Como clasificar hoy en dia las leucemias y linfomas .SLPC-B: ANOMALAS QUE AFECTAN A GENES DE CONTROL

download Como clasificar hoy en dia las leucemias y linfomas .SLPC-B: ANOMALAS QUE AFECTAN A GENES DE CONTROL

of 46

  • date post

    01-Oct-2018
  • Category

    Documents

  • view

    219
  • download

    0

Embed Size (px)

Transcript of Como clasificar hoy en dia las leucemias y linfomas .SLPC-B: ANOMALAS QUE AFECTAN A GENES DE CONTROL

  • Cmo clasificar hoy en da las Leucemias y los Linfomas?

    El rol de la citometra de flujo

    SANDRA QUIJANO GMEZ MSc. PhD.Octubre de 2011

    El rol de la citometra de flujo

  • SNDROMES LINFOPROLIFERATIVOS CRNICOS B (SLPC-B)Expansiones (mono)clonales de linfocitos B maduros

    clnicamente heterogneas

    Leucemias linfoides crnicas de clulas B maduras/perifricas:Leucemia linftica crnica/Linfoma linfoctico de clula B pequeaLeucemia prolinfocticaTricoleucemia

    Linfomas de clulas B maduras/perifricos:

    CLASIFICACIN DE LOS SLPC-B SEGN LA OMS

    Linfomas de clulas B maduras/perifricos:Linfoma linfoplasmocticoLinfoma de la zona marginal esplnicaLinfoma de la zona marginal extranodal tipo MALTLinfoma de la zona marginal nodal (clulas B monocitoides)Linfoma folicularLinfoma de clulas del mantoLinfoma B difuso de clula grandeLinfoma de Burkitt

    Neoplasias de clulas plasmticas:Mieloma mltiple/plasmocitoma

    Campo E. et al. Blood 2011

  • SLPC-B: ANOMALAS QUE AFECTAN A GENES DE CONTROL DE CICLO CELULAR Y DE LA APOPTOSIS

    SLPC-B Gen Funcin Alteracin Frecuencia

    LF BCL2 Inhibicin de apoptosis t(14;18) 80%-90%

    MALT BCL10 Inhibicin de apoptosis t(1;14) 90%

    LLC-B RB/D13S25 del(13q) 10%-60%LLC-B RB/D13S25 del(13q) 10%-60%ATM/MLL Control del ciclo celular del(11q) 5%-15%

    P53 del(17p) 1%-5%MDM2? +12 15%-25%

    LLP PAX5 Diferenciacin B t(9;14) 50%

    MW BLIMP1 Diferenciacin BCiclo celular (arresto G0/G1) del(6q21) 30%-50%

    LBDCG BCL6 Activacin y diferenciacin B t(3q27) 30%-40%C-MYC Control del ciclo celular t(8;14) 5%-10%BCL-2 Inhibicin de apoptosis t(14;18) 30%-40%

    LB C-MYC Diferenciacin t(8;14) 80%Control del ciclo celular t(8;22) 5%Induccin de apoptosis t(2;8) 15%

    Campo E. et al. Blood 2011Kppers R. Nat Rev Cancer 2005 Quijano S et al. Blood. 2008

  • MECANISMOS DE TRANSFORMACIN MALIGNA DE CLULAS B DE CENTRO GERMINAL EN SLPC-B

    Clula plasmtica

    Centro germinal (CG)

    Clula Bdel CG

    Apoptosis

    Linfoplasmocito

    DC foliculares

    B T

    *Anomalas adicionales de P53, RB, P16, P27, ATM

    MAYOR AGRESIVIDAD TUMORAL YVENTAJA PROLIFERATIVA

    Apoptosis

    C-MYC NFBBCL2

    BCL-6PAX5

    BCL6

    Mecanismos oncognicos

    Kppers R. Nat Rev Cancer 2005

  • Alteraciones genticas en Leucemias agudas

    60-80% de los casos presentan alteracionescromosmicas estructurales y/ numricas

    *Pronstico: buen pronstico -t(12;21) e hiperdiploidia (51-65 cromosomas) malpronstico -t(9;22); t(4;11), t(1,19) e hipodiploidia-.* Implicadas en proceso de transformacin maligna, activacin de vas mitgenas,inhibicin de la apoptosis y la respuesta inmune anti-tumoral.

