BECA SCO 2010 - Acadèmia de Ciències Mèdiques i de la ...Drusas actúan como El desarrollo de...
Transcript of BECA SCO 2010 - Acadèmia de Ciències Mèdiques i de la ...Drusas actúan como El desarrollo de...
acción activa del factor derEDF) en el tratamiento de la modelo animal de degene
BECA SC
ed
J. BaM.A. ZA. Boix
A. Carvalho, Sanj
ivado del epitelio pigmentaa neovascularización coroideración macular asociada a
CO 2010
ad
adalZapataxaderaA. Salas, C.
jurjo
Estado actual conocimie
MAE patología multifactoria
Ed dEdad
Tabaquismo
Raza blanca
Factores genéticos
Polimorfismo TyR402His en
Polimorfismo Ala69Se
entos científicos-técnicos
al
n el gen del factor del complemento H
er en el gen 2 ARMS2
Estado actual conocimie
MAE patología multifactoria
Edad
Tabaquismo
Raza blanca
Factores genéticos
Sistema inmunológicoDrusas actúan como
El desarrollo de grandes drusas y la apoptosis constituyen un factor que determina el r
entos científicos-técnicos
al
o estimulo antigénico
del EPR son señales de la respuesta inmune y riesgo de progresión a DMAE avanzada
Estado actual conocimie
MAE patología multifactoria
mecanismo que lleva al desarrollo de las
conocido
Angiogénesis ocular como factor c
VEGF
entos científicos-técnicos
al
s lesiones de DMAE temprana y tardía e
clave en la progresión de la DMAE
PEDF
Estado actual conocimie
MAE patología multifactoria
sición de DMAE seca a húmeda ocurre isis del receptor 2 del VEGF es reducidaGF en el EPR
PEDF
entos científicos-técnicos
al
cuando la capacidad del PEDF de regula, generando una disregulación en la señ
VEGF
Estado actual conocimie
DF
oproteina 50kd de la família de los inhibi
ti i é i á t t l jor antiangiogénico más potente en el ojo
retado cells EPR
to neurotrófico
to antiinflamatorio
to protección barrera EPR
entos científicos-técnicos
dores de la proteasa serina
o
Estado actual conocimie
DF
oproteina 50kd de la família de los inhibi
or antiangiogénico más potente en el ojog g p j
retado cells EPR
to neurotrófico
to antiinflamatorio
to protección barrera EPR
entos científicos-técnicos
dores de la proteasa serina
o matriz FRmatriz FR
Hipó
1.- El tratamiento con PEDF puede ser la mejor opcióinducida por el VEGF, sino también ejerciendo unprotectora en el EPR
2.- La administración tópica de la faPEDF, por tenefectiva en el polo posterior, ofreciendo una forma de
3.- La administración tópica de una fracción del péptineovascularización coroidea
4.- La faPEDF puede mantener la capacidad neurotróentero
tesis
ón terapéutica para la DMAE, no sólo inhibiendo la Nna acción antiinflamatoria, neurotrófica en la retina
er menor tamaño, puede penetrar en la córnea yye administración no invasiva
do es tan efectiva como la intravítrea en el control de
ófica y antiinflamatoria del péptido
Obje
Evaluar y comparar la eficacia de una faPEDFde determinar una mejor vía terapéutica para la
fase experime
fase experime
fase experimeDeterminar cuál es la faPEDF mmigración y formación tubular eumbilical humano
Determinar el efecto citoprotector de la faPEDF en e
Evaluar el efecto de la faPEDF en la
tivos
F sintética por vía intravítrea y tópica, con el fina DMAE húmeda
entos “in vitro”
entos “in vivo”
entos in vitromás eficaz en la inhibición de la proliferación,en cultivos de cells endoteliales de cordón
el cultivo celular de EPR sometido a estrés oxidativo
producción de citoquinas por el EPR
Obje
Evaluar y comparar la eficacia de una faPEDFde determinar una mejor vía terapéutica para la
fase experimefase experime
fase experime
Preparar el modelo Valorar el efecto de la administración tópica de la faP
modeloValorar el efecto y tiempo de efectividad en
Comparar la toxicidad corneal con la toxicidad vitr
Comparar entre ambos grupos de estud
tivos
F sintética por vía intravítrea y tópica, con el fina DMAE húmeda
entos “in vitro”entos in vitro
entos “in vivo”
de NVC en ratonesEDF en el control de las lesiones neovasculares en e
o animaln la administración intravítrea de la faPEDFreoretiniana producida en los dos grupos de estudio
dio el efecto sobre las lesiones de NVC
PEDF SINTÉTICO
Fracción activa neurotrófica deriva de la
Fracción activa antiangiogénica deriva d
