Principales aspectos microbiológicos

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Genero Brucella.sppPrincipales aspectos microbiológicosEl manual de bioseguridad para laboratorioselaborado por la Organización Mundial de laSalud (OMS) clasifica a los microorganismosdel género Brucella en el Grupo de Riesgo III

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División BXII. ProteobacteriaClase I AlphaproteobacteriaOrden I RhodospirillalesFamilia II AcetobacteraceaeGénero I AcetobacterGénero IX GluconobacterOrden II RickettsialesFamiliaI RickettsiaceaeGénero I RickettsiaOrden VI RhizobialesFamilia I RhizobiaceaeGénero I RhizobiumGénero II AgrobacteriumFamily III BrucellaceaeGénero I Brucella

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División Proteobacterias Clase Alphaproteobacterias Orden Rhizobiales Familia Brucellaceae

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-1887, David Bruce aisla una bacteriaa partir del bazo de un soldado inglésmuerto en Malta tras sufrir una enfermedad caracterizada por un cuadro febril ondulante. Bruce denomina a esta bacteria Micrococcus melitensis

1897 Bernhard Bang descubre una bacteriacausante de abortos en vacas a la que denominaBacillus abortus

1914 Temistocles Zammit demuestra quela brucelosis se transmite por el consumode leche de cabra

1917 Alice Evans demuestra que la leche de vaca también transmite la brucelosis.Asocia la enfermedad al Bacillus abortus de Bang al que renombra como Brucella abortus

1931 Forrest Huddleson reconoce el microorganismocausante de la brucelosis en cerdos como una especienueva: Brucella suis

1966 Leland Carmichael descubre una nuevaespecie a la que denomina Brucella canis poraislarse de casos de abortos en perros.Esta especie se demuestra capaz de infectar a laspersonas

Genero Brucella

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GENERO Brucella: GENERALIDADESPequeños cocobacilos Gram negativosAerobios estrictos, catalasa y oxidasa positivosCrecimiento lento y nutricionalmentemuy exigentes

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Nuevas especies Brucella cetáceaBrucella pennipeda Brucella microti

Brucella maris

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Laboratorio de InmunologiaLaboratorio de Inmunologia

Coloración de Gram

cocobacilo, aeróbico

Gram negativo

No poseen capsulas

Son inmóviles

No son esporulados

Parásitos intracelulares facultativos

Particular perfil metabólico

Producen una infección de por vida en los animales

MorfologíaSon bacilos pequeños de 0,6-1,5 m de

longitud y 0,5-0,7 m de diámetro

Genero BrucellaEspecie : Brucella melitensisBiovares: melitensis abortus suis canis ovis neotomae maris

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RESERVORIOS COMUNES DE LA ESPECIE DE BRUCELLAESPECIE BIOVAR. HOSPEDERO PATOGENICIDAD EN HUMANOSBr. melitensis Todos Caprinos/ovinos +Br. abortus T Todos Bovinos +Br. suis 1, 3 Porcinos + 2 Porcinos, liebres - 4 Caribus, renos +Br. canis Caninos +Br. ovis Ovinos -Br. neotomae Ratas de campo -Br. maris Ballenas, delfines, bufeos + Focas, leones marinos

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Brucella lisas

B.abortus B.melitensis B.suis

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Brucella ovis y Brucella canis

Son cepas naturalmente RUGOSAS

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Principales características del Género

cocobacilo, aeróbico Gram negativo No poseen capsulas Son inmóvilesNo son esporulados Parásitos intracelulares facultativos Particular perfil metabólico Producen una infección de por vida en los animales

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CARACTERISTICAS GENERALESMorfologíaSon bacilos pequeños de 0,6-1,5 m de longitud y 0,5-0,7 m de diámetro

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Por las características de su pared son Gram negativos.InmóvilesNo Poseen cápsula.

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Los cultivos lisos de Brucella (S) presentan tendencia a sufrir variaciones durante el crecimiento, especialmente con subcultivos y aparecen formas rugosas (R).

Las colonias son entonces mucho menos transparentes, presentan una superficie matemás granular y el color varía de blanco mate amarrón con luz reflejada o trasmitida. 20

La comprobación de esta transición se realiza fácilmente por tinción con cristal violeta: las colonias rugosas aparecen rojas y las lisas de color amarillo pálido.

