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8/17/2019 biotoxinas-marinas.docx

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METODOLOGIA PARA EL ANALISIS DE BIOTOXINAS MARINAS

INTRODUCCION

La proliferación masiva cada vez más frecuente de organismos Fito

planctónicos que da origen a episodios tóxicos está determinada por

las condiciones ambientales del medio en el que vive y la inuencia

de un gran número de factores físicos (salinidad temperatura luz! y

químicos como la presencia de nutrientes (nitrógeno fosforo etc!

debido al aumento de la contaminación de aguas"

#ntre las contaminaciones más importantes de alimentos de origenmarino por proliferaciones de algas toxicas y consecuentemente de

$umanos consumidores de los mismos se encuentran las

intoxicaciones %&% 'ntoxicación %aralítica por ariscos )&%

'ntoxicación )iarreica por ariscos y *&% 'ntoxicación amn+sica por

mariscos"

#n este documento se $izo un protocolo de análisis para la

determinación de biotoxinas marinas"

PROCEDIMIENTO (MOLUSCOS BIVALVOS)

%reparación de la muestra

, Lavar cuidadosamente el exterior del marisco con agua dulce", *brir cortando el músculo aductor", &e lava el interior con agua dulce para eliminar arena y otras sustancias

extra-as", &e separa la carne de las valvas", &e recoge de ./0 a 100 gramos y se coloca en un tamiz para de2ar

escurrir / minutos" #l líquido 3ltrado se desec$a", &e procesa en una licuadora $asta consistencia $omog+nea"

Preparación del e!rac!" #cid"

, &e coloca .00 gramos del material bien mezclado en un recipienteresistente al calor"

, &e a-ade solución acuosa 0".4 de 56l7 .00 ml

, &e calienta la mezcla y se $ierve suavemente durante / minutos, &e de2a enfriar


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, &e toma p5 del líquido" )ebe ser menor de 8"/ con papel medidor del p5", &i se necesita disminuir el p57 utilizar una solución / 4 56l gota a gota, &i se necesita aumentar el p57 utilizar una solución 0". 4a95 gota a gota, &e traslada la mezcla a una probeta graduada y se completa a 100 ml

con agua pura o

, levemente acidulada, &e agita se coloca en tubos de centrífuga y se centrifuga a :000 rpmdurante / minutos

, #l líquido sobrante es el extracto ácido

Pr$e%a en ra!"ne& (Re&p$e&!a %i"ló'ica SOMMER MAER *+,-)

, #xtracto ácido de moluscos7 p5 :;8, minutos• &e utilizan ratones sanos $embras de .?; 1. gramos cepa 6F." &i pesan

menos de .? ó más de 1. se aplica el factor de corrección de masa delmismo (tabla de &9#=!

, @ía intraperitoneal7 . ml de extracto ácido" &e anota el momento deinoculación y el tiempo de muerte (último movimiento respiratorio!"

, &i el tiempo de muerte es menor a / minutos de varios ratones se diluyecon solución 3siológica acidulada p5 : para obtener un tiempo de / a >minutos"

C#lc$l" de !"icidad

, )eterminar tiempo medio de muerte de los ratones y usar tabla de&9#=6álculo para determinar unidades ratón7

@*L9= A'#%9


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, #s necesario contar con una colonia de ratones de entre .? y 11 g depeso"

, #l límite de detección del ensayo varía según la cepa", La relación entre el tiempo $asta la muerte y la concentración de toxinas

no es lineal"

, La determinación exacta del tiempo $asta la muerte es muy traba2osaH yconlleva el sacri3cio de un gran número de animales"

In!"icación Diarreica p"r Mari&c"& (DSP)

Iioensayo en ratón

#xtraer las toxinas con acetona del te2ido de marisco evaporar y disolver elresiduo obtenido en un volumen peque-o de .J AKeen 0" #l extracto seinyecta intraperitonealmente a ratones de 10 g de peso corporal y seregistra la supervivencia entre 18 y 8M $oras"


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tiempo transcurrido (en general menos de ./ minutos! desde la inyeccióninicial a la muerte del ratón"

In!"icación ne$r"ló'ica p"r .ari&c"& (NSP)

Iioensayo en ratón#n el bioensayo en ratón se evalúa la toxicidad inyectandointraperitonealmente extracto lípido en bruto de mariscos en ratones" Losresultados se expresan en unidades ratón (


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ciguatoxinas encontradas en los peces carnívoros (LeKis y &ellin .??1HLeKis et al" .??.! esta relación la aproxima log


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Los ensayos se realizaran con las muestras previamente $omogenizadas en

días diferentes para cuanti3car el ácido domoico expresado en mgg" &e

traba2ara con : niveles de concentración diferentes adicionados a la

muestra de2ando asi en contacto la solución estándar con las muestras

durante unas $oras ba2o refrigeración se realizara el tratamiento y se $ara

las lecturas de los resultados de las muestras"

La especi3cidad del m+todo se representó mediante los espectros de los

estándares y el reporte de su correspondiente pureza en las muestras" %ara

evaluar la especi3cidad del sistema se traba2ara con la solución estándar

mediante el softKare del equipo"

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