionespectrofotomtrica

Se detectan antocianinas, antocianidinas

No discrimina entre los activos

(glicsidos) y posibles productos

de degradacin.

Tampoco detecta adulterantes.

HPLCPrevia hidrlisis

Se hidrolizan todos los glicsidos y

analizan las antocianidinas

resultantes

No permite la deteccin de productos de

degradacin ya presentes ante s de la hidrlisis, ni de procianidinas que

tambin daran antoncianidinas en estas condicones

HPLCPerfil entero

Se analiza la muestra previa extraccin en condiciones

conservadoras

Permite obtener una idea ms

exacta del contenido en

activos.

HPLC sin hidrlisis previa

Fuente: Indena (Mirtoselect)

Se valora cada antocianina contra una sustancia de referencia: cianidina-3-O-glicsido

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Control de calidad en el futuro.

Determinacin de la composicin ptima a travs de la aplicacin del anlisis estadstico de datos obtenidos con mltiples muestras (por ejemplo, PCA)

-1000

0

1000

2000

-8000 -6000 -4000 - 2000 0 2000 4000 6000 8000 10000 12000

PC2

(3.1%

)

PC1 (91.4%)

1 2

2

2

2 3 3

3

3

3

3

3

H

HHH

HHHHHHHH

HHHHHH 4

4

4

4

4445

5

5

55

5

5

6

6

6

6

67

7

77

7788

89

9

9

99 9

1010

10

10

1010

10

DISOLUCIN DE COMPRIMIDOS Se debe evaluar la liberacin de un extracto.

PAUTA: Valorar el activo menos soluble, ej: comprimidos de

Passiflora, tilo y valeriana. En el comprimido se valoran marcadores

Passiflora: vitexina Tilo: hipersido/rutina Valeriana: c. valernico.

Se valora por lo tanto el cido valernico con la presuncin de que si libera este, los dems componentes del extracto se liberaron.

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AJO-Tabletas de Liberacin RetardadaEspecificacin:

No menos de 90 % ni ms de 140% de la cantidad declarada de alina y no menos de 90% ni ms de 140% de la cantidad declarada de alicinapotencial.

Identificacin: Prueba A y D para ajo (TLC)

Liberacin de alicina: Ensayo de disolucin, midiendo allicina en etapa amortiguada (luego de la cida) por HPLC

Solucin standard: alina tratada con alliinasa.

Contenido de alina (HPLC con derivatizacin con o-ftaldehdo)

Contenido de alicina potencial (HPLC)

Actividad de aliinasa (HPLC).