Si las colonias son lisas deben probarse con antisuero contra B. abortus lisa, o preferiblemente con antisueros monoespecíficos contra los antígenos de superficie A y M.

En el caso de colonias rugosas, las colonias deben probarse con antisuero contra el antígeno R de Brucella.

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La mayoría de las especies son Catalasa positivas

A la oxidasa son negativos B. ovis B. Neotomae

Son aerobios estrictos a excepción B. ovis y B. abortus, son microaerobias

(5- 10 % de CO2)22

Requerimientos de Cultivo

Necesita medios enriquecidos complejos, por requerir de ciertos animoácidos ,tiamina, biotina, nicotinamida, pantotenato de calcio y trazas de magnesio.

Se usan medios con suero

Medio enriquecido Albimi

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En los medios seobservan las coloniaspequeñas, húmedas ybrillantes.El periodo de incubaciónes de 72 a 96 horas.Presentan disociación (SR)

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Coloración de Gram

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Factores de virulencia y patogenicidad

Bacterias de vida endocelular

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Factores de Virulencia

Lípido AActividad antileucocitaria (Pared Celular)

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EL DIAGNÓSTICO

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Diagnostico DirectoAislamiento: sangre - hemocultivo fetos placentasemenPoner en evidencia el agente: Técnicas de biología molecular PCR

Coloraciones especificas: Coloración de Stamp

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Medios enriquecidosAgar Brucella con 10% de suero estérilAgar Tripticasa Soya con suero estéril

Medios selectivosMedios enriquecidos mas antibióticos BacitracinaCicloheximidaPolimixina BAgar base estéril, fundirlo a 50°C se le agregan las soluciones :Bacitracina 25.000UI por litroPolimixina B 6000 UI por litroCicloheximida 100mg litro

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Pruebas bioquímicas básicas

Tbilisi

BRUCELÓFAGOSBRUCELÓFAGOS

6 grupos de fagos : 6 grupos de fagos :

Tipo 1:: Tbilisi B.abortus en fase S SI o I Tipo 2: cepa Firenze75/13 . B.abortus S SI I y B.suis(4)Tipo 3:: cepa Weybridge B.abortus S SI I y B.suis

Tipo 4: Berkeley BK0 BK1 Y BK2 Formas S abortus,neotomae,suisTipo 5: R/O ,R/C Formas R de Brucella Tipo 6: Tzatnagar Iz Cultivos S,SI,I de abortus,melitensis,neotomae y suis.

El patrón de sensibilidad a los fagos muestra una gran El patrón de sensibilidad a los fagos muestra una gran

vinculación con la actividad de oxidación metabólica, definen : vinculación con la actividad de oxidación metabólica, definen : especieespecie

Por lo general, los cambios de morfología colonial se asocian con cambios en la virulencia, en las propiedades serológicas y/o en lasensibilidad a los fagos.

La aglutinación positiva con un antisuero anti-Brucella es una identificación preliminar de que el aislado corresponde a Brucella.

La identificación posterior completa se realiza mejor en un laboratorio de referencia.

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Los animales infectados eliminan Brucella al medio, contaminando el ambiente (pastos, aguas,establos).

La eliminación es particularmente importante durante el aborto o los partos infecciosos, 1014 UFC/Brucella por gramo de tejido cotiledonario de vacas.

En estos casos, los loquios, la orina, la leche y losfetos están infectados.

La eliminación continúa enforma importante durante los 45 días post-parto.

La leche es también una vía de eliminación importantey fuente principal de infección para el hombre.

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En los rumiantes, la enfermedad pasa desapercibida, siendo el único signo clínico el aborto

último trimestre de la gestación.

Las crías pueden nacer muertas o débiles.

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Sólo en los animales• Vacuna a las terneras con Cepa 19• 2 ml, vía SC en terneras de 3 a 8 meses de

edad.

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Enfermedad profesional

Quesos principalmente de cabra

Leche

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• VIA DE EXTRACCIÓN - VOLUMEN (4 -5 ml.) - INSTRUMENTAL A UTILIZAR

• CALIDAD : - HEMOLISIS - CONTAMINACIÓN • TIPO : - SANGRE ENTERA : refrigerada - SUERO: frizado

• EMBALAJE

• IDENTIFICACIÓN

Muchas graciasMuchas gracias

B.abortusB.abortus B.melitensisB.melitensis B.suisB.suis