    Van Dongen et al, Lancet 2010. Onciu M. Hematol Oncol Clin N Am. 2009

  • Malignidades hematolgicasMalignidades hematolgicas: : APLICACIONES CLINICAS DEL APLICACIONES CLINICAS DEL

    INMUNOFENOTIPOINMUNOFENOTIPO

    Diagnstico: identificacin de clulasneoplsicas (presencia vs ausencia)

    Clasificacin: identificacin de lnea, Clasificacin: identificacin de lnea, estadio madurativo, screening de

    alteraciones cromosmicas

    Evaluacin PronsticaMonitorizacin del tratamiento

  • CaracterizacinCaracterizacin inmunofenotpicainmunofenotpica de de clulasclulastumoralestumorales porpor citometracitometra de de flujoflujo

    EN QUE SE PARECEN LAS CELULAS LEUCEMICAS A EN QUE SE PARECEN LAS CELULAS LEUCEMICAS A LAS CELULAS NORMALES ?LAS CELULAS NORMALES ?

    -- Reflejan lnea celular y estadio madurativo.Reflejan lnea celular y estadio madurativo.

    EN QUE SE DIFERENCIAN LAS CELULAS LEUCEMICASEN QUE SE DIFERENCIAN LAS CELULAS LEUCEMICASDE LAS CELULAS NORMALES ?DE LAS CELULAS NORMALES ?

    -- Reflejan distintos patrones de expresin de Reflejan distintos patrones de expresin de protenas protenas

    (alteraciones genticas)(alteraciones genticas)

  • La interpretacin adecuada de neoplasias La interpretacin adecuada de neoplasias hematolgicas requiere el hematolgicas requiere el

    CONOCIMIENTOCONOCIMIENTOdel del InmunofenotipoInmunofenotipo dededel del InmunofenotipoInmunofenotipo dede

    MUESTRAS NORMALESMUESTRAS NORMALES

    Saavedra, C., Quijano S, Orfao A. et al. Biomdica 2010Wood B. et al. Clinical Cytometry 2007Van Lochem. et al. Clinical Cytometry 2004 Prez de Andrs M. et al. Clinical Cytometry. 2010

  • Inmunofenotipo de poblaciones B de Mdula sea normal:Citometra de flujo de 4 fluorescencias

    Clinical Cytometry 2004

  • Inmunofenotipo de poblaciones B de Mdula sea normal:Citometra de flujo de 4 fluorescencias

    Seleccin declulas CD19+

    Pre-pre B

    Pre-B

    Clula B inmadura

    Clula B madura

    Van Lochem. et al. Clinical Cytometry 2004

  • Clinical Cytometry 2010Inmunofenotipo de clulas B de distintos tejidos normales

  • Inmunofenotipo de clulas B de distintos tejidos normalesCitometra de flujo de 6-8 fluorescencias

    Pre-B I

    Pre-B II

    B inmadurasB maduras

    Plasmticas

    B inmaduras

    B maduras

    Plasmablastos

    SP= 614 individuos sanos20-90 aos

    Prez de Andrs et al. Clinical Cytometry 2010

    Plasmablastos

    B inmaduras

    B vrgenes

    B memoriaPB

    B vrgenes

    B memoria

    Plasmablastos

    B centro germinal

  • Poblacin de estudio: 10 muestras de MO de individuos 61-79 aos

  • 1. Cuantificar distintas subpoblaciones celulares hematopoyticas deMO normal en trminos absolutos y relativos.

    2. Analizar la expresin de diferentes marcadores celulares cuyareactividad est asociada a la diferenciacin linfoide y mieloide, con el

    OBJETIVOS

    reactividad est asociada a la diferenciacin linfoide y mieloide, con elfin de establecer rangos de expresin para los mismos.

    3. Utilizar estos resultados como parmetros de anlisis para eldiagnstico y clasificacin de las leucemias mieloides agudas ysndromes mielodisplsicos que se estudien en la Unidad de Citometradel Hospital Universitario San Ignacio.

