CITOMETRIA DE FLUJO EN HEMATOLOGÍA · HISTOGRAMAS Anticuerpos Monoclonales 1 Un fotón de energía...
1
CITOMETRIA DE FLUJO EN HEMATOLOGÍA HOSPITAL UNIVERSITARIO VIRGEN MACARENA José Ramón Toro López y Rosa León Sotelo Medina (Dpto. Hematología) Que es la Citometría La citometría es un método analítico por el que se mide la emisión de múltiples fluorescencias y la dispersión de luz de células o partículas microscópicas, alineadas mediante una corriente líquida laminar, cuando son presentadas de una en una y a gran velocidad (hasta miles de células/segundo) frente a un haz de luz láser de longitud de onda adecuada En que consiste el proceso MARCADO CON ANTICUERPOS UNIDOS A FLUOROCROMOS EMISION DE FLUORESCENCIA DETECCION Y AMPLIFICACION PULSOS DE VOLTAJE DIGITALIZACION HISTOGRAMAS Anticuerpos Monoclonales 1 Un fotón de energía es absorbido por la molécula fluorescente, creando un estado excitado con un electrón. 3 Un fotón de energía es emitido, para devolver la molécula fluorescente a su estado basal. 2 El estado excitado tiene una duración de 1–10 × 10 -9 segundos ¿Qué es la fluorescencia? Relación estructura / Fluorescencia Optica 0 256 512 768 1024 4C5144001 FSC-Hei ght -> Granulocitos Linfocitos Monocitos Morfología de diferenciación en el análisis celular Inyección de la muestra y cámara de flujo APLICACIONES CLINICAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE CELULAS • PARAMETROS ESTRUCTURALES: • Tamaño • Complejidad • PROTEINAS (ANTIGENOS) DE SUPERFICIE: • Identidad • Linaje • Función • Activación • ADN, ARN Y PARAMETROS RELACIONADOS: • Ploidía • Estado proliferativo • Estadío de maduración APLICACIONES CLINICAS GENERALES • PRONOSTICO BASADO EN EL ANALISIS CELULAR • DIAGNOSTICO BASADO EN EL ANALISIS CELULAR : • MÉDULA OSEA • SANGRE PERIFERICA • LIQUIDOS ORGANICOS • TEJIDOS • EVALUACION Y MONITORIZACION DE TRATAMIENTO APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO EN LA TERAPEUTICA SELECCION DE CELULAS EN LA TERAPIA CELULAR: • Análisis de progenitores en el transplante autólogo • Detección y cuantificación de leucocitos residuales en hemopreparados SEGUIMIENTO TERAPÉUTICO DEL PACIENTE • Detección de recidivas y enfermedad mínima residual • Establecimiento de patrones pronósticos de éxito terapéutico Longitud de onda de excitación y emisión
Transcript of CITOMETRIA DE FLUJO EN HEMATOLOGÍA · HISTOGRAMAS Anticuerpos Monoclonales 1 Un fotón de energía...
CITOMETRIA DE FLUJO EN HEMATOLOGÍA HOSPITAL UNIVERSITARIO VIRGEN MACARENA
José Ramón Toro López y Rosa León Sotelo Medina (Dpto. Hematología)
Que es la Citometría La citometría es un método analítico por el que se mide la emisión de múltiples fluorescencias y la dispersión de luz de células o partículas microscópicas, alineadas mediante una corriente líquida laminar, cuando son presentadas de una en una y a gran velocidad (hasta miles de células/segundo) frente a un haz de luz láser de longitud de onda adecuada
En que consiste el proceso
MARCADO CON ANTICUERPOS UNIDOS A FLUOROCROMOS
EMISION DE FLUORESCENCIA
DETECCION Y AMPLIFICACION
PULSOS DE VOLTAJE
DIGITALIZACION
HISTOGRAMAS
Anticuerpos Monoclonales
1 Un fotón de energía es absorbido por la molécula fluorescente, creando un estado
excitado con un electrón.
3 Un fotón de energía es emitido, para devolver la molécula fluorescente a su estado basal.
2 El estado excitado tiene una duración de 1–10 × 10-9 segundos
¿Qué es la fluorescencia? Relación estructura / Fluorescencia
Optica
0 256 512 768 1024
4C5144001 FSC-Height ->
Granulocitos
Linfocitos
Monocitos
Morfología de diferenciación en el análisis celular Inyección de la muestra y cámara de flujo
APLICACIONES CLINICAS DE LA CITOMETRIA DE FLUJO
IDENTIFICACION Y CARACTERIZACION DE CELULAS
• PARAMETROS ESTRUCTURALES: • Tamaño • Complejidad
• PROTEINAS (ANTIGENOS) DE SUPERFICIE:
• Identidad • Linaje • Función • Activación
• ADN, ARN Y PARAMETROS RELACIONADOS:
• Ploidía • Estado proliferativo • Estadío de maduración
APLICACIONES CLINICAS GENERALES
• PRONOSTICO BASADO EN EL ANALISIS CELULAR
• DIAGNOSTICO BASADO EN EL ANALISIS CELULAR : • MÉDULA OSEA
• SANGRE PERIFERICA
• LIQUIDOS ORGANICOS
• TEJIDOS
• EVALUACION Y MONITORIZACION DE TRATAMIENTO
APLICACIONES DE LA CITOMETRIA DE FLUJO EN LA TERAPEUTICA
SELECCION DE CELULAS EN LA TERAPIA CELULAR:
• Análisis de progenitores en el transplante autólogo • Detección y cuantificación de leucocitos residuales en hemopreparados
SEGUIMIENTO TERAPÉUTICO DEL PACIENTE • Detección de recidivas y enfermedad mínima residual • Establecimiento de patrones pronósticos de éxito terapéutico
Longitud de onda de excitación y emisión
