Cartuchos PoraPak Rxn

para la limpieza de productos de síntesis

Post Synthesis Cleanup

PoraPakTM

Waters ofrece ahora los cartuchos PoraPak™ Rxn, una familia de productos para cromatografía basados en polímeros que permite una mayor limpieza de las reacciones de síntesis. Los productos PoraPak Rxn se ofrecen con dos químicas:

n PoraPak Rxn CX, un sorbente de intercambio catiónico fuerte.

n PoraPak Rxn RP, un sorbente de fase reversa.

Los sorbentes PoraPak Rxn se suministran en dispositivos tipo jeringa de vidrio sinterizado, con volúmenes de 6, 20 y 60 cc. Las resinas pueden adquirirse también a granel y pueden solicitarse configuraciones personalizadas.

SOLUCIONES NUEVAS PARA RESULTADOS MÁS RÁPIDOSLos sorbentes PoraPak Rxn se basan en copolímeros con las siguientes propiedades:

n Material duro en el que no aumenta la contrapresión con el flujo.

n Poca expansión y contracción con diversos eluyentes y a pH extremos.

n Baja resistencia hidráulica que permite el flujo por gravedad.

n Tolerancia a pH extremos sin disolución ni hidrólisis, limitaciones ambas de los sorbentes basados en sílice.

Esta combinación de propiedades físicas y químicas hace que los cartuchos PoraPak Rxn sean ideales para la limpieza de productos de síntesis. Las características de los polímeros y el tamaño de las partículas mantienen el flujo inducido por gravedad, presión o vacío, incluso cuando las mezclas de reacción contienen precipi-tados que pueden aportar resistencia adicional al flujo.

La muestra atravesará el cartucho a pesar de estos inconvenientes.

El polímero utilizado en los productos PoraPak Rxn es resistente a la contracción y a la expansión en los eluyentes orgánicos uti-lizados habitualmente en las reacciones de síntesis. Las pruebas realizadas con los siguientes eluyentes demuestran que el lecho de relleno mantiene unas buenas propiedades de flujo:

n DCE n DMF

n DCM n THF

n DMSO n Acetona

Algunos químicos especializados en química médica están habituados a utilizar productos para cromatografía basados en sílice para la limpieza de crudos de reacción.

Una de las limitaciones de estos materiales de intercambio iónico basados en sílice es el pH. La sílice se disuelve a pH elevados, mien-tras que las fases enlazadas se hidrolizan a pH bajos; ambas situa-ciones ocasionan la pérdida de muestra o la aparición de impurezas (de sílice y de la fase enlazada) que se recogen en las fracciones del producto. Las fases cromatográficas basadas en polímeros PoraPak Rxn son estables a pH extremos. Esta característica permite usar el pH como una herramienta muy potente para crear una separación, en particular en el modo de intercambio iónico.

WAT ERS: L ÍDER MUNDIAL EN LA C IENCIA DE LAS SEPARACIONES

PROPORCIONA SOLUCIONES PARA LAS SEPARACIONESWaters es una empresa muy valorada en todo el mundo por su experiencia en cromatografía. Nuestra capacidad para conjugar de forma óptima instrumentación, columnas, tecnologías de separación y software unida a la experiencia nos coloca en una posición única para proporcionar soluciones de valor añadido a nuestros clientes.

FABRICACIÓNNuestras plantas de fabricación de primer nivel se expanden y se actualizan continuamente para mantenerse a la altura de las demandas del mercado de productos nuevos y existentes.

Fabricamos de acuerdo con las normas de calidad más exigentes del sector, como: ISO-9001:2000, ISO 13485:2003 y las Buenas prácticas de fabricación vigentes (cGMP).

[CARTUCHOS PORAPAK Rxn]

[LIMPIEZA DE LA REACCIÓn]

Atrapar y eluir

En la técnica de “atrapar y eluir”, la mezcla de reacción se carga en el cartucho y el sorbente retiene los analitos de interés. A continuación, se realiza un paso de lavado para eliminar del cartucho los componentes adicionales de la reacción. Se utiliza un eluyente fuerte para eluir los analitos del cartucho. La concentración de la muestra se produce cuando el volumen de elución final es menor que el volumen de carga.

Pasar por el cartucho

En la técnica de pasar por el cartucho, el sorbente no retiene los compuestos de interés, pero sí retiene ciertas clases de compuestos e impurezas que pueden desecharse con la columna. El fraccionamiento se logra por la interacción entre las impurezas de la mezcla de reacción y el sorbente. No se produce enriquecimiento de la muestra durante el paso de extracción en la fase sólida (SPE).

