Control Biologico Nematodo Agallador Meloidogyne Spp-Ecu

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2. RESUMEN

"Control biológico del nematodo agallador Meloidogyne spp. con la bacteria Pasteuria penetrans en campos de producción"

Este proyecto de investigación fue aprobado con el número 2115, código IGCV040 por el comité de adjudicación de Proyectos de investigación, Alianzas y Becas (CAPIAB) del PROMSA, financiado por el Banco Mundial y ejecutado en el Departamento Nacional de Protección Vegetal, sección Nematología, Estación Experimental Boliche del Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias desde Julio del año 2000 hasta Julio del 2003. Colaboraron Las Universidades Técnica de Babahoyo (UTB), Técnica del Norte (UTN) y Nacional de Loja (UNL).

El nematodo agallador de raíces Meloidogyne spp. es una plaga de gran importancia económica en todo el mundo, especialmente en países tropicales y subtropicales. Se reportan pérdidas de la producción mundial por causa de este nematodos en aproximadamente 115 mil millones de dólares anual. En Ecuador se encuentra presente en todas las regiones, aunque las incidencias poblacionales más altas están en las zonas calientes, donde tienen ciclos biológicos de 2130 días e índices de reproducción sobre los 1000 huevos. Los cultivos con mayores pérdidas económicas son las hortalizas, leguminosas y frutales, por lo general los productores no detectan el problema antes de la siembra y cuando lo identifican en su afán de salvar parte de la producción se ven obligados a utilizar nematicidas, productos peligrosos y de alto costo. Para campos infestados no hay medidas de control adecuadas y sostenibles, excepto la utilización de variedades resistentes que hay pocas disponibles en el país. El uso de alternativas biológicas es una gran opción para incorporarla en el manejo integrado de nematodos. En los campos cultivados del país se ha encontrado con mucha frecuencia a la bacteria Pasteuria penetrans parásito obligado de Meloidogyne spp. En años anteriores el INIAP realizó trabajos básicos en invernadero y micro parcelas y se encontraron resultados importantes. Muchos productores en todos los niveles y Técnicos desconocen la biología del nematodo agallador y el rango de hospederos, conocen poco sobre estrategias para asegurar plantas sanas en semilleros, viveros y manejo en el campo, desconocen la existencia y manejo de enemigos naturales de los nematodos.

Este proyecto tuvo como objetivos: Determinar nuevas poblaciones de P. penetrans con amplia cobertura para el control de Meloidogyne spp. Evaluar la eficacia de P. penetrans en nuevas zonas agrícolas (donde no existe en forma natural). Desarrollar tecnología para el control de Meloidogyne con P. penetrans en campos de producción. Capacitar a Técnicos Investigadores, Gremios, Productores y Estudiantes en el control biológico de nematodos.

Entre 10 poblaciones nativas de P. penetrans colectadas en diferentes zonas agrícolas del país, se seleccionaron cinco muy patogénicas para infectar a Meloidogyne spp., reconocidas como Nueva Colonia, La Concordia, Quinindé, Boliche y Guarapal. También se determinó que en poblaciones de Meloidogyne de la provincia de El Guayas e Imbabura, el 17 y 10 % de especímenes probados respectivamente escaparon al parasitismo de la bacteria. La identificación de estos nematodos sirvió para determinar que M. javanica es la especie que presentó esta característica. En los ensayos de eficacia de la introducción de cinco poblaciones de Pasteuria para el control de Meloidogyne en tomate y fréjol en la Península de Santa Elena,

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Babahoyo y Valles del Catamayo y Chota, se encontró que el porcentaje de nematodos J2 del suelo infectados con las esporas de P. penetrans aumentó, así como la concentración de esporas en las raíces, progresivamente conforme aumentaron los ciclos de cultivo fréjolfréjol tomatefréjolfréjoltomate, mientras que la incidencia poblacional del nematodo en las raíces y en el suelo se redujo poco a poco con la misma tendencia. Al final del ciclo 6 (tomate) la reducción de la población de Meloidogyne en 100 cm 3 de suelo en la media de los tratamientos Pasteuria comparados con el testigo fue de 47 % en la Península de Santa Elena, 90 % en Babahoyo, 74 % en Catamayo y 83 % en el Valle del Chota. En este mismo ciclo de cultivo, los porcentajes de nematodos del suelo infectados con las cinco poblaciones de Pasteuria estuvieron en los rangos de 34 49 en la Península de Santa Elena, 5570 en Babahoyo, 3537 en el Valle del Catamayo y del 40 54 % J2 en el Valle del Chota.

La concentración de esporas en las raíces al final del ciclo 6 fueron muy significantes, siendo los rangos de 11613897 x 10 4 esporas /100 mg de raíces pulverizadas en la Península de Santa Elena, 21473119 x 10 4 esporas /100 mg raíces en Babahoyo, 6782770 x 10 4 en el Valle del Catamayo y 10162839 x 10 4 en el Valle del Chota.

La eficacia de las metodologías de aplicación de P. penetrans en campos de amplia superficie en cultivos de trasplante como el tomate es igual estadísticamente, aplicando las esporas en semilleros como en el sitio definitivo. En cultivos de alta densidad de siembra como la soya y fréjol la eficacia de la bacteria en el control del nematodo es similar si se aplican las esporas con la sembradora al momento de la siembra o si se aplican en forma manual en presiembra e incorporadas.

Los resultados se difundieron mediante un boletín divulgativo, dos boletines técnicos, dos artículos científicos, un artículo en una revista agropecuaria, dos presentaciones orales y un póster en el Congreso Internacional de Nematología. Además se produjo tres tesis de grado de Ingeniero Agrónomo, dos días de campo y cinco seminarios a los que asistieron 105 Productores, 126 Técnicos y 533 Estudiantes. Las Universidades colaboradoras participaron en el manejo y evaluación de los cultivos y en la organización de seminarios. Por la obtención de resultados importantes para el productor hay mucho expectativa para realizar investigación en cultivos como tomate de árbol y naranjilla, en integrar esta estrategia con otras medidas biológicas para controlar a la vez otros nematodos de importancia económica y buscar la vía más adecuada para que los agricultores puedan obtener el producto. El uso de P. penetrans ha reducido en buen porcentaje las poblaciones de Meloidogyne en cinco zonas agro ecológicas del país y en diferentes cultivos. El monocultivo y la rotación favorecen la multiplicación de la bacteria; los agroquímicos utilizados para el manejo de insectos plaga y enfermedades no han afectado la multiplicación del agente benéfico. Con esta tecnología una sola aplicación de las esporas es suficiente para introducirlas en los campos, lo cual significa que es económica y además no afecta la salud de las personas que la manejan. Finalmente se concluye que Ecuador dispone ahora de cinco poblaciones de P. penetrans con alta capacidad patogénica para infectar a Meloidogyne spp. Se puede introducir la bacteria con eficacia en cualquier lugar de la Costa y en los valles de la Sierra. Se recomienda incrementar las dosis de esporas de Pasteuria para reducir el número de ciclos de cultivo, e integrar a Pasteuria con otros agentes benéficos que controlen a otros géneros de nematodos.

Con el desarrollo del proyecto se ha incrementado la interacción científica de Técnicos y productores, se ha fortalecido la relación entre las Instituciones colaboradoras y el INIAP.

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ABSTRACT

“Biological control of the rootknot nematode Meloidogyne spp. with the bacterium Pasteuria penetrans in the field”.

This Project was identified with the number 2115, PROMSA reference IGCV040, financed by the World bank and executed by the Nematology Section of the Crop Protection Department in Boliche Experimental Station at the Institute of Agronomical Research (INIAP). It was carried out from July 2000 to July 2003. Those Collaborators were Technical University of Babahoyo (UTB) Northern Technical University (UTN) and National University of Loja (UNL).

The root knot nematodes (Meloidogyne spp.) are important economic pest worldwide more especially in the tropical and subtropical regions. The estimated annual losses amount to $ 115 thousand million. In Ecuador the nematodes are found in all zones but highest population densities occur in the warmest areas where the life cycle is completed in 2130 days and nematodes may produce up to 1000 eggs. Horticultural crops suffer the most serious losses and also beans and fruits crops. Farmers often fail to detect these nematodes before plating and when damage symptoms become apparent they will try to correct the problem with nematicides which are expensive and potentially damaging to users and the environment. In infested fields there are no effective, sustainable management strategies apart from the use of resistant varieties which are not widely available in the country. The use of biological control agents is an attractive option to include in an integrated system and earlier work to INIAP has identified the commonly occurring bacterium, Pasteuria penetrans as a potential means of controlling the pest. Farmers, irrespective of technical ability are unaware of the biology of the rootknot nematode or their natural enemies. Similarly they are unfamiliar with the need to produce plants in nurseries which are free of the pests and do not appreciate the wide host ranges of the nematodes.

The objectives of this project were:

• To locate new populations of P. penetrans pathogenic to rootknot nematodes. • Evaluate P. penetrans in areas where it had not been found to occur naturally. • Develop a system for using P. penetrans in commercial fields. • Provide training for institutions and farmers in the principles of biological control of

nematodes.

From 10 populations of P. penetrans collected from different agricultural zones around the country, five of the more pathogenic were selected these were from Nueva Colonia, La Concordia, Quinindé, Boliche and Guarapal.

In the rootknot nematode populations from the Guayas and Imbabura provinces were found that 17 and 10 % of the nematodes tested escaped infection respectively. Subsequent identification of these nematodes showed them to be M. javanica a more difficult species to manage.

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In the efficacy trials on beans and tomato that were carried out in the Santa Elena peninsula, Babahoyo and the valleys of Catamayo and Chota, percent of P. penetrans sporeencumbered juvenile nematodes in soil and numbers of P. penetrans spores in roots progressively increased during successive cycles of beanbeantomatobeanbeantomato as the population levels of nematodes in 100 cm 3 soil in P. penetrans treated soil was 47, 90 , 74 and 83 for the Santa Elena, Babahoyo, Catamayo and Chota experiments respectively. In this final cycle the percentages of juvenile nematodes encumbered with spores of the five P. penetrans populations was 3449, 5570, 3537 and 4045 for Santa Elena, Babahoyo, Catamayo and Chota respectively.

The concentrations of P. penetrans spores in the root systems after the final crop cycle were 11613897 x 10 4 , 21473119 x 10 4 , 7682770 x 10 4 and 10162839 x 10 4 per 100 mg of dry powdered root for Santa Elena, Babahoyo, Catamayo and Chota respectively.

There was no statistical difference in the efficacy of large scale application of P. penetrans spores with tomato transplants when applied to the nursery or directly in the planting site. In high density planted crops like soybean and beans similar results were obtained when spores were applied with the seed or incorporated in soil prior to sowing.

Information about the results have been distributed in farmers bulletins, technical advisory bulletins, in an article in an agricultural journal and in two oral presentations and a poster at the International Nematology Congress held in Guayaquil in 2003. Also, results have been presented in three theses of students completing their degrees as Agronomist, two field days and five seminars which were attended by 105 farmers, 126 technical staff and scientists and 533 students. The collaborating universities participated in the management and evaluations and in the organisation of seminars.

Much has been expected from the results of this work particularly for the farmers specialising in production of tree tomatoes and naranjilla who wish to integrate this information with other biologicallybased crop management strategies to control other nematodes within an appropriate system. By using P. penetrans the numbers of rootknot nematodes have been reduced on different crops in five production zones of the country. Monoculture and rotation have been shown to favour the multiplication of the bacterium and the use of agrochemicals to control other pests and diseases has not affected its performance.

An additional benefit of this collaborative project has been the increased interaction of technical staff from the universities and INIAP with the farmers.

The technology developed is one in which a single treatment with spores is necessary; it is shown that this is economically useful and environmentally benign.

Finally, it is concluded that within Ecuador there are at least 5 populations of P. penetrans with good levels of pathogenicity which could be used for managing rootknot nematodes and that these could be uses in the coastal regions and in the warmer mountain valleys. It is recommended that increasing spore dosages of P. penetrans and the integration with other beneficial organisms will be possible in the future management of different nematode pests.

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3. IDENTIFICACIÓN DEL PROYECTO

Código: IG CV 040

Número de registro: 2115

Título del Proyecto: Control biológico del nematodo agallador Meloidogyne spp. con la bacteria Pasteuria penetrans en campos de producción

Rubro: Estudios especiales

Área: Manejo Integrado de Plagas

Fecha de inicio del Proyecto: Agosto del 2000

Fecha de terminación del Proyecto: Julio del 2003

Institución Ejecutora: Instituto Nacional Autónomo de Investigaciones Agropecuarias (INIAP)

Instituciones Colaboradoras: Universidad Técnica de Babahoyo (UTB) Universidad Técnica del Norte (UTN) Universidad Nacional de Loja (UNL)

Investigador Principal: Ing. Agr. PhD. Carmen Triviño Gílces

Otros Investigadores: Ings: Joffre León Carlos Casco Tulio Solano Daniel Navia S Luis Velasco Egdos: Geovanny Guijarro Ever Castro Julio Bustamante Marco Romero V Yolanda Songor C.

Grupo de Referencia: Dr. Leonardo Corral Ing. Manuel Donoso Ing. Elías Alcívar Barreto Ing. Luis Delgado Ing. José Carrera

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4. JUSTIFICACIÓN

El nematodo agallador de raíces Meloidogyne spp., es una plaga de importancia económica en el mundo, especialmente en países tropicales y subtropicales. Se estimaron pérdidas promedio anual de la producción mundial causada por el nematodo en alrededor de 115 mil millones de dólares anual (Luc et al., 1990). En Estados Unidos, los nematodos causaron pérdidas de 381 millones de dólares de los cuales, Meloidogyne fue responsable de pérdidas de $ 200.5 millones; Rotylenchulus reniformis de 154.5 millones y otras especies 25.5 millones (Blasingame, 2002). También se reporta que en tomate se han determinado pérdidas de producción del 24 50 % en Carolina del Norte y en Canadá del 40% (Eisemback y Triantaphyllou, 1991). En Colombia, Meloidogyne spp. reduce el crecimiento de las plantas de naranjilla, tomate de árbol y granadilla en un 78% y la producción hasta en 50% (Munera, 2003). En Venezuela, plantaciones comerciales de guayaba, han reducido la producción por la incidencia severa de este nematodo agallador (Cassasa, 2002).

Meloidogyne spp. está distribuido en Ecuador en todos los estratos geográficos, siendo mayor la densidad poblacional en las áreas calientes incluyendo los valles de la Sierra. Los cultivos más atacados son las hortalizas (Triviño et al., 1998) como tomate riñón, pimiento, pepino, melón, sandía, acelga, lechuga, malanga; también son hospedantes el fréjol, haba pallar, caupí, tabaco, arveja, papaya, tomate de árbol, naranjilla, flores comerciales de corte y en general plantas ornamentales de jardines. En la zona de Taura y en la Presa El Azúcar (provincia del Guayas) se han abandonado campos sembrados con melón por la alta incidencia de Meloidogyne spp. En el cultivo de arroz se observaron pérdidas de rendimiento causadas por M. graminicola en las áreas de Puerto Inca, Taura y Samborondón (Triviño y Figueroa, 1993) y en abril del 2003 se determinó que esta especie ha infestado aproximadamente 150 has de arroz en Vinces, provincia de los Ríos, con pérdidas de producción de alrededor del 50 % y en Montalvo y Mata de cacao en alrededor del 5%.

Existen más de 80 especies de Meloidogyne distribuidas en el mundo y el mayor daño económico está atribuido a las cuatro más comunes, M. incognita, M. javanica, M. arenaria y M. hapla (Eisemback, 1997). Estas mismas especies están presentes en Ecuador, siendo M. incognita la más abundante y diseminada (80% de la incidencia poblacional), seguida de M. javanica.

La importancia de este nematodo en la agricultura se debe a que tiene el mayor número de plantas hospedantes, amplia distribución geográfica, reproducción partenogenética, el ataque en las raíces induce a que las células se alarguen mediante la división del núcleo y aumento de la pared celular ("célula gigante"), además tienen ciclos biológicos cortos.

En las condiciones climáticas de la provincia del Guayas, el ciclo biológico de M. incognita en tomate es de alrededor de 24 días, en melón y fréjol mungo es de 21 días, en maíz híbrido Brasilia 8501 de 32 días (Arregui y Triviño, 2003). Son endoparásitos sedentarios, las hembras que están en el interior de las raíces ovipositan alrededor de 1200 huevos en una masa gelatinosa que esta fuera de la corteza en contacto con el suelo, dando lugar a 2 o 3 generaciones en cultivos susceptibles de ciclo corto. Ataques de Meloidogyne y de otros géneros de nematodos que también están en el suelo como Pratylenchus, Rotylenchulus y Nacobbus, predisponen a las plantas a ser atacados por hongos (Fusarium, Verticillium) y bacterias. En consecuencia, Meloidogyne es una plaga extremadamente difícil de controlar

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con rotación de cultivos, debido a que no hay muchas opciones de sembrar cultivos resistentes a los nematodos y las que existen no son comerciales como ajonjolí, Tagetes spp.; el monocultivo con plantas susceptibles y la mezcla de especies de nematodos fitoparásitos en un mismo campo, han incrementado las poblaciones.

El control químico es el método más efectivo para el control de nematodos, sin embargo a medida que pasa el tiempo el uso de nematicidas es más restringido y dirigido a cultivos de alto valor comercial debido a que son costosos para el Agricultor y por los efectos tóxicos al medio ambiente y peligro para los consumidores. El comercio internacional exige productos limpios, lo cual con el uso de invernaderos o de cultivos protegidos para la explotación de hortalizas no es suficiente, puesto que Meloidogyne spp. también esta presente en el suelo o en los substratos utilizados en este sistema de explotación si no son debidamente tratados.

Meloidogyne spp. tiene enemigos naturales en el suelo, siendo uno de ellos la bacteria Pasteuria penetrans cuya multiplicación se realiza mediante esporas, siendo este nematodo su único hospedero. En Ecuador, con mayor frecuencia se la encuentra en la región litoral, en raíces de tomate. El segundo estadío juvenil que inicialmente está en el suelo (J2) penetra en las raíces y durante la migración puede hacer contacto con las esporas de P. penetrans mediante la adhesión sobre la cutícula, así las esporas son llevadas al interior de las raíces donde germinan completando el ciclo de vida cuando la hembra del nematodo se ha formado, estas mueren antes de formar huevos por lo que paulatinamente se va reduciendo la densidad poblacional del nematodo. Cada hembra de Meloidogyne infectada contiene alrededor de 2 millones de esporas, las que son liberadas al suelo al destruirse las raíces (Stirling, 1988).

