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7/23/2019 BACTERIAS PRACTICO.doc

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TALLER # 2

IDENTIFICACIN BACTERIANA: COCOS GRAM POSITIVOS

ESQUEMAS PARA IDENTIFICAR ESTAFILOCOCOS

ESPECIE Gram Catalasa Coagulasa Fermenta

manitol

DNasa Novobiocina

S. aureus

S. epidermidis

S. saprophyticus

1 Color a!ul oscuro o violeta G "

2. Prueba de caa!a"a: #a catalasa es una

en!ima $ue descompone al per%&ido dehidr%geno en o&'geno y agua( esta en!ima es

similar a la estructura de la hemoglobina.

E&cluyendo al g)nero Streptococcus y

algunos otros la mayor'a de las bacterias

aerobias y anaerobias *acultativas tienen

catalasa.

#a base de esta prueba es demostrar la

presencia de la en!ima catalasa( colocando +

o , gotas al cultivo.

El resultado es positivo si en la colonia haye*ervescencia.
http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasahttp://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa


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3. La coagulasaes un enzimacapaz de desnaturalizar la fbrinadel plasma. Los Staphylococcusaureus patgenos dan una reaccinpostiva y los no patgenos negativa

Se aade una suspensin densa debacterias a un tubo pequea conplasma y se incuba a 37 oC. Seobserva la coagulacin a las y !h sin sacarlos de la estu"a.

Rojo -

Amarillo +

para el aislamiento e identificacin

deStaphylococcus aureus.NaCl 7,5%le

proporciona lo selectivo ya que slo estos

microorganismos osmotolerantes u

osmfilos pueden multiplicarse en

l.Manitoles el nico azcar fermentadopor las cepas patgenas de este gnero

bacteriano.

La produccin de cidos proveniente de la

fermentacin del manitol es detectada por

el viraje del indicador de pH presente en el

medio (rojo fenol) aamarillo.

Staphylococcus epidermidisno

fermenta el manitol, dar lugar a

colonias pequeas rodeadas de un halo

prpura.

Prueba de DNasa


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Con halo de inhibicin +

Sin el

la prueba de la DNasa odeso&irribonucleasa.#a prueba de la DNasa se basa en la

capacidad $ue tienen ciertas bacterias para hidroli!ar en!imaticamente en -DN(produci)ndose una me!cla de mono y polinucle%tidos. El medio $ue se usa es el -gar

DNasa y como reactivo se usa Clorh'drico 1N.

/CNIC- Consiste en

1. 0acer una estr'a o bien poner un pegote de la colonia.+. Despu)s metemos en la estu*a ,2C durante +3 horas.,. secar y echar bastante clorh'drico 1N.

#EC45-#a aparici%n de un halo blanco alrededor de estr'as de siembra indica $ue la prueba espositiva. El microorganismo es producto de la deso&irribonucleasa. Son DNasa positiva

S.-ureus( Serratia( Pseudomona y 6acillus.788888888888888.

IDENIFIC-CI9N DE ES5EP9C9C9S : ENE59C9C9S

Prueba de laboratorio Gram Catalasa Serogrupo

#ance*ield

6acitracina 9pto$uina C-;P -gar 6ilisEsculina

-gar cNaClNombre 6acteria

Streptococospyogenes

-

S. pneumonia G

S. agalactiae 6

S. bovis D

Enterococcus

1. Prueba Gram +

2. Prueba catalasa

3. Prueba BacitracinaS.!ogenes

+ "

#rueba utilizada para la di"erenciacinde estreptococos beta hemol$ticos del


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grupo % de otros estreptococos betahemol$ticos..

&undamentoLa bacitracina es unantibitico que inhibe la s$ntesis depared celular bacteriana' y a la

concentracin que se encuentra en losdiscos ().) *+ inhibe el crecimiento delos estreptococos beta hemol$ticos delgrupo % de Lancefeld pero no inhibe eldesarrollo de otros estreptococos betahemol$ticos.

. Prueba oto$uina

#rueba para Streptococcus al"ahemol$ticos' S. neumoniae

+ "

%. Prueba &e 'A(P + S.agalactiae beta

6.Prueba CAMP Y agar bilis

esculina para S. bovis

Losestreptococos del grupo B(S.

agalactiae) producen una protena

difusible y termoestable (factor CAMP)

que aumenta la beta-hemlisis de

Staphylococcus aureus.

S. aureus(sembrado desde la parte

superior hasta la parte inferior de la

placa) produceesfingomielinasa

Cque se puede unir a las membranas

de los eritrocitos. Cuando son

expuestas al factor CAMP del grupo B,las clulas sufren hemlisis.


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Medio utilizado para el aislamiento eidentificacin presuntiva deestreptococos del grupo D.

FundamentoLos estreptococos del grupo D

crecen rpidamente en el agar bilisesculina e hidrolizan la esculina, queen presencia de iones hierro formanun compuesto de color verde olivahasta negro. Las sales biliares

presentes inhiben el desarrollo de laflora acompaante.

). Prueba agar bilis esculina ! agar con *a'l ,% -

Identificacin bacteriana. La maor!a de los laboratorios slo necesitandiferenciar entre Enterococcus faecalis E. faecium, cobrando especial

relevancia su distincin de las otras especies del g"nero, frente a una cepa

resistente a vancomicina

#e observa cultivo de Enterococcus faecalis en agar telurito. Las colonias

adoptan una pigmentacin negra, indicando la metabolizacin del telurito.

