BIOQUIMICA FARMACIA DE AUTORES: BIBLIOTECA

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TESIS II

“Tamizaje fitoquímico y efecto antifúngico in vitro del extracto

hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes (amancay) frente a Candida

albicans”

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTORES:

ROJAS ONTANEDA, Leslie Jenifer

ASESORA:

Dra. SOTO VÁSQUEZ, Marilú Roxana

TRUJILLO – PERÚ

2019

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

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A Dios, por guiar cada uno de mis pasos y

mantener mi camino firme y lleno de

bendiciones.

A mis padres, Miguel y Luz, por ser

modelos de responsabilidad y

esfuerzo y adentrar en mí estos

valores. Por la confianza depositada

y el apoyo incondicional otorgado en

cada etapa de mi vida.

A mi hermano Miguel, mi más grande motivo

para avanzar día a día hacia mis metas y poder

así, guiarlo hacia las suyas.

A mi sobrina Luciana, a mi abuela

Esther y a mi tía Mary, por ser una

fuente de inspiración y fortaleza en

mi camino.



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AGRADECIMIENTO.

Mi más profundo y especial agradecimiento a mi asesora Marilú Roxana Soto Vásquez,

quien con su paciencia y conocimiento me ha sabido orientar a lo largo de este camino.



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ÍNDICE

JURADO DICTAMINADOR ii

DEDICATORIA iii

AGRADECIMIENTO iv

PRESENTACIÓN v

RESUMEN vi

ABSTRACT vii

INTRODUCCIÓN 1

MATERIAL Y MÉTODO 8

RESULTADOS 21

DISCUSIÓN 26

CONCLUSIÓN 30

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 31

ANEXOS 34



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RESUMEN

El presente trabajo de investigación, tuvo como objetivo realizar el tamizaje fitoquímico,

y evaluar el efecto in vitro del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes

(Amancay) frente a Candida albicans.

Se obtuvo el extracto hidroetanólico mediante soxhlet de 30 g de bulbos de Ismene

amancaes (amancay) procedente del distrito de Otuzco, provincia de Otuzco,

departamento de La Libertad. Se realizó el tamizaje fitoquímico preliminar mediante el

método de Martinez y Cuéllar. El extracto hidroetanólico se fraccionó en extracto

clorofórmico, etanólico y acuoso, en los cuales se realizaron los diferentes ensayos

fitoquímicos. Finalmente se determinó el efecto antifúngico del extracto hidroetanólico

de Ismene amancaes “amancay” mediante el método de difusión en discos – Kirby &

Bauer a concentraciones de 0.05 g/ml, 0.10 g/ml, 0.15 g/ml, 0.30 g/ml y 0.5 g/ml frente a

Candida albicans. En la fracción clorofórmica de bulbos de Ismene amancaes se

identificaron cualitativamente triterpenos-esteroides. En la fracción etanólica de bulbos

de Ismene amancaes se identificaron cualitativamente compuestos fenólicos, alcaloides,

aminoácidos, flavonoides, catequinas y resinas, y en la fracción acuosa de de Ismene

amancaes se identificaron cualitativamente alcaloides y saponinas. El extracto

hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes “amancay” presentó a concentraciones de

0.15 g/ml, 0.30 g/ml y 0.5 g/ml halos de inhibición, con valores promedios de 14.67 mm

± 2.5, 25.42 mm ± 1.62, 28.75 mm ± 3.11 respectivamente. Siendo sensible frente a

Candida albicans.

La concentración minima antifúngica del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene

amancaes fue de 0.5 g/ml, frente a Candida albicans.

PALABRAS CLAVES: Tamizaje fitoquímico, Ismene amancaes, efecto antifúngico,

Candida albicans, in vitro.



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ABSTRACT

The objective of this research work was to carry out phytochemical screening, and to

evaluate the in vitro effect of the hydroetanolic extract of bulbs of Ismene amancaes

(Amancay) against Candida albicans.

The hydroethanolic extract was obtained by means of 30 g of bulbs from Ismene

amancaes (amancay), the district of Otuzco, province of Otuzco, department of La

Libertad. Preliminary phytochemical screening was performed using the Martínez and

Cuéllar method. The hydroethanolic extract was fractionated in the chloroform, ethanolic

and aqueous extract, and in which the different phytochemical tests were carried out.

Finally the antifungal effect of the hydroquinhanolic extract of Ismene amancaes

"amancay" was determined by means of the diffusion method in nightclubs - Kirby &

Bauer at a rate of 0.05 g / ml, 0.10 g / ml, 0.15 g / ml, 0.30 g / ml and 0.5 g / ml against

candida albicans. In the chloroformic fraction of bulbs of Ismene amancaes, triterpene-

steroids are qualitatively identified. Phenolic compounds, alkaloids, amino acids,

flavonoids, catechins and resins were qualitatively identified, and in the proportion of

Ismene amancaes, alkaloids and saponins were qualitatively identified. The

hydroethanolic extract of bulbs of Ismene amancaes "amancay" presented at

concentrations of 0.15 g / ml, 0.30 g / ml and 0.5 g / ml halos of inhibition, with average

values of 14.67 mm ± 2.5, 25.42 mm ± 1.62, 28.75 mm ± 3.11 respectively. Being

sensitive to Candida albicans.

The minimum antifungal concentration of the hydroethanolic extract of Ismene amancaes

bulbs was 0.5 g / ml, compared to Candida albicans.

KEY WORDS: Phytochemical screening, Ismene amancaes, antifungal effect, Candida

albicans, in vitro.