s posiciones Val78-Thr121 (44-mer)
de las posiciones Asp44-Asn77 (34-mer)
PEDF SINTÉTICO
Fracción activa neurotrófica deriva de l
Fracción activa antiangiogénica deriva
7 faPCultivos de células endoteliales de
Cultivos primarios de línea celular de e
Ensayo de migr
Ensayo de formación
as posiciones Val78-Thr121 (44-mer)
de las posiciones Asp44-Asn77 (34-mer
EDFcordón umbilical humano (HUVEC)
epitelio pigmentario humano (ARPE-19)
ración (HUVEC)
n de tubos (HUVEC)
SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)
faPEDF inhibe la migración de cells
5-FU stop proliferación celu
Raspador celular
≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)
faPEDF inhibe la migración de cells
5-FU stop proliferación celu
Raspador celular
≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)
faPEDF inhibe la migración de cells
5-FU stop proliferación celu
Raspador celular
≠[faPEDF]1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
SAYO DE MIGRACIÓN (HUUVEC)
faPEDF inhibe la migración de cells
≠[faPEDF]
5-FU stop proliferación celu
Raspador celular
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
SAYO DE MIGRACIÓN (HU
Área sin migración celular (µm)
UVEC)
ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)
N DE TUBOS
Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares
son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG
≠[faPEDF]
Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100
SAYO DE FORMACIÓN DEE TUBOS (HUVEC)
Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares
son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG
≠[faPEDF]
Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100
SAYO DE FORMACIÓN DDE TUBOS (HUVEC)
Las cells de endotelio vasculara formar estructuras tubulares
son co-cultivadas con fibroblatratadas con VEGF y FG
≠[faPEDF]
Evaluar la capacidad inhibitorformación de tubos a distinconcentraciones de faPE
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100
ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)
tubos
N DE TUBOS
Las fracciones 2 y 3 presentaron disminución enlongitud de tubos a concentración de 50nM
ENSAYO DE FORMACIÓN(HUVEC)
tubos
La fra
L
N DE TUBOS
La fracción 2 del péptido fue eficaz en la inhibición formación de tubos a todas las concentracione
acción 3 demostró eficacia a partir de una concentrac
Las fracciones 6 y 7 sólo a partir de concentraciones d
ENSAYO DE VIABILIDAD C
(HUVEC)
CELULAR
Ensayo con azul tripán (penetra mb cells muertas)≠[faPEDF]
Determinar faPEDF con mayor efecto antiproliferativo sobre cells endoteliales
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
Las fracciones 2 y 3 presentan diferenciaestadísticamente significativas a una concentra
5nM
ENSAYO DE PROLIFERAC
(HUVEC)
CIÓN CELULAR
Ensayo con Alamar blue (proliferación/metabolismo)
≠[faPEDF]
Determinar faPEDF con mayor efecto antiproliferativo sobre cells endoteliales
1nM, 5nM,10nM, 50nM, 100nM
No diferencias estadísticamente significativasninguna fracción ni concentración de péptid
odelo animal NVC
nes C57BL de 6 a 12 semanas de edad
tura mb bruch láser verde en 4 localizaciones peripapilar
250mw 100ms
dio evaluado y aprobado por el
Ojo adelfo control
oscopía confocal verificar NVC
asia CO2 según el protocolo ético establecido
odelo animal NVC
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tura mb bruch láser verde en 4 localizaciones peripapilar
250mw 100ms
dio evaluado y aprobado por el
Ojo adelfo control
oscopía confocal verificar NVC
asia CO2 según el protocolo ético establecido
ONCLUSIONES
1.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas eendote
2.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas enlongit
fase “in vitro”
longit3.- Las faPEDF 2 y 3 demostraron ser efectivas e
endoteliales
4.- Los resultados “in vitro”han demostrado la capdel péptido PEDF, siendo el primer paso para elpatología neovascular de la retina
en inhibir la capacidad de migración de las cells lialesn inhibir la formación de tubos y en disminuir su ududen disminuir la viabilidad de las cells
pacidad antiangiogénica en una pequeña fracción actl desarrollo de una posible terapia no invasiva para