Adsorción

En la técnica de cromatografía por adsorción en un sorbente de fase reversa, los componentes neutros se desplazan por la columna cromatográfica en presencia de un eluyente orgánico, aunque lo hacen lentamente, con lavados con un bajo porcentaje orgánico. Cargue la mezcla de reacción disuelta en un alto contenido de agua (p. ej., un 75% de agua), lave para eliminar los compuestos polares y después aumente el contenido orgánico en incrementos grandes para eluir los compuestos neutros. El aumento está determinado por la hidrofobicidad y el peso molecular de los compuestos.

ELIJA EL PRODUCTO Y LA T ÉCNICA ÓPT IMOS PARA LA LIMPIEZA

Los productos PoraPak Rxn se ofrecen con dos sorbentes: CX, una resina de intercambio catiónico fuerte, y RP, una resina de fase reversa. Las ilustraciones siguientes recomiendan el sorbente y la técnica de separación más adecuados para aplicar durante la limpieza. La elección del sorbente y la técnica adecuados depende de la naturaleza de los productos de reacción, los reactivos, los eluyentes y las columnas preparativas.

Bases

Ácidos

Neutros

Atrapar y eluir

Pasar por el cartucho

Adsorción

Pora Pak Rxn CX

Pora Pak Rxn CX

PoraPak Rxn RP

Eliminación de TFA

Convertir a partir de un disolvente con un alto

punto de ebullición para bases

Atrapar y eluir

Atrapar y eluir

Pora Pak Rxn CX

Pora Pak Rxn CX

Fraccionar la muestra antes de LC preparativa para bases

Eliminar el agua de la fracción recogida de la

columna para bases

Atrapar y eluir

Atrapar y eluir

Pora Pak Rxn CX

Pora Pak Rxn CX

Técnica: Producto recomendado:

Productos de reacción:

Componentes de la reacción

Pre- y Post- LC Preparativa:

P ROC EDIMIENTOS D E LIM PIEZA

Con PoraPak Rxn CX: protocolos de pasar por el cartucho y atrapar y eluir con un sorbente de intercambio catiónico fuerte

Con PoraPak Rxn RP: protocolo de fase reversa

Atrapar y eluir: Pasar por el cartucho:

Paso de lavadoLa fracción en metanol 100% contiene más

impurezas, y compuestos ácidos

y neutros

Paso de eluciónMetanol con un 5%

de amoníaco: la fracción contiene bases

Paso de acondicionamiento

Metanol 100%

Paso de cargaLa fracción recogida contiene compuestos

ácidos y neutros, y el solvente de

reacción

Paso de lavadoLa fracción en

metanol 100% contienecompuestos

ácidos y neutros

Combinar de nuevo los pasos de carga

y lavado

Acondicionar con un solvente orgánico como metanol.Este paso es importante para humedecer el sorbente.

Verter la mezcla de reacción en el cartucho. Dejar que la mezcla de reacción fluya por gravedad.

Estrategia de atrapar y eluir: eluir las bases con metanol amoniacado al 5%.

Estrategia de pasar por el cartucho: los compuestos retenidos son los componentes no deseados de la reacción; no

se necesita un paso de elución adicional.

Estrategia de atrapar y eluir: el paso de lavado contiene componentes no deseados de la reacción.

Estrategia de pasar por el cartucho: los analitos de interés no se retienen y se eluyen en el lavado.

Combinar la fracción recogida en el paso de carga con la fracción de lavado.

Estrategia de pasar por el cartucho: los analitos de interés no se retienen

Estrategia de atrapar y eluir: los analitos se retienen por la interacción con el sorbente de intercambio iónico.

Lavar con metanol 100%.

Paso de acondicionamiento

Metanol 100%

Paso de cargaLa fracción recogida contiene compuestos ácidos y neutros, y el eluyente de reacción

Adsorción

Paso de acondicionamiento

Acondicionar el sorbente con un eluyente orgánico polar, de preferencia el mismo que se utilice en la reacción.

Seguir con un paso de equilibrado con una mezcla de eluyente orgánico/agua que contenga un 75% de agua como mínimo.

Paso de carga

Paso de lavado

Paso de elución

Diseñado para eliminar los componentes no deseados de la reacción, no los analitos.

Verter la mezcla de reacción en el cartucho.Dejar que la mezcla de reacción fluya por gravedad.

Lavar con un eluyente más fuerte para eluir los compuestos de interés.

Protocolo genérico: cargar la mezcla de agua:eluyente orgánico (en una proporción 3:1 como mínimo).

La fracción recogida contiene compuestos polares.

Protocolo genérico: acondicionar con metanol seguido por agua.

Protocolo genérico deLavado 1: agua. La fracción contiene compuestos polares.

Lavado 2: agua:metanol (1:1). La fracción recogida contiene menos compuestos polares.

Protocolo genérico: metanol. La fracción recogida contiene compuestos hidrófobos.