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I.- INTRODUCCIÓN

Las micosis invasoras son cada vez más frecuentes en la práctica clínica, afectando

especialmente a sujetos con grados variables de inmunocompromiso, por causas como

infección por el Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH) y enfermedades

hematológicas malignas. Además, se presentan en forma secundaria a tratamientos

agresivos como cirugía mayor, terapia anti retroviral, quimioterapia, trasplante de

precursores hematopoyéticos y tratamientos antimicrobianos de amplio espectro.1

La sepsis producida por hongos, principalmente por especies del género Candida spp. se

ha transformado en un problema creciente en servicios de salud, pues su incidencia se ha

Incrementado en un 40% entre los años 1980 y 1990. Actualmente corresponde a la cuarta

causa de sepsis a nivel nosocomial en hospitales complejos, desplazando en parte a

Staphylococcus coagulasa negativo, Staphylococcus aureus y Escherichia coli. 2

Los hongos son microorganismos muy ubicuos; se encuentran diseminados en el suelo,

aire, agua y seres vivos, sobre todo en los vegetales. Solo unas 175 especies, de las más

de 500.000 clasificadas hasta la fecha, son capaces de producir enfermedades en el

hombre. Además de sobrevivir y crecer a la temperatura del cuerpo humano, los hongos

que producen enfermedad en el hombre deben vencer los mecanismos de defensa del

huésped y esto se da en muy pocas ocasiones. Candida albicans es la especie más

virulenta, y constituye el agente principal en las infecciones micóticas humanas.1, 3

Dentro del género Candida está la especie Candida albicans que es un comensal común

en las membranas de las mucosas de la boca, el intestino y la vagina de individuos sanos,



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pero puede invadir localmente, En casos extremos, puede crecer sistemáticamente y

causar la muerte después de colonizar la sangre a través de un catéter intravenoso, en el

cual las células de levadura se adhieren.3

Candida albicans contiene en su pared celular manano, quitina, proteínas, lípidos y

carbohidrato, los cuales son importantes en los procesos de adherencia al epitelio antes

de invadirlo, además con la obtención de ácidos carboxílicos de cadena corta, producto

del metabolismo de los azúcares logra un ambiente ácido óptimo para su crecimiento. El

componente antigénico es una glicoproteína que se encuentra en la pared celular, que

asociado a la producción de fosfolipasas capaces de destruir la membrana celular del

hospedero y proteinasas que ejercen un efecto sobre la superficie celular, juegan un papel

importante en la fase inicial de las infecciones en mucosas.4

El equilibrio entre la infección, la colonización y la eliminación depende de la capacidad

de las cepas de Candida para modular la expresión de factores de virulencia en la

respuesta a los cambios del medio ambiente, combinado con la competencia del sistema

inmune del huésped.3

Los principales factores de patogenicidad de Candida albicans son: switch fenotípico

(cambio morfológico entre levadura, formación de hifas y pseudohifas), secreción

enzimática, expresión diferencial de genes en respuesta al ambiente, síntesis de adhesinas

y su capacidad para formar biopelículas, las que contribuyen a la generación de resistencia

a los antifungicos.5

La formación de una biopelícula también es muy favorable para esta levadura, ya que le

permite resistir la acción limpiadora del flujo salival y de las moléculas de defensa del



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hospedero, además de brindar mayor resistencia a antifúngicos como el fluconazol, sobre

todo si esta biopelícula está compuesta también por bacterias. Se ha descrito que las

células fúngicas modulan la acción de antibióticos y a su vez las bacterias afectan la

actividad de agentes antifúngicos en biopelículas mixtas.6

Los protocolos actuales de tratamiento de la candidiasis son estándar, se aplican de igual

modo a todos los pacientes que presenten la condición. Comúnmente el tratamiento

comprende la administración de antifúngicos orales como nistatina o diversos azoles,

entre ellos, el fluconazol. La toxicidad presenta una diferencia importante entre los dos

grupos de azoles, debido a su selectividad. En consecuencia, los imidazoles son más

tóxicos.5, 7

Es por esta razón que la gente en países como el nuestro, busca nuevas alternativas y

prefiere muchas veces el tratamiento de sus afecciones con plantas medicinales, el uso

de las plantas medicinales se remonta a la época prehistórica en la mayoría de las culturas

conocidas. Gracias a sus infinitos conocimientos tradicionales, esta industria ancestral

persiste en el equilibrio del bienestar integral tanto de los pacientes como de los

practicantes.8

La familia Amarilidácea, la componen alrededor de 60 géneros, los cuales están ubicados

fundamentalmente en el sureste de África y en América del Sur, con gran cantidad de

especies apreciadas por su valor desde el punto de vista ornamental. Ciertamente esta

familia es muy afín con la Liliácea, pero se diferencia por la posición del ovario.9

Una característica particular de las amarilidáceas es la presencia de un grupo de alcaloides

isoquinolínicos. Su característica común es la presencia de un sistema de anillos



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compuesto por una unidad C6-C1 derivada del aminoácido fenilalanina y una unidad N-

C2-C6 derivada del aminoácido tirosina. Los subgrupos más conocidos incluyen los del

tipo licorina, galantamina, tazzetina, crinina y narciclasina. 10

La licorina tiene propiedades antineoplásica, antivírica dosis dependiente sobre el virus

Polio I, Coxsackie y Herpes simple; antiprotozoaria sobre P. caudatum. Inmunosupresor

útil en prevención de rechazos a trasplantes y tratamientos en alergias. Inhibidor potente

de la biosíntesis del ácido ascórbico así como también del crecimiento y división celular

en líneas celulares humanas y animales.10

La Narciclasina tiene propiedades antineoplásicas frente al glioblastoma multiforme

humano (GBM) en modelos animales preclínicos. Este tipo de tumor se caracteriza por

invasión agresiva de tejidos cerebrales normales y resistencia a las terapias

convencionales que desencadenan la apoptosis. Narciclasina tiene la habilidad de cruzar

la barrera hematoencefálica.10

La galantamina actúa como inhibidor de la acetilcolinesterasa selectivo, competitivo y

rápidamente reversible que interacciona tanto con el sitio aniónico como con la cavidad

aromática de la enzima. Además, se ha demostrado que es un modulador alostérico del

receptor neuronal nicotínico de acetilcolina. 11

Los alcaloides amarilidáceos, bufanidrina y distichamina, presentan actividad

antibacterial de amplio espectro frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli y

