COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU Y SU VARIANTE1
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CITOLO EXFOLIATIVA 2013 COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU Y SU VARIANTE La tinción de Papanicolaou es un método de tinción policrómico que consta de una tinción nuclear y un contraste citoplásmicos. Tiene como ventaja una buena de nición del fi detalle nuclear, evidenciando el patrón de cromatina; un aspecto transparente del citoplasma, que permite apreciar los grados de diferenciación celular y actividad metabólica. Colorantes empleados: Existen varias soluciones de Papanicolaous, pero todas son variantes de los siguientes colorantes: Hematoxilina de Harris (EA50, EA65,EA36) Naranja G Eosina La tinción de Papanicolaou tiene cuatro pasos principales: a. Fijación. b. Tinción del núcleo con Hematoxilina. c. Tinción de citoplasma con Orange G y EA. d. Aclaramiento. La técnica utiliza un elevado número de colorantes en su procedimiento. Llehuac Cristian | RAMOS ARMAULIA, Jessenia S. | 3NL31
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CITOLO EXFOLIATIVA 2013
COLORACIÓN DE PAPANICOLAOU Y SU VARIANTE
La tinción de Papanicolaou es un método de
tinción policrómico que consta de una
tinción nuclear y un contraste
citoplásmicos. Tiene como ventaja una
buena definición del detalle nuclear,
evidenciando el patrón de cromatina; un
aspecto transparente del citoplasma, que
permite apreciar los grados de
diferenciación celular y actividad
metabólica.
Colorantes empleados: Existen varias soluciones de Papanicolaous, pero
todas son variantes de los siguientes colorantes:
Hematoxilina de Harris (EA50, EA65,EA36)
Naranja G
Eosina
La tinción de Papanicolaou tiene cuatro pasos principales:
a. Fijación. b. Tinción del núcleo con Hematoxilina. c. Tinción de citoplasma con Orange G y EA. d. Aclaramiento.
La técnica utiliza un elevado número de colorantes en su procedimiento.
Hematoxilina: es la tinción nuclear escogida, permite básicamente revelar los núcleos de las células presentes en la muestra. Suele usarse Hematoxilina de Harris. Orange G: es un colorante sintético de carácter ácido que revela compuestos básicos como la prequeratina (que tiñe de color rosado) o la queratina (que tiñe de color naranja brillante). Eosina amarillenta: tiñe de color rosa-anaranjado el citoplasma de las células escamosas maduras, de las células ciliadas y de los
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eritrocitos. Verde Luz SF amarillento: tiñe de color verde-azulado las células escamosas no superficiales (inmaduras o a parcialmente maduras).Pardo Bismark R: no tiñe el citoplasma celular pero si la mucina. Ácido fosfotúngstico: tiene una función mordiente, especialmente importante para el Verde Luz SF.
Al presentar su composición varios colorantes, es capaz de revelar
diferentes tipos de células. Estas características son las que la hacen
óptima para estudios de tipo citológico.
La técnica implica el uso de tres soluciones diferentes, por un lado la
correspondiente a la hematoxilina, por otro la que contiene Orange G
(solución de Papanicolaou OG) y la última con el resto de colorantes
(solución de Papanicolaou EA).
Para lograr una buena preparación citológica es necesario que el la toma
o recolección del material sea adecuada, una correcta y rápida fijación, y
un buen proceso de coloración.
Para la Coloración de Papanicolaou es necesario que los preparados sean
previamente fijados en alcohol 96º. El material extendido en el
portaobjeto debe fijarse inmediatamente antes que comience la
desecación. Lo ideal es sumergirlo en alcohol 96º no menos de 10
minutos.
La tinción de Papanicolaou es una prueba fiable. Requiere de experiencia
en la interpretación de los resultados, el porcentaje de aciertos es muy
elevado. Esta prueba ha ayudado a disminuir drásticamente el número
de mujeres que mueren por causa de cáncer cervical. En nuestro país el
Programa de detección de cáncer cervico-uterino con las pruebas citoló-
gicas periódicas ha ayudado extraordinariamente a reducir esta enfer-
medad.
Otros métodos computarizados, utilizados en conjunción con el Papani-
colaou, ayudan a la fiabilidad de la prueba, pero aumentan el costo de su
utilización.
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COLORACIÓN DE SHORR
La tinción de Shorr se usa solamente en citodiagnóstico hormonal en el cual es superior.Permite lograr la diferenciación neta de las células del epitelio vaginal. Tinción nuclear intensa y coloración citoplasmática homogénea.
Técnica con muy buenos resultados para la evaluación hormonal de la citología vaginal. Permite distinguir con gran facilidad las células queratinizadas (color naranja brillante) de las no queratinizadas (color azul verdoso). Los núcleos se tiñen de azul. Además también pueden reconocerse bien otros elementos presentes en las muestras como hematíes, bacterias, etc.
Técnica Fijación: se prefiere el etanol al 96% o el alcohol-eter al 50%.