Para que se retenga un com-puesto, la reacción llevada a cabo en un solvente orgánico polar debe estar concentrada por evaporación o diluida con agua (en una proporción 3 a 1 o mayor). Esta dilución reduce el contenido orgánico a un 25% o menos con el fin de permitir la retención en fase reversa. El protocolo genérico, que se muestra a la derecha, puede utilizarse como punto de partida para limpiar la mezcla de reacción.

INFORMACIÓN PARA PEDIDOS

LIMPIEZA DE UNA MEZCLA DE AMINACIÓN REDUCT IVA

La aminación reductiva es una reacción habitual en los laboratorios de química médica. En este ejemplo, se emplea un cartucho PoraPak Rxn CX para fraccionar la mezcla de reacción.

R

H –H2O +H2

HR

NR'

O+C

R

R NC R'

R

R'HN

C

R

H

1-naftaldehído Triacetoxiborohidruro de sodio en DCE

4-metoxibencilamina [MBA] N-(naftilmetil)metoxibencilamina (producto)

Procedimiento de atrapar y eluir:

Condiciones de UPLCInstrumento: Sistema ACQUITY UPLC® Columna: ACQUITY UPLC BEH Shield RP18, 2,1 × 100 mm, 1,7 µmNº de ref. de la columna: 186004049Fase móvil A: ácido fórmico al 0.01%Fase móvil B: Acetonitrilo al 100%Gradiente y caudal: Tiempo Caudal A(%) B(%) Curva (min) (mL/min) Inicial 0,42 95 5 Inicial 7 0,42 1 99 6Volumen de inyección: 2 µLTemperatura de la columna: 30 °CDetector: ACQUITY UPLC PDA Longitud de onda de UV: 250-340 nm (modo de absorbancia total)

Mezcla de reacción antes de la limpieza

MBA

PRODUCTO (rendimiento >80%)

1-naftaldehído

0,0

2,0e-1

4,0e-1

6,0e-1

8,0e-1

1,0

1,2

1,4

1,6

1,8

2,0

2,2

2,4

2,6

2,8

3,0

Paso de carga

3% de producto en el eluato de la carga

0,0

5,0e-1

1,0

1,5

71% de NA en el eluato de la carga

Paso de elución

78% de producto en el eluato

0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5 5,0 5,5 6,0 6,5 7,0 Min

0,0

5,0e-1

1,0

1,5

2,0

2,5

Paso de lavado

10% de producto en el eluato de lavado 11% de NA en el eluato de lavado

0,0

5,0e-1

1,0

1,5

2,0

2,5

Mezcla del crudo de reacción. La amina inicial (MBA) está presente en una baja concentración respecto al producto y hay un exceso del aldehído.

Al lavar el cartucho con metanol, se eluye más aldehído en esta fracción.

El cartucho se lava con metanol con amoníaco y se eluyen todos los compuestos básicos. Esta fracción contiene el producto.

Fracción recogida del paso de carga. La fracción que atraviesa el cartucho contiene aldehído que no queda retenido en el intercambiador catiónico.

PoraPak Rxn CX PoraPak Rxn RP

Cartuchos de 6 cc con brida, 400 mg, 30/paquete

186004541 186004545

Cartuchos de 6 cc sin brida, 400 mg, 30/paquete

186004542 186004546

Cartuchos de 20 cc, 2 g, 20/paquete 186004543 186004547

Cartuchos de 60 cc, 5 g, 10/paquete 186004544 186004548

A granel, 200 mL/recipiente 186004569 186004570

Paso de lavadoMetanol 100%

Paso de eluciónMetanol con un 5% de amoníaco

Paso de acondicionamiento

Metanol 100%

Paso de carga

El uso del procedimiento de atrapar y eluir para limpiar esta mezcla de reacción permite recoger rápidamente un número limitado de fracciones, aumentando así

la certidumbre de encontrar rápidamente el producto. Analice la fracción del producto para confirmar su presencia y después, inicie el paso de evaporación

del eluyente más volátil.

DIRECT RICES DE UT ILIZACIÓN DEL PRODUCTO

Las tablas siguientes deben utilizarse como orientativas para la capacidad de carga, el caudal y el volumen de los eluyentes de lavado y elución. Estas tablas tienen en cuenta las dimensiones del dispositivo y el volumen del lecho, y recomiendan los caudales y volúmenes apropiados para los pasos de acondicionamiento, lavado y elución.

La capacidad es para el total de compuestos de la reacción que se retendrán. En el caso del intercambio catiónico, la capacidad es para todas las bases presentes en la mezcla de reacción, incluidos el producto y los reactivos.

Considere cargas menores a las indicadas como capacidad máxima orientativa o elija un dispositivo más grande para evitar la pérdida de compuestos.

El caudal orientativo está pensado para proporcionar un flujo durante el paso de carga de la reacción.