Klebsiella pneumonia. Candimia y una serie de derivados de licorina han mostrado

importante actividad frente al parásito Trichomonas vaginalis.11

Ismene tiene 10-14 especies originarias de los Andes. En el Perú habitan 10 especies, de

ellas 8 son endémicas; destaca en el Norte de Perú I. amancaes. Ismene amancaes



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“amancay” es una planta bulbosa que se desarrolla en la costa central de Perú y es un

componente característico del ecosistema de Lomas. Su desarrollo es dependiente de la

humedad ambiental que se presenta en los meses de invierno.12,22

En la actualidad esta especie se encuentra reportado como Ismene amancaes en

“Catalogue of the Flowering Plants and Gymnosperms of Perú” (1993) de Brako &

Zarucchi. Se le ubica como división angiospermae, clase monocotiledónea, orden liliales,

familia amarilidácea. Se le conoce con los siguientes nombres vulgares: amanca,

amancaes, amancay, flor de amancaes, amancaes, janancai (y), jamanackai y lirio de

amancaes.13

Ismene amancaes es una hierba con bulbos blancos, hojas de color verde intenso y flores

terminales amarillas con interior verdoso. Florece una vez al año, naciendo entre piedras

y neblina, y tiene un tiempo de vida corto de 2 a 4 días. Posee semillas verdes que

germinan en la planta y posteriormente caen con raíz al suelo. Se le encuentra silvestre y

cultivada, y tiene usos cosméticos y medicinales.14

Hymenocallis amancaes (R. & P.) tiene uso medicinal para el tratamiento de contusiones

y músculos desgarrados, también se utiliza como ornamental y es el símbolo de la ciudad

capital de Lima, aunque se considera en peligro de extinción.15

En un estudio realizado en el 2016 en México, denominado “Micropropagación de

Hymenocallis harrisiana” que tuvo como autor a Mayra Flórez Alcántara, se demostró

que la planta H. littoralis, tiene propiedades contra Candida albicans. Se ha demostrado

que esta misma especie contiene varios alcaloides con propiedades medicinales que

pueden ser aislados del bulbo (licorina), que ha demostrado tener efectos antineoplásicos

y antivirales. Así mismo, se menciona que en el género Hymenocallis hay presencia de



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galantamina, un alcaloide que actualmente se comercializa para el tratamiento

sintomático de la enfermedad de Alzheimer.20.

Debido a que esta planta es muy poco estudiada y casi no se han encontrado trabajos

científicos y debido a la gran incidencia de infecciones fúngicas por el hongo Candida

albicans es que busca realizar este estudio en el cual se investiga los extractos

hidroetanólicos de Ismene amancaes en Candida albicans.

Por lo expuesto se plantea el siguiente problema:

¿El extracto hidroetanólico de los bulbos de Ismene amancaes (Amancay)

presentará efecto antifúngico frente a Candida albicans?

Postulándose la siguiente hipótesis:

Los fitoconstituyentes del extracto hidroetanólico de los bulbos de Ismene

amancaes (Amancay) presentan efecto antifúngico frente a Candida albicans.



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OBJETIVOS

Objetivo general:

Determinar los fitoconstituyentes y el efecto in vitro del extracto hidroetanólico

de los bulbos de Ismene amancaes (Amancay) frente a Candida albicans.

Objetivos específicos:

Realizar el tamizaje fitoquímico del extracto hidroetanólico de los

bulbos de Ismene amancaes (amancay).

Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto

hidroetanólico de los bulbos de Ismene amancaes (amancay) frente a

Candida albicans.



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II. MATERIAL Y MÉTODO

MATERIAL:

1. Material botánico

- 1 kg de bulbos de Ismene amancaes (amancay), recolectadas del sector

Platanar, provincia de Otuzco.

2. Material microbiológico:

- Cándida albicans ATCC 90028

Proporcionada por el departamento de microbiología y parasitología de la

Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo

3. Material farmacológico

- Discos de sensibilidad: Fluconazol 25UI

4. Material de laboratorio

Materiales de vidrio de uso común en laboratorio

4.1. Equipos e instrumentos:

Balanza analítica OHAUS

Baño maría MEMMERT

Cocina eléctrica

Estufa MEMMERT



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Micropipeta BIOHIT

Refrigeradora ELECTROLUX

Autoclave

Horno

4.2. Reactivos:

Anhídrido acético

Acetato de sodio

Ácido clorhídrico

Ácido sulfúrico

Alcohol amílico

Amoníaco

Carbonato de sodio

Cloroformo

Cloruro de sodio

Cloruro de sodio (10%)

Hidróxido de potasio

Hidróxido de sodio

Magnesio metálico

Ninhidrina

Tricloruro férrico (5%)

Reactivo de Baljet

Reactivo Dragendorff

Reactivo de Fehling

Reactivo de Liebermann-Burchard



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Reactivo de Mayer

Reactivo de Wagner

Solución de gelatina (1%)

4.3. Solventes:

Diclorometano

Alcohol

Agua

4.4. Otros

Alcoholímetro

Algodón hidrófilo

Mascarillas

Guantes estériles

Papel de filtro Whatman Nº 01

Asa bacteriológica

Placas petri

Mechero de Bunsen

MÉTODO:

1. Recolección de la muestra:

La especie de Ismene amancaes se recolectó del Sector Platanar, distrito de Otuzco,

provincia de Otuzco, departamento de La Libertad. La recolección de la especie se realizó



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por el método convencional de herborización, se seleccionó el material en el campo y

verificó sus buenas condiciones.

2. Identificación y determinación taxonómica de la especie:

Se llevó un ejemplar de la planta al Herbarium Truxillense (HUT) para su identificación

y posterior verificación taxonómica según el sistema filogenético de la especie. (Código

de depósito anexo 1)

3. Preparación de la muestra17

Selección de la muestra: El material vegetal recolectado fue transportado al

laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la

Universidad Nacional de Trujillo, en donde se eliminó las sustancias extrañas

presentes en el material vegetal.

Lavado de la droga: Luego de la separación de las sustancias extrañas, se

procedió a lavar el material vegetal con agua destilada, seguido de una

desinfección utilizando hipoclorito de sodio a una concentración de 200 ppm

durante 5 minutos. Posteriormente se realizó un enjuague con suficiente agua

destilada estéril, esto fue para retirar los residuos de hipoclorito.

Secado: Una vez lavado los bulbos, se procedió a adecuar la droga en bolsas

de papel Kraft con orificios y se colocó en la estufa a una temperatura de 40 °C

y se realizó la determinación de peso cada 24 horas hasta valores constantes.

