Congreso SEAPCongreso SEAPCCáádiz, 24/ Mayo/ 2013diz, 24/ Mayo/ 2013

Dr. Dr. FelipFelip VilardellVilardellHospital Hospital UniversitariUniversitari Arnau de Vilanova, Arnau de Vilanova, LleidaLleida

IMPORTANCIA DE LA EVALUACIÓN DE LA EXPRESIÓN DE CK19 EN BIOPSIAS DE CÁNCER DE MAMA EN

PACIENTES SOMETIDAS A ESTUDIO DEL GANGLIO CENTINELA MEDIANTE OSNA

INTRODUCCIINTRODUCCIÓÓNN

� El análisis del ganglio centinela (GC) mediante técnica de “One Step Nucleic Acid Amplification” (OSNA) es un procedimiento molecular cada vez más usado para el estadiaje intraoperatorio de la axila en pacientes con cáncer de mama.

� Se basa en la amplificación y cuantificación de RNAm de citoqueratina 19 (CK19).

� Casi todos los carcinomas de mama expresan esta proteína, pero se ha reportado pérdida de su expresiónen un 6% de casos.

EXPRESIEXPRESIÓÓN DE CITOQUERATINAS N DE CITOQUERATINAS EN CEN CÁÁNCER DE MAMANCER DE MAMA

CLASIFICACICLASIFICACIÓÓN N MOLECULAR MOLECULAR DEL CDEL CÁÁNCER DE MAMANCER DE MAMA((microarraysmicroarrays de cde c--DNA):DNA):

-- LuminalLuminal A y BA y B

-- HerHer--22

-- ““BasalBasal--likelike””

Mayo, año 2000

ONCOLOGY. Vol. 22 No. 11

NATIONAL BREAST CANCER AWARENESS MONTHUnderstanding and Treating Triple-Negative Breast Cancer

By CAREY ANDERS, MD

Assistant Professor

FENOTIPO LUMINAL vs BASAL

�� LuminalLuminal A: ER + o PR +, HerA: ER + o PR +, Her--2 2 ––�� LuminalLuminal B: ER + o PR +, HerB: ER + o PR +, Her--2 +2 +

�� Fenotipo HerFenotipo Her--2: ER 2: ER -- y PR y PR --, Her, Her--2/2/neuneu ++

�� Fenotipo TripleFenotipo Triple--negativo: ER negativo: ER --, PR , PR --, Her, Her--2 2 –––– ““BasalBasal--likelike””: Asociado a expresi: Asociado a expresióón de EGFR y p53n de EGFR y p53–– No BasalNo Basal

INMUNOFENOTIPOS DEL INMUNOFENOTIPOS DEL CCÁÁNCER DE MAMANCER DE MAMA

El método OSNA amplifica el RNA mensajero de la citoqueratina 19mediante un procedimiento isotérmico, específico y sensible denominadoRT-LAMP (Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification).

El progreso de la amplificación se monitoriza a tiempo real.

OSNAOSNA EN ESTADIAJE AXILAR DEL EN ESTADIAJE AXILAR DEL CCÁÁNCER DE MAMANCER DE MAMA

�� Mediante Mediante OSNAOSNA se determina la carga se determina la carga tumoral total (tumoral total (TTLTTL) (n) (núúmero de copias de mero de copias de mRNAmRNA dede CK19CK19).).

�� Los valores de corte son los determinados por Los valores de corte son los determinados por TsujimotoTsujimoto et alet al. en 2007, a partir de un . en 2007, a partir de un estudio sobre 106 ganglios linfestudio sobre 106 ganglios linfááticos.ticos.

OSNAOSNA EN ESTADIAJE AXILAR EN ESTADIAJE AXILAR DEL CDEL CÁÁNCER DE MAMANCER DE MAMA

< 250 copias mRNA CK19 µL: Células aisladas

250 – 5000 copias mRNA CK19 µL: micrometástasis(máx. 2 mm)

> 5000 copias mRNA CK19 µL: macrometástasis

Tsujimoto et al; 2007

� En nuestro centro, el análisis del GC mediante OSNA se complementa con improntas citológicas.

� De 450 casos de carcinoma de mama estadiados mediante OSNA e impronta durante un periodo de 2 años, en un caso se objetivó una metástasis en la impronta del GC que no fue detectada mediante OSNA:

– A partir de ese caso se ha comprobado sistemáticamente el nivel de expresión de CK19 en todas las biopsias diagnósticas de cáncer de mama.

– Si la CK19 es negativa en la biopsia, el análisis del GC se realiza mediante técnicas patológicas convencionales.

� En este estudio hemos valorado la frecuencia y el perfil molecular de los carcinomas de mama CK19 negativos en tres series de casos. A la vez hemos buscado una posible correlación entre el nivel de expresión de CK19 en el carcinoma primario y el número de copias de RNAm de CK19 hallado en el GC.

INTRODUCCIINTRODUCCIÓÓN (2)N (2)

OBJETIVOSOBJETIVOS

1.1. Determinar la Determinar la frecuenciafrecuencia de carcinomas de carcinomas CK19 CK19 --en cada uno de los cuatro en cada uno de los cuatro inmunofenotiposinmunofenotipos del del ccááncer de mama.ncer de mama.

2.2. Valorar si la evaluaciValorar si la evaluacióón de CK19 en la biopsia n de CK19 en la biopsia puede ayudar en la decisipuede ayudar en la decisióón de n de usar OSNAusar OSNA u u otrasotrasmetodologmetodologíías patolas patolóógicas convencionales para el gicas convencionales para el estudio del GC.estudio del GC.

