Oscar Vazquez Armengol, 123030. Microbiologia II Grupo D

Practica #4: Bacteriófagos.ResumenEl objetivo de la practica fue aprender sobre los bacteriófagos, sus características y la forma correcta forma para cultivarlos.Los bacteriófagos son virus que solo atacan las células bacterianas, es decir que no tienen efecto directo sobre las células del hombre, sino solo contra bacterias de diversos tipos. Estos bacteriófagos consisten de una cabeza, que es donde se encuentra su material genético de ADN envuelto por la capside, y tienen un cuello hecho de proteínas, y unas fibras de cola que les permiten adherirse a la pared bacteriana para inyectar su material genético dentro de esta. Los fagos no tienen movimiento propio, y dependen del azar para poder encontrar una bacteria a la cual infectar.Una vez causada la infección hay dos ciclos de vida que pueden seguir los bacteriófagos: el ciclo lítico y el ciclo lisogenico.Los fagos que siguen el ciclo lítico una vez que logran la infección de la bacteria comienza la replicación de su material genético, así como la síntesis de las enzimas virales que requerirá, después comienza la síntesis de cubiertas proteicas y envuelve al material genético replicado en capsides. Ensambla todos los componentes para dar forma a varios fagos nuevos, y estos finalmente lisan la bacteria para salir y comenzar de nuevo el ciclo.El otro tipo de fagos, los lisogenico pueden seguir el ciclo lítico, pero también pueden entrar detener su ciclo, frenando la transcripción de sus genes. Cuando un fago entra en este estado, a su material genético se le conoce como profago. Este profago puede hacer empalme con el material genético del huésped, siendo replicado en las células hijas de este. Una célula hija con el profago en su genoma no se ve afectada de forma negativa, pero el profago puede adquirir nuevas propiedades mediante la adquisición genes de la bacteria durante su separación. Por su parte los genes del profago le permiten a la bacteria lisogena expresar nuevas habilidades y producir nuevas proteínas, llevando esto a modificación en su antigenicidad, o codificación de toxinas bacterianas.Una vez que la bacteria lisogena encuentre condiciones adversas y se vea amenazada su integridad se terminara el ciclo lisogenico y comenzara la inducción, que es la activación del profago a un fago activo, que comenzara rápidamente con el ciclo lítico de los fagos. Estas

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condiciones adversas pueden ser exposición a luz UV, falta de nutrientes, exposición a químicos mutagenicos, etc.

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Fago 0.5 ml en 4.5 ml de caldo cerebro

corazonMetodología

Tomar 0.5 ml del primer tubo y

pasar tubo con 4.5 ml de sol.

fisiologica (Dilucion 1:10)

Hacer diluciones 1:100, 1:1,000,

1:10,000, 1:100,000 y 1:1,000,000 igual

que en el paso anterior

Cambiar de puntilla cada vez que se hace

Por cada dilucion del fago, se toma 0.1 ml y se pasan a un tubo de

ensayo con 0.1 ml de E. coli, se mezcla y se

incuba por 20 min a 37 grados

A cada tubo con E. coli y fago se le adiciona

a.c.c blando, se mezcla y se vierte sobre placa

de agar cerebro corazon

Esperar a que el a.c.c blando se enfrie un poco o destruitra el fago y bacteria

Solidificar e incubar 24 hrs. a

37 grados.

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Resultados

No hubo formación de placas de lisis por bacteriófago ya que el fago elimino completamente la E. coli sembrada.En una caja de Petri se presentó una sola placa de lisis

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Discusión:La primera vez que hicimos la práctica de bacteriófagos, esta salió mal debido posiblemente a la mala preparación del fago o contaminación de alguno de los componentes de la práctica.Se volvió a montar esta práctica con la esperanza de que la falla anterior ya había sido resuelta y resulto ser que no, ya que en 2/3 de las placas sembradas se dio de nuevo la lisis total de la E. coli, es decir las titulaciones 1:10,000, 1:100,000 eliminaron toda la presencia de E. coli. La titulación 1:1, 000,000 fue la única que mostro una sola placa de lisis, lo que nos deja saber que el fago era muy fuerte ya que en las titulaciones anteriores no dejo ninguna placa. Es extraño ya que debido a la fuerza que suponemos tenía el bacteriófago, debió haber más placas de lisis que solo una.Es muy posible que lo que haya estado mal preparado fuera el fago, ya que al formarse una placa de lisis se descarta que la E. coli no pudiera crecer en el medio de cultivo debido a la mala preparación de este.Conclusión:Los bacteriófagos son importantes por diversas cuestiones. Una es que pueden ser utilizados para identificar una bacteria (los fagos son específicos para cierta bacteria, por lo que solo lisaran esa bacteria). Se pensó en la aplicación de tratamientos con bacteriófagos para

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enfermedades en el hombre, pero no progreso debido a la dificultad en su aplicación. También, debido a que pueden causar Splicing en las bacterias, confiriéndoles habilidades nuevas, podrían ser causantes de la propagación de la resistencia bacteriana a medicamentos, por lo menos en los fagos lisogénicos.También es sabido que son causantes indirectos de patogenicidad en el ser humano, ya que al cambiar las propiedades de las bacterias pueden causar producción de toxinas por parte de microorganismos que pueden infectar al ser humano.

Cuestionario1. Investigue las posibles aplicaciones de bacteriófagos, en el laboratorio.Los bacteriófagos en infecciones supurativas: Los fagos utilizados para el tratamiento de estas infecciones, se administraron por vía oral, previo tratamiento de los pacientes con antiácidos y gelatina, para proteger a los fagos de la acidez gástrica y posteriormente se comprobaba que los fagos llegaban a torrente sanguíneo, en este trabajo los investigadores Polacos reportaron que el 90% de los pacientes tratados, se recuperó satisfactoriamente cesando la supuración y cerrándose las heridas y las fístulas.Ayudan a la detección de bacterias: Se pueden adicionar sobre las muestras de bacterias aisladas de pacientes, donde se produzca una placa lítica (zona clara en una caja con crecimiento confluente de bacterias), existe la bacteria que el fago es capaz de lisar y así es posible conocer la identidad de la bacteria que está ocasionando la enfermedad2. Haga una lista de enfermedades humanas causadas por bacterias, cuya patogenicidad es conferida por fagos lisogénicosa) Difteria, Corynebacterium diphtheriae, Toxina diftérica causada por fago betab) E. coli productora de Toxina Shiga c) Gastroenteritis, Salmonella typhimurium, lipopolisacaridos producidos por bacteriófagoBibliografía:

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http://www.sobiologia.com.br/conteudos/Seresvivos/Ciencias/biovirus2.phphttp://www.respyn.uanl.mx/xii/3/ensayo/ensayo.htmhttp://www.revistaaquatic.com/aquatic/pdf/18_2.pdfhttp://europepmc.org/abstract/med/7676916http://phages.org