ESPECTROSCOPA ULTRAVIOLETA-VISIBLE

FUNDAMENTOS

En espectroscopia UV-Vis se irradia con luz deenerga suficiente como para provocar transicioneselectrnicas, es decir promover un electrn desdeun orbital de baja energa a uno vacante de altaenerga

FUNDAMENTOS

Transiciones electrnicas y espectro de tomos

FUNDAMENTOS

Transiciones electrnicas y espectro de molculas

FUNDAMENTOS

FUNDAMENTOS

TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

TRANSMITANCIA Y ABSORBANCIA

LEY DE LAMBERT-BEER

La intensidad de un haz de luz monocromtica, que incideperpendicularmente sobre una muestra, decrece segn la siguienteexpresin:

Absorbancia = x concentracin x paso pticoA = * c * b

: coeficiente de extincin Molar o absortividad molar (L/mol*cm)

a: absortividad especifica (g L-1) y se expresa en (L/g*cm)

Ej.1 Una solucin de permanganato de potasio 7,5x10-5 M, tieneuna transmitancia de 36,4% cuando se mide en una celda de 1,05cm a una longitud de onda de 525 nm.Calculara) Absorbancia de la solucinb) Absortividad molar del KMnO4

a) A= -log T = -log 0,364 = -(-0,4389) = 0,439

b) = A / b x c = 0,4389 / 1,05 cm x (7,5x10-5) mol L-1

= 5,57x103 L mol-1 cm-1

DESVIACION DE LA LEY DE LAMBERT-BEER

INSTRUMENTALESLuz monocromticaRadiacin parsitaErrores de lectura

QUMICASSoluciones concentradas (menor a 0,01 M)Equilibrios (dimerizacin, cido-base, etc.)TemperaturaEfecto del solvente o reactivos.

Linealidad hasta 1 absorbancia !!!, ideal cuantificar cerca de 0,4

unidades de absorbancia

Pendiente = coeficiente absortividad

Ejemplos de cromforos

ADICIN DE ABSORBANCIAS

ADICIN DE ABSORBANCIAS

La absorbancia de una disolucin 0,00010 M de un colorante A en

una celda de 1,00 cm es de 0,982 a 420 nm y 0,216 a 505 nm. La

absorbancia de una disolucin 0,00020 M de un colorante B es 0,362

a 420 nm y 1,262 a 505 nm. La absorbancia de una mezcla de los dos

colorantes es 0,820 a 420 nm y 0,908 a 505 nm. Calcular la

concentracin de ambos colorantes en la mezcla.

Colorante A0,00010 M

Colorante B0,00020 M

420 nm 0,982 abs. 0,362 abs.

505 nm 0,216 abs. 1,262 abs.

Colorante A0,00010 M

Colorante B0,00020 M

420 nm 9820 1810

505 nm 2160 6310

420 nm: 0,820 = 9820*1*CA + 1810*1*CB505 nm: 0,908 = 2160*1*CA + 6310*1*CB

INSTRUMENTACIN

INSTRUMENTACIN

INSTRUMENTACIN

Anlisis InstrumentalLaboratorio de Espectroscopa UV-VIS

Produccin de Bioetanol

1.- Objetivos:

- Estudio de fermentacin de glucosa mediante levadura de cervezasaccharomyces cerevisiae.

- Anlisis colorimtrico del producto de la fermentacin.- Obtencin de los espectros en el rango UV-VIS de los reactivosinvolucrados en la reaccin, as como de los productos de la reaccin.

..EN EL LABORATORIO

Determinacin de glucosa: La determinacin de glucosa se realizamediante el uso de cido 3,5-dinitrosaliclico, mtodo DNS paraazcares reductores. Al combinar un azcar reductor con el cido3,5-dinitrosaliclico, el grupo funcional aldehdo o el grupofuncional cetona del azcar, son oxidados a grupos carboxilos,mientras que el cido 3,5-dinitrosaliclico es reducido a cido 3-amino,5-nitrosaliclico, el cual tiene una coloracin naranja cuyaintensidad es proporcional a la concentracin del azcar. Ladeterminacin de la absorbancia se realiza a una longitud de ondade 540 [nm]

..EN EL LABORATORIO

540 nm

:. Glucosa inicial Glucosa final = Glucosa rxn.Fermentacin

..EN EL LABORATORIO

Ej.2. Porcentaje (%) de conversin de glucosa despus de 7 das de reaccin:

PM (glucosa) = 180 g/molGlucosa inicial = 6,5 % p/vGlucosa final = 3,85 x 10-3 M

Glucosa inicial = (6,5 g / 180 g mol-1)/0,1 L = 0,36 MGlucosa final = 0,00385 M

Glucosa inicial glucosa final = 0,36 0,00385 = 0,356

% conversin = 0,356/0,36 *100 = 98,9%

..EN EL LABORATORIO

Ej.3 Clculo de glucosa al final de la fermentacin

Datos

Alcuota = 2 mlVolumen de aforo = 25 ml

Absorbancia solucin = 0,425

Ecuacin de la recta: A = 0,0936 * C + 0,007

Donde: A = AbsorbanciaC = Concentracin de glucosa [mM] (10-3M)

:. De la ecuacin de la recta: 0,425 = 0,0936 *C + 0,007C= 4,47 mM

Factor de dilucin

Glucosa = 4,47 mM * 25 ml/2 ml = 55,8 mM de Glucosa