  • Muestras de MO disgregadas (aprox. 5 mL)

    Pasadas por jeringa (dimetro X)

    100 uL muestra

    Marcaje celularFITC PE PERCP APC ESFERAS

    EDTA

    Anlisis de muestras de MO mediante citometra de flujo

    Adquisicin y anlisis en el Citmetro de flujo FACSCalibur BDBProgramas informticos CellQuest Pro y Paint A Gate BDB

    FITC PE PERCP APC ESFERAS

    cyTdT cyMPO CD45 CD34 +CD34 CD11b CD45 CD34 +

    HLA-DR CD117 CD45 CD34 +CD64 CD14 CD45 CD34 +CD71 CD36 CD45 CD34 +CD15 CD16 CD33 CD34 +

  • Anlisis de precursores CD34+

    Precursores linfoidesPrecursores mieloides

  • Malignidades hematolgicasMalignidades hematolgicas: : APLICACIONES CLINICAS DEL APLICACIONES CLINICAS DEL

    INMUNOFENOTIPOINMUNOFENOTIPO

    Diagnstico: identificacin de clulasneoplsicas (presencia vs ausencia)

    Clasificacin: identificacin de lnea, Clasificacin: identificacin de lnea, estadio madurativo, screening de

    alteraciones cromosmicas

    Evaluacin PronsticaMonitorizacin del tratamiento

  • LLA-B Momento del Diagnstico (90% de linfoblastos)

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    CD34 PE-A ->10 10 10 10 100 1 2 3 4

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    CD19 FITC-A ->

    0 256 512 768 1024

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    FSC-A ->

    LINEA BCELULASINMADURAS

    FRECUENCIA ELEVADA

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    CD45 PerCP-A ->10 10 10 10 100 1 2 3 4

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    CD10 APC-A ->

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    2008001040_CD20,2f,CD10#ABF.fcs

    CD38 PE-Cy7-A ->

    HEMATOPOYETICAS CELULASINMADURAS

    MARCADORESABERRANTES

  • SPLCSPLC--B: fenotipo normal vs aberranteB: fenotipo normal vs aberranteClula B normalClula B normal Clulas B aberrantesClulas B aberrantes

    Tricoleucemia

    LLC-B

    Tricoleucemia

    Tricoleucemia

  • Malignidades hematolgicasMalignidades hematolgicas: : APLICACIONES CLINICAS DEL APLICACIONES CLINICAS DEL

    INMUNOFENOTIPOINMUNOFENOTIPO

    Diagnstico: identificacin de clulasneoplsicas (presencia vs ausencia)

    Clasificacin: identificacin de lnea, Clasificacin: identificacin de lnea, estadio madurativo, screening de

    alteraciones cromosmicas

    Evaluacin PronsticaMonitorizacin del tratamiento

  • Clinical Cytometry 2004

  • 0 256 512 768 1024

    Leucemia Promieloctica Aguda: INMUNOFENOTIPO DE CASO t(15;17)+

    SSC-

    A

    SSC-

    A

    SSC-

    A

    CD33++ CD117-/+0 256 512 768 1024

    MO_MUESTRA.fcs

    FSC-A -> 10 10 10 10 100 1 2 3 4

    MO_MUESTRA.fcs

    CD33 PerCP-Cy5-5-A ->10 10 10 10 100 1 2 3 4

    MO_MUESTRA.fcs

    CD117 APC-A ->FSC-A CD33 PERCPCY5.5 CD117 APC

    Promielocito normal CD15+ Promielocito aberrante CD15+ dbil

  • Clinical Cytometry 2004

  • LLA-B: INMUNOFENOTIPO DE CASO BCR/ABL+

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    RFR7690.007

    CD34 ->

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    RFR7690.008

    CD10 ->

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    RFR7690.008

    CD13 ->

    10 10 10 10 100 1 2 3 4

    RFR7690.011

    CD34 ->

    CD19

    CD45

    CD20CD19

    CD10 CD13 CD34 CD34

    CD19++,CD13+, CD45-/+, CD20-/+

  • CD20

    FMC7

    CD24

    CD19

    SSC

    FSC

    CD27

    CD25

    CD22

    sIgM sIg

    CD79

    b

    CD11

    cCD

    38

    CD23

    CD43

    CD5

    bcl2

    Grupo A (n=38)

    Marcador13q-trisoma 1211q-17p-

    Grupo fenotpicoA B C

    % +12

    % -13q

    11%

    78%

    37%

    43%

    46%

    33%

    Alteracin gentica

    FENOTIPO Y ALTERACIONES