ATLAS DE INMUNOHISTOQUIMICA · El Atlas es un exponente de la rigurosidad en el método de los...

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INÉS MARTÍN-LACAVETOMÁS GARCÍA-CABALLERO

ATLAS DE INMUNOHISTOQUÍMICACaracterización de células, tejidos y

órganos normales

AutoresINÉS MARTÍN-LACAVECatedrática de HistologíaDepartamento de Citología e Histología Normal y PatológicaFacultad de Medicina, Universidad de Sevilla

TOMÁS GARCÍA-CABALLEROCatedrático de HistologíaDepartamento de Ciencias MorfológicasFacultad de Medicina y Odontología, Universidad de Santiago de CompostelaPatólogo Responsable del Laboratorio de Inmunohistoquímica y Dianas TerapéuticasServicio de Anatomía Patológica, Hospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela

ColaboradoresANDRÉS BEIRAS IGLESIASCatedrático de Histología, Departamento de Ciencias MorfológicasFacultad de Medicina y Odontología, Universidad de Santiago de CompostelaJefe de Sección de Microscopía Electrónica, Servicio de Anatomía PatológicaHospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela

JULIA BUJÁN VARELACatedrática de Histología, Departamento de Especialidades MédicasFacultad de Medicina, Universidad de Alcalá de Henares

MARYSSA CANUELResearch Associate, Department of Anatomy and Cell BiologyMcGill University, Montreal, Quebec, Canada

MANUEL DE MIGUEL RODRÍGUEZProfesor Titular de Histología, Departamento de Citología e Histología Normal y PatológicaFacultad de Medicina, Universidad de Sevilla

BEATRIZ FERNÁNDEZ RODRÍGUEZFacultativo Especialista de Área, Servicio de Anatomía PatológicaHospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela

JOSÉ M. FERNÁNDEZ SANTOSProfesor Titular de Histología, Departamento de Citología e Histología Normal y PatológicaFacultad de Medicina, Universidad de Sevilla

VII

Atlas de inmunohistoquímicaX

MÁXIMO FRAGA RODRÍGUEZCatedrático de Anatomía Patológica, Departamento de Anatomía Patológica y Ciencias ForensesFacultad de Medicina, Universidad de Santiago de CompostelaFacultativo Especialista de Área, Servicio de Anatomía PatológicaHospital Clínico Universitario de Santiago de Compostela

ROSALÍA GALLEGO GÓMEZProfesora Titular de Histología, Departamento de Ciencias MorfológicasFacultad de Medicina y Odontología, Universidad de Santiago de Compostela

LUCÍA GARCÍA-CABALLERODoctora en Odontología, Colaboradora de la Unidad de Pacientes Especiales, Departamento de EstomatologíaUniversidad de Santiago de Compostela

CARLOS R. MORALESProfessor of the Department of Anatomy and Cell BiologyMcGill University, Montreal, Canada, H3 2B2

GÉRARD MOREL#������������:��������4��������������������:�������5������� ���B4�:5DUniversité Claude Bernard-Lyon 1, F69622 Villeurbanne cedex, France

KAWTAR RAGHAYBecaria Postdoctoral, Departamento de Ciencias MorfológicasFacultad de Medicina y Odontología, Universidad de Santiago de Compostela4��������������������:�������5������� ���B4�:5DUniversité Claude Bernard-Lyon 1, F69622 Villeurbanne cedex, France

JAVIER REGADERA GONZÁLEZCatedrático de Histología, Departamento de Anatomía, Histología y NeurocienciaFacultad de Medicina, Universidad Autónoma de Madrid

JOSÉ C. UTRILLA ALCOLEAProfesor Titular de Histología, Departamento de Citología e Histología Normal y PatológicaFacultad de Medicina, Universidad de Sevilla

El poder transmitir información clara y útil sobre los pormenores de los métodos de inmunotinción y sus resultados en varios tipos celulares y tejidos es un cometido que requiere la combinación de esfuerzo y cono-cimiento. Inés Martín-Lacave y Tomás García-Caballero nos ofrecen una obra de características especiales que ��������!��������������!��������������� ������ �������������������������������������&����������������localizar un producto celular usando técnicas inmunohistoquímicas. Dicho objetivo se enriquece con la partici-pación de varios colaboradores que suman su experiencia en forma sólida y visualmente atractiva en cada uno de los capítulos. El Atlas de Inmunohistoquímica logra su objetivo de ofrecer al lector un complemento valioso a los atlas de Histología y los de Inmunopatología existentes. El material se presenta en tres partes y veinte capítulos. La primera parte presenta con detalle los métodos aplicables a la microscopía óptica y electrónica. El lector se ���������!����������������� �����������!����������� ���!������������������������������������������(�����obstáculos que cada método de inmunotinción brinda. Todos aquellos interesados en determinar la localización de antígenos en células y tejidos normales y anormales encontrarán en la segunda y tercera parte una ayuda práctica valiosa. No sólo las imágenes son de alta calidad técnica sino que también poseen un valor estético y ������������� ���������������� ���������������#��������������������������������!����� ��������;����������capítulo. Las mismas expanden las posibilidades futuras de usar marcadores adicionales que no se incluyen en ���7������������������������������!�����������������������������������������������������������������-gico y tisular o la naturaleza de una alteración patológica con la ayuda de la inmunohistoquímica. Histólogos, ��������������������������!��� �������������������������������������������������������;��&�����������de estructura así como a la vez establecer un puente de comunicación entre la localización de un antígeno y su función. Finalmente, el contenido de este Atlas se ha organizado para hacerlo útil al estudiante, de manera que vaya de los temas mas simples a los mas complejos en términos de organización y estructura de células y teji-dos. Así, en la Segunda Parte del Atlas se incluyen los tejidos básicos y en la Tercera Parte los diversos sistemas y aparatos. En resumen, el Atlas de Inmunocitoquímica representa una contribución bienvenida y largamente esperada que cumple su objetivo de enriquecer la Histología e Inmunopatología por su contenido de gran valor didáctico y práctico.

ABRAHAM L. KIERSZENBAUM, MD, PHDProfessor and Chair

Department of Cell Biology and AnatomyThe Sophie Davis School of Biomedical Education

The City University of New YorkNew York, NY. USA

Prólogo P

XI

El Atlas de Inmunohistoquímica de Inés Martín Lacave y Tomás García-Caballero, pioneros en la Inmuno-��� �����������;������� ����������������� ��� �������������������"���������������������� �������������de la inmunohistoquímica en patología antes de que alguien tomase la decisión, como han hecho los autores, de abordarla en células, tejidos y órganos normales. Este Atlas es una referencia, no solo para la histología, sino que lo va a ser también para la patología. En un momento histórico de la medicina, en el que predomina el cono-cimiento molecular, la morfología ha perdido el misterio, éste reaparece en lo molecular, pero queda camino por hacer en la morfología. Sin quitarle ninguna importancia a la biología molecular, el tejido normal y patológico, sobre el que asienta la enfermedad, es tan complejo, especialmente en los procesos neoplásicos, que necesita un conocimiento panorámico que solo técnicas como la inmunohistoquímica, de carácter morfológico, proporcionan por su posibilidad global de entender la patología de los sistemas, por delante del conocimiento puramente mo-������������������������������������������������������&����������� �������������������������������de su integración. Parte de la clave del conocimiento de la biología y la patología perdura en las proteínas, que se ��������������������������������������������� �������� ��������������������������������������������a nivel genético. El inmunofenotipo que nos da la inmunohistoquímica nos lleva de la alteración molecular a ������������)�������������������������7������ �����������������������������������������&������������������tisular y orgánica, danto una visión global del cuerpo humano y sirviendo de base para comprender su patología. Dentro de su excelencia, destaca el cuidado metodológico, tanto en la descripción como en las imágenes, que son demostrativas y de muy alta calidad. La metodología comprende, no solo técnicas cromogénicas, sino los �������������������������������������������������������������������������������������������������������El Atlas es un exponente de la rigurosidad en el método de los autores, de su capacidad docente, de su vocación por la histología, pero también de su inquietud y conocimiento de la patología.

El Atlas es útil para estudiantes, investigadores y patólogos, y para todos aquellos clínicos o básicos comprometidos con la biomedicina. Es de fácil lectura, tanto para su estudio como para su consulta, pues predomina en todo él una estructura didáctica y la información adecuada. Esperamos que sobre esta base, y ���������������;�������� ���������������������������7��������9������� ����������8�������������sobre el que ya es cierto que existen precedentes, pero una aportación de los autores sería muy novedosa por su singular comprensión de la morfología y patología de los sistemas, lo que demuestran en este Atlas innovador, que enriquece la Histología, la Patología y la Medicina.

JERÓNIMO FORTEZA VILA

Profesor de Histología y Anatomía Patológica. Universidad Católica de ValenciaProfesor Ad Honorem. Universidad de Santiago de Compostela

Prólogo P

XIII

@��������������������������������������������� �����������������(���������������������������*�������-cia” microscópica tras el empleo de técnicas de tinción clásicas, como son la Hematoxilina-Eosina o las diversas técnicas especiales. No obstante, con la introducción de la inmunohistoquímica, no solo ha aumentado de modo ����������������.��������������� ���������������������&���������������������������� �������������������-tenido nueva información sobre su distribución, frecuencia e interrelaciones.

#����������������� ����������������������� ���������������������������������������������-����������������������in situ de cualquier tipo de proteína respetando el contexto morfológico. Hasta ahora se han publicado diversos libros que tratan sobre los fundamentos y técnicas inmunohistoquímicas, así como sobre su utilización como herramienta diagnóstica en Anatomía Patológica. No obstante, que nosotros sepamos, no existe �������� �� �������������������������� �������������������� ����������"������������������������������precisa de los distintos componentes tisulares en el contexto de un individuo sano, siendo éste el propósito funda-mental de esta obra.

Para alcanzar dicho objetivo, en los tres primeros capítulos de este libro se actualizan los fundamentos de las ��������� �������� ���������� ��� ������������� �������������������� B4�������'D6� �������������������������������������.�������B4�������$D�����������������(�������������������������������B4�������GD�������������-trado con más de 100 esquemas originales en color de gran calidad.

La lectura de las dos columnas en que se disponen los capítulos ha de hacerse en horizontal: la de la izquierda constