UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTAFACULTAD DE INGENIERIAINGENIERIA AGROINDUSTRIAL

INDICE:

I.INTRODUCCIN:1II.OBJETIVOS:1III.FUNDAMENTO TEORICO:23.1.PRUEBA DE BIURET PARA RECONOCIMIENTO DE PROTENA23.2.PRUEBA DE KJELDAHL2IV.MATERIALES:3V.PROCEDIMIENTO:45.1. Obtencin de protena de leche.45.2. Prueba de biuret.55.3. Prueba de kjeldahl.55.3.1. Etapa de digestin:55.3.2. Etapa de destilacin:65.3.3. Etapa de valoracin o titulacin:7VI.RESULTADOS:9VII.DISCUSIONES:9VIII.CONCLUSIONES:9IX.REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:9

I. INTRODUCCIN:

II. OBJETIVOS:

III. FUNDAMENTO TEORICO:

3.1. PRUEBA DE BIURET PARA RECONOCIMIENTO DE PROTENA

La reaccin debe su nombre al biuret, una molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2), que es la ms sencilla que da positiva esta reaccinLa presencia de protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos presentando un mximo de absorcin a 540 nm.

Da positiva esta reaccin en todos los compuestos que tengan dos o ms enlaces peptdicos consecutivos en sus molculas. Espectrofotometra. Principios bsicos

A diferencia de las pruebas realizadas anteriormente, la reaccin de Biuret es cuantificable, es decir, a mayor concentracin de protenas, mayor intensidad de color violeta. Esta reacciones, en las que el color formado es proporcional a la cantidad de sustancia se llamanreacciones colorimtricas.Midiendo la intensidad de color se podra conocer la concentracin de la sustancia que lo produce. Para ello se aplican tcnicas fotomtricas, empleando un aparato llamadocolormetro(si mide slo un determinado color) oespectrofotmetro(si realiza una medida de todo el espectro de colores).

La luz es parte de la radiacin electromagntica, que se propaga de forma ondulatoria. Las distintas radiaciones luminosas (los distintos colores) se diferencian unas de otras por sus longitudes de onda (l)(distancia entre la cresta de una onda y la siguiente), que se mide en nm. La luz visible engloba las radiaciones comprendidas entre 380-750 nm, que corresponden a los colores del arco-iris, de tal forma que cada color corresponde a una radiacin con unalespecfica. El espectrofotmetro dispone de una lmpara que emite luz monocromtica, de una longitud de onda determinada, que incide y atraviesa la muestra coloreada a medir, y de un detector, que medir la cantidad de luz que no es absorbida por la muestra. Para cada sustancia determinada, se utilizar la radiacin de longitud de onda a la que absorba ms cantidad de luz.Su funcionamiento de basa en la ley de Beer-Lambert: la fraccin de luz incidente que es absorbida por una solucin es proporcional a la concentracin de soluto y al espesor de la sustancia atravesada por la luz. La relacin entre la luz incidente (I0) y la reflejada (I) dar una idea de la cantidad de radiacin que ha sido absorbida por la muestra. Es lo que se denominaAbsorbancia(Abs) oDensidad ptica(DO)

3.2. PRUEBA DE KJELDAHL

IV. MATERIALES:

V. PROCEDIMIENTO:5.1. Obtencin de protena de leche.

Para la obtencin de la casena se trabajara con la muestra de la prctica anterior.

5.2. Prueba de biuret.

Prepara un blanco de agua de 2 ml y tres tubos de patrn que contengan 2, 5 ,8 mg de protena (0.2, 0.5, 0.8 ml de la solucin de patrn) y aadir agua hasta completar 2 ml. de las muestras obtenidas se diluyen adecuadamente y se toman un volumen de 2 ml para mediciones espectrofotomtricas.

Aadir 8 ml de reactivo de biuret en todos los tubos y mezclar.

Despus de 30 min. leer la densidad ptica en 500 nm corriendo con el blanco

5.3. Prueba de kjeldahl.

5.3.1. Etapa de digestin:

Se introducen 1 a 5 g de muestra un tubo de mineralizacin y se ponen 2 pastillas de catalizador que suele estar constituido por una mezcla de sales cobre, oxido de titanio o/y oxido de selenio. De forma habitual se utiliza como catalizador una mezcla de K2SO4: CuSO4 : se (10:1:0,1). Despus se adicionan 10 ml de h2so4 concentrado posteriormente se digiere a 400 C durante una hora. Se sabe que la digestin ha terminado porque la disolucin adquiere del cido sulfrico en caliente. En la actualidad, para llevar a cabo este proceso se utilizan digestores automticos que son capaces de digerir un nmero determinado de muestras al mismo tiempo.

5.3.2. Etapa de destilacin:

Despus de enfriar se coloca el tubo de mineralizacin en el destilador automtico al cual est programado para adicionar NaOH al 40% y agua destilada adems de inyectar vapor. Para determinar fuertemente el medio y as desplazar el amoniaco de las sales amoniacos. El amoniaco liberado es arrastrado por el vapor de agua inyectado en el contenido del tubo durante la destilacin.

El destilado obtenido es agregado automticamente a un matraz que contiene el lquido receptor elaborado por cido brico, rojo de metil y verde de bronocresol.

5.3.3. Etapa de valoracin o titulacin:

La cuantificacin del nitrgeno amoniacal se realiza por medio de una volumtrico acido-base del ion borato formato, empleando cido clorhdrico o sulfrico y como indicador una disolucin alcohlica de una mezcla de rojo de metilo y azul de metileno. Los equivalentes de cido consumido correspondientes a los equivalentes de amoniaco destilados.

En tubo en blanco

En tubo con muestra de filete.

VI. RESULTADOS:VII. DISCUSIONES:VIII. CONCLUSIONES:IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

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