P. penetrans ha sido reconocida en muchos países como un efectivo agente biológico controlador de Meloidogyne; sin embargo se ha observado que presenta cierto grado de especificidad para atacar a unas especies del nematodo más que a otras.

La inhabilidad de producir masivamente esporas de P. penetrans in vitro, ha sido la barrera para que no se haya elaborado un producto comercial, sin embargo actualmente ha sido encontrada la bacteria Enterobacter cloacae en raíces de tomate y su composición tiene estrecha relación con la cutícula de M. arenaria. Cultivo de los filtrados de E. cloacae y esporas de P. penetrans en simple nutriente ha producido endosporas viables de P. penetrans, convirtiéndose E. cloacae. en el medio ideal para el crecimiento vegetativo y esporulación de Pasteuria (Hewlett, et al., 2002). En Ecuador la siembra de hortalizas y leguminosas durante el año da la oportunidad para que la bacteria se multiplique por si sola, sin necesidad de realizar frecuentes aplicaciones de esta en el campo.

Se ha determinado que aplicaciones individuales de P. penetrans y la combinación con otros antagonistas, reducen en poco tiempo el agallamiento y el número de hembras; mientras que el número de huevos y la densidad poblacional de J2 en raíces y suelo disminuye después de varios ciclos de cultivos (Dube, 2001; Meyer y Daniel, 2002).

En consecuencia, con el uso de la bacteria P. penetrans se pueden beneficiar los productores de diferentes estratos sociales, sean estos Horticultores, Fruticultores, Arroceros, Floricultores, especialmente de zonas calientes, incluyendo los valles de la Sierra, donde P. penetrans se multiplica mejor.

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5. OBJETIVOS DE LA INVESTIGACIÓN

General:

Ofrecer a los productores una tecnología biológica adecuada para el control de Meloidogyne spp., que permita asegurar una mejor producción de los cultivos.

Inmediatos:

1. Determinar nuevas poblaciones de P. penetrans con amplia cobertura para el control de Meloidogyne spp.

2. Evaluar la eficacia de P. penetrans en nuevas zonas agrícolas (donde no existe en forma natural)

3. Desarrollar tecnología para el control de Meloidogyne con P. penetrans en campos de producción

4. Capacitar a Instituciones agrícolas, Gremios, Productores en el control biológico de Nematodos

6. ACTIVIDADES DESARROLLADAS

6.1. OBJETIVO 1: DETERMINAR NUEVAS POBLACIONES DE P. PENETRANSCON AMPLIA COBERTURA PARA EL CONTROL DE MELOIDOGYNE SPP.

Para lograr el objetivo 1 se efectuaron cuatro trabajos en el laboratorio e invernadero de Nematología de la Estación Experimental Boliche del INIAP, para el cual se utilizó las siguientes metodologías:

Actividad 1:

Selección de poblaciones de poblaciones de P. penetrans altamente infectivas sobre Meloidogyne spp.

Se ha observado que hay variabilidad en el número de esporas de la bacteria Pasteuria penetrans que se adhieren a la cutícula de los juveniles del segundo estadío de Meloidogyne. Puede darse casos de especímenes que tengan 0, o más de 100 esporas en aproximadamente una hora de exposición entre esporas nematodo. La variabilidad existe dentro de una o diferentes poblaciones de Meloidogyne, sea que éstas provengan de un mismo cultivo o de especies vegetales diferentes. De las raíces de tomate infestadas con Meloidogyne se puede obtener P. penetrans con mayor probabilidad de presencia y facilidad para extraerla.

Este trabajo se realizó con el objetivo de seleccionar poblaciones de P. penetrans eficaces para el control de Meloidogyne spp. en los trabajos de investigación que se realizaron en condiciones de campo.

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Durante el primer semestre del año 2000 se colectó 20 poblaciones de Meloidogyne spp. en plantaciones de tomate como consta en el Cuadro 1 y se les probo la susceptibilidad sobre 10 poblaciones de P. penetrans colectadas de raíces de tomate en diferentes plantaciones cuya ubicación se presentan en el Cuadro 2. De cada población de Meloidogyne se extrajo 10 masas de huevo y se sometieron a eclosión individual, de cada una de estas se extrajo aproximadamente 50 J2, se les colocó 0.25 ml de una suspensión de esporas 5 x 10 4 /ml agua por cada población de la bacteria. Dos horas después, se evaluó el número de esporas adheridas a cada nematodo, en 20 J2/submuestra. De esta manera se observó 2000 J2/población de Meloidogyne, 10000 J2/ provincia. La selección de las poblaciones de P. penetrans de mayor cobertura se efectuó en base a una escala arbitraria de rangos de número de esporas adheridas a la cutícula del nematodo, siendo esta: 0 esporas/J2, 1 4 esporas/J2, 515/J2, 1650/J2 y > 50/J2. Las poblaciones de P. penetrans que infectaron a un mayor número de especímenes de Meloidogyne con el mayor número de esporas por nematodo en promedio y el menor número de nematodos con 0 esporas se consideran las más patogénicas.

Cuadro 1. Poblaciones de Meloidogyne spp. colectadas en plantaciones de tomate del litoral.

No. Sitios de muestreos de Meloidogyne

Guayas Manabí Los Ríos El Oro 1. El Triunfo 24 de Mayo Quevedo La Isla 2. Boliche Mejía Babahoyo Carcabón 3. Chimbo Higuerón Mata de cacao Guarapal 4. Santa Elena Lodana Montalvo Guabillo 5. Cone Rocafuerte Puebloviejo Chacras

Cuadro 2. Poblaciones de la bacteria P. penetrans aisladas de raíces de tomate.

No. Sitios de muestreo de P. penetrans

Guayas Esmeraldas El Oro Chimborazo 1. Nueva Colonia La Concordia Guarapal Pallatanga 2. Boliche La Unión 3. El Triunfo Quinindé 4. Taura 5. Naranjal

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Actividad 2:

Selectividad de poblaciones de P. penetrans para infectar a Meloidogyne spp. colectadas en diferentes cultivos.

Existe mucha heterogeneidad en el parasitismo de poblaciones de P. penetrans sobre Meloidogyne spp., especialmente cuando las poblaciones del nematodo agallador provienen de diferentes cultivos. Este trabajo se realizó para determinar la existencia de selectividad de la bacteria sobre Meloidogyne spp., ya que, la mayoría de las plantas cultivadas o malezas son hospederas a una o varias especies de éste género de nematodo. Entre septiembre y octubre del año 2000 se colectó 80 muestras de raíces y suelo en campos sembrados con diferentes cultivos e infestados con Meloidogyne, como se detalla en el Cuadro 3. De cada población del nematodo (muestra) se extrajo 20 masas de huevo para eclosión en mezcla y sobre aproximadamente 20 especímenes (J2) se colocó 0.25 ml de una suspensión de esporas extraídas de los cultivos muestreados, conteniendo 5x10 4 /ml agua. Una hora después se evaluó el número de esporas adheridas a la cutícula de cada nematodo. Estos se agruparon por el número de esporas pegadas a la cutícula, se utilizó la escala 0 esporas/J2, 1 5 esporas/J2, 615/J2, 1640/J2, 4190/J2.

Cuadro 3. Poblaciones de Meloidogyne colectadas en diferentes cultivos y lugares del País.

Cultivos Poblaciones de Meloidogyne

Total Guayas Manabí Los Ríos El Oro Loja Imbabura

1.Tomate (Lycopersicon esculentum) 13 13 2 5 7 3 43 1. Pimiento (Capsicum annum) 2 4 . 6 2. Cowpea (Vigna unguiculata) 2 2 2 2 2 10 4.Soya (Glycine max) 8 8 5 Haba pallar (Phaseolus lunatus) 2 1 3 6.Guayaba (Psidium guayava) 1 1 7.Papaya (Carica papaya) 2 2 2 1 1 8 8.Badea (Passiflora quadrangularis) 1 1 Total 20 20 14 10 10 6 80

Cuadro 4. Poblaciones de P. penetrans colectadas en diferentes cultivos y lugares del país.

Cultivos Población de P. penetrans

Total Guayas Manabí Los Ríos El Oro 1. Tomate (Lycopersicon esculentum) 8 4 3 15 2. Pimiento (Capsicum annum) 1 1 2 3. Haba pallar (Phaseolus lunatus ) 1 1 4. Soya (Glycine max) 1 1 5. Guayaba. (Psidium guayava) 1 1 Total 10 6 1 3 20

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Actividad 3:

Identificación de especies de Meloidogyne en los nematodos con dificultad para infectar se con P. penetrans.

En las 80 poblaciones de Meloidogyne sometidas a prueba de susceptibilidad con P. penetrans (Cuadro 3), se seleccionó 29 de ellas con dificultad para infectarse con las esporas de la bacteria (cinco por cada provincia muestreada). Durante febrero a marzo del 2001 se identificó la especie de Meloidogyne que presentó estas características. Para el efecto, de plantas mantenidas en el invernadero pertenecientes a la misma población del nematodo agallador seleccionada, se extrajeron cinco masas de huevo (145 en total) y se las expuso a eclosión individual, a éstos juveniles (J2) se les inoculó con esporas de P. penetrans (prueba preliminar). Se colectó los J2 de una masa de huevo por muestra de las que no presentaron esporas pegadas, éstos se inocularon en una planta de tomate susceptible sembrada en suelo esterilizado, después de seis semanas se extrajo de las raíces 20 hembras maduras por cada una de las 29 poblaciones, se efectuó cortes perineales (con la ayuda de un bisturí y estéreo microscopio) y se identificó la especie del nematodo agallador según la distribución y forma de las estrías longitudinales y transversales de la región perineal, típicas de las cuatro especies de Meloidogyne más comunes en el país, establecidas en las claves internacionales.

Actividad 4:

Multiplicación masiva de esporas de P. penetrans con alta patogenicidad para el contr ol de Meloidogyne spp.

Pasteuria penetrans es un parásito obligado de Meloidogyne spp., debido a ello resulta fácil su multiplicación, inoculando los nematodos del segundo estadío juvenil (J2) infectados con las esporas en plantas susceptibles al nematodo. Esta característica es lo que favorece al agricultor para que la bacteria se multiplique sola en un campo infestado con Meloidogyne, sin necesidad de realizar muchas aplicaciones. Por la abundante masa radical que tiene el tomate y por ser una planta indicadora de varias especies del nematodo, se la utilizo en este trabajo para multiplicación masiva de las cinco poblaciones de P. penetrans que presentaron alta patogenicidad sobre Meloidogyne spp. Se construyeron cinco platabandas sobre nivel con dimensiones 1.20 x 4 m y se llenaron con suelo solarizado y desinfectado. Se trasplantó plántulas de tomate con pocas agallas en las raíces y cuatro semanas después se eliminaron las plantas. El suelo húmedo con los nematodos se mezcló con raíces pulverizadas conteniendo alta concentración de esporas de P. penetrans. Cinco días después se trasplantó plantas de tomate variedad Floradade en alta densidad, y a las seis semanas se cosecharon las raíces conteniendo alta concentración de esporas. Esta actividad se repitió varias veces en el mismo sitio.

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6.2. OBJETIVO 2: EVALUAR LA EFICACIA DE PASTEURIA PENETRANS EN NUEVAS ZONAS AGRÍCOLAS

Para lograr el objetivo 2 se realizaron cuatro experimentos, cada uno manejado con seis ciclo de cultivos, siguiendo la metodología que se describe a continuación:

Actividad

Evaluación de la eficacia de Pasteuria penetrans en el contr ol de Meloidogyne spp. en El Azúcar (Península de Santa Elena), zona de Babahoyo y Valles del Catamayo y Chota.

La bacteria P. penetrans es muy común encontrarla en raíces de hortalizas y suelo en la Costa, Oriental e Isla San Cristóbal, sin embargo según varios monitoreos realizados no se la ha encontrado en cierta áreas de El Azúcar (Península de Santa Elena), Babahoyo y Valles de la Sierra. El objetivo de esta investigación fue determinar la eficacia de la introducción de P. penetrans en lugares completamente agrícolas, donde no se ha encontrado a la bacteria en forma natural. Se desarrolló desde septiembre del 2000 a julio del 2003.

Se realizaron cuatro experimentos ubicados en campos infestados de Meloidogyne spp, en El Azúcar, (35 msnm), Babahoyo (8 msnm), El Tingo en el valle del Catamayo (1234 msnm) y en El Juncal en el valle del Chota (1200 msnm). En cada lugar se investigaron siete tratamientos: cinco poblaciones individuales de P. penetrans, siendo estas, (1) Nueva Colonia, (2) La Concordia, (3) Quinindé, (4) Boliche y (5) Guarapal; (6) mezcla del 1 al 5; (7) testigo sin Pasteuria. Los tratamientos se manejaron con la siembra continua de seis ciclos de cultivos susceptibles a Meloidogyne spp., siendo éstos, fréjol + fréjol + tomate + fréjol + fréjol + tomate. Se utilizó la var. de tomate "Floradade" y en fréjol la más sembrada en la zona como "Blanco Imbabura" en Catamayo, "1001" y Sangre de Toro" en el Chota, "Chabelo" e INIAP 472 en El Azúcar y Babahoyo. En cada experimento se aplicó 320 x 10 6 esporas de P. penetrans por cada parcela (4m 2 ) cinco días antes del primer y cuarto ciclo de cultivo.

Cada experimento se condujo en un diseño de Bloques Completos al Azar y cuatro repeticiones. La comparación de medias de tratamientos se efectuó mediante la prueba de Duncan 0.05. También se realizaron los análisis de correlación y regresión

Al final de cada ciclo de cultivo en 10 plantas por parcela se evaluó: índice de agallamiento en las raíces (Escala de Bridge y Page, 1980), densidad poblacional de Meloidogyne (J2) en 10 g de raíces y 100 cm 3 de suelo, porcentaje de J2 del suelo infectados con P. penetrans, cantidad de esporas en 100 mg de raíces pulverizadas y producción del cultivo.

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6.3. OBJETIVO 3: DESARROLLAR TECNOLOGÍA PARA EL CONTROL DE MELOIDOGYNE CON P. PENETRANS EN CAMPOS DE PRODUCCIÓN

Para lograr el objetivo 3 se realizaron tres experimentos, cada uno manejado con tres y cuatro ciclo de cultivos, siguiendo la metodología que se describe a continuación:

Actividad 1:

Desar rollo de Tecnología para la aplicación de P. penetrans en cultivos de ciclo cor to de tr asplante, en campos de producción de amplia super ficie, para el contr ol de Meloidogyne.

Las hortalizas entre ellas el tomate (Lycopersicom esculentum Mill) es uno de los cultivos de trasplante más atacados por el nematodo agallador de raíces, por tal motivo se la escogió como planta indicadora en esta investigación La mayoría de las investigaciones realizadas sobre P. penetrans para el control de Meloidogyne spp., han sido desarrolladas en condiciones de invernadero o en micro parcelas de campo. El objetivo de esta investigación es definir una eficaz metodología de aplicación de esporas de P. penetrans, en cultivos de ciclo corto de trasplante en campo de amplia superficie. Este experimento se realizó en la Estación Experimental Boliche, desde agosto del 2001 a Julio del 2003. Se sembró tomate riñón variedad "Floradade" por ser altamente susceptible al nematodo de las agallas radicales Meloidogyne spp. Los tratamientos investigados fueron cinco: (1) aplicaciones de P. penetrans en semillero convencional tipo cama, (2) aplicación de P. penetrans en semillero de vasos, (3) P. penetrans aplicado al voleo incorporado antes del trasplante en el sitio definitivo, (4) P. penetrans aplicado en sitio definitivo al trasplante al fondo del hoyo y (5) testigo absoluto sin la bacteria. Se aplicó 320 x 10 6 esporas por parcela en suelo húmedo al inicio del primer y segundo ciclo.

El experimento se condujo en un diseño de Bloques Completo al Azar y cuatro repeticiones. La comparación de medias se efectuó mediante la prueba de Duncan 0.05. El manejo de la bacteria se realizó con la siembra de cuatro ciclos continuos de tomate. El área experimental fue de 1280 m 2 , las parcelas de 64 m 2 y el distanciamiento de siembra de 0.60 x 0.80 m. (130 plantas /parcela).

Al final de cada ciclo de cultivo en 10 plantas por parcela se evaluó: índice de agallamiento en las raíces (Escala de Bridge y Page, 1980), densidad poblacional de Meloidogyne (J2) en 10 g de raíces y 100 cm 3 de suelo, porcentaje de J2 del suelo infectados con P. penetrans, cantidad de esporas en 100 mg de raíces pulverizadas y producción del cultivo.

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Actividad 2:

Desar rollo de Tecnología para la aplicación de P. penetrans en cultivos de ciclo cor to de alta densidad de siembra, en campos de pr oducción de amplia super ficie, para el contr ol de Meloidogyne spp.

La soya (Glycine max Merr.), fréjol (Phaseolus vulgaris), fréjol mungo (Vigna radiata), cowpea (Vigna unguiculata, entre otros cultivos de alta densidad de siembra, son excelentes hospedantes del nematodo agallador de raíces, por tal motivo en esta investigación se sembró soya variedad INIAP 304 y fréjol INIAP 472 como cultivos susceptibles . El objetivo de este trabajo fue definir una metodología de aplicación de esporas de Pasteuria penetrans en cultivos de ciclo corto de alta densidad de siembra. Se desarrolló en la Granja experimental de la Facultad de Ciencia Agropecuarias de la Universidad Técnica de Babahoyo, desde Junio 2002 a Agosto 2003. Los tratamientos fueron cinco: (1) Soya + P. penetrans + Nitragin aplicado con sembradora, (2) Soya + P. penetrans + Nitragin aplicado con voleadora, (3) Soya + P. penetrans + Nitragin aplicado al voleo manual, (4) P. penetrans aplicado manualmente al suelo en presiembra + soya + Nitragin, con sembradora y (5) un testigo absoluto Soya + Nitragin sembrado con sembradora sin P. penetrans. El manejo de las poblaciones de la bacteria se realizó con la siembra en el mismo sitio de soya + fréjol + soya. Se aplicó 204 x 10 8 esporas por parcela de 102 m 2 , una sola vez al inicio del primer ciclo. El área útil experimental fue de 2040 m 2 , el distanciamiento de siembra de 15 plantas por m lineal y 45 cm entre hileras.