Pulverización: Una vez secado los bulbos, se pulverizaron con ayuda de un

mortero.

Tamizaje: El material obtenido de la pulverización, se pasó a través del

tamiz Nro 0.75



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Almacenamiento: El polvo de las hojas se guardó en frascos de vidrio de color

ámbar de boca ancha.

4. Preparación del extracto hidroetanólico18, 19

Se pesó 30 g de polvo tamizado de hojas de bulbos de Ismene amancaes previamente

pulverizadas y tamizadas. Luego se vertió en un cartucho de papel de filtro y se colocó

en el extractor del equipo de soxhlet y se extrajo con 250 mL de etanol de 70° G.L, usando

cocina con termostato para mantener la temperatura de 60°C a 80°C durante 4 horas. El

producto se filtró 3 veces, primero con papel filtro Whatman N°41, un segundo filtrado

se realizó con papel filtro Whatman N°4 y por último un tercer filtrado con papel

Whatman N°2; se obtuvo un extracto purificado libre de partículas. La solución resultante

se llevó a sequedad en un rotavapor a presión reducida y a una temperatura de 40°C, luego

se pesó el residuo seco y se guardó en refrigeración a 4°C en frasco de vidrio de color

ámbar. De este residuo seco se preparó las concentraciones 5, 10 y 15 mg/ml disueltas en

etanol 70° GL, respectivamente. Finalmente los extractos se guardaron en frascos de

vidrio de color ámbar estériles y en refrigeración (4 – 8 °C) hasta su utilización en el

ensayo antifúngico.

5. Tamizaje fitoquímico19

Se llevó a sequedad el extracto y se procedió a realizar el tamizaje fitoquímico preliminar

siguiendo el método de Martínez M. y Cuellar A.

Fundamento: De acuerdo con este método para la marcha fitoquímica o tamizaje

fitoquímico de Martínez M. y Cuellar A., cada muestra fue sometida a la acción extractiva

de solventes de polaridad creciente: cloroformo, etanol y agua, modificando el pH del

medio con el fin de obtener los metabolitos secundarios de acuerdo a su solubilidad.



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Luego se separó las fracciones y se realizó la identificación de los fitoconstituyentes

haciendo uso de reactivos de coloración y precipitación.

Método y Procedimiento:

En este caso se empleó un esquema general, en el cual se realizó la extracción sucesiva

del material vegetal para la aplicación de técnicas de tamizaje fitoquímico detallado en el

esquema I:

Ensayo de Catequinas: Para ello se tomó I gota de la solución alcohólica, con la

ayuda de un capilar y se aplicó sobre papel filtro. Sobre la mancha se aplicó solución

de carbonato de sodio. La aparición de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica

un ensayo positivo.

Ensayo de Resinas: Para detectar este tipo de compuesto, se añadió a 2 ml de la

solución alcohólica, 10 ml de agua destilada. La aparición de un precipitado indica un

ensayo positivo.

Ensayo de Fehling: Permite reconocer en un extracto la presencia de azúcares

reductores. Para ello, si la alícuota del extracto no se encontrase en agua, debe

evaporarse el solvente en baño de agua y el residuo redisolverse en 1 a 2 ml de agua.

Se adicionaron 2 ml del reactivo y se calentó en baño de agua 5 a 10 minutos. El ensayo

se considera positivo si la solución se colorea de rojo o aparece precipitado rojo.

Ensayo de Baljet: Permite reconocer en un extracto la presencia de compuestos con

agrupamiento lactónico, en particular cumarinas, aunque otros compuestos lactónicos

pueden dar positivo al ensayo. Para ello, si la alícuota del extracto no se encontrase

en alcohol, debe evaporarse el solvente en baño de agua y redisolverse en la menor

cantidad de alcohol (1 ml). En estas condiciones se adicionó 1mL del reactivo,



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considerándose un ensayo positivo la aparición de coloración o precipitado rojo (++ y

+++) respectivamente.

Ensayo de Liebermann-Burchard: Permite reconocer en un extracto la presencia de

triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer un núcleo del

androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6.

Para ello, el solvente se evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 ml de

cloroformo. Se adicionó 1 ml de anhídrido acético y se mezcló bien. Por la pared del

tubo de ensayo se dejó resbalar II a III gotas de ácido sulfúrico concentrado sin agitar.

Un ensayo positivo se ha de reconocerse por un cambio rápido de coloración:

- Rosado-azul muy rápido.

- Verde intenso-visible aunque rápido.

- Verde oscuro-negro-final de la reacción.

Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer cambio generalmente

ocurre cuando el material evaluado tiene cantidades importantes de estos compuestos.

Importante: Para realizar este ensayo no hubo agua en el medio de reacción, pues ésta

con el ácido sulfúrico reacciona de forma violenta y puede ocurrir un accidente.

La reacción de Liebermann-Burchard se emplea también para diferenciar las

estructuras esteroidales de los triterpenoides, las primeras producen coloraciones azul

o azul verdoso, mientras que para las segundas se observa rojo, rosado o púrpura. Estas

coloraciones pueden variar por interferencias producidas por carotenos, xantofilas y

esteroides saturados que puedan estar presentes.



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Ensayo de La Espuma: Permite reconocer en un extracto la presencia de saponinas,

tanto del tipo esteroidal como triterpénica. De modo que se diluyó en cinco veces su

volumen en agua y se agitó, dicha mezcla, fuertemente durante 5 a 10 minutos.

El ensayo se considera positivo si apareciese espuma en la superficie del líquido de

más de 2 mm de altura y persistente por más de 2 minutos.

Ensayo del Cloruro Férrico: Permite reconocer la presencia de compuestos fenólicos

y/o taninos en un extracto vegetal. Si el extracto de la planta se realiza con alcohol, el

ensayo determina tanto fenoles como taninos. A una alícuota del extracto alcohólico

se le añadió III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina

fisiológica. Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos.

A una alícuota del extracto se añadió acetato de sodio para neutralizar y III gotas de

una solución de tricloruro férrico al 5% en solución salina fisiológica, un ensayo

positivo puede dar la siguiente información general:

- Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en general.

- Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo pirocatecólicos.

- Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo pirogalotánicos.

