cDNAs de isoformas de PKC bovino cerebro humano cerebro, células T rata, conejo cerebro ratón cerebro, fibroblastosI rata, conejo cerebro humano bazoII bovino cerebro humano cerebro, bazo rata, ratón, cerebro conejo cerebro bovino cerebro humano cerebro rata, conejo cerebro rata cerebro ratón cerebro, células mieloides conejo, rata cerebro ratón cerebro rata cerebro humano células mieloides ratón piel humano queratinocitos rata pulmón ratón piel

Convencionales

Novel

Novel

Atípica

PKC CONVENCIONALES:•Activadas por PS en forma dependiente de Ca2+

•Unen DAG•Blanco de PMA

PKC NUEVAS:•Insensibles a Ca2+

•Activadas x DAG y PMA en presencia de PS

PKC ATIPICAS•Insensibles a Ca2+

•No responden a PMA/DAG

PRKs (PKC related kinases)•Insensibles a Ca2+, DAG o PMA•Se unen a Rho activo

Dendograma basado en comparación de secuencia de familia de PKCs

ESTRUCTURA DE LOS DOMINIOS DE LAS SUBFAMILIAS DE PKC

DOMINIO C1DOMINIO C1

Presente en cPKCs y nPKCDos dedos de Zn: C1a y C1b

Motivo: H – X12 – C – X2- C – X13/14 – C – X2 – H – X2 – C – X7 – C

Sitio de unión para DAG y PMA

PROTEINAS QUE CONTIENEN DOMINIOS C1PROTEINAS QUE CONTIENEN DOMINIOS C1

Proteína Dedo Zn Unión a PMA Comentario

DAG kinasa 2 No C1 no necesario para unión de DAG o catálisis

Quimerina 1 Sí PMA estimula actividad tipo GAP contra Rac

PKD 2 Sí Activada x PMA y DAG

Munc-13 1 n.h. Homólogo mamífero de Unc-13; sinaptosomal

Raf 1 No C1 se une a prenilo de RasKsr 1 n.h. Kinasa relacionada a RafVav 1 Sí GEF para RasStac 1 n.h. proteína de cerebro con SH3

DOMINIO C2DOMINIO C2

Presente en otras proteínas: sinaptotagmina, rabfilina, PLs, GAPsConfiere unión a PS/Ca2+

Estructura : Sandwich compacto: 2 x 4 hojas antiparalelas

5 Asp para unión de Ca2+

Ausente en nPKCs y aPKC, pero ~ a Vo (faltan algunos Ds)Función : interacción con otras proteínas

C2A y C2B de syn.: sintaxina y clatrina AP2RACKs (Receptor for Activated PKCs): no sustrato, sí unión lleva a membrana

DOMINIO HR1DOMINIO HR1

3 repeticiones de 55 aaUne Rho?

Conservado básicoConservado acídicoConservado hidrofóbico

Dominio C1

PMA

Zn Zn

Dominio C2(sinaptotagmina)

Aspx5

conservados

Dominios C3+C4catalítico

Unión de S

Unión de nucleótido

ESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS FAMILIAS DE PKCESTRUCTURA PRIMARIA DE LAS FAMILIAS DE PKC

MODELO DE REGULACION DE cPKCMODELO DE REGULACION DE cPKC

1

2transPi

3autoPi

4autoP

i

pseudoS

Regulación mediada por PKC

Papeles propuestos para PKC en respuestas

celulares

Tejidos y Células Respuestas celulares Sistemas Endocrinos Médula adrenal

Secreción catecolamina

Corteza adrenal Secreción aldosterona

Islotes de páncreas Liberación insulina

Hipotálamo Libereración de TSH

Células de pituitaria Liberación de GH, prolactina luteinizante, tirotropina

Células paratiroides Liberación de PTH

Células C tiroides Liberación de calcitonina

Células de Leydig Esteroidogenesis

Sistema exocrino Células acinares páncreas

Secreción de amilasa

Glándula paratiroidea Secreción amilasa y mucina

Glándula submaxilar Secreción de mucina Glándula gástrica Sec.pepsinógeno, ác. gástrico Células alveolares Secreción de surfactante

Papeles para PKC en respuestas celulares (Cont.)

Tejidos y Células Respuestas celulares Sistema Nervioso Sinapsis neuronal

Liberación de transmisores

Unión neuromuscular Liberación de transmisores Células PC12 Liberación de dopamina Neuronas Conductancia de membrana

Sistema muscular Músculo cardíaco

Contracción muscular

Inflamación+ S.inmune Plaquetas

Liberación de serotonina, enzimas lisosomales, araquidonato, síntesis de tromboxano

Neutrófilos Generación superóxido, enzimas lisosomales, transporte hexosas

Basófilos Liberación de histamina Linfocitos Activación de linfocitos B y T

Metabolismo/otros Adipocitos

Lipogénesis, transporte de glucosa

Hepatocitos Gluconeogénesis, trans. glucosa

LIGANDO

RECEPTOR

TRANSMISOR(e.g.Proteinas G) EFECTOR

SEGUNDO MENSAJERO

BLANCO 1

BLANCO 2

BLANCO 3

EXPRESION DE GENES

LIGANDO(hormonas, etc)

RECEPTOR

(hormona, factoresde crec. citokinas)

(Ad.ciclasa, PLs, PI3Ks, otros)

cAMP, DAG,Ca PIP3, otros

PKA, PKB, PKC

Raf,MAPK, S6K

CREB, myc, fos, jun, NF-kB