El experimento se condujo en un diseño de Bloques Completo al Azar y cuatro repeticiones. La comparación de medias se efectuó mediante la prueba de Duncan 0.05. Al final de cada ciclo de cultivo se evaluó: Índice de agallamiento en las raíces (daño), densidad poblacional de Meloidogyne en raíces y suelo, porcentaje de juveniles del nematodo en el suelo infectados con P. penetrans, concentración de esporas en las raíces y peso de semillas.

Actividad 3:

Desar rollo de Tecnología para aplicación de esporas de P. penetrans en frutal.

Algunos frutales entre ellos la papaya (Carica papaya), tomate de árbol (Solanum betaceum), granadilla (Passiflora ligularis), guayaba (Psidium guayava) son excelentes hospederos del nematodo agallador de raíces. En esta investigación se sembró papaya material criollo por ser susceptibles a Meloidogyne spp. El objetivo de este trabajo fue determinar una metodología eficaz para aplicación de esporas de P. penetrans en frutal. El trabajo se lo ejecutó desde abril del 2002 a Agosto 2003, en un campo infestado con Meloidogyne spp. en El Azúcar (Península de Santa Elena). Los tratamientos que se investigaron fueron siete: (1) P. penetrans aplicada en el semillero convencional, (2) P. penetrans aplicada en el vivero al substrato de siembra en funda, (3) P. penetrans aplicada en el sitio definitivo al hoyo de trasplante, (4) P. penetrans aplicada en el sitio definitivo alrededor de la planta al trasplante, (5) P. penetrans aplicada en plantación establecida de seis meses alrededor de la planta, (6) aplicada como en tratamientos 1, 4 y 5; (7) Testigo absoluto no tratado. En los tratamientos 1 al 5 se utilizó 64 x10 8

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esporas/parcela de 80 m 2 en el sitio definitivo, aplicadas según la situación del tratamiento. En el tratamiento 6 ésta dosis se compartió mitad para el semillero, 1/4 al trasplante y 1/4 a seis meses. El área útil experimental fue de 2240 m 2 , las parcelas tuvieron dimensiones de 10 x 8 m y el distanciamiento de siembra fue de 2.0 x 2.5 m. (25 plantas/parcela).

El experimento se condujo en un diseño de Bloques Completo al Azar y cuatro repeticiones. La comparación de medias se efectuó mediante la prueba de Duncan 0.05.

Las evaluaciones se realizarán a los 90, 120, 210 y a los 360 días después del trasplante, en los siguientes parámetros: Índice de agallamiento, densidad poblacional de Meloidogyne spp. en 10 g de raíces y 100 cm 3 de suelo, porcentaje de J2 infectados con Pasteuria y cantidad de esporas por 100 mg de raíces pulverizadas. El tamaño del hoyo para muestreo de raíces fue de 10 dm 3 (20 x 20 x 25 cm) a los 90 días y de 27 dm 3 en los restantes períodos (30x30x30 cm).

6.4. OBJETIVO 4: CAPACITAR A INSTITUCIONES AGRICOLAS, GREMIOS, PRODUCTORES EN EL CONTROL BIOLÓGICO DE NEMATODOS

Para lograr el objetivo 4 se capacitó a los tesistas y a los Responsables del Proyecto en las Universidades socias, en técnicas de laboratorio y metodologías de evaluación en el campo. También se realizaron cinco Seminarios en los lugares donde se desarrollaron las investigaciones dirigido a Técnicos, Agricultores, Profesores y Estudiantes.

• Nematodos fitoparásitos, características, biología, alternativas de control y avances en el control biológico de Meloidogyne spp. con la bacteria P. penetrans. Se realizó en Junio del 2001 en la Universidad Técnica del Norte.

• Control biológico del nematodo Meloidogyne spp. en campos de agricultores. Se presentó en el valle del Chota. Se presentó en la Universidad Técnica del Norte, del 21 al 22 de noviembre del 2002,

• Control biológico del nematodo Meloidogyne con la bacteria P. penetrans en el Valle del Catamayo. Se presentó en Catamayo (Loja), el 2 de Julio del 2003

• Control biológico del nematodo Meloidogyne con la bacteria P. penetrans en el Valle del Chota. Se presentó en el Valle del Chota, el 27 de Mayo del 2003.

• Control biolóGgico de Meloidogyne con P. penetrans en la zona de Babahoyo. Se presentó en la Universidad Técnica de Babahoyo, el 10 de Julio del 2003.

• Estudios de la sensibilidad de poblaciones de Meloidogyne spp. de diferentes especies de cultivo, a cuatro poblaciones de P. penetrans. Se presentó en XI Seminario Nacional de Sanidad Vegetal en la Universidad Técnica de Babahoyo, del 20 al 23 de Nov.del 2001.

• Evaluación de la sensibilidad de varias poblaciones de Meloidogyne spp. frente a diez

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poblaciones de P. penetrans nativas de Ecuador. Se presentó en el Congreso Internacional de Nematólogos de los Trópicos Americanos (ONTA) en Cuba, Junio del 2001

• Eficacia de la introducción de P. penetrans en el control de Meloidogyne spp. en nuevas zonas agrícolas del Ecuador. Se presentó en el Congreso Internacional de Nematólogos de los Trópicos Americanos (ONTA) en Guayaquil, del 21 25 de Julio del 2003.

Día de campo sobre Manejo de P. penetrans en campos de pr oducción.

• Manejo de P. penetrans para el control de Meloidogyne en campos de producción en el Juncal, Valle del Chota, Enero 8 del 2003.

• Manejo de P. penetrans para el control de Meloidogyne en campos de producción en el Valle del Catamayo.

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7. RESULTADOS Y DISCUSION

7.1.Determinación de poblaciones nacionales de P. penetrans de amplia cober tura para el contr ol de Meloidogyne spp.

7.1.1. Poblaciones de P. penetrans altamente infectivas sobre Meloidogyne spp.

En esta selección se consideró dos factores importantes: las poblaciones de Meloidogyne que presentaron el menor número de especímenes con 0 esporas y el número de esporas adheridas a la cutícula de los nematodos. Se determinó que en las poblaciones de Meloidogyne obtenidas de la provincia de Los Ríos (Cuadro 5), el 99.58 % de los especímenes se infectaron con las 10 poblaciones de P. penetrans y solamente el 0.42 % presentó 0 esporas con la población de la bacteria colectada en La Unión de Esmeraldas, la que además no infectó el 0.39 % de los especímenes colectados en Manabí (Cuadro 6).

En las poblaciones de Meloidogyne obtenidas de la provincia de El Oro (10000 especímenes), no se infectó el 2.76% de los nematodos (Cuadro 7), recayendo en las poblaciones de P. penetrans identificadas como La Unión (1.9 %), Pallatanga (0.4%), El Triunfo (0.13%), Naranjal (0.1 %) y Taura (0.23%).

En las poblaciones de Meloidogyne obtenidas de la provincia de El Guayas (10000 especímenes), se encontró 12.35 % de los especímenes del nematodo no parasitados con ocho poblaciones de P. penetrans probadas. Las bacteria Nueva Colonia y Taura parasitaron a todos los especímenes probados de esta provincia (Cuadro 8).

En general, se determino que entre las 10 poblaciones de P. penetrans probadas, las más patogénicas sobre Meloidogyne spp. son: Nueva Colonia, La Concordia, Quinindé, Boliche y Guarapal.; con las que se obtuvieron promedios de 12 a > 40 esporas por nematodo (J2) adheridas a la cutícula (Fig. 1).

Con este estudio se confirma que existe una amplia variabilidad en el numero de esporas que se adhieren a la cutícula del nematodo, aún en condiciones de laboratorio, donde todos los especímenes del nematodo estuvieron sometidos a la misma concentración de esporas y al mismo tiempo de contacto. Por otro lado, el cultivo del cual se extrajeron los nematodos y la bacteria no es la causa de la variabilidad del número de esporas/J2, ya que en este trabajo, ambos microorganismos fueron extraídos de raíces de tomate.

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Cuadro 5. Población promedio de Meloidogyne spp. de raíces de tomate de la provincia de Los Ríos, infectadas con P. penetrans. Estación Experimental Boliche, 2000.

Poblaciones de Pp

Meloidogyne (J2) con esporas de P. penetrans Rangos del Número de Esporas de Pp / J2

0 1 4 5 15 16 50 > 50

1. Nueva Colonia 0 0 36 177 787 2. La Concordia 0 0 72 682 246 3. Quinindé 0 0 42 859 99 4. Boliche 0 0 0 84 916 5. Guarapal 0 0 0 254 746 6. Unión 42 492 424 42 0 7. Pallatanga 0 202 548 232 18 8. El Triunfo 0 179 739 82 0 9. Naranjal 0 283 717 0 0 10. Taura 0 50 937 13 0

Total 42 1206 3515 2425 2812 % 0.4 12 35 24 28

Cuadro 6. Población promedio de Meloidogyne spp. de raíces de tomate de la provincia de Manabí, infectadas con P. penetrans. Estación Experimental Boliche, 2000.

Poblaciones de P. penetrans


0 1 4 5 15 16 50 > 50


Total 39 1094 3995 2272 2600 % 0.4 11 40 22.6 26

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Cuadro 7. Población promedio de Meloidogyne spp. de raíces de tomate de la provincia el Oro, infectadas con P. penetrans. Estación Experimental Boliche, 2000.



0 1 4 5 15 16 50 > 50


Total 276 1383 4205 3054 1082 % 3 14 42 30 11

Cuadro 8. Población promedio de Meloidogyne spp. de raíces de tomate de la provincia del Guayas infectadas con P. penetrans. Estación Experimental Boliche, 2000.


Meloidogyne (J2) con esporas de P. penetrans Rangos de Número de Esporas de Pp / J2

0 1 – 4 5 15 16 50 > 50


Total 1235 1782 3624 1884 1475 % 12 18 36 1 9 15

20

Promedio de Esporas Adheridas a Meloidogyne

0

10

20

30

40

50

60

Nueva

Colonia

La

Concordia

Quinindé

Boliche

Guarapal

La Union

Pallatanga

Naranjal

El Triunfo

Taura

Pasteuria penetrans

Promed

io Esp

oras Adh

eridas

Figura 1. Patogenicidad de 10 poblaciones de P. penetrans sobre Meloidogyne spp.

7.1.2. Selectividad de poblaciones de P. penetrans para infectar a poblaciones de Meloidogyne spp. colectadas en diferentes cultivos.

Utilizando diferentes cultivos para extraer ambos microorganismos como tomate (Lycopersicon esculentum), pimiento (Capsicum annum), cowpea (Vigna unguiculata), soya (Glycine max), haba pallar (Phaseolus lunatus), papaya (Carica papaya), guayaba (Psidium guayava) y badea (Passiflora quadrangulata), nuevamente se determinó que especímenes con 0 esporas pueden encontrarse cuando ambos microorganismos provienen de los mismos o diferentes cultivos como ocurre en tomate y soya. Lo que es evidente es que en los especímenes de Meloidogyne colectados en las provincias de Los Ríos, Imbabura y Guayas hay mayor cantidad de estos con 0 esporas. Resultados similares han sido reportados por investigadores de otros países, manifestando que ocurre cuando nematodos y Pasteuria son extraídos de cultivos diferentes, cuando Pasteuria no es extraída de la misma especie del nematodo a parasitar, también se lo atribuye a la baja concentración de esporas, por el tipo de proteínas del nematodo (Charnecki, et al., 1997), por la poca profundidad de las estrías de la cutícula del nematodo en ciertas especies (Dickson, 2000) y últimamente lo atribuyen a la raza de la bacteria. Estudios de 2 razas de P. penetrans (P20 y P100) mostraron que P20 tuvo preferencia por infectar a M. arenaria raza 1, mientras que P100 mostró preferencia por M. arenaria raza 2, M. javanica y M. incognita (Preston et al., 2003). Aunque en Ecuador se puede encontrar con facilidad a P. penetrans, mediante estos estudios se ha seleccionado las cinco poblaciones más patogénicas.

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7.1.3. Identificación de las especies de Meloidogyne en los especímenes con dificultad para infectar se con P. penetrans.

Se determinó mediante cortes perineales en las hembras, que los especímenes de Meloidogyne con dificultad para infectarse con P. penetrans corresponden el 92 % a M. javanica, 3 % a M. arenaria, 2 % M. incognita y el 3 % a una especie no identificada (Cuadro 11). Con este trabajo se deduce que por la mezcla de especies y razas de Meloidogyne en el campo, siempre habrá una pequeña población del nematodo que va a escapar al ataque de la bacteria, y con mayor frecuencia esto ocurrirá especialmente en la provincia de los Ríos donde hay una mayor incidencia de M. javanica en maíz (según diagnósticos nematológicos efectuados en la E. E. Boliche). Sin embargo por previos monitoreos realizados en el INIAP (Triviño, 1996), está determinado que el 80 % de la densidad poblacional de Meloidogyne del Ecuador es M. incognita excelente hospedante de las P. penetrans nativas, y solamente el 20 % es M. javanica, M. arenaria, M. hapla y M. graminicola y otras especies aún no identificadas.

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Cuadro 9. Respuesta de 80 poblaciones de Meloidogyne spp. al parasitismo de cuatro poblaciones de P. penetrans, provenientes de diferentes cultivos hospedantes. Estación Experimental Boliche, 2000.

Poblaciones de Meloidogyne spp.


Número de Meloidogyne (J2) con Pp 0 15* 615* 1640* 4190*

Tomate (43) PpT 7 161 445 189 38 (l. esculentum) PpHP 0 151 416 210 63

PpS 21 248 396 154 21 PpG 25 273 382 128 32

Pimiento (6) PpT 0 22 60 32 6 Capsicum annum) PpHP 0 38 48 24 10

PpS 0 36 44 28 12 PpG 0 32 66 18 4

Cowpea (10) PpT 7 76 103 28 6 (Vigna unguiculata) PpHP 6 52 120 31 11

PpS 10 76 93 31 10 PpG 7 72 97 32 12

Haba pallar (3) PpT 0 6 32 15 7 (Phaseolus lunatus) PpHP 0 9 36 13 2

PpS 0 15 31 13 1 PpG 0 17 26 14 3

Soya (8) PpT 30 96 30 4 0 (Glycine max) PpHP 26 80 36 18 0

PpS 32 86 40 2 0 PpG 34 102 24 0 0

Papaya (8) PpT 30 88 33 9 0 (Carica papaya) PpHP 31 82 38 9 0

PpS 34 92 32 2 0 PpG 30 95 29 6 0

Guayaba (1) PpT 0 1 9 6 4 (Psidium guayava) PpHP 2 7 11 0 0

PpS 2 6 9 3 0 PpG 0 2 11 5 2

Badea (1) PpT 0 4 8 5 3 (Passiflora quadrangularis) PpHP 2 4 9 3 2

Pp S 4 8 6 2 0 PpG 2 8 8 2 0

J2=Segundo estadío juvenil, Pp= Pasteuria penetrans, T= Aislada de raíces de tomate, HP = haba pallar, S=soya, G=Guayaba (Cerecita), * Número de esporas adheridas a cada nematodo.

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Cuadro 10. Respuesta de 80 poblaciones de Meloidogyne spp. al parasitismo de cuatro poblaciones de P. penetrans, provenientes de seis diferentes provincias. Estación Experimental Boliche, 2000.

Poblaciones de Meloidogyne spp.


Número de Meloidogyne (J2) con Pp 0 15* 615* 1640* 4190*

Guayas (20) PpT 18 106 174 86 16 PpHP 20 98 188 70 24 PpS 22 108 168 84 18 PpG 16 98 178 84 24 % no infectados 4.7

Manabí (20) PpT 6 60 20 92 36 PpHP 14 88 194 82 22 PpS 12 150 164 52 22 PpG 10 190 124 62 14 % no infectados 2.6

Los Ríos (14) PpT 43 138 87 12 0 PpHP 38 126 89 25 2 PpS 52 154 64 10 0 PpG 53 178 49 0 0 % no infectados 16.7

El Oro (10) PpT 6 74 84 33 3 PpHP 5 54 92 37 12 PpS 8 66 87 33 6 PpG 7 64 95 32 3 % no infectados 3.2

Loja (10) PpT 4 76 84 28 6 PpHP 6 78 100 14 2 PpS 10 100 60 24 6 PpG 12 80 78 22 8 % no infectados 4.0

Imbabura (6) PpT 12 78 20 10 0 PpHP 8 80 28 4 0 PpS 16 68 29 7 0 PpG 12 64 40 4 0 % no infectados 10.0

J2 = Segundo estadío juvenil, Pp = Pasteuria penetrans, T = Aislada de raíces de tomate, HP = haba pallar, S = soya, G = Guayaba (Cerecita), * Número de esporas adheridas a cada nematodo.

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Cuadro 11. Identificación de la especie de Meloidogyne en especímenes con dificultad para infectarse con P. penetrans.

Procedencia de la muestra Especie de Meloidogyne % Provincia Sitio Cultivo

Guayas Taura Tomate M. javanica 80 No identificada 20

Chimbo Tomate M. javanica 90 No identificada 10

El Triunfo Tomate M. javanica 80 M. arenaria 20

Boliche Tomate M. javanica 100 Presa El Azúcar Pimiento M. javanica 80

No identificada 20 Manabí Guabito Tomate M. javanica 75

No identificada 25 Sta. Ana Tomate M. javanica 90

M. incognita 10 Lodana Pimiento M. javanica 90

M. incognita 10 Sequita Haba pallar M. javanica 100 Higuerón Pimiento M. javanica 100

Los Ríos Quevedo Soya M. javanica 90 M. arenaria 10

Fumisa Soya M. javanica 100 Babahoyo Fréjol M. javanica 100 U.T. de Babahoyo Tomate M. javanica 100 Mata de cacao Tomate M. javanica 80

M. arenaria 20 El Oro La Isla Tomate M. javanica 80

M. arenaria 10 M. incognita 10

Guarapal Tomate M. javanica 100 Arenillas Tomate M. javanica 100 Jumon Fréjol M. javanica 100 Sta. Rosa Papaya M. javanica 70

M. incognita 20 M. arenaria 10

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Continuación Cuadro 11.