Ensayo de la Ninhidrina: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia

de aminoácidos libres o de aminas en general. Se tomó una alícuota del extracto en

alcohol, o el residuo de la concentración en baño de agua, se mezcló con 2 ml de

solución al 2% de ninhidrina en agua. La mezcla se calentó 5 a 10 minutos en baño de

agua. Este ensayo se considera positivo cuando se desarrolle un color azul violáceo.

Ensayo de Borntrager: Permite reconocer en un extracto la presencia de quinonas.

Para ello el solvente se evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 ml de



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cloroformo. Se agregó 1 ml de hidróxido de sodio, hidróxido de potasio o amonio al

5%. Se agitó, mezclando las fases y se dejó en reposo hasta su ulterior separación. Si

la fase acuosa alcalina (superior) se coloreara de rosado o rojo, el ensayo se considera

positivo. Coloración rosada (++), coloración roja (+++).

Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de flavonoides en un extracto de

un vegetal. Se diluyó el extracto con 1 ml de ácido clorhídrico concentrado y un

pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperó 5 minutos,

se añadió 1 ml de alcohol amílico, se mezclaron las fases y se dejó reposar hasta que

se separen. Si la alícuota del extracto se encontrase en agua, se procede de igual forma,

a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado.

El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amílico se coloree de amarillo,

naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos.

Ensayo de Antocianidinas: Permite reconocer en los extractos vegetales la presencia

de estructuras de secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calentaron 2 ml

del extracto etanólico 10 minutos. Con 1 ml de HClcc., se dejó enfriar y se añadió 1

ml de agua y 2 ml de alcohol amílico. Se agitó y se dejó separar las dos fases. La

aparición de color rojo a marrón en la fase amílica es indicativa de un ensayo positivo.

Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en un extracto la presencia de alcaloides,

para ello, se evaporó en baño de agua y el residuo redisolvió en 1 ml de ácido

clorhídrico al 1%. Con la solución acuosa ácida se realizó el ensayo, se añadió III gotas

del reactivo de Dragendorff, si existiera: opalescencia se ha de considerar (+), turbidez

definida (++), precipitado (+++).

Ensayo de Mayer: Se realiza según la forma descrita anteriormente, hasta obtener una

solución ácida.



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Se añadió luego, una pizca de cloruro de sodio en polvo, se agitó y filtró. Se ha de

añadir II o III gotas de la solución reactiva de Mayer, y si observase: opalescencia (+),

turbidez definida (++), precipitado coposo (+++).

Observación: En el caso de alcaloides cuaternarios y los aminoácidos libres, éstos solo

se encuentran en el extracto acuoso y para considerar su presencia la reacción debe ser

(++) o (+++), que un resultado (+) puede provenir de una extracción incompleta de

bases primarias, secundarias o terciarias.

Ensayo de Wagner: Se parte al igual que en los casos anteriores de la solución ácida,

se añadió II o III gotas del reactivo y clasificando los resultados de la misma forma.

6. Ensayo microbiológico: 20,21

Se realizó por el Método de difusión en discos – Kirby & Bauer.

a. Preparación de las cepas.

La cepa de Cándida albicans fue proporcionada por el Laboratorio de Microbiología

de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.

b. Reactivación de los cultivos de Cándida albicans.

A partir de los cultivos puros de Cándida albicans, se sembró al hongo en tubos de

ensayo conteniendo Agar Sabouraud, los mismos que incubaron a 37 ºC por un

espacio de 24 a 48 horas.



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c. Preparación y estandarización de los inóculos de Cándida albicans.

A partir de los cultivos reactivados del hongo se prepararon suspensiones en solución

salina fisiológica estéril hasta alcanzar la densidad similar a la turbidez del tubo Nº

0.5 del Nefelómetro de McFarland (1.5 x 108 células/mL).

d. Siembra en placas.

Los cultivos estandarizados de Cándida albicans se sembraron por superficie en las

placas Petri conteniendo Agar Mueller Hilton. Una vez realizada la siembra de

Cándida albicans se eliminó el excedente y se llevó a secar las placas Petri en estufa

por 5 minutos aproximadamente.

e. Aplicación de los extracto

En cada placa sembrada se colocaron los discos de sensibilidad antes preparados

correspondientemente a concentraciones de 5 mg/mL, 10mg/mL, 15 mg/mL, 30

mg/mL y 50 mg/mL del extracto de bulbos de Ismene amancaes presionándolos con

suavidad sobre la superficie del agar con una pinza estéril, como control se colocó

los discos de sensibilidad que contenían Fluconazol.

Cada disco se enumeró de 1 al 4 según volumen respectivo; se dejaron reposar por

10 minutos a temperatura ambiente y luego se incubaron a 37 ºC por 24 horas. Se

realizaron 5 ensayos.



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f. Evaluación del efecto del extracto

La evaluación del efecto antifúngico se realizó midiendo con una regla milimetrada

el halo de inhibición de crecimiento de Cándida albicans; y los resultados se

expresaron como diámetro (mm) de halo de inhibición.

g. Comparación del efecto del extracto con el de los discos de sensibilidad de

Fluconazol.

Se realizó mediante el método de Kirby Bauer, para lo cual se utilizaron discos de

sensibilidad de Fluconazol. La medida del diámetro de los halos de inhibición de

crecimiento de Cándida albicans, por el contraste con el diámetro de los halos de

inhibición de los discos de sensibilidad de Fluconazol.

h. Determinación de la Concentración Bactericida y de la Concentración Mínima

Inhibitoria (CMI):

Se realizó la siembra de la bacteria en cinco tubos de ensayo con medio de solución

salina y el experimental en concentraciones de 5, 10, 15, 30 y 50 % y 0,2 mL de

acuerdo a lo que se quiso investigar y el cultivo bacteriano, incubándose a 37 C por

24 a 48 horas, después de lo cual se sembró de cada uno de los tubos 0.1 ml de la

dilución en placas con medio agar Mueller Hilton, incubando las placas en

anaerobiosis. La observación del crecimiento bacteriano se realizó mediante el

conteo de las Unidades Formadoras de Colonias (UFC).

La CMI se interpretó como la concentración de extracto, contenida en el tubo de la

serie que inhibió el crecimiento visible de la bacteria, para lo fuel necesario

comparar cada uno de los tubos con los controles positivo y negativo. El tubo que

se observó claro sin turbidez fue la CMI.