TALLER # 3

IDENTIFICACIN BACTERIANA: BACILOS GRAM NEGATIVOS

1. Tincin Gram

2. Prueba o/i&asa

#a #rueba de $%&da"aes una prueba usada en microbiolog'a para determinar si una bacteria producealguna de lascitocromo c o&idasas.1#a prueba hace uso de discos impregnados con el reactivo N(n(n(n7tetrametil7p7*enilendiamina?o ;FD@ oN(N7Dimetil7p7*enilendiamina?o D;FD@( el cual tambi)n es unindicadorredo&. El reactivo pasa de a!ul oscuro a granateal ser o&idado( y se vuelve transparente al serreducido. #as bacterias o&idasa positiva poseen citocromo o&idasa o indo*enol o&idasa ?una
http://es.wikipedia.org/wiki/Citocromo_c_oxidasahttp://es.wikipedia.org/wiki/Citocromo_c_oxidasahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_la_Oxidasa#cite_note-Prueba_modificada-1http://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_la_Oxidasa#cite_note-Prueba_modificada-1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,N-Dimetil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,N-Dimetil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/wiki/Redoxhttp://es.wikipedia.org/wiki/Redoxhttp://es.wikipedia.org/wiki/Granate_(color)http://es.wikipedia.org/wiki/Granate_(color)http://es.wikipedia.org/wiki/Citocromo_c_oxidasahttp://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_de_la_Oxidasa#cite_note-Prueba_modificada-1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,n,n,n-tetrametil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/w/index.php?title=N,N-Dimetil-p-fenilendiamina&action=edit&redlink=1http://es.wikipedia.org/wiki/Redoxhttp://es.wikipedia.org/wiki/Granate_(color)


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hemoprote'[email protected] catali!an el transporte de electrones de compuestos donantes ?N-D0@ areceptores de electrones ?por lo general el o&igeno@.

Positiva 6GNNFG

Negativa 6GNFG Enterobacterias
http://es.wikipedia.org/wiki/NADHhttp://es.wikipedia.org/wiki/NADH


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S& e" $%&da"a Ne'a&(a: BGNFG E)er$bacer&aceae

*. Agar (ac'on0e! + ara enterobac.

MacC$)+e,o -gar ;acConAey es unmediode cultivoespec'*ico para bacteriasgram

negativasy cepas$ue*ermentenlalactosa.

+""

2. Prueba agar TS

El A'ar-&err$-r!e a/0cares un medio de cultivo. Gracias a su composici%n es uno de los medios de

cultivomBs empleados para la di*erenciaci%n deenterobacteriassegn

1. Fermenten o no glucosa.

+. Fermenten o no lactosa o sacarosa.

,. Produ!can o no Bcido sul*h'drico.

3. Produ!can o no gas.

Si no hay *ermentaci%n AA rooroo

Si *ermenta un a!car A- rooamarillo

Si *ermenta los tres -- amarilloamarillo
http://es.wikipedia.org/wiki/Medio_selectivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_selectivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_selectivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteriashttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteriashttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativahttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cepahttp://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Lactosahttp://es.wikipedia.org/wiki/Lactosahttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacteriashttp://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacteriashttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_selectivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteriashttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativahttp://es.wikipedia.org/wiki/Bacteria_Gram_negativahttp://es.wikipedia.org/wiki/Cepahttp://es.wikipedia.org/wiki/Fermentaci%C3%B3nhttp://es.wikipedia.org/wiki/Lactosahttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivohttp://es.wikipedia.org/wiki/Enterobacterias


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1. Prueba LA

#rueba consiste en que si el microorganismo posee o no le enzima lisinadescarbo,ilasa o lisina desaminasa.

Si no hay ninguna --

Si hay lisina descarbo,ilasa %-

Si hay lisina desaminasa /-

. Prueba &e S(

Sul"uro0 se torna negra 1

indol0 se mide con reactivo de corva, 2 anillo roo 1

4ovilidad0 se vuelve turbulento 1

$s un medio semislido destinado a verificar la movilidad, produccin de indol de sulfuro de hidrgeno en un mismo tubo.

$s %til para diferenciar miembros de la familia $nterobacteriaceae.

Fundamento

$l triptfano es un aminocido constituente de muchas peptonas, particularmente

de la tripte!na, que puede ser o&idado por algunas bacterias para formar indol. $n elproceso interviene un con'unto de enzimas llamadas triptofanasa. $l indol producido se

combina con el aldehido del reactivo de (ovac)s o de $rlich, para originar uncompuesto de color ro'o. Las cepas mviles pueden apreciarse en este medio, por la

turbidez que producen alrededor de la puncin de siembra, mientras que aquellascepas productoras de sulfh!drico se distinguen por la formacin de un precipitado negro

de sulfuro de hierro a partir del tiosulfato siempre que el medio se mantenga a un p*

maor a +..

Prueba &e urea #one de manifesto la actividad de la enzima ureasa'para degradar la urea en dos mol5culas de amoniaco. 6l medio llevacomo indicador /oo "enol' que se torna amarillo cuando es negativo y


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rosa cuando es positivo. ay que tener precaucin por que tambi5npuede ocurrir que no se produzca cambio de coloracin' en este caso esnegativo. el medio posee un color ros8ceo (mucho menos intenso quelos verdaderos positivos+ lo que puede llevarnos a error (considerar"alsos positivos+.

Prueba &e agar citrato

Se usa para determinar si el organismo es capaz de utilizar el citrato como9nica "uente de carbono y compuesto amoniacales como 9nica "uente denitrgeno. Es ms eseso

#ositivonegativo

3. Prueba &e cal&o malonato

Se hace para determinar la capacidad de utilizar malonato de sodio como "uente de carbono.6l caldo de malonato tiene azul de bromotimol como indicador de p. Las bacterias que

usan malonato tambi5n sul"ato de amonio como "uente de :! #ositivo por aumento enalcalinidad al usar sul"ato de amonio' cambia indicador de verde a azu

#ositivo negativo

;;;;.


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