Procedencia de la muestra Especie de Meloidogyne % Provincia Sitio Cultivo

Loja Chanquicuña Tomate M. javanica 100 San Francisco Tomate M. javanica 100 Chichoca fréjol M. javanica 100 Las Vega Tomate M. javanica 100 La Capilla Papaya M. javanica 100

Imbabura Cuambo fréjol M. javanica 90 M. incognita 10

Chapi Tomate M. javanica 90 M. incognita 10

Juncal Tomate M. javanica 80 M. arenaria 20

La Pradera Tomate M. javanica 100

7.2. Eficacia de la intr oducción de P. penetrans, para el contr ol de Meloidogyne spp. en nuevas zonas agr ícolas del país.

7.2.1. Intr oducción de P. penetrans en El Azúcar , Península de Santa Elena

Con la introducción de las cinco poblaciones de P. penetrans en El Azúcar para el control del nematodo agallador, no hubo diferencia estadística entre tratamientos dentro de cada ciclo de cultivo en las variables índice de agallamiento y densidad poblacional del segundo estadío juvenil (J2) en raíces (Cuadro 12 y 13). Sin embargo, se determino que el mayor índice de agallamiento se presentó en el tercer ciclo sembrado con tomate y se redujo en el sexto ciclo sembrado con el mismo cultivo. Lo contradictorio fue que en este ultimo ciclo de manejo de P. penetrans, en el testigo también se redujo el índice de agallamiento, lo que se atribuye a que la incidencia de los nematodos Pratylenchus (lesionador de raíces) y Rotylenchulus reniformis (agallador) se incrementaron con el paso de los ciclo de cultivo especialmente de fréjol (excelente hospedante), que impidió obtener una mejor diferencia entre tratamientos Pasteuria y testigo.

La densidad poblacional de Meloidogyne J2 en raíces en el ciclo 3 (tomate) llego al máximo incremento y en los siguientes ciclos incluyendo el 6 ésta se redujo. Igual tendencia de resultados se obtuvo con la densidad poblacional del nematodo en el suelo, en que niveles muy altos se presentaron en el ciclo 3 (tomate) y se redujeron progresivamente hasta el ciclo 6 (tomate) donde hubo diferencia estadística significativa entre los tratamientos (Cuadro 14).

En el porcentaje de juveniles del segundo estadío (J2) del suelo con presencia de esporas de la bacteria adheridas a la cutícula se determinó un incremento progresivo desde el ciclo 1 (1119 %) al ciclo 6 (34 49 %) y también presencia de la bacteria en el testigo del último ciclo (14 %) que pudo diseminarse con la herramienta de muestreo (Cuadro 15).

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Cuadro 12. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en seis ciclos de cultivo, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en El Azúcar, Península de Santa Elena.

Tratamientos Pasteuria (Pp)

Índice de Agallamiento* / Planta / Ciclo de Cultivo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 1.3 4.0 7.1 2.2 3.0 3.7 2. La Concordia 0.5 1.5 4.0 2.3 2.8 2.5 3. Quinindé 1.3 2.5 6.1 3.0 4.0 4.6 4. Boliche 1.7 4.3 7.0 3.0 3.8 4.1 5. Guarapal 0.8 1.7 5.5 2.0 1.9 1.7 6. Mezcla 15 0.4 1.0 4.9 1.0 0.7 1.8 7. Testigo sin Pp 1.0 3.5 6.5 3.0 2.0 4.3 CM 1.304 6.807 5.293 2.129 5.572 5.933 C.V. % 70.06 61.32 33.58 38.70 63.87 25.87 Signific. estadística ns ns ns Ns Ns ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 13. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en El Azúcar, Península de Santa Elena.

.


Meloidogyne (J2) / 10 g de raíces Promedio 2000 2001 2002 2003

Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 1000 2275 21875 1250 538 1000 4656 2. La Concordia 2975 1325 15137 1313 438 912 3683 3. Quinindé 3050 1725 18612 1563 525 1687 4527 4. Boliche 3200 1725 18412 1575 350 1437 4450 5. Guarapal 2825 2775 15162 575 300 750 3731 6. Mezcla 15 2650 2225 16912 500 212 800 3883 7. Testigo sin Pp 2925 2175 25750 1175 488 1975 5748 CM 190.393 99.855 659.146 185.091 42.409 199.814 72.310 C.V. % 24.45 19.90 13.89 36 34 33.35 26. 25.88 9.48 Signific. estadística ns ns ns ns ns Ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

27

Cuadro 14. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en suelo, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en El Azúcar, Península de Santa Elena.


Meloidogyne (J2) / 100 cm 3 de suelo Promedio 2000 2001 2002 2003

Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 318 937 2062 200 237 150 b 651 2. La Concordia 212 512 2950 223 250 100 b 708 3. Quinindé 319 1100 1862 125 162 125 b 615 4. Boliche 310 750 1987 163 312 150 b 612 5. Guarapal 156 625 1575 163 150 175 b 474 6. Mezcla 15 159 637 1650 125 162 100 b 472 7. Testigo sin Pp 384 875 2350 275 250 250 a 731 CM 24.226 49.755 78.915 14.600 15.12 15.18 3.918 C.V. % 38.61 20.94 17.04 26.54 43.04 17.09 11.47 Signific. estadística ns ns ns ns ns * ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05)

Cuadro 15. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne del suelo infectados con P. penetrans, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en El Azúcar, Península de Santa Elena.


% Meloidogyne (J2) con P. penetrans, en suelo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 14 18 21 30 31 41 2. La Concordia 15 15 21 27 34 39 3. Quinindé 11 18 24 30 23 41 4. Boliche 19 19 21 28 36 43 5. Guarapal 13 11 23 30 32 34 6. Mezcla 15 11 10 30 45 37 49 CM 61.954 10.536 26.297 23.231 12.273 20.947 C.V. % 37.50 14.50 18.10 14.16 9.93 11.51 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron arcoseno. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

28

En general, la multiplicación de esporas fue similar entre las cinco poblaciones de P. penetrans (Cuadro16), aunque mayor concentración hubo en el primer ciclo (25236276 x 10 4 /100 mg raíces). Esto pudo ocurrir por que las poblaciones de otros géneros de nematodos presentes en este campo experimental fueron bajas al inicio. En los ciclos siguientes las raíces se incorporaron para la descomposición y liberación de las esporas de la bacteria al suelo.

En la producción de frutos no hubo diferencia estadística entre tratamientos (Cuadro 17) en los ciclos 1 al 6. En los dos ciclos de tomate (3 y 6) se obtuvo mayor peso de frutos/ha con los tratamientos Pasteuria vs testigo y en especial con el tratamiento mezcla de poblaciones de P. penetrans.

Cuadro 16. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del número de esporas de P. penetrans en las raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans X 10 4 / 100 mg raíces Promedio 2000 2002 2002 2003

Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 2523 b 1097 1250 2269 4125 3167 ab 2405 2. La Concordia 6276 a 1714 900 1397 4938 1161 b 2731 3. Quinindé 2738 b 761 1150 2041 4297 1692 b 2113 4. Boliche 4182 b 1311 1594 1755 4042 1866 b 2458 5. Guarapal 6099 a 994 1761 1078 5089 3066 ab 3014 6. Mezcla 15 5871 ab 1855 1100 1389 3047 3897 a 2860 CM 676.628 113.944 73.688 60.219 107.853 59.562 C.V. % 10.30 18.28 23.82 21.11 16.10 15.83 Signific. estadística ** ns ns ns ns ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron a √ + 1 ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Correlaciones entre todos las variables antes descritas determinaron que en este ensayo, solamente hubo relación entre la producción de tomate (peso de frutos/ha) y la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces (Anexo 3), obteniendo mayor producción a menor población del nematodo y viceversa como indica la Figura 2.

29

Cuadro 17 Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la producción de los cultivos, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en El Azúcar, Península de Santa Elena.


Producción kg / ha 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 782 1152 31250 1101 1133 33750 2. La Concordia 890 991 36250 961 915 35625 3. Quinindé 694 1222 35000 819 909 35000 4. Boliche 712

534 1067 34375 986 988 35625

5. Guarapal 1246 36250 690 863 34375 6. Mezcla 15 584 1311 40625 942 920 36875 7. Testigo sin Pp 768 1135 27500 762 855 30000 CM 0.009 0.008 11.036 0.013 0.007 3.119 C.V. % 34.24 23.49 14.54 26.90 27.29 10.48 Signific. Estadística ns ns ns ns ns ns El análisis estadísttico se realizó en kg/parcela. ns = No existen diferencias estadísticamente significativa (P>0.05)

Fig. 2 Regresión lineal entre producción de tomate (kg/ha) vs nematodos en 10g de raíces. El Azúcar

10000.0

0.0

10000.0

20000.0

30000.0

40000.0

50000.0

60000.0

70000.0

80000.0

0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000 10000

Nematodos en 10 g de Raíces

Prod

ucción

Produccion Pronóstico Produccion Lineal (Pronóstico Produccion)

Producción = 28092 – 3.30 (J2 10g Raíces)

30

7.2.2. Introducción de P. penetrans en la zona de Babahoyo

En este experimento realizado en Babahoyo, en todos los ciclos a excepción del 2 y 3 hubo diferencia estadística entre tratamientos Pasteuria y testigo en el índice de agallamiento en las raíces (Cuadro 18), mientras que las poblaciones de la bacteria fueron similares entre ellas. Además se determinó numéricamente que desde el ciclo 4 al 6 se redujo el índice de agallamiento en todos los tratamientos Pasteuria y se incrementó en el testigo.

En general, la densidad poblacional de Meloidogyne (J2) obtenida en 10 g de raíces (Cuadro 19) se redujo progresivamente en los ciclos de fréjol (1, 2, 4 y 5) y tomate (3 y 6). Hay diferencias estadísticas en los dos últimos ciclos de cultivos donde los tratamientos Pasteuria son significativamente más bajos que el testigo (P < 0.01), sin embargo numéricamente la reducción de la población entre tratamientos Pasteuria vs testigo ocurrió desde el ciclo 3 al 6. Nuevamente ocurrió que en el testigo en vez de incrementarse la población a medida que aumenta los ciclos, estos caen después del ciclo 3 (tomate), posiblemente debido a la competencia de los nematodos que hay después de la siembra de tomate, sin embargo existe una gran diferencia entre tratado y testigo.

Cuadro 18. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en seis ciclos de cultivo, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en Universidad Técnica de Babahoyo.


Índice de Agallamiento / Planta / Ciclo de Cultivo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 4.0 3.4 6.3 3.2 b 1.1 b 3.2 b 2. La Concordia 3.4 3.7 6.5 4.1 b 2.0 b 3.6 b 3. Quinindé 3.9 3.6 7.0 4.3 b 1.6 b 3.7 b 4. Boliche 4.1 3.4 6.6 2.8 b 0.6 b 4.1 b 5. Guarapal 3.0 3.4 6.4 3.3 b 2.0 b 2.9 b 6. Mezcla 15 4.0 3.3 7.0 2.9 b 2.1 b 3.0 b 7. Testigo sin Pp 3.3 4.6 7.0 5.4 a 5.5 a 7.0 a CM 0.634 0.785 0.336 3.589 10.110 8.269 C.V. % 11.43 40.7 8.93 24.79 44.58 23.23 Signific. estadística * ns ns * ** ** ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

31

Cuadro 19. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en Universidad Técnica de Babahoyo.



Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 23675 11775 11625 8300 2400 ab 1200 b 9829 b 2. La Concordia 15000 5450 11450 7650 3300 ab 1300 b 7358 b 3. Quinindé 25450 9225 14550 7900 2800 ab 1250 b 10196 b 4. Boliche 23800 11775 14213 7200 1800 ab 1050 b 9973 b 5. Guarapal 18825 10550 13400 7300 3050 ab 900 b 9012 b 6. Mezcla 15 23700 5300 14338 5700 1200 b 750 b 8498 b 7. Testigo sin Pp 23125 11125 20712 10050 10500 a 8000 a 13919 a CM 635.763 804.689 626.867 209.623 1925.41 1881.92 400.652 C.V. % 21.05 29.24 12.50 13.83 16.77 16.07 10.00 Signific. estadística ns ns ns ns ** ** * Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01) Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Rango Múltiple de Duncan.

El análisis de correlación de las variables aquí evaluadas determinó que la producción, concentración de esporas en las raíces, porcentaje de nematodos infectados y poblaciones de nematodos en suelo y raíces están relacionados con el agallamiento, nematodos en raíces y suelo y porcentaje de nematodos infectados con las esporas (Anexo 4) y así se determinó que a medida que aumenta el índice de agallamiento también aumenta la población del nematodo en raíces y suelo (Fig.3 y 4, Anexo 5 y 6). mientras que el agallamiento disminuye al aumentar el porcentaje de nematodos del suelo infectados con Pasteuria (Fig. 5, Anexo 7 y 8) y al incrementarse la cantidad de esporas en las raíces (Fig. 6). Los análisis de regresión y varianza están en estos anexos.

Con respecto a la población de Meloidogyne en 100 cm 3 de suelo (Cuadro 20), en los tres últimos ciclos hay diferencia altamente significativa entre tratamientos (P <0.01), sin embargo las poblaciones de Pasteuria son iguales entre sí. En el primer ciclo de tomate (Ciclo 3) las poblaciones se incrementaron considerablemente y después de este ciclo se redujeron, obteniéndose una notable reducción de las poblaciones del nematodo en los tratamientos Pasteuria comparadas con el testigo.

El porcentaje de juveniles del segundo estadío en el suelo (J2) infectados con las esporas se incrementó progresivamente con el ciclo de cultivo (Cuadro 21) desde 613 % de la población de Meloidogyne en el ciclo 1, a 55 70 % en el ciclo 6, y un 20% de J2 con esporas en el testigo del último ciclo. Durante los seis ciclos de cultivo la concentración de esporas de la bacteria en las raíces es alta y estable (Cuadro 22), esta varía entre 1097 x 10 4 /100mg raíces pulverizadas a 3856 x 10 4 .

32

Fig. 3 Regresión lineal entre J2 en 10g raíces vs agallamiento. Babahoyo

0.0

2000.0

4000.0

6000.0

8000.0

10000.0

12000.0

14000.0

16000.0

18000.0

0 1 2 3 4 5 6 7

Índice de Agallamiento

J2 en 10g Raíces

J2 10g Raices Pronóstico J2 10g Raices Lineal (Pronóstico J2 10g Raices)

Fig. 4 Regresión lineal entre J2 en suelo vs índice de agallamiento. Babahoyo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 7.0


J2 en Sue

lo

J2 Suelo Pronóstico J2 Suelo Lineal (Pronóstico J2 Suelo)

J2 en 10 g Raíces = 3266 + 6 (Agallamiento)

J2 en Suelo = 1129 + 0.953 (Agallamiento)

33

Fig. 5 Regresión lineal entre % J2 infectados con Pp en suelo vs agallamiento. Babahoyo

0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0 50.0

0 1 2 3 4 5 6 7

Agallamiento

% J2 Infestad

os con

Pp

%J2 Suelo con Pp Pronóstico %J2 Suelo con Pp Lineal (Pronóstico %J2 Suelo con Pp)

Fig. 6 Regresión lineal entre Pp en 100 mg de raíces vs índice de agallamiento. Babahoyo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0 1 2 3 4 5 6 7


Pp 100 mg Raíces

Pp 100 mg Raices Pronóstico Pp 100 mg Raices Lineal (Pronóstico Pp 100 mg Raices)

% J2 Infectados con Pp = 68.6 – 0.0163 (Índice Agallamiento)

Pp 100 mg Raíces = 3377 – 0.812 (Agallamiento)

34

Cuadro 20. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y Coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en suelo, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en la Universidad Técnica de Babahoyo.



Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 263 1838 b 1087 300 b 200 b 337 b 679 b 2. La Concordia 188 1088 b 1275 450 b 350 b 437 b 631 b 3. Quinindé 413 975 b 2050 350 b 250 b 412 b 742 b 4. Boliche 413 1200 b 1562 300 b 300 b 387 b 694 b 5. Guarapal 200 1037 b 1662 350 b 262 b 312 b 637 b 6. Mezcla 15 188 1413 b 1437 500 b 250 b 325 b 686 b 7. Testigo sin Pp 218 2537 a 3437 850 a 4612 a 3750 a 2567 a CM 31.707 217.563 267.004 68.17 1508.95 1018.35 1005.30 C.V. % 23.36 19.58 23.74 14.79 17.25 12.46 8.67 Signific. estadística ns * ns ** ** ** ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan.

Cuadro 21. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficiente de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne del suelo infectados con P. penetrans, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en Babahoyo.


% Meloidogyne (J2) con P. penetrans en suelo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 10 20 48 52 50 60 2. La Concordia 9 21 44 49 52 70 3. Quinindé 8 16 43 46 49 55 4. Boliche 13 16 54 43 48 60 5. Guarapal 6 16 54 40 40 55 6. Mezcla 15 9 15 38 54 50 55 CM 50.989 33.596 47.907 42.017 13.233 14.263 C.V. % 43.89 23.90 16.13 14.95 8.28 7.43 Significación estadística ns ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron arcoseno. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

35

Cuadro 22. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del número de esporas de P. penetrans en las raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en la Universidad Técnica de Babahoyo.



Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 892 b 1010 1225 b 1345 b 1653 2147 1379 2. La Concordia 2053 ab 933 1677 b 2050 ab 2389 3033 2022 3. Quinindé 1703 b 1658 2105 a 1903 b 2361 2978 2118 4. Boliche 2300 ab 1097 1511 b 2200 ab 2178 2880 2028 5. Guarapal 1669 b 1450 2144 a 2667 ab 2797 3119 2308 6. Mezcla 15 3856 a 2502 1200 b 3556 a 1978 2730 2637 CM 110.137 74.833 19.886 22.320 34.763 23.559 C.V. % 23.96 23.63 11.12 15.06 12.62 9.21 Signif. estadística * ns ** ** ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron a √ ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

En las Figuras 7 y 8 se presentan las curvas de regresión lineal entre el porcentaje de J2 con esporas y la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces y suelo respectivamente (Anexo, 9 y 10). También se determinó que las poblaciones del nematodo disminuyeron conforme aumentó el porcentaje de nematodos infectados y la concentración de esporas en las raíces (Fig. 9 y 10, anexos 11 y 12). Estas correlaciones también dejan determinado que al haber mayor liberación de esporas al suelo habrá un mayor número de nematodos infectados (Fig. 11, Anexo 13).

En la producción (peso de frutos de tomate y semilla de fréjol) no hubo diferencia estadística entre tratamientos, sin embargo en los ciclos 4 y 5 de fréjol de los tratamientos Pasteuria (Cuadro 23) hubo mayor producción que en el testigo. En tomate, los tratamientos Pasteuria produjeron en un rango de 62750 68750 kg/ ha, y en el testigo 55250 kg/ha.

En Babahoyo, la incorporación de P. penetrans en el campo permitió una significativa multiplicación de las esporas de la bacteria y alto número de especímenes infectados, por lo que hubo una excelente supresión del nematodo en el suelo. Posiblemente estos resultados tengan relación con dos factores: homogénea densidad poblacional al inicio del ensayo, solamente hubo presencia de M. incognita. Con la gran cantidad de P. penetrans en las raíces que van a ser liberadas al suelo en el ciclo 6 se obtendrá una mayor supresión del nematodo. Según Chen et al., 1998, con aproximadamente 2 x 10 6 endosporas maduras que se liberan al suelo con solo romperse una hembra y si cada planta contiene 1 a 50 hembras del nematodo infectadas, significa que una sola planta puede liberar entre 10 7 a 10 8 endosporas dentro del suelo. Con alta densidad de endosporas en el suelo y una población susceptible del nematodo la supresión será altamente significativa como ocurre en Babahoyo.

36

Fig. 7 Regresión lineal entre % J2 infectados con Pp en suelo vs J2 10g raíces. Babahoyo

0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

25.0

30.0

35.0

40.0

45.0

0 2000 4000 6000 8000 10000 12000 14000 16000 18000

J2 10g Raíces

% J2 Infestad

os con

Pp

%J2 Suelo con Pp Pronóstico %J2 Suelo con Pp Lineal (Pronóstico %J2 Suelo con Pp)

F ig . 8 Reg res ió n l in ea l en t re % J 2 in fec tad o s c o n Pp en s u e lo v s J 2 s u e lo . B ab ah o yo

0 .0

5 .0

10 .0

15 .0

20 .0

25 .0

30 .0

35 .0

40 .0

45 .0

0 500 1000 1500 2000 2500 3000

J 2 Su e lo

%J2 In

festad

os con

Pp

%J2 Sue lo con Pp P ronós tico % J2 Sue lo con Pp L inea l (P ronós tico % J2 Sue lo con Pp)

%J2 Infectados = 59.3 – 0.00266 (J2 10 g Raíces)

% J2 Infectados con Pp = 49.3 – 0.0171 (J2 en Suelo)

37

Fig. 9 Regresión lineal entre Pp en 100 mg raíces vs J2 en 10g raíces. Babahoyo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 2000.0 4000.0 6000.0 8000.0 10000.0 12000.0 14000.0 16000.0 18000.0

J2 en 10g Raices

Pp 100 mg Raíces


Pp en 100 mg = 3056 – 0.148 (J2 en 10 g Raíces)

Fig. 10 Regresión lineal entre Pp en 100 mg raíces vs J2 en suelo. Babahoyo

500.0

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 500.0 1000.0 1500.0 2000.0 2500.0 3000.0

J2 en Suelo

Pp en 100 m

g Raíces


Pp en 100 mg Raíces = 2469 – 0.909 (J2 en Suelo)

38

Fig. 11 Regresión lineal entre Pp en 100 mg de raíces vs % J2 infectados con Pp en suelo. Babahoyo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 40.0 45.0

% J2 infestados con Pp

Pp 100 mg raices


Cuadro 23 Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y Coeficientes de variación (CV) de la producción de los cultivos, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en Babahoyo.


Producción kg / ha 2000 2001 2002 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol

1. Nueva Colonia 1500 2025 68750 2000 2100 2. La Concordia 1875 2437 63250 2297 2150 3. Quinindé 1575 2437 62750 2497 2212 4. Boliche 1437

1575 1737 65875 2150 2115

5. Guarapal 2075 63750 2725 2462 6. Mezcla 15 1875 2375 66750 2477 2482 7. Testigo sin Pp 1500 2225 55250 1990 1532 CM 0.021 0.043 11.998 0.097 0.064 C.V. % 16.62 24.83 8.710 23.02 19.91 Signific. Estadística ns ns ns ns ns El análisis estadístico se realizó en kg / parcela. ns = no significativo. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

Pp = 32 + 47.5 (% J2 Infectados con Pp)

39

7.2.3. Introducción de P. penetrans en el Valle del Catamayo

En la investigación realizada en el Valle del Catamayo no hubo diferencia estadística en el índice de agallamiento en las raíces (Cuadro 24), se determinó menor agallamiento a partir del ciclo 4. En este lugar al igual que en la Península de Santa Elena, se incrementaron las poblaciones de Pratylenchus (lesionador de raíces) y Rotylenchulus reniformis (agallador). Además, se observó un ligero ataque de Fusarium, lo que posiblemente influyó en el buen comportamiento de Pasteuria.

En las poblaciones de Meloidogyne en 10 g de raíces no hay diferencia estadística (Cuadro 25) y solamente en el ciclo 6 (tomate) se ve que los tratamientos Pasteuria tienen una apreciable población inferior al testigo.

En la densidad poblacional de Meloidogyne en el suelo (Cuadro 26) no hay diferencia significativa entre tratamientos. Numéricamente desde el ciclo 4 las poblaciones se disminuyen considerablemente pero también ocurre con el testigo, lo que puede ser atribuido a la invasión de otros géneros de nematodos y hongos. Sin embargo se ve que hay un porcentaje de nematodos en el suelo (Cuadro 27) que están infectados desde el 5 11% en ciclo 1 hasta el 35 37 % en el ciclo 6.

La mayor concentración de esporas en las raíces esta en el ciclo 1 (fréjol) y en general la población Guarapal y mezcla presentan mayor multiplicación (Cuadro 28).

Con respecto a la producción, no se encontró diferencia estadística entre tratamientos (Cuadro 29). Se determinó que la producción de fréjol disminuyó conforme aumentaron los ciclos de cultivo mientras que la producción de tomate aumentó con el paso de los ciclos. Esto concuerda con lo antes mencionado, el fréjol es un excelente hospedero de Pratylenchus y Rotylenchulus y susceptible a hongos del suelo, lo que hace que los resultados del Valle del Catamayo sean muy parecidos a los de la Península de Santa Elena por presentarse los mismos problemas fitosanitarios colaterales al utilizar solamente un específico agente biológico controlador de nematodos.

Correlaciones de todas las variables evaluadas (Anexo 14) determinaron que las densidades poblacionales de Meloidogyne en el suelo (J2) disminuyeron conforme aumentó el porcentaje de nematodos infectados con las esporas en el suelo (Fig. 12, Anexo 15) y por el incremento de la concentración de esporas en las raíces (Fig. 13, Anexo 16), ya que estas dos últimas variables están estrechamente relacionadas como se representa en la curva de regresión lineal en la Fig. 14, Anexo 17.

40

Cuadro 24. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en seis ciclos de cultivo, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Valle del Catamayo, provincia de Loja


Índice de Agallamiento / Planta / Ciclo de Cultivo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 5.6 5.4 1.8 4.52 1.50 1.45 2. La Concordia 5.6 6.1 3.5 6.40 1.80 2.47 3. Quinindé 5.5 7.5 4.4 5.52 2.00 2.25 4. Boliche 5.0 5.2 1.7 3.70 1.60 1.20 5. Guarapal 6.0 6.7 4.0 6.47 1.52 2.10 6. Mezcla 15 6.3 6.3 3.0 5.47 1.10 1.30 7. Testigo sin Pp 5.5 6.5 2.9 4.17 1.20 1.57 CM 0.618 2.431 4.036 4.667 0.201 1.00 C.V. % 16.39 15.80 33.79 23.82 47.62 50.44 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

Cuadro 25. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en raíces en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Valle del Catamayo.



Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 6075 18200 1701 6550 125 600 5542 2. La Concordia 6375 18550 1826 7550 212 725 5873 3. Quinindé 9200 28825 2824 7638 162 712 8060 4. Boliche 4300 26925 1328 4925 362 562 6400 5. Guarapal 3875 30325 1452 7312 125 612 7536 6. Mezcla 15 6050 29350 1618 8062 175 750 7667 7. Testigo sin Pp 9025 41075 1867 7738 275 1012 10165 CM 648.265 3449.16 44,071 297.882 28.698 34.923 648.265 C.V. % 27.83 31.90 18.56 17.65 38.53 30.50 15.73 Signific. estadística ns Ns ns ns ns ns * Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

41

Cuadro 26. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y oeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en suelo en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Valle del Catamayo, Provincia de Loja.



Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 1100 1425 b 375 113 162 75 b 542 2. La Concordia 1013 2200 b 325 119 250 106 ab 668 3. Quinindé 1587 2963 b 337 188 112 75 b 877 4. Boliche 1600 1413 b 325 119 112 31 b 600 5. Guarapal 1200 3275 b 350 131 287 137 ab 897 6. Mezcla 15 1275 4588 b 337 144 200 69 b 1102 7. Testigo sin Pp 1713 7200 a 612 188 362 312 a 1731 CM 56.63 1146.39 24.491 6.695 35.785 53.164 86.650. C.V. % 25.24 33.53 15.83 27.63 34.16 31.36 25.24 Signific. estadística ns * ns ns ns ** ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 27. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne del suelo infectados con P. penetrans, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Valle del Catamayo, Provincia de Loja.


% Meloidogyne (J2) con P. penetrans en suelo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 11 9 b 11 35 30 a 36 2. La Concordia 11 15 a 11 26 27 ab 35 3. Quinindé 11 15 a 14 41 26 ab 37 4. Boliche 10 12 ab 11 35 24 b 36 5. Guarapal 5 14 a 11 30 32 a 36 6. Mezcla 15 10 17 a 13 39 26 ab 37 CM 1.431 26.215 4.047 46.507 16.489 1.231 C.V. % 26.92 12.79 25.96 17.56 21.78 9.71 Signific. estadística ns * ns ns ** ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

42

Cuadro 28. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del número de esporas de P. penetrans en las raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en el Valle del Catamayo.


P. penetrans X 10 4 / 100 mg raíces

X 2000 2001 2002 2003 Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 1599 b 927 b 764 1780 ab 3025 a 678 b 1462 2. La Concordia 3546 ab 719 b 996 1797 ab 2583 ab 931 b 1762 3. Quinindé 2886 ab 783 b 858 1900 a 2078 ab 1236 ab 1623 4. Boliche 3017 ab 514 b 664 966 b 2644 ab 2031 ab 1639 5. Guarapal 6331 a 811 b 747 1825 a 1980 b 1808 ab 2250 6. Mezcla 15 5665 a 933 a 630 906 b 1393 b 2770 a 2049 CM 867.976 5.884 21.962 158.205 165.460 380.070 C.V. % 8.76 8.74 11.26 12.58 11.67 14.05 Sign. estadística ** ** ns ** ** ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron a √ ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01) Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan.

Cuadro 29. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes coeficientes de variación (CV) de la producción de los cultivos, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en el Valle del Catamayo.


Producción kg / ha 2000 2001 2002 2003 Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 475.0 15050 383.0 21450 262.5 25900 2. La Concordia 477.5 15125 211.5 23275 456.2 28700 3. Quinindé 626.0 15350 494.0 14950 235.0 26900 4. Boliche 519.0 16350 518.2 21325 297.5 37475 5. Guarapal 515.0 16125 410.2 20325 406.2 32150 6. Mezcla 15 587.5 20175 391.0 22700 290.0 22675 7. Testigo sin Pp 652.5 16375 377.5 18700 405.0 25850 CM 0.003 2.003 0.003 5.131 0.005 15.367 C.V. % 19.85 19.7 20.15 30.74 48.72 28.39 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

43

Fig. 12 Regresión lineal entre %J2 en suelo infectados vs J2 suelo. Catamayo

0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

25.0

30.0

0 500 1000 1500 2000 2500

J2 Suelo

%J2 Sue

lo Pp

%J2 Suelo Pp Pronóstico %J2 Suelo Pp Lineal (Pronóstico %J2 Suelo Pp)

Fig. 13 Regresión lineal entre Pp en 100 mg vs J2 suelo. Catamayo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 500.0 1000.0 1500.0 2000.0 2500.0

J2 Suelo

Pp en 100 mg Raices

Pp en 100 mg Raices Pronóstico Pp en 100 mg Raices Lineal (Pronóstico Pp en 100 mg Raices)

%J2 Suelo Infectados = 25.3 – 0.00764 (J2 Suelo)

Pp en 100 mg Raíces = 2187 – 0.705 (J2 suelo)

44

Fig. 14 Regresión lineal entre % J2 en suelo infectados con Pp vs Pp en 100 mg de raíces. Catamayo

0.0

500.0

1000.0

1500.0

2000.0

2500.0

3000.0

0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0

%J2 Suelo con Pp

Pp en 100 mg Raices

Pp en 100 mg Raices Pronóstico Pp en 100 mg Raices Lineal (Pronóstico Pp en 100 mg Raices)

7.2.4. Intr oducción de P. penetrans en el Valle del Chota

En el campo experimental donde se desarrolló esta investigación hubo presencia del nematodo falso agallador Nacobbus aberrans, motivo por el cual no se presentan datos de índice de agallamiento. Con respecto a la población de Meloidogyne en 10 g de raíces no hay diferencia estadística entre tratamientos (Cuadro 30). Se determinó que desde el tercer ciclo de cultivo (tomate) las poblaciones del nematodo se reducen, manteniendo una diferencia numérica apreciable entre tratamientos Pasteuria y testigo, lo que representa en el promedio general una reducción del 44 %. En las poblaciones de Meloidogyne en el suelo no hubo diferencia estadística (Cuadro 31), lo que se pudo determinar es que en el ciclo 2 (tomate) la población fue alta y después hubo una gran reducción de la población, con un significante margen de diferencia entre tratado y testigo.

El porcentaje de nematodos con esporas se incrementó conforme pasaron los ciclos de cultivo (Cuadro 32) desde 1.1 2.5 % J2 en el ciclo 1, a 40 54 % en el ciclo 6. La concentración de esporas en las raíces fue muy variable entre ciclos (Cuadro 33) presentaron mayor cantidad en ciclos alternados sean estos fréjol o tomate (2, 4 y 6), cabe destacar que a pesar de la heterogeneidad en la multiplicación de Pasteuria en el Chota, ésta es importante para utilizarla en el manejo integrado de Meloidogyne. La producción de semilla de fréjol se duplicó en los dos últimos ciclos de cultivo, siendo la producción de los dos cultivos mayor en los tratamientos Pasteuria que en los testigos. Posiblemente debido a que aparte de reducir la población de Meloidogyne con el uso de Pasteuria, también se redujo la población de Nacobbus con la siembra del fréjol,

Pp en 100 mg Raíces = 61 + 87.6 (%J2 Suelo

45

Cuadro 30. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en raíces en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Juncal, Valle del Chota, en la provincia de Imbabura.



Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 1089 6150 600 325 850 212 1537 2. La Concordia 1357 4950 625 250 812 287 1380 3. Quinindé 1859 2700 500 138 300 325 970 4. Boliche 1139 5375 650 338 400 387 1317 5. Guarapal 2178 3500 575 362 387 187 1198 6. Mezcla 15 720 5125 550 213 850 175 1272 7. Testigo sin Pp 1089 8600 600 1189 1350 825 2275 CM 275.083 639.869 3.580 153.499 165.955 117.347 99.998 C.V. % 36.05 38.01 18.03 36.83 42.66 25.38 25.75 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

Cuadro 31. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de Meloidogyne en suelo en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans. en el Juncal, Valle del Chota, provincia de Imbabura.



Fréjol Tomate Fréjol Tomate Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 188 2950 100 75 b 262 112 b 615 2. La Concordia 163 2338 100 250 ab 300 87 b 540 3. Quinindé 338 1700 100 88 b 175 100 b 417 4. Boliche 188 3088 100 163 b 312 150 b 667 5. Guarapal 263 1938 75 288 ab 600 112 b 546 6. Mezcla 15 375 3563 75 125 b 475 75 b 781 7. Testigo sin Pp 238 3413 125 300 a 1237 637 a 992 CM 12.325 249.966 3.203 50.624 188.283 125.673 54.133 C.V. % 43.70 35.38 23.44 21.46 38.39 32.40 27.70 Signific. estadística ns ns ns ** ns ** ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

46

Cuadro 32. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficiente de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne del suelo infectados con P. penetrans, en función de la introducción de cinco poblaciones de P. penetrans en el Juncal, Valle del Chota, provincia de Imbabura.


% Meloidogyne (J2) con P. penetrans en suelo 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 1.3 15.0 10 18 16 54 2. La Concordia 1.3 21.2 9 21 12 40 3. Quinindé 2.5 15.0 8 20 15 49 4. Boliche 1.9 11.2 9 23 19 44 5. Guarapal 1.3 13.8 14 16 19 47 6. Mezcla 15 1.1 10.0 10 14 15 45 CM 55.642 33.653 8.620 10.855 30.961 29.050 C.V. % 173.2 27.02 16.30 13.11 24.07 12.56 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron arcoseno ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

Cuadro 33. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del número de esporas de P. penetrans en las raíces, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en el Juncal, Valle del Chota, provincia de Imbabura.



Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate 1. Nueva Colonia 292 b 1799 a 333 b 2350 ab 356 1295 ab 1071 2. La Concordia 503 a 1041 ab 492 ab 2385 ab 505 2780 ab 1284 3. Quinindé 439 ab 1211 ab 658 ab 2928 a 610 1970 ab 1303 4. Boliche 456 ab 558 b 453 ab 2314 ab 545 2839 a 1194 5. Guarapal 323 b 1013 ab 708 a 2714 ab 802 1016 ab 1096 6. Mezcla 15 517 a 1133 ab 528 ab 2050 b 914 1483 ab 1104 CM 247.061 707.933 319.004 1419.36 400.10 744.44 448.725 C.V. % 22.56 23.10 15.77 13.85 14.89 14.48 8.17 Signif. estadística ** ** ** ** ** ** ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se transformaron a √ ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

47

Cuadro 34 Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la producción de los cultivos, en función de la introducción de cinco poblaciones de la bacteria en el Juncal, Valle del Chota, provincia de Imbabura.


Producción kg / ha 2000 2001 2002 2003 Fréjol Fréjol Tomate Fréjol Fréjol Tomate

1. Nueva Colonia 372 575 62275 1330 970 50000 2. La Concordia 412 555 50475 1440 1250 50000 3. Quinindé 420 537 51150 1597 1125 55000 4. Boliche 422 637 50100 1322 1092 42500 5. Guarapal 575 612 53850 1235 1362 50000 6. Mezcla 15 485 575 52425 1330 1297 55000 7. Testigo sin Pp 357 530 56775 1120 1105 37500 CM 22068.03 8878.98 12.168 13703.63 11939.58 11.583 C.V. % 23.78 23.94 21.548 24.53 17.38 11.04 Signific. estadística ns ns ns ns ns ns ns = no significativo.

Con las correlaciones de las variables (Anexo 18) se determinó que la densidad poblacional de Meloidogyne es menor a mayor porcentaje de nematodos en el suelo infectados con las esporas (Fig. 15), el análisis de regresión esta en el Anexo 19 y a mayor concentración de esporas de P. penetrans en las raíces también hay mayor número de nematodos del suelo infectados (Fig. 16), tanto el análisis de regresión como el de varianza están en el Anexo 20.

Finalmente, al realizar un análisis del porcentaje de nematodos infectados y la concentración de esporas en las raíces en función de las zonas, cultivo de tomate (2 ciclos), ciclos de cultivos, y las interacciones se puede observar en el Cuadro 35 que no hubo diferencias estadísticas de los tratamientos en las diferentes zonas probadas; así mismo los tratamientos por cultivos y ciclos de cultivo. Esto prueba la adaptación de P .penetrans en las diferentes zonas agrícolas; resultado muy importante ya que los diferentes factores climáticos y características de suelo y agua no afectaron de manera alguna al porcentaje de J2 con esporas adheridas.

Para el caso de la concentración de P. penetrans, así mismo resultó que no es dependiente del lugar ni el cultivo (Cuadro 36). Esto prueba que la adherencia de las esporas si infectan, colonizan y cumplen su ciclo para la producción final en todas las zonas.

En el valle del Catamayo con la introducción de P. penetrans se redujo la población del nematodo y se multiplicó, sin embargo la incidencia de Pratylenchus y Rotylenchulus reniformis en el cultivo de fréjol impidió una mejor reducción de la población del nematodo. En el valle del Chota, P. penetrans realizó un buen control del nematodo, aunque en tomate la incidencia de Nacobbus aberrans también influyó en una mejor multiplicación de la bacteria, aunque este caso, el fréjol fue un hospedero pobre de Nacobbus.

48

Fig. 15 Regresión lineal entre J2 infectados en suelo vs J2 en raíces. El Chota

0.0

5.0

10.0

15.0

20.0

25.0

0.0 50.0 100.0 150.0 200.0 250.0 300.0 350.0 400.0 450.0 500.0

J2 10 g raices

% J2 su

elo Pp

%J2 Suelo Pp Pronóstico %J2 Suelo Pp Lineal (Pronóstico %J2 Suelo Pp)

Fig. 16 Regresión lineal entre Pp en 100 mg de raíces vs J2 con Pp en suelo. El Chota

0.0 200.0 400.0 600.0 800.0 1000.0 1200.0 1400.0 1600.0 1800.0

0.0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0

%J2 Suelo Pp

Pp 100 mg Raices


Pp 100 mg Raíces = 87 + 69.3 (%J2 suelo Infectados)

%J2 Suelo Infectados = 2.79 + 0.0325 (J2 10 g Raíces)

49

Cuadro 35. Análisis de varianza para % J2 infectados con P. penetrans.

F. V. DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Tratamientos 6 7821.24 7821.24 1303.54 26.68 ** Zona 3 5447.70 5447.70 1815.90 37.16 ** Cultivo 1 5611.18 5611.18 5611.18 114.83 ** Ciclo 1 9685.95 9685.95 9685.95 198.22 ** Trat * Zona 18 1228.21 1228.21 68.23 1.40 ns Trat * Cult 6 141.11 141.11 23.52 0.48 ns Trat * Ciclo 6 490.08 490.08 81.68 1.67 ns Zona * Cult 3 532.86 532.86 177.62 3.63 ** Zona * Ciclo 3 243.06 243.06 81.02 1.66 ns Cult * Ciclo 1 25.32 25.32 25.32 0.52 ns Error 63 3078.44 3078.44 48.86 Total 111 34305.14

ns = No significativo. ** = Hay diferencia estadística altamente significativo (P<0.01)

Cuadro 36. Análisis de varianza para concentración de esporas de P. penetrans en 100 mg raíces

F. V. DF Seq SS Adj SS Adj MS F P

Tratamientos 6 48611588 48611588 8101931 22.04 0.000 Zona 3 17410955 17410955 5803652 15.79 0.000 Cultivo 1 3400140 3400140 3400140 9.25 0.003 Ciclo 1 10061708 10061708 10061708 27.37 0.000 Trat * Zona 18 6218565 6218565 345476 0.94 0.537 Trat * Cult 6 1660023 1660023 276670 0.75 0.610 Trat * Ciclo 6 2007214 2007214 334536 0.91 0.494 Zona * Cult 3 6764637 6764637 2254879 6.13 0.001 Zona * Ciclo 3 2091582 2091582 697194 1.90 0.139 Cult * Ciclo 1 2949543 2949543 2949543 8.02 0.006 Error 63 23159603 23159603 36763 Total 111 124335557

* * Altamente significativo (P<0.01). ns = No significativo

50

A. Juveniles infectados esporas de P. penetrans

0

10

20

30

40

50

60

1 2

Ciclos

# de

Esp

oras Adh

eridas

El Azúcar Babahoyo Chota Catamayo

B. Esporas de P. penetrans en 100 mg

0

500

1000

1500

2000

2500

3000

1 2

Ciclos

# de

Esp

oras en 100 mg

El Azúcar Babahoyo Chota Catamayo

Fig. 17. Relación de nematodos infectados con P. penetrans (A) y concentración de esporas en 100 mg raíces (B) correspondientes a dos ciclos de tomate, en función de los ciclos de cultivo en las cuatro zonas de introducción de la bacteria.

51

7.3. Eficacia de metodologías de aplicación de P. penetrans en dos sistemas de producción, en campos de amplia super ficie.

7.3.1. Metodologías de aplicación de P. penetrans en cultivo de tr asplante (tomate).

No se encontró diferencia estadística en el índice de agallamiento evaluado durante los cuatro ciclos continuos de tomate. Este fluctuó entre 1.3 a 3.9 en los tratamientos Pasteuria y en el testigo de 2.6 a 5.0 (Cuadro 35).

La población de Meloidogyne en raíces fue estadísticamente diferente en los ciclos 3 y 4; sin embargo los métodos de aplicación de Pasteuria fueron iguales entre ellos. Según los valores promedio de las cuatro evaluaciones, la reducción de la población con relación al testigo fluctuó de 69.6% con aplicación en semillero convencional a 52 % con aplicación en semillero en vaso (Cuadro 36). En la población de nematodos en suelo, solamente en el ciclo 4 hubo diferencia estadística. Las poblaciones se mantuvieron bajas en los tratamientos Pasteuria, mientras que en el testigo aumentaron progresivamente, siendo los tratamientos con aplicación en semillero convencional e incorporado en el sitio definitivo (112 J2/100 cm 3 suelo) diferentes al testigo. Considerando el promedio general, la reducción de la población fue del 46 % al 53 % con el uso de P. penetrans (Cuadro 37)

Cuadro 37. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en tomate, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E. E. Boliche.

Tratamientos Metodologías de Aplicación de

P. penetrans (Pp)

Agallamiento / planta / Ciclo cultivo 2001 2002 2003 Tomate Tomate Tomate Tomate

1. Pp en semillero convencional 3.6 1.8 b 2.2 2.2 2. Pp en semillero de vasos 3.9 1.3 b 2.8 2.5 3. Pp incorporado en sitio definitivo 3.7 1.6 b 2.1 2.4 4. Pp en el hoyo al trasplante 3.4 1.5 b 2.7 2.0 5. Testigo absoluto 3.2 2.6 a 2.8 4.9 CM 0.239 0.941 0.537 2.874 C.V. % 28.90 21.22 80.23 61.43 Significación estadística ns ** ns ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

52

Cuadro 38. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces tomate, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E E. Boliche.


P. penetrans (Pp)

Meloidogyne (J2) / 10 g de raíces

2001 2002 2003 Media

% control Tomate Tomate Tomate Tomate

1. Pp en semillero convencional 6462 300 1362 b 1100 b 2306 b 69.6 2. Pp en semillero de vasos 8562 288 3313 ab 1800 b 3491 b 52.5 3. Pp incorporado en sitio definitivo 7275 313 2938 ab 1625 b 3038 b 58.6 4. Pp en el hoyo al trasplante 6675 300 3700 ab 2212 b 3222 b 56.1 5. Testigo absoluto 7787 387 11087 a 10125 a 7346 a CM 357.440 4.721 2559.88 967.837 770.29 C.V. % 27.16 24.38 18.24 14.58 26.76 Significación estadística ns ns ** ** * Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x. Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 39. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en suelo, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E E. Boliche.


P. penetrans (Pp

Meloidogyne (J2) / 100 cm 3 de Suelo 2001 2002 2003

Media %

control Tomate Tomate Tomate Tomate

1. Pp en semillero convencional 200 188 162 ab 112 b 165 46 2. Pp en semillero de vasos 137 150 175 ab 137 ab 150 51 3. Pp incorporado en sitio definitivo 137 250 81 b 112 b 145 53 4. Pp en el hoyo al trasplante 175 238 125 ab 175 ab 153 50 5. Testigo absoluto 125 275 325 a 500 a 306 CM 5.244 11.720 43.401 97.983 14.660 C.V. % 24.50 17.81 18.25 14.18 20.53 Significación estadística ns ns ** ** ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

53

El porcentaje de nematodos infectados con Pasteuria fluctuó de 1117 en el ciclo 1 a 7580 en el ciclo 4 (Cuadro 38), lo que coincide con el mayor contenido de esporas en las raíces (Cuadro 39). En la producción de frutos no hubo diferencia estadística entre tratamientos (Cuadro 40), solamente se observó un ligero incremento del ciclo 1 al 3. El ciclo cuatro no se reporta, puesto que estuvo muy afectado por el insecto Prodiplosis longifila ("negrita").

Cuadro 40. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne infectados con P. penetrans en suelo, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E E. Boliche.


P. penetrans (Pp)

% Meloidogyne (J2) con P. penetrans, en suelo 2001 2002 2003 Tomate Tomate Tomate Tomate

1. Pp en semillero convencional 17 21 a 70 75 a 2. Pp en semillero de vasos 15 20 a 80 85 a 3. Pp incorporado en sitio definitivo 11 19 a 75 80 a 4. Pp en el hoyo al trasplante 12 18 a 62 80 a 5. Testigo absoluto 0 0 b 25 35 b CM 11.659 4.555 28.005 15.630 C.V. % 18.36 9.65 12.66 6.28 Significación estadística ns * ns * Para el análisis estadístico los valores originales se transformaron arcoseno. * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05)

Cuadro 41. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la concentración de esporas de P. penetrans en raíces de tomate, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E E. Boliche.


P. penetrans (Pp)

P. penetrans X 10 4 / 100 mg raíces 2001 2002 2003 Total Tomate Tomate Tomate Tomate

1. Pp en semillero convencional 500 700 ab 3014 a 3800 ab 8014 2. Pp en semillero de vasos 506 1600 a 1081 b 3200 ab 6387 3. Pp incorporado en sitio definitivo 414 620 ab 2370 a 4500 a 7904 4. Pp en el hoyo al trasplante 447 535 b 1611 ab 2855 b 5448 CM 15.036 20.629 34.528 42.354 C.V. % 18.59 16.06 13.42 11.112 Significación estadística ns ** ** ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x+1. ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01) Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a Duncan.

54

Cuadro 42 Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la producción de tomate, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la E E. Boliche.


P. penetrans (Pp)

Producción kg / ha 2001 2002 Tomate Ciclo 1

Tomate Ciclo 2

Tomate Ciclo 3

1. Pp en semillero convencional 16719 22500 29219 a 2. Pp en semillero de vasos 17812 21906 26406 a 3. Pp incorporado en sitio definitivo 18906 26906 24375 a 4. Pp en el hoyo al trasplante 15937 20469 27500 a 5. Testigo absoluto 17812 20000 21250 b CM 2.531 1.562 2.679 C.V. % 17.57 9.04 4.14 Significación estadística ns ns ** ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

7.3.2. Metodologías de aplicación de P. penetrans en cultivos de alta densidad de siembra (soya fr éjol)

Los diferentes métodos de aplicación de Pasteuria en el cultivo de soya presentaron diferencia estadística en índice de agallamiento (Cuadro 41); solamente la aplicación en presiembra (tratamiento 4) con índice de agallamiento 21 fue diferente al testigo (4.5). Con respecto a la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces, en el tercer ciclo hubo diferencia estadística, aunque las metodologías de aplicación fueron iguales entre ellas (Cuadro 42); en este ciclo, la reducción de la población del nematodo en las raíces fue del 35 al 70% en los tratamientos Pasteuria y en el suelo varió de 46 al 71% aplicado en presiembra (Cuadro 43).

El porcentaje de nematodos (J2) infectados con P. penetrans (ciclo 3) fue del 55 70 %, siendo los métodos de aplicación estadísticamente iguales entre sí (Cuadro 44). En la concentración de esporas en las raíces, no hubo diferencia estadística entre los métodos de aplicación, lo que se pudo observar es que la cantidad de esporas aumentó en todos los tratamientos conforme pasaron los ciclos de cultivo (Cuadro 45). En el último ciclo de soya, el peso de grano seco en el testigo se redujo en un 6.6 % comparado con los tratamientos Pasteuria (Cuadro 46) que fueron iguales entre ellos.

55

Cuadro 43. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en soya y fréjol, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

Índice de agallamiento / planta

2002 2003 Soya Fréjol Soya

1. Pp en la semilla + Nitragin, aplicada con sembradora 1.3 4.8 2.5 ab 2. Pp en la semilla + Nitragin, aplicada con voleadora 2.0 2.7 3.0 ab 3. Pp en la semilla + Nitragin aplicada al voleo manual 1.0 5.3 3.5 ab 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 1.4 4.2 2.1 b 5. Testigo absoluto 2.0 4.5 4.5 a CM 0.720 3.787 3.409 C.V. % 42.60 35.54 18.75 Significación estadística ns ns ** Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 44. Medias de tratamientos, Cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

Meloidogyne (J2) / 10 g raíces 2002 2003 %

Soya Fréjol Soya control 1. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con sembradora 3175 6637 3850 ab 63 2. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con voleadora 4962 8900 5000 ab 52 3. Pp en la semilla + Nitragín aplicada al voleo manual 3887 13825 3100 b 70 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 3175 18537 6750 ab 35 5. Testigo absoluto 4750 8237 10350 a CM 139.388 987.946 1333.97 C.V. % 34.71 32.91 10.68 Significación estadística ns ns ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x. Valores en una columna seguido por una misma letra no difieren estadísticamente de acuerdo a la Prueba de Duncan. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

56

Cuadro 45. Medias de tratamientos, Cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en suelo, en función de metodologías de aplicación de P .penetrans en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

Meloidogyne (J2)/100 cm 3 suelo 2002 2003 %

Soya Fréjol Soya control 1. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con sembradora 287 312 150 b 57 2. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con voleadora 750 387 187 b 46 3. Pp en la semilla + Nitragín aplicada al voleo manual 175 450 162 b 54 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 737 550 100 b 71 5. Testigo absoluto 700 425 350 a CM 91.871 106.148 38.772 C.V. % 34.7 32.91 10.68 Significación estadística ns ns ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 46. Medias de tratamientos, Cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne infectados con P. penetrans, en función de metodologías de aplicación de esporas de la bacteria en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

% J2 del suelo con esporas de Pp


1. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con sembradora 19 31.2 70 2. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con voleadora 24 21.2 55 3. Pp en la semilla + Nitragín aplicada al voleo manual 20 31.0 60 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 29 30.0 55 CM 45.282 56.321 62.245 C.V. % 23.69 23.60 32.52 Significación estadística ns ns ns * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

57

Cuadro 47. Medias de tratamientos, Cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del número de esporas de P. penetrans en las raíces, en función de metodologías de aplicación de la bacteria en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

Pp X 10 4 / 100 mg raíces


1. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con sembradora 394 ab 1939 a 2666 ab 2. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con voleadora 602 a 1422 a 3111 a 3. Pp en la semilla + Nitragín aplicada al voleo manual 547 a 2400 a 4443 a 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 594 a 1144 a 4200 a 5. Testigo absoluto 0 b 144 b 444 b CM 442.277 717.963 825.348 C.V. % 20.54 42.75 11.04 Significación estadística ** * ** Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x+1. * = Hay diferencia estadística significativa (P<0.05) ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 48. Medias de tratamientos, Cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la producción de los cultivos, en función de metodologías de aplicación de la bacteria en campo de amplia superficie, en la Universidad Técnica de Babahoyo.