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Aquellas placas petri en las cuales no existió crecimiento microbiano alguno o se

observó un crecimiento menor de 300 UFC fueron designadas como negativo (-);

mientras que en aquellas placas que presentaron crecimiento mayor de 300 UFC, el

resultado fue emitido como positivo (+).

Negativo (-): 0 a 300 UFC.

Positivo (+): >300 UFC.

8. ANÁLISIS ESTADÍSTICO

Para la presente investigación se utilizó tablas de resumen de indicadores como media

aritmética, desviación estándar y asimismo se usó gráficos adecuados para presentar los

resultados de investigación. Para determinar el efecto se utilizó el análisis de varianza

(ANOVA) para un diseño completamente al azar y considerando un nivel de significancia

de 95% (P<0.05). La prueba Post Hoc de elección fue Tukey.



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III. RESULTADOS

Tabla 1: Tamizaje fitoquímico del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene

amancaes.

Metabolitos Ensayo Fracción

Clorofórmica

Fracción

Etanólica

Fracción

Acuosa

Alcaloides

Dragendorff ++++

Mayer ++++

Wagner ++++

Lactonas y Cumarinas Baljet -

Triterpenos y Esteroides Liebermann-Burchard +

Compuestos Fenólicos Tricloruro férrico +

Flavonoides Shinoda +++

Quinonas Borntrager -

Catequinas Luz UV +

Resinas Resina +

Azúcares Reductores Fehling +++

Saponinas Espuma +

Aminoácidos Ninhidrina +++

Antocianidinas Antocianidina - -

Resultado positivo: + Intensidad: Baja: +

Resultado negativo: - Moderada: ++

Alta: +++

Muy alta ++++



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Tabla 2. Medida de halos de inhibición producidos por exposición del extracto

hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes y los discos de sensibilidad de Fluconazol

25 UI, frente a Candida albicans.

Halo de inhibición (mm) discos de 6 mm de diámetro

Leyenda:

X ± D.E.: Promedio y desviación estándar. 6: No hay presencia de halo.

N° de

repeticiones

Concentración del extracto hidroetanólico (mg/mL) Control

positivo

Control

negativo

0.05 0.1

0.15

0.3 0.5 Fluconazol

25 U.I.

Etanol

30°

1 6 6 16 26 30 25 -

2 6 6 17 25 26 22 -

3 6 6 15 25 25 22 -

4 6 6 20 27 25 24 -

5 6 6 17 25 29 24 -

6 6 6 13 25 26 24 -

7 6 6 12 24 26 22 -

8 6 6 15 23 30 25 -

9 6 6 12 24 34 24 -

10 6 6 13 27 31 25 -

11 6 6 12 29 33 24 -

12 6 6 14 25 30 25 -

X ± D.E. 6 ± 0 6 ± 0 14.67±2.5 25.42±1.62 28.75±3.11 23.83 ±

1.19 -



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Figura 1. Promedios de los halos de inhibición del crecimiento del hongo Candida

albicans(mm) con diferentes concentraciones del extracto hidroetanólico de bulbos de

Ismene amancaes “Amancay”.

Tabla 3. Análisis de varianza para determinar el efecto del extracto hidroetanólico de

los bulbos de Ismene amancaes “Amancay” frente a Candida albicans.

Origen de las variaciones SC GL PC F P Valor

crítico para F

Entre grupos 5434.5 4 1358.625 366.595462 6.1355E-39 2.53968863

Dentro de los grupos 203.833333 55 3.70606061

Total 5638.33333 59

6 6

14.67

25.42

28.75

0

5

10

15

20

25

30

35

0.05 mg/mL 0.1 mg/mL 0.15mg/mL 0.3mg/mL 0.5 mg/mL

Concentración del extracto hidroetanólico vs Promedios de los halos de inhibición



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Tabla 4. Prueba de Tukey para determinar las concentraciones del extracto hidroetanólico

de bulbos de Ismene amancaes “Amancay” que presentan diferencias significativas

frente a Candida albicans.

Concentración Media

0.05g/ml 6

0.10g/ml 6

0.15g/ml 14.67

0.30g/ml 25.42

0.50g/ml 28.75

HSD 2.21

MULTIPLICADOR 3.98

Mse 3.71

N 12.00

A B C D E

A 0 -8.67 -19.42 -22.75

B -8.67 -19.42 -22.75

C -10.75 -14.08

D -3.33

E



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Tabla 5. Resultados del Recuento en placa de UFC de Candida albicans, frente a

diferentes concentraciones del Extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes.

0.05 mg/mL 0.1 mg/mL 0.15mg/mL 0.3mg/mL 0.5 mg/mL

Ensayo 1 320 900 630 620 80

Ensayo 2 320 930 650 430 110

Ensayo 3 300 960 960 400 30

Ensayo 4 400 620 680 580 100

Ensayo 5 510 1000 820 550 50

Promedio 370 882 748 516 74

Figura 2. Promedios del Recuento en placa del hongo Candida albicans(UFC) con

diferentes concentraciones del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes

“Amancay”

370

882

748

516

74

0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

1000

1 2 3 4 5

Ensayos

Promedio del Recuento en placa en UFC, a diferentes concentraciones.



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IV. DISCUSIÓN

En la presente investigación, se realizó el Tamizaje fitoquímico de los bulbos de Ismene

amancaes provenientes del distrito de Otuzco y también se evaluó la sensibilidad y el

efecto antifúngico in vitro del extracto hidroetanólico de los bulbos de Ismene amancaes

frente a Candida Albicans.

En la tabla 1 se observa diferentes fitoconstituyentes; en la fracción clorofórmica se

identificó mediante la reacción de Liebermann-Burchard triterpenos y/o esteroides. En la

fracción etanólica se identificaron resinas, Catequinas, compuestos fenólicos,

aminoácidos, flavonoides. En la fracción acuosa se identificaron alcaloides saponinas,

azúcares reductores

Los terpenoides o isoprenoides, se derivan de la fusión de unidades de cinco carbonos

llamada isopreno (C5) y se clasifican de acuerdo al número de unidades de isopreno que

los forman. En plantas, los isoprenos básicos para la síntesis de los terpenos son el

isopentenil pirofosfato (IPP) o su isómero dimetilalil pirofosfato (DMAPP) 17.