3.3. Determinar si existe correlaciDeterminar si existe correlacióón entre el nivel de n entre el nivel de expresiexpresióón de CK19 en el tumor primario y el nn de CK19 en el tumor primario y el núúmero mero de copias de de copias de mRNAmRNA de CK19 detectadas en el GC de CK19 detectadas en el GC mediante OSNA .mediante OSNA .

MATERIAL Y MMATERIAL Y MÉÉTODOSTODOS

�� Tres seriesTres series de casos:de casos:–– Serie prospectivaSerie prospectiva de de 197197 biopsias consecutivas de biopsias consecutivas de ccááncer de mama, incluyendo 182 carcinomas ncer de mama, incluyendo 182 carcinomas ductalesductalesNOS, 6 carcinomas NOS, 6 carcinomas lobulillareslobulillares y 9 pertenecientes a otros y 9 pertenecientes a otros subtipos histolsubtipos histolóógicos.gicos.

–– Serie retrospectivaSerie retrospectiva de de 4141 carcinomas de mama con carcinomas de mama con fenotipo fenotipo triple negativotriple negativo resecados quirresecados quirúúrgicamente.rgicamente.

–– Serie retrospectivaSerie retrospectiva de de 6868 pacientes, cuyos pacientes, cuyos GCGCssfueron positivos para metfueron positivos para metáástasis mediante tstasis mediante téécnicas cnicas convencionales realizadas con anterioridad a la convencionales realizadas con anterioridad a la implantaciimplantacióón del OSNA.n del OSNA.

MATERIAL Y MMATERIAL Y MÉÉTODOS (2)TODOS (2)

�� Se realizSe realizóó estudio del estudio del GCGC mediante mediante OSNAOSNA e e improntasimprontas en en 111 pacientes111 pacientes de la primera serie.de la primera serie.

�� Se determinSe determinóó el el inmunofenotipoinmunofenotipo y la y la expresiexpresióónn de de CK19CK19 en las tres series de tumores mediante en las tres series de tumores mediante inmunotinciinmunotincióónnde ER, PR, de ER, PR, KiKi--67, HER2 y CK19 (67, HER2 y CK19 (DakoDako ®®).).

–– Los tumores con fenotipo triple negativo fueron Los tumores con fenotipo triple negativo fueron caracterizados como caracterizados como ““tipo basaltipo basal”” o o ““no basalno basal”” mediante mediante inmunotinciinmunotincióónn para CK5/6 y EGFR (para CK5/6 y EGFR (DakoDako ®®). ).

�� Para los anPara los anáálisis estadlisis estadíísticos se utilizsticos se utilizóó un software SPSS. un software SPSS. Las correlaciones clLas correlaciones clííniconico--patolpatolóógicas fueron analizadas gicas fueron analizadas mediante tablas de contingencia y el mediante tablas de contingencia y el testtest de X2.de X2.

RESULTADOSRESULTADOS

� Serie prospectiva: Se verificó CK19 en 197 de 202 casos:

– Se halló pérdida de expresión de CK19 en 6 (3,5%) casos: � 2 (3,5%) carcinomas de mama con fenotipo luminal A� 3 (2,9%) carcinomas con fenotipo luminal B� 1 (4,2%) carcinomas triple negativos.� No se halló pérdida de expresión de CK19 en ningún carcinoma Her-2.

– En un caso de carcinoma luminal CK19 - :

� Se detectó mediante criosección una macrometástasis de 9 mm en el GC, en la que mediante inmunotinción posterior para CK19 se observaron células aisladas CK19 +.

� Una inmunotinción posterior de CK19 sobre secciones de la pieza quirúrgica del correspondiente tumor primario mostró algunas clonas CK19+ no representadas en la biopsia diagnóstica.

b)a) c)

d) e)

a) CK19 en un carcinoma de mama luminal A en el que se observan escasos grupos celulares con expresión de dicha citoqueratina

b) y c) Ganglio centinela correspondiente en el que se observa una macrometástasis de 9 mm de diámetro máximo (H&E y CKAE1/AE3, magnificación original 40 y 100 respectivamente

d) y e) Inmunotinción de CK19 del mismo ganglio centinela en la que se observan escasos grupos celulares metastásicos con expresión de CK19 (magnificación original 40 y 100 respectivamente).

RESULTADOS (2)RESULTADOS (2)

�� SSerie retrospectiva de 41 carcinomas triple negativos: ningún tumor CK19 -.

� Serie retrospectiva de 68 pacientes GC + diagnosticados con anterioridad al OSNA:

– Un caso con macrometástasis en el GC que fue CK19 -, así como el correspondiente tumor primario.

Pruebas de Pearson y de Spearman:

La correlación entre la expresión de CK19 en los carcinomas primarios y el número de copias de RNAm de CK19 en los correspondientes ganglios centinelas es cercana a cero, y no resulta estadísticamente significativa en ningún caso.

CONCLUSIONES� Puede hallarse pérdida de expresión de CK19 en aproximadamente un 3,5% de carcinomas de mama, incluyendo tumores con fenotipo luminal.

� Se halló un caso con expresión heterogénea de CK19 en el tumor primario, en el que solamente escasas células de la macrometástasis en el GC eran CK19+. El estudio del GC hubiera resultado impreciso, probablemente células aisladas, si se hubiera optado por la técnica OSNA en ese caso.

� Un caso con macrometástasis en el GC en la serie retrospectiva anterior a la técnica OSNA, en la que tanto la metástasis como el tumor primario fueron CK19 -.

CONCLUSIONES

La expresión de CK19 debe ser valorada sistemáticamente en todos los carcinomas de mama para decidir el método de estadiaje axilar más adecuado.