P. penetrans (Pp)

Producción kg / ha


1. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con sembradora 2551 799 4250 2. Pp en la semilla + Nitragín, aplicada con voleadora 2157 1037 4087 3. Pp en la semilla + Nitragín aplicada al voleo manual 2451 1037 4250 4. Pp en presiembra y siembra con sembradora 2363 850 4087 5. Testigo absoluto 2451 837 3892 CM 8.845 95.720 9.565 C.V. % 7.46 39.94 8.03 Significación estadística ns ns ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

58

7.3.3. Metodologías de aplicación de esporas de P. penetrans en frutal (papaya).

Las diferentes metodologías de aplicación de P. penetrans en papaya, no presentaron diferencias estadísticas entre tratamientos en índice de agallamiento, densidad poblacional de Meloidogyne en raíces y suelo, y porcentaje de nematodos infectados con las esporas (Cuadro 47, 48, 49, 50).

La concentración de esporas en las raíces de esta investigación es muy baja comparada con los otros ensayos, dando la impresión que las metodologías de aplicación de esporas utilizadas o la cantidad de esporas aplicadas no es la adecuado para este cultivo, debido posiblemente a que las raíces no se desintegran por largo período, para liberar las esporas al suelo, también puede estar influyendo el sitio de muestreo, puesto que a medida que las plantas desarrollaron en altura, se fue distanciando el sitio de muestreo (51). Los datos de producción no son representativos, solamente se reportó el peso de 50 frutos por parcela (52).

Cuadro 49. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del índice de agallamiento en raíces de papaya, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp)

Índice de agallamiento /planta 2002 2003

90+ 120+ 210+ 360+ 1. Pp en semillero convencional 2.6 1.9 1.0 3.0 2. Pp en funda en vivero 3.0 2.2 1.5 3.0 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 1.7 1.6 2.2 2.0 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 1.2 1.9 2.6 3.0 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 2.4 1.9 1.2 4.0 6. Pp como en 1, 4 y 5 2.4 1.9 2.1 3.0 7. Testigo absoluto 2.5 1.3 2.4 3.0 CM 1.357 0.341 1.705 0.405 CV % 45.52 31.01 39.05 35.96 Significación estadística ns ns ns ns

+ Días después de trasplante en el sitio definitivo ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

59

Cuadro 50. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en raíces de papaya, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de amplia superficie, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp)

Meloidogyne (J2) / 10 g raíces 2002 2003

Promedio 190+ 120+ 210+ 360+

1. Pp en semillero convencional 125 162 212 250 187 2. Pp en funda en vivero 87 225 200 200 178 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 100 87 125 300 153 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 437 212 150 250 262 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 225 125 150 250 187 6. Pp como en 1, 4 y 5 87 312 187 150 184 7. Testigo absoluto 112 137 225 350 206 CM 40.990 12.277 8.102 17.262 3.934 CV % 46.20 47.11 15.56 16.60 17.43 Significación estadística ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x + Días después de trasplante en el sitio definitivo. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

Cuadro 51. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la densidad poblacional de Meloidogyne en suelo, en función de metodologías de aplicación de P. penetrans en campo de papaya, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp)

Meloidogyne (J2) / 100 cm 3 suelo 2002 2003 Promedio

90+ 120+ 210+ 360+

1. Pp en semillero convencional 75 100 87 100 90 2. Pp en funda en vivero 62 125 75 87 87 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 250 87 150 200 172 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 87 137 100 175 125 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 150 75 83 200 127 6. Pp como en 1, 4 y 5 75 150 112 100 109 7. Testigo absoluto 87 100 125 200 128 CM 13.990 6.113 8.742 17.887 3.919 CV % 51.95 25.59 19.75 24.02 15.51 Significación estadística ns ns ns ns ns Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x . + Días después de trasplante en el sitio definitivo. ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

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Cuadro 52. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del porcentaje de Meloidogyne infectados con P. penetrans, en función de metodologías de aplicación de esporas de la bacteria en campo de papaya, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp)

% J2 Meloidogyne con esporas de Pp

90+ 120+ 210+ 360+ Promedio

1. Pp en semillero convencional 15 a 17 a 27 a 35 a 23.5 a 2. Pp en funda en vivero 14 a 21 a 36 a 35 a 26.5 a 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 22 a 21 a 37 a 40 a 30.0 a 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 19 a 20 a 25 a 35 a 24.7 a 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 6 b 12 a 31 a 25 a 18.5 a 6. Pp como en 1, 4 y 5 19 a 24 a 52 a 45 a 35.0 a 7. Testigo absoluto 6 b 6 b 7 b 15 b 8.5 b CM 187.913 132.281 340.907 151.616 171.544 CV % 29.62 20.91 10.93 9.81 12.0 Significación estadística ** ** ** ** ** Para el análisis estadístico los valores originales se transformaron arcoseno + Días después de trasplante en el sitio definitivo ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

Cuadro 53. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) de la concentración de esporas de P. penetrans, en función de metodologías de aplicación de esporas de la bacteria en campo de papaya, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp)

P. penetrans X 10 4 / 100 mg raíces

2002 2003 Total 90+ 120+ 210+ 360+

1. Pp en semillero convencional 125 a 222 a 311 a 319 a 977 a 2. Pp en funda en vivero 128 a 264 a 322 a 350 a 1064 a 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 83 a 258 a 278 a 353 a 972 a 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 161 a 291 a 322 a 327 a 1101 a 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 0 b 67 ab 222 a 283 a 572 ab 6. Pp como en 1, 4 y 5 264 a 372 a 400 a 428 a 1464 a 7. Testigo absoluto 0 b 41 b 44 b 44 b 129 b CM 250.89 91.136 74.727 85.132 102.298 CV % 60.88 10.10 4.87 9.65 19.63 Significación estadística ** ** ** ** ** + Días después de trasplante en el sitio definitivo Para efectuar el análisis estadístico los datos originales se trasformaron a √x+1 ** = Hay diferencia estadística altamente significativa (P<0.01)

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Cuadro 54. Medias de tratamientos, cuadrados medios (CM), significación estadística y coeficientes de variación (CV) del peso de frutos de papaya en función de metodologías de aplicación de P. penetrans, El Azúcar, Península de Santa Elena.


P. penetrans (Pp) Peso de 50 Frutos / Parcela

(kg)

1. Pp en semillero convencional 131.5 ns 2. Pp en funda en vivero 135.0 3. Pp en el hoyo al trasplante, campo 124.2 4. Pp alrededor de planta, al trasplante 116.0 5. Pp a 6 meses trasplante, alrededor planta 134.2 6. Pp como en 1, 4 y 5 123.0 7. Testigo absoluto 121.0 CM 0.453 CV % 6.90 Significación estadística ns ns = No existen diferencias estadísticamente significativas (P>0.05)

En el cultivo de tomate y soya las metodologías de aplicación de la bacteria en campos de amplia superficie probadas, redujeron la densidad poblacional del nematodo. En papaya las aplicaciones de P. penetrans no redujeron con eficacia las poblaciones del nematodo y la multiplicación de la bacteria no progresó, posiblemente la dosis de esporas aplicada fue baja, el sitio de aplicación de las esporas no estuvo acorde con el desarrollo del sistema radical de la papaya, ya que en este cultivo no se puede esperar que las raíces se desintegren para que las esporas se liberen al suelo y estas a su vez infecten a las nuevas generaciones del nematodo como se manejó los otros experimentos.

8. SITUACIÓN INICIAL Y ACTUAL DEL GRUPO META

Situación Inicial

Productores grandes, medianos y pequeños que manejan hortalizas, leguminosas, frutales, flores de corte y de jardines, gramíneas, plantas medicinales, entre otros, tienen problemas en el manejo de Meloidogyne spp., tanto en campo abierto como en cultivos protegidos (invernaderos).

Los medianos y pequeños productores no reconocen los daños que causan los nematodos en las raíces, conocen poco sobre las plantas hospedantes y los factores de diseminación, la única medida de control que utilizan es mediante el uso de nematicidas.

Los grandes productores utilizan nematicidas para reducir el problema.

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Productores, Técnicos relacionados con el manejo de los cultivos, Profesores y estudiantes de las Facultades de Agronomía conocen poco sobre el género Meloidogyne y su enemigo natural Pasteuria penetrans como un potencial agente biocontrolador.

Situación Actual

Algunos Productores y Técnicos, en especial en las zonas donde se realizó la investigación, conocen los síntomas y daños económicos que causa Meloidogyne spp. en los cultivos.

Productores medianos y pequeños conocen como realizar un buen muestreo en los diferentes cultivos, para diagnóstico nematológico.

Productores grandes, medianos y pequeños tienen amplios conocimientos sobre P. penetrans y el manejo en el campo para reducir los niveles poblacionales del nematodo.

Profesores y estudiantes de las tres Universidades Socias del Proyecto, se han capacitado en el manejo Integrado de nematodos.

9. ESTIMACIÓN DE EFECTOS E IMPACTOS

Con la investigación realizada, aplicaciones de P. penetrans reducen en lato porcentaje los niveles poblacionales de Meloidogyne spp. en campo abierto de poca y amplia superficie.

El monocultivo, cultivos intercalados y en rotación, favorecen el manejo de P. penetrans para su multiplicación.

Con una sola aplicación de P. penetrans en los campos, este queda infectado para los siguientes ciclos de cultivo.

A los cuatro ciclos de cultivo después de aplicaciones de P. penetrans, se incrementa la producción del cultivo.

Se incrementó la interacción científica de los Técnicos y Productores en el área de Nematología

INIAP capacitó a personal de planta de las Universidades Socias para continuar trabajando en esta Disciplina.

Se ha fortalecido la relación entre las Universidades Socias y los productores de las zonas de investigación con INIAP.

La introducción de P. penetrans en los valles de la Sierra es favorable para reducir las poblaciones del nematodo.

En las Universidades socias y productores hay expectativas para que P. penetrans llegue a los agricultores.

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10. PRODUCTOS DEL PROYECTO

Producto Título

1 Boletín divulgativo Pasteuria penetrans el enemigo más promisorio del nematodo agallador de raíces Meloidogyne spp. Boletín divulgativo No. 290, Nov, 2001

1 Boletines Técnico Poblaciones de Pasteuria penetrans de amplia cobertura para infectar al nematodo Meloidogyne spp. No. 92 Julio, 2003.

1 Boletines Técnico Control biológico del nematodo Meloidogyne spp. con La bacteria Pasteuria penetrans en campos de producción.

1 Artículo en revista científica Evaluación de la sensibilidad de varias poblaciones de Meloidogyne spp. de diferentes especies de cultivo a cuatro poblaciones de P. penetrans. En Memorias del XI Seminario Nacional de Sanidad Vegetal. Babahoyo Sep. 2001.

Evaluación de la sensibilidad de varias poblaciones de Meloidogyne spp. frente a diez poblaciones de Pasteuria penetrans nativas de Ecuador. Nematrópica 31(2), 2001.

1 Artículo en revista Agropecuaria Alternativa biológica para el control del nematodo Meloidogyne con Pasteuria penetrans. Revista Cultivo No. 31, Sept. 2001.

1 Presentaciones en Congreso Eficacia de la introducción de Pasteuria penetrans en el Internacional de Nematología control de Meloidogyne spp. en nuevas zonas agrícolas

del Ecuador. En el XXXV Congreso Internacional Nema.

1 Póster Comportamiento de Pasteuria penetrans en el control de Meloidogyne spp. en los cultivos tomatefréjol en la Península de Santa Elena de Ecuador. En el XXXV congreso Internacional de Nematología.

5 Pasteuria penetrans Se ha seleccionado cinco poblaciones de P. penetrans Altamente patogénicas sobre Meloidogyne spp. Se encuentran en la E. E. Boliche.

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Producto Título 3 Tesis Ing. Agr. Geovanny Guijarro Jara

"Determinación del comportamiento de la bacteria Pasteuria penetrans en el control de Meloidogyne spp. en la Península de Santa Elena". Universidad Técnica de Babahoyo, 2003

Ing. Agr. Julio Bustamante Jaramillo "Diagnóstico, Introducción y Evaluación de la eficacia de la bacteria Pasteuria penetrans en el control de Meloidogyne spp en Catamayo". Universidad Nacional de Loja, 2003

Ing. Agr. Marco Romero e Ing. Agr. Yolanda Songor "Control biológico del nematodo Meloidogyne spp. con la bacteria Pasteuria penetrans en Catamayo". Universidad Nacional de Loja, 2003

2 Días de Campo Manejo de P. penetrans en campos de producción, El Juncal, Valle del Chota 13 Junio, 2003

5. Seminarios Taller A Productores, Técnicos, Profesionales agrícolas, Estudiantes:

Los nematodos, características, biología, manejo integrado Presentación del Proyecto Control biológico de Meloidogyne En Universidad Técnica del Norte.

Control biológico del nematodo Meloidogyne spp. en campos de productores, en el valle del Chota". 2122 nov. 2002

Control biológico del nematodo Meloidogyne spp. en campos de productores, en el valle del Chota". 27 mayo. 2003

"Control biológico del nematodo Meloidogyne con la bacteria Pasteuria penetrans en el valle del Catamayo". 2 julio 2003

Control biológico de Meloidogyne con P. penetrans en la zona de Babahoyo". 10 de julio 2003

Personal Capacitado Agricultores Técnicos Estudiantes Total Ibarra 27 50 190 267 Loja 22 32 36 90 Guayas 20 30 60 110 Babahoyo 36 14 16 66 Total 105 126 302 533

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11. LOGROS ADICIONALES

Con la realización de este proyecto, se han presentado nuevas oportunidades de investigación como:

• Manejo integrado de agentes biológicos nativos para el control de nematodos en hortalizas y frutales.

• Selección de plantas resistentes al ataque de Pratylenchus spp. y Rotylenchulus reniformis. • Manejo Integrado de nematodos en hortalizas y frutales.

Con estas investigaciones se ha fortalecido la relación de INIAP con las Universidad Técnica de Babahoyo, Técnica del Norte y Nacional de Loja.

Las Universidades de Loja y del Norte conjuntamente con Productores de esas zonas planificaron unir esfuerzos para trabajar en el control de nematodos con la colaboración de tesistas.

Las Universidades socias cuentan con un técnico (responsable de la investigación en esa institución) y personal estable que trabaja en los laboratorios de Sanidad Vegetal, capacitados para realizar investigación y trabajos de diagnóstico en esta disciplina.

Los laboratorios de Sanidad vegetal de las Universidades socias se equiparon con estereo microscopios, tamices, hemocitómetro, materiales de vidriería graduada y otros, indispensables para continuar trabajando en investigación.

A través de este proyecto se presentaron seminarios, en los cuales se despertó interés por ésta investigación y otras relacionadas con los nematodos. Además, los responsables de esta investigación han sido nombrados Directores o Coordinadores de investigación en sus respectivas Universidades.

Técnicos responsables del Proyecto están capacitado para escribir, ejecutar investigación integrada con varias Instituciones y especialmente a manejar los recurso financieros.

Personal de los Dptos. Financieros de las Universidades están mejor capacitados para reportar los informes financieros.

12. LIMITACIONES EN EL DESARROLLO DEL PROYECTO Y SOLUCIONES

En el primer año del desarrollo del proyecto no se disponía de un ayudante contable, esto atrasó el envío de planillas a su debido tiempo. En este mismo sentido, las Universidades socias tardaron mucho tiempo en enviar los justificativos del gasto, lo que perjudicó en la obtención de los reembolso de planillas acorde con la realidad de gastos. En vista de lo ocurrido, la institución base debe manejar al máximo el presupuesto asignado a las instituciones colaboradoras como compra de equipos, materiales, pago a becarios, entre otros.

Los laboratorios que venden los equipos, materiales y reactivos especializados, tardan mucho en importar los pedidos. Algunos agricultores son difíciles para facilitar los campos por largo período para realizar la investigación, esto limita a escoger el sitio más adecuado. Al inicio del proyecto, en los valles del Chota y Catamayo se presentó esta limitación. Mientras que los ensayos desarrollados en campos de la UTB se atrasaron por problemas laboral de esta Institución.

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13. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

Conclusiones • En Ecuador, las poblaciones nativas de la bacteria Pasteuria penetrans más patogénicas sobre Meloidogyne spp. son las identificadas como Nueva Colonia, Boliche (provincia del Guayas), La Concordia, Quinindé (provincia de Esmeraldas) y Guarapal (El Oro).

• La población de P. penetrans de la Unión (Esmeraldas) es la que menos infecta a Meloidogyne

• No existe selectividad de P. penetrans sobre poblaciones de Meloidogyne que provengan de la misma especie de la planta de la que también se extrae el nematodo.

• En esta investigación, Meloidogyne javanica es la especie con más dificultad para infectarse con P. penetras.

• Las condiciones de salinidad del suelo y agua en El Azúcar, no afectó la multiplicación de P. penetrans.

• En El Azúcar (Península de Sarta Elena, Zona de Babahoyo y Valles del Catamayo y Chota, la introducción de las cinco poblaciones de P. penetrans fue eficaz, además no hubo diferencia significante entre ellas en nematodos parasitados y producción de esporas.

• En los Valles de la Sierra, la introducción de P. penetrans reduce con eficacia las poblaciones de Meloidogyne spp.

• En campos de amplias superficie, la aplicación de esporas de P. penetrans en plantas de trasplante no difieren en eficacia para el control de Meloidogyne incorporándolas en semilleros o en el sitio definitivo.

•En soya, la aplicación de esporas de P. penetrans manual e incorporadas antes de la siembra, es igual en eficacia para el control de Meloidogyne spp. que aplicadas con sembradora en mezcla con la semilla y Nitragin.

• Excelente eficacia de P. penetrans en el control de Meloidogyne se obtienen en campos donde no hay incidencia de otros géneros de nematodos, o es muy baja.

Lecciones aprendidas •Elaboración de proyectos integrales. •Escribir los resultados de la investigación inmediatamente que éstos concluyen. •Priorizar gastos.

Recomendaciones: •Aumentar la concentración de esporas de P. penetrans en campos severamente infestados con Meloidogyne.

• Integrar a P. penetrans con hongos nativos controladores de nematodos, para evitar el incremento poblacional de otros nematodos que no son Meloidogyne.