La mezcla de reacción puede verterse en el cartucho y dejar que fluya por gravedad. Si el flujo es demasiado lento, solo hay que añadir una pequeña cantidad de presión o vacío para aumentarlo. Si se producen precipitados en el recipiente de reacción, aclare el recipiente con más eluyente de carga y añádalo a la parte superior del cartucho. Durante los pasos de lavado, el producto atrapado por el precipitado puede disolverse y retenerse en el lecho de relleno para ser eluido posteriormente en las condiciones de eluyente adecuadas.

Esta tabla muestra los volúmenes orientativos para los pasos de acondicionamiento, lavado y elución en los distintos tamaños de cartuchos PoraPak Rxn.

Capacidad máxima orientativa PoraPak Rxn RP PoraPak Rxn CX

Configuración Compuestos retenidos Base retenida

6 cc-150 mg 15 mg/50 µmol 15 mg/50 µmol

6 cc-400 mg 40 mg/150 µmol 40 mg/150 µmol

20 cc-2 g 200 mg/350 µmol 200 mg/350 µmol

60 cc-5 g 500 mg/2000 µmol 500 mg/2000 µmol

Volúmenes de lavado y elución (mL)

DispositivoAcondiciona-

mientoLavado Elución

6 cc-150 mg 3 mL 4 mL 4 mL

6 cc-400 mg 5 mL 10 mL 10 mL

20 cc-2 g 20 mL 20 mL 20 mL

60 cc-5 g 45 mL 45 mL 45 mL

Caudal orientativo (mL/min)

Cartucho de 6 cc 2 mL/min

Cartucho de 20 cc 5 mL/min

Cartucho de 60 cc 9 mL/min

ACONDICIONAR CARgAR LAVAR ELUIR

RETOS DE LIMPIEZA

Reto: Solución:

Convertir o eliminar un disolvente con un alto

punto de ebullición antes del siguiente paso de la

reacción, cuando el producto es una base.

Cargar la mezcla de reacción en el cartucho PoraPak Rxn CX y pasar un eluyente con

un alto punto de ebullición, como DMSO.

Lavar con metanol.

Eluir con metanol con un 5% de amoníaco. Enriquecer la muestra y ahorrar tiempo

mediante la eliminación por evaporación de un eluyente con un bajo punto de ebul-

lición antes del siguiente paso.

Separar el producto (bases) de los reactivos y el

disolvente de reacción.

Cargar en un cartucho PoraPak Rxn CX mediante una estrategia de “atrapar y eluir”.

Lavar con metanol y después eluir con metanol con amoníaco.

Eliminar de las bases el TFA utilizado en

la reacción.

Cargar la mezcla de reacción en un cartucho PoraPak Rxn CX mediante una estrategia

de “atrapar y eluir”. El TFA atraviesa el cartucho sin restricciones.

Lavar con metanol y eluir con metanol con amoníaco.

Convertir a partir del disolvente utilizado en la

última síntesis antes de la LC preparativa para

obtener la muestra en las condiciones de la fase

móvil inicial.

Cargar en un cartucho PoraPak Rxn CX mediante una estrategia de “atrapar y eluir”.

Lavar con metanol y eluir con metanol con amoníaco.

Evaporar la fracción y reconstituir el producto en el eluyente inicial de la LC preparativa.

Eliminar el agua de las fracciones recogidas de la

LC preparativa para un secado más rápido.

Cargar en cartuchos PoraPak Rxn CX mediante una estrategia de “atrapar y eluir”.

Lavar con metanol y eluir con metanol con amoníaco.

Post Synthesis Cleanup

PoraPakTM

Austria y exportación en Europa (Europa central sudoriental, CEI y Oriente Medio) 43 1 877 18 07

Australia 61 2 9933 1777

Bélgica 32 2 726 1000

Brasil 55 11 5094-3788

Canadá 1 800 252 4752 x2205

China 86 21 6879 5888

CEI/Rusia +7 495 3367000

República Checa 420 2 617 1 1384

Dinamarca 45 46 59 8080

Finlandia 09 5659 6288

Francia 33 1 30 48 72 00

Alemania 49 6196 400600

Hong Kong 852 29 64 1800

Hungría 36 1 350 5086

India y subcontinente indio 91 80 2837 1900

Irlanda 353 1 448 1500

Italia 02 265 0983

Japón 81 3 3471 7191

Corea 82 2 820 2700

México 52 55 5200 1860

Países Bajos 31 76 508 7200

Noruega 47 63 84 60 50

Polonia 48 22 833 4400

Puerto Rico 1 787 747 8445

Singapur 65 6273 1221

España 34 93 600 9300

Suecia 46 8 555 11 500

Suiza 41 56 676 70 00

Taiwán 886 2 2543 1898

Reino Unido 44 208 238 6100

Todos los demás países: Waters Corporation U.S.A. 1 508 478 2000

1 800 252 4752

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