Los monoterpenos tales como el mentol, que es un antimicrobiano, el citronelal, que es

un repelente de insectos y las piretrinas que funcionan como venenos del sistema nervioso

de los insectos, son componentes químicos con actividad biológica potencial durante la

respuesta de defensa de las plantas que los producen. Los sesquiterpenos tales como la

risitina y lubimina ,el capsidiol y el 2,7-dihidroxicadaleno son compuestos con actividad

antimicrobiana; mientras que el poligodial inhibe fuertemente la alimentación de diversos

insectos herbívoros, el diterpeno atractilósido inhibe la fosforilación oxidativa en

mitocondrias, y el casbeno es un agente antifúngico. 17,18.



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Los alcaloides son heterocíclicos que por su similitud química a moléculas que participan

en la transmisión de las señales del sistema nervioso, bloquean neuroreceptores,

intermediarios de la transducción de la señal neuronal y canales iónicos de vertebrados e

insectos. Los alcaloides que se han logrado diferenciar en la bibliografía son licorina,

galantamina, tazzetina, crinina y narciclasina. Mientras que sus efectos inhibitorios del

crecimiento de microrganismos patógenos están dados por su capacidad de intercalarse

con el DNA, de detener la síntesis de proteínas, inducir la apoptosis e inhibir las enzimas

del metabolismo de carbohidratos. Los receptores adrenérgicos, nicotinérgicos,

muscarinérgicos y de la serotonina son blancos de unión de estos compuestos. Así mismo,

inhiben a las enzimas necesarias para la síntesis y el rompimiento del neurotransmisor

acetilcolina, impidiendo la transducción de la señal neuronal de insectos y vertebrados.

La interacción de estos alcaloides con el DNA, las proteínas y enzimas de la transcripción,

tóxicos contra bacterias, hongos, virus, insectos, vertebrados y otras plantas. 17

Flavonoides son una familia muy diversa de compuestos, que se caracterizan por ser

polifenólicos y solubles en agua. Cumplen funciones metabólicas importantes en las

plantas, como por ejemplo son responsables de la resistencia de las plantas a la

fotooxidación de la luz ultravioleta del Sol, intervienen en el transporte de la hormona

auxina, y se cree que funcionan como defensa ante el herbivorismo. Además son

considerados antimicrobianos, anticancerígenos, entre otros. Un flavonoide con

importante efecto antifúngico es la pisatina es un isoflavonoide producido por el guisante

en respuesta a la infección por hongos e induce la expresión del gen PDA1 en estos. La

pisatina y el eriodictiol inducen la germinación de las esporas de ciertos hongos. También

las furanocumarinas y estilbenos han demostrado tener propiedades antibacterianas,

antivirales y antifúngicas 18.



https://es.wikipedia.org/wiki/Polifenol

https://es.wikipedia.org/w/index.php?title=Pisatina&action=edit&redlink=1

https://es.wikipedia.org/wiki/Isoflavonoide

https://es.wikipedia.org/wiki/Eriodictiol

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El efecto antifúngico, del extracto hidroetanólico de los bulbos de Ismene amancaes se

explicaría por la existencia de constituyentes fitoquímicos con poder antifúngico; la

acción mostrada puede estar relacionada al funcionamiento de uno o más metabolitos

secundarios, sin embargo, las características de una planta por lo general no provienen de

un único principio active de los que está compuesta, sino de la acción conjunta de todos

ellos201,21.

Para cada medicamento existe lo que se conoce como los puntos de corte, los cuales

determinan, según los mm obtenidos o la CMI obtenida, si la cepa es sensible, intermedia

o resistente. En el caso del fluconazol se obtuvo un valor promedio de 23.83 ± 1.19,

encontrándose según la SCLI dentro de la categoría de sensible (anexo 3) 20.

En la tabla 2 se presentan los diámetros de los halos de inhibición del extracto

hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes frente a Candida albicans, donde se

observa que en las concentraciones de 0.05mg/ml y 0.10mg/ml no existió formación

obteniéndose una media de 6.00 mm ± 00 en ambos casos, mientras que en las

concentraciones 0.15 g/ml , 0.3 g/ml y 0.5 mg/ml la formación fue notoria, siendo los

valores de 14.67±2.5 mm, 25.42±1.62mm y 28.75±3.11mm, respectivamente.

Encontrándose según la SCLI dentro de la categoría de sensible. El valor promedio del

control negativo fue 0, comprobándose que la formación de los halos no correspondía al

efecto del etanol 30°GL.

En la table 3 se realizó el análisis de varianza, obteniéndose una probabilidad menor a

0.05, por lo que se acepta la hipótesis alterna, concluyendo que, existe relación entre la

concentración empleada del extracto seco de hojas secas de Ismene amancaes y la media

del diámetro del halo de inhibición obtenido frente a Candida albicans.



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En la tabla 4 se ejecutó la prueba post Hoc de Tukey, para determinar las concentraciones

del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes “amancay” que presentan

diferencias significativas frente a Candida albicans, obteniéndose que existe diferencia

estadísticamente significativa entre el efecto del extracto a una concentración de 0.15

g/ml, 0.3g/ml y a 0.5 g/ml.

En la tabla 5 se muestran los recuentos de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de

Candida albicans a diferentes concentraciones, siendo en las concentraciones de

0.05g/mL, 0.1g/mL, 0.15g/mL y 0.3g/mL mayores de 300UFC. Por el contrario, en la

concentración 0.5g/ml se obtuvo un promedio de 74UFC, al ser un valor menor de 300

UFC se considera que no existió crecimiento del hongo. Obteniéndose que la

Concentración Mínima antifúngica es 0.5g/ml.

Respecto a lo evaluado en este trabajo de investigación, la acción antifúngica mostrada

se presenta posiblemente por el sinergismo de sus compuestos, es por eso que existe un

requerimiento de estudiar el efecto de los metabolitos secundarios uno a uno.