• Investigar metodologías de aplicación de agentes controladores de nematodos en frutal.

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14. LITERATURA CONSULTADA

ARREGUI, A., TRIVIÑO, C. 2003. Evaluación de la sensibilidad del maíz a Meloidogyne incognita y determinación del ciclo de vida en el híbrido Brasilia. Memorias de la XXXV Reunión Anual de la Organización de Nematólogos de los Trópicos Americanos (ONTA), Guayaquil, Ecuador, p. 20.

BLASINGAME, D. J. 2002. Nematodes losses in cotton in the USA. Nematology, 4(2): 209

CASSASA, A. M. 2002. Control Integrado de Meloidogyne spp. en Guayaba. Nematology 4(2): 210

DUBE, B. N. 2001. Integrated Application of Paecilomyces lilacinus, P. penetrans and cattle manure for control of Meloidogyne javanica. Journal of Nematology 33(4): 255.

EISENBACK, J. D. and TRIANTAPHYLLOU, H. 1991. RootKnot nematodes Meloidogyne species and races. In: W. R. Neekle, ed .Manual of Agricultural Nematology, Marcel Dekker, Inc. New York,

EISENBACK, J. D. 1997. Root knot nematode taxonomic. CABI Publishing International, Wallingford, Oxon, UK.

HEWLETT T, E., GERBER, J. F., SMITH, K. S. and WHITE, J. H. 2002. In vitro culture of Pasteuria penetrans. Journal of Nematological 4(2): 152153.

MUNERA, U. 2003. Problemas de nematodos y su manejo en Solanum quitoense, Cyphomandra betacea y Passiflora ligularis en Colombia. En Memorias de XXXV Reunión Anual de la Organización de Nematólogos de los Trópicos Americanos (ONTA), Ecuador, p25

TRIVIÑO, C., GOWEN, S., y FARGUETTE, M. 1998. Densidades poblacionales de Nematodos Fitoparasitos en campos hortícolas del Ecuador. Nematrópica 28(2): 148.

TRIVIÑO, C. y FIGUEROA, M. 1993. Los Nematodos del arroz y su control, INIAP, Quito, Ecuador, Boletín Divulgativo No. 241: 12.

LUC, M., BRIDGE, J. and SIKORA, R. A. 1990. Reflection on Nematoly in Subtropical and Tropical Agriculture. In: Plant parasitic Nematodes in Subtropical and Tropical Agriculture. Wallingford, CABI. PP 117.

KOENING S., OVERSTREET C., NOLING J., DONALD P., BERKER J and FORTHUM B. 1999. Survey of crop losses in response to phytoparasitic nematodes in the United States for 994. Journal of Nematology 34:587 618.

MEYER, S. L., and DANIEL, R. 2002.Combination of biocontrol Agents for management of plant parasitic nematodes and soil borne plantpathogenic fungi. Journal of Nematology 34(1): 18.

CHARNECKI, J. H. 1997. Pasteuria penetrans spores proteins: potential function in attachment to Meloidogyne spp. M.Sc. thesis, University of Florida, Gainesville, Fl. 50pp.

CHEN, Z. X., and DICKSON, D. W. 1998. Review of Pasteuria penetrans: Biology, ecology and biological control potential. Journal of Nematology 30: 313340.

PRESTON, J. F., DICKSON, D. W., MARUNIAR, J. E., NONG, G., BRITTO, J. A., SCHMIDT, L. M. and GIBLINGDAVIS, R. M. 2003. Pasteuria spp: Systematic and Phylogeny of these bacterial parasites of phytopathogenic nematodes. Journal of Nematology 35(2):198206

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15. FECHA Y FIRMA DEL INVESTIGADOR PRINCIPAL

17 de noviembre del 2003

________________________ Dra. Carmen Triviño Gílces Investigador principal

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Anexo 1. Presencia de P. penetrans en raíces de hortalizas, leguminosas, soya y frutales, infestadas con Meloidogyne spp, en seis provincias del país.

Provincias Sitios Cultivos Total muestras Muestras con Pp Guayas: Taura Tomate 2 1

Chimbo Tomate 1 1 Papaya 1

Cone Tomate 1 Ma. Sucre Fréjol 1 Naranjito Pimiento 1 1 Nueva Colonia Tomate 3 3 El Triunfo Tomate 2 1

Fréjol 1 Boliche Tomate 1 1 Naranjal Tomate 2 1 El Azúcar Tomate 1

Pimiento 1 Cerecita Guayaba 1 1 Pedro Carbo Papaya 1

Total 20 10 Manabí Guabito Tomate 1

Estancia vieja Tomate 2 1 Cadi Tomate 1

Badea 1 Pachinche Tomate 2 Santa Ana Tomate 2 1 Lodana Tomate 2

Pimiento 2 Sequita Tomate 2 1

Haba pallar 1 1 Higuerón Pimiento 1 1 Riochico Pimiento 1 Rocafuerte Tomate 1 1

Haba pallar 1 Total 20 6

Los Ríos Quevedo Soya 2 San Carlos Soya 1 Fumisa Soya 2 1 Buena Fe Soya 2 Puebloviejo Soya 1 Babahoyo fréjol 1 Montalvo Papaya 1 UTB Tomate 1 Mata de cacao Tomate 1 Baba Papaya 1 Lechugal Fréjol 1

Total 14 1

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Continuación Anexo 1.

Provincias Sitios Cultivos Total muestras Muestras con P. penetrans

Los Ríos Quevedo Soya 2 San Carlos Soya 1 Fumisa Soya 2 1 Buena Fe Soya 2 Puebloviejo Soya 1 Babahoyo Fréjol 1 Montalvo Papaya 1 UTB Tomate 1 Mata de cacao Tomate 1 Baba Papaya 1 Lechugal Fréjol 1

Total 14 1 El Oro: La Isla Tomate 1

Guarapal Tomate 2 2 Chacras Tomate 1 Arenillas Tomate 1 1 Jumón Fréjol 1 Santa Rosa Papaya 1 Aguas Negras Fréjol 1 Marcabelí Papaya 1 San Vicente Haba pallar 1

Total 10 3 Loja Chariquicuña Tomate 2

San Francisco Tomate 2 Chichaca Fréjol 1 La Vega Tomate 1 Los Juanes Tomate 1 La Capilla Tomate 1

Papaya 1 Coop. 15 de Abril Fréjol 1

Total 10 0 Imbabura Cuambo Fréjol 1

Papaya 1 El Juncal Tomate 1 El Chapi Tomate 1

Fréjol 1 La Pradera Tomate 1

Total 6 0

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Anexo 2. Análisis de correlación de variables evaluadas en ensayo “Evaluación de eficacia de la introducción de P. penetrans para el control de Meloidogyne en El Azúcar”.

Correlaciones: Producción promedio del cultivo de tomate, P. penetrans en 100 mg raíces, % J2 infectados con Pp, J2 en suelo, J2 en raíces, índice agallamiento

Producción, Pp en 100 mg, % J2 con Pp, J2 suelo, J2 raíces

Pp en 100 mg 0.014 0.944

% J2 Pp 0.073 0.484 0.710 0.009

J2 suelo 0.033 0.059 0.061 0.869 0.766 0.758

J2 raíces 0.444 0.026 0.315 0.050 0.018 0.897 0.102 0.799

Agallamiento 0.098 0.178 0.080 0.304 0.141 0.620 0.365 0.684 0.116 0.473

La relación más estrecha se encuentra entre la producción y la densidad poblacional de nemátodos en raíces.

Anexo 3. Análisis de regresión de la producción promedio de los dos ciclos de tomate vs Meloidogyne (J2) /10g raíces.

Ecuación de la regresión: Producción =280923.30 (J2/10g raíces) Predictor Coef SE Coef T P Constant 28092 5912 4.75 0.000 J2/10g raíces 3.302 1.308 2.52 0.018

S = 9663 RSq = 19.7% RSq (adj) = 16.6%

Analysis of Variance

Source DF SS MS F P Regression 1 595306821 595306821 6.38 0.018 Residual Error 26 2427787009 93376423 Total 27 3023093830

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Anexo 4. Análisis de correlación de variables evaluadas en ensayo “Evaluación de eficacia de la introducción de P. penetrans para el control de Meloidogyne en Babahoyo”.

Correlaciones: Producción de tomate, esporas de P. penetrans en 100 mg raíces, % J2 infectados con Pp, J2 en suelo, J2 en raíces, índice agallamiento

Producción, Pp en 100mg, %J2 con Pp, J2 suelo, J2 raíces,

Pp 100mg 0.427 0.024

% J2 Pp 0.259 0.843 0.184 0.000

J2 suelo 0.351 0.876 0.928 0.067 0.000 0.000

J2 raíces 0.640 0.582 0.593 0.631 0.000 0.001 0.001 0.000

Agallamiento 0.586 0.528 0.598 0.643 0.991 0.001 0.004 0.001 0.000 0.000

Cell Contents: Pearson correlation PValue

Las relaciones más estrechas se encuentran entre:

Producción vs J2 en 10g raíces Producción vs Agallamiento Pp en 100mg raíces vs % J2 infectados en suelo Pp en 100mg raíces vs J2 suelo Pp en 100mg raíces vs J2 en 10g raíces Pp en 100mg raíces vs Agallamiento % J2 infectados en suelo vs J2 suelo % J2 infectados en suelo vs J2 en 10g raíces % J2 infectados en suelo vs Agallamiento J2 suelo vs J2 en 10g raíces J2 suelo vs Agallamiento J2 en 10g raíces vs Agallamiento

73

Anexo 5. Análisis de regresión de J2 en raíces vs índice de agallamiento, correspondiente a la Figura 3.

Ecuación de la regresión: J2 10g raíces = 3266 + 6.00 (agallamiento) Predictor Coef SE Coef T P Constant 3265.8 358.7 9.10 0.000 Agallamiento 6.0042 0.1611 37.27

S = 391.4 RSq = 98.2% RSq (adj) = 98.1%



Anexo 6. Análisis de regresión de J2 en suelo vs índice de agallamiento, correspondiente a la Figura 4.

Ecuación de la regresión: J2 en suelo = 1129 + 0.953 (agallamiento) Predictor Coef SE Coef T P Constant 1128.8 1128.8 2.28 0.031 Agallamiento 0.9530 0.2227 4.28 0.000

S = 541.0 RSq = 41.3% RSq (adj) = 39.1%



74

Anexo 7. Análisis de regresión de % J2 infectados con Pp vs índice de agallamiento, correspondiente a la Figura 5.

Ecuación de la regresión: % J2 Infectados con Pp = 68.6 0.0163 (agallamiento)

Predictor Coef SE Coef T P Constant 68.628 9.537 7.20 0.000 Agallamiento 0.016293 0.004283 3.80 0.001

S = 10.41 RSq = 35.8% RSq (adj) = 33.3%


Source DF SS MS F P Regression 1 1567.1 1567.1 14.47 0.001 Residual Error 26 2815.0 108.3 Total 27 4382.1

Anexo 8 Análisis de regresión de P. penetrans en 100 mg raíces vs índice de agallamiento, correspondiente a la Figura 6.

Ecuación de la regresión: Pp 100 mg Raíces = 3377 0.812 (agallamiento)

Predictor Coef SE Coef T P Constant 3376.7 570.2 5.92 0.000 Agallamiento 0.8122 0.2560 3.17 0.004

S = 622.1 RSq = 27.9% RSq (adj) = 25.1%



75

Anexo 9. Análisis de regresión del % J2 infectado con Pp vs J2 en raíces, correspondiente a la Figura 7.

Ecuación de la regresión: % J2 Infectados con Pp = 59.3 0.00266 (J2 10g raíces) Predictor Coef SE Coef T P Constant 59.285 7.247 8.18 0.000 J2 10g raíces 0.0026646 0.0007102 3.75 0.001

S = 10.46 RSq = 35.1% RSq(adj) = 32.6%



Anexo 10. Análisis de regresión del % J2 infectados con Pp vs J2 en100 cm3 suelo, correspondiente a la Figura 8.

Ecuación de la regresión: % J2 Infectados con Pp = 49.3 0.0171 (J2 en 100 cm3 suelo) Predictor Coef SE Coef T P Constant 49.298 1.562 31.56 0.000 J2 en 100 cm3 suelo 0.017065 0.001339 12.75 0.000

S = 4.822 RSq = 86.2% RSq (adj) = 85.7%



76

Anexo 11. Análisis de regresión P. penetrans en 100 mg raíces vs J2 en raíces, correspondiente a la Figura 9.

Ecuación de la regresión: Pp 100 mg raíces = 3056 0.148 (J2 10g raíces) Predictor Coef SE Coef T P Constant 3055.8 413.0 7.40 0.000 J2 10g raíces 0.14758 0.04047 3.65 0.001

S = 595.9 RSq = 33.8% RSq(adj) = 31.3%



Anexo 12. Análisis de regresión Pp 100 mg raíces vs J2 en suelo, correspondiente a la Figura 10.

Ecuación de la regresión: Pp 100 mg raíces = 2469 0.909 (J2 en suelo) Predictor Coef SE Coef T P Constant 2468.6 114.3 21.60 0.000 J2 en suelo 0.90909 0.09794 9.28 0.000

S = 352.8 RSq = 76.8% RSq(adj) = 75.9%



77

Anexo 13. Análisis de regresión de Pp en 100 mg de raíces vs % J2 Infectados con Pp, correspondiente a la Figura 11.

Ecuación de la regresión: Pp 100 mg raíces = 32 + 47.5 (% J2 con Pp) Predictor Coef SE Coef T P Constant 31.9 211.1 0.15 0.881 % J2 con Pp. 47.549 5.961 7.98 0.000

S = 394.6 RSq = 71.0% RSq(adj) = 69.9%



78

Anexo 14. Análisis de correlación de variables evaluadas en ensayo “Evaluación de eficacia de la introducción de P. penetrans para el control de Meloidogyne en el Valle del Catamayo”.

Correlaciones: Producción, P. penetrans en 100 mg raíces, % J2 infectados con Pp, J2 en suelo, J2 en raíces, índice de agallamiento


Las relaciones mas estrechas se encuentran entre:

Pp en 100 mg raíces vs % J2 infestados en el suelo Pp en 100 mg raíces vs J2 suelo % J2 infestados en el suelo vs J2 suelo J2 suelo vs J2 en 10g raíces

Producción, Pp. 100 mg, % J2 suelo, J2 suelo, J2 10 g raíces

Pp. 100 mg 0.109 0.582

% J2 suelo 0.114 0.885 0.563 0.000

J2 suelo 0.229 0.512 0.548 0.242 0.005 0.003

J2 10 g raíces 0.253 0.332 0.351 0.507 0.194 0.084 0.067 0.006

Agallamiento 0.330 0.221 0.220 0.159 0.365 0.086 0.259 0.261 0.418 0.056

79

Anexo 15. Análisis de regresión del % J2 infectados con Pp vs J2 en suelo, correspondiente a la Figura 12.

Ecuación de la regresión: % J2 con Pp = 25.3 0.00764 (J2 suelo) Predictor Coef SE Coef T P Constant 25.283 2.383 10.61 0.000 J2 suelo 0.007637 0.002285 3.34 0.003

S = 6.002 RSq = 30.0% RSq (adj) = 27.3%



Anexo 16. Análisis de regresión de P. penetrans en 100 mg raíces vs J2 suelo correspondiente a la Figura 13.

Ecuación de la regresión: Pp en 100 mg raíces = 2187 0.705 (J2 suelo) Predictor Coef SE Coef T P Constant 2187.1 242.1 9.03 0.000 J2 suelo 0.7052 0.2323 3.04 0.005

S = 609.9 RSq = 26.2% RSq (adj) = 23.3%



80

Anexo 17. Análisis de regresión del % J2 infectados con Pp vs P. penetrans en 100 mg raíces, correspondiente a la Figura 14.

Ecuación de la regresión: Pp en 100 mg raíces = 61 + 87.6 (% J2 con Pp)

Predictor Coef SE Coef T P Constant 60.6 176.4 0.34 0.734 % J2 con Pp 87.585 9.022 9.71 0.000

S = 330.1 RSq = 78.4% RSq (adj) = 77.5%



81

Anexo 18. Análisis de correlación de variables evaluadas en ensayo “Evaluación de eficacia de la introducción de P. penetrans para el control de Meloidogyne en el Valle del Chota”.

Correlaciones: Producción, P. penetrans en 100 mg raíces, % J2 infectados con Pp, J2 en suelo, J2 en raíces, índice agallamiento


Las relaciones mas estrechas se encuentran entre:

Pp en 100 mg raíces vs % J2 infectados en el suelo Pp en 100 mg raíces vs J2 en 10g raíces Pp en 100 mg raíces vs Agallamiento % J2 infectados en suelo vs J2 en 10g raíces % J2 infectados en suelo vs Agallamiento

Producción, Pp 100 mg raíces, % J2 infectado, J2 suelo, J2 raíces

Pp 100 mg 0.234 0.232

% J2 suelo 0.397 0.855 0.037 0.000

J2 suelo 0.055 0.331 0.377 0.779 0.085 0.048

J2 raíces 0.288 0.719 0.570 0.410 0.137 0.000 0.002 0.030

Agallamiento 0.238 0.578 0.600 0.429 0.255 0.222 0.001 0.001 0.023 0.191

82

Anexo 19. Análisis de regresión del % J2 infectados con Pp vs J2 en raíces, correspondiente a la Figura 15.

Ecuación de la regresión: % J2 infectados= 2.79 + 0.0325 (J2 10g raíces) Predictor Coef SE Coef T P Constant 2.788 3.787 0.74 0.468 J2 10g raíces 0.032547 0.009192 3.54 0.002

S = 4.603 RSq = 32.5% RSq(adj) = 29.9%



Anexo 20. Análisis de regresión de P. penetrans en 100 mg raíces vs % J2 infectados con Pp, correspondiente a la Figura 16.

Ecuación de la regresión: Pp en 100 mg raíces = 87 + 69.3 (% J2 infectados

Predictor Coef SE Coef T P Constant 87.3 138.0 0.63 0.533 % J2 infectados 69.302 8.246 8.40 0.000

S = 235.6 RSq = 73.1% RSq (adj) = 72.1%



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