SolucionesSolución colorante:
Alcohol etílico 50º……………100ml Escarlata de Biebrich ……….. 0.50mg. Naranja G …………… 0.25g. Verde resistente FCF……………….0.075g. Acido fosfotúndstico……………..0.50g. Acido fosfomolibdico………………..0.50g. Acido acético glacial………………….1.00ml.
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Agitar y mezclar todo. Sólo se utilizara esta solución cuando todos los componentes estén perfectamente disueltos.
Hematoxilina de Harris
Pasos Hidratar en alcoholes de graduación decreciente. Lavados en agua destilada. 20 inmersiones. Hematoxilina de Harris. De 30 segundos a 1 minuto. Lavado en agua corriente. Durante 5 minutos. Lavado en alcohol etílico 70º 20 inmersiones. Lavado en alcohol etílico 96º 20 inmersiones. Solución de Shorr durante 1 minuto. Deshidratar, aclarar y montar como en Papanicolaou.
Resultados
Núcleos: de azul a violeta oscuro. Citoplasma: de naranja brillante a azul verdoso. Bacterias: azul oscuro
CITOLOGÍA HORMONAL
La citología hormonal puede ser empleada para evaluar ciertos aspectos de la condición hormonal en la mujer.
EVALUACION CITO-HORMONAL
El epitelio pluri-estratificado plano no cornificado, que recubre la vagina y algunos islotes del trígono vesical y de la uretra, son efectores periféricos de los estrógenos y la progesterona.
Los estrógenos.- determinan el crecimiento (proliferación celular), aumento del número de capas celulares y aumento de grosor epitelial.
La progesterona.- produce disminución del contenido intracelular del glucógeno y aumenta la descamación celular de la capa intermedia y superficial.
CUELLO UTERINO
Está compuesto por epitelio cilíndrico que reviste el conducto endocervical, y epitelio escamoso que cubre la superficie del exocérvix.
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El punto de unión de estos dos epitelios se denomina UNION ESCAMO-CILINDRICA ó UNION ESCAMO-COLUMNAR
CORTE HISTOLOGICO DEL EXOCERVIX CELULAS
EPITELIO ESCAMOSO ORIGINAL DE VAGINA Y EXOCERVIX
1.-CAPA BASAL.-Es una sola fila de células madre con grandes núcleos y citoplasma escaso.
2.-CAPA PARABASAL.-Abarca dos a cuatro filas de células inmaduras que tienen mitosis para sustituir a las del epitelio suprayacente conforme éste se descama.
3.-CAPA INTERMEDIA.-Abarca 4 a 5 filas de células con mayor cantidad de citoplasma, y núcleos vesiculares. Tienen forma poliédrica y están separadas por un espacio intracelular.
4.-CAPA SUPERFICIAL.-Abarca 5 a 8 filas de células aplanadas con núcleos pequeños uniformes y citoplasma lleno de glucógeno, el núcleo se vuelve picnótico y las células se desprenden desde la superficie (exfoliación). Estas células constituyen la base en la interpretación de la respuesta estrogénica.
ACTIVIDAD HORMONAL
Estructura del epitelio vaginal en función de la acción de las hormonas sexuales.
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COLPOCITOGRAMA: INDICES MAS FRECUENTES
Índice de maduración (IM).- Establece la relación porcentual de los 3 tipos de células vaginales (P/I/S: parabasales, intermedias, superficiales).Presentes en el frotis para esto se cuentan 200 células en 5 campos microscópicos diferentes.
Índice picnótico (IP).- Establece la relación porcentual entre las células con núcleo picnótico y el resto de células superficiales. En el periodo ovulatorio el IP puede alcanzar valores de 75 a 80 %.
Es importante conocer los antecedentes clínicos y fase del ciclo menstrual en que se encuentra la mujer.
En el embarazo, la imagen citológica está compuesta casi exclusivamente por células intermedias de bordes muy delgados, toman el aspecto de “células naviculares”. Las células se exfolian agrupadas.
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El frotis es muy celular y sucio, con leucocitos abundantes y citolisis frecuente.
El IM característico es: 0/95/5.
Climaterio y Menopausia. En la pre-menopausia es frecuente encontrar ciclos anovulatorios con marcado estrogenismo citológico. En la post-menopausia temprana es frecuente encontrar predominio de células intermedias. En la post-menopausia tardía es más frecuente encontrar células parabasales.
CICLO MENSTRUAL
Durante el ciclo menstrual, la mucosa cervico-vaginal, muy sensible a la secuencia hormonal fisiológica (estrógenos y progesterona), sufrirá cambios que nos permitirán darnos una idea de la maduración celular, averiguando el "estatus" hormonal, así como detectar situaciones patológicas en las que secundariamente va a estar alterada.
En una mujer de edad fértil es frecuente observar un 40% de células intermedias y un 60% de células superficiales en la fase pre-ovulatoria.
En la fase post-ovulatoria el porcentaje será inverso, con un 60% de células intermedias y 40% de células superficiales. En ambas situaciones no existen células basales ni parabasales.
En la menopausia encontraremos aproximadamente un 80% de células parabasales y un 20% de células intermedias (atrofia epitelial).
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