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V. CONCLUSIONES

1) El extracto hidroetanólico de los bulbos de Ismene amancaes presentó

fitoconstituyentes como triterpenos – esteroides, catequinas, resinas, azúcares

reductores, compuestos fenólicos, saponinas, alcaloides, aminoácidos, y flavonoides.

2) El extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes presenta sensibilidad a las

concentraciones de 0.15 g/mL, 0.3 g/mL y 0.5 g/mL, frente a Candida albicans con

halos de inhibición de 14.67 mm , 25.42 mm y 29.75mm respectivamente.

3) El extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes presentó efecto antifúngico

a la concentración 0.5g/mL, frente a Candida albicans.



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VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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Candida y bacterias del género Lactobacillus en pacientes portadores de prótesis

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neonatos. (2009). [Visto el 15 de diciembre del 2018]. URL

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cantidad-de-plantas-medicinales-y-sus-usos/

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15. Flórez Alcántara. M.A. (2016).Micropropagación de Hymenocallis harrisiana

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http://cybertesis.unmsm.edu.pe/bitstream/handle/cybertesis/878/Pascual_me.pdf;jsessionid=34808F9C677B6E0464C9EEDBF392F07A?sequence=1

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18. Miranda M. Farmacognosia y Productos naturales. 1ª ed. Cuba. Ed. Félix Varela.

2001.

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Cuba. Editorial Universidad de la Habana. 2002.

20. Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos para la prueba de

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de Candida a los antifúngicos. Argentina: Rev. Argent. microbiot. 43(2).



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ANEXOS



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ANEXO1

ET

AN

OL 96o

GL

Dis

olv

er

en

10

mL de

agu

a

2

m

2

m

Re

sid

uo

La

var co

n

15

m

L

de

eta

nol

ENSAYO

BAL

JET

2

m

2

m

Coloca

r 25 ml

del

extract

o

fluído

en una

cápsul

a y

evapor

ar en el

baño

de

agua

El

residu

o se

lava

con

10

mL

de

Cl2C

Cl2C

H2

ENSAYO

LIEBERMAN - BURCHA

RD

SUDAN

III

DRAGENDORFF, MAYER,

WAGNER

3m

L

en

3 por

cio

nes

1mL

1mL

1mL

2m

L

1mL

1mL

1mL

1mL

1mL

1mL

1mL

3m

L

en

3

por

cio

Re

sid

uo



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36

TABLA 2: Puntos de corte y equivalencia diámetro – CMI para Candida spp

Fuente: Cantón, E; Martin, E; Espinel, A. (2004). Métodos estandarizados por el

CLSI para el estudio de la sensibilidad a los antifúngicos (Documentos M27-A3,

M38-A y M44-A). España: Revista Iberoamericana de Micología.

ANEXO 3: Preparación de la muestra botánica

a) Selección de los bulbos de Ismene amancaes

B



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ICA

37

b) Lavado de los bulbos de Ismene amancaes

c) bulbos de Ismene amancaes sin raíces

C



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ICA

38

d) Pesado de los bulbos de Ismene amancaes(780 gramos)

e) Cortado de los bulbos de Ismene amancaes



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IOQUIM

ICA

39

f) Secado a estufa 40 °C durante 3 días

g) bulbos de Ismene amancaes secos



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ICA

40

h) Pulverización de los bulbos de Ismene amancaes

i) Pesado del polvo de bulbos de Ismene amancaes (117

gramos)



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41

ANEXO 4: Preparación del extracto hidroetanólico

a) Preparación de alcohol de 70° GL

b) Macerado



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ICA

42

c) Filtrado

ANEXO 5: Tamizaje fitoquímico



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E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

43

Ensayos químicos:

(1) (14)

LEYENDA:

1) Catequinas 4) Saponina 7) Ninhidrina 10) Bortranger 13) Wagner

2) Resina 5) Fehling 8) Shinoda 11) Antocianina 14) Liberman

3) Baljet 6) Cloruro férrico 9) Draggendorf 12) Mayer



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

44

ANEXO 6: Ensayo microbiológico frente a Candida albicans

a. Cepa de Candida albicans

b. Turbidez similar al tubo Nº 0.5 del Nefelómetro de

McFarland



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

45

c. Preparación de agar Mueller Hilton

d. Preparación de discos de sensibilidad de las

concentraciones del Extracto hidroetanólico.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

46

ANEXO 7: Aplicación de los discos de sensibilidad

ANEXO 8: Resultados del Ensayo microbiológico de Sensibilidad

a. Control negativo: Etanol 30°GL



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

47

b. Control positivo: Fluconazol

c. Resultados del Ensayo microbiológico del extracto

fluido hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes

frente a Candida albicans, a una concentración de

0.05g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

48

d. Resultados del Ensayo microbiológico del extracto



0.10g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

49

e. Resultados del Ensayo microbiológico del extracto



0.15g/mL.

f. Resultados del Ensayo microbiológico del extracto



0.30g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

50

g. Resultados del Ensayo microbiológico del extracto



0.50g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

51

ANEXO 9: Resultados del Recuento en placa

a. Resultados del Recuento en placa, a una concentración

de 0.05g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

52

b. Resultados del Recuento en placa, a una concentración de 0.10g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

53

c. Resultados del Recuento en placa, a una concentración de 0.15g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

54

d. Resultados del Recuento en placa, a una concentración de 0.30g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

55

e. Resultados del Recuento en placa, a una concentración de 0.50g/mL.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

56

Rojas Ontaenda, Leslie

Jenifer FF.BB 1021100113 Autor

Soto Vásquez, Marilú FF.BB Farmacotecnia Asesor 5727 Asesor

Tamizaje fitoquímico y efecto antifúngico in vitro del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene

amancaes (amancay) frente a Candida albicans

28294849

76850173

asesor

autor



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

57

01 Rojas Ontaenda, Leslie

Jenifer FF.BB 1021100113 Autor

02 Soto Vásquez, Marilú FF.BB Asesor 5727 Asesor

autor 76850173

28294849

asesor

Tamizaje fitoquímico y efecto antifúngico in vitro del extracto hidroetanólico de bulbos de Ismene amancaes (amancay)

frente a Candida albicans



BIOQUIMICA FARMACIA DE AUTORES: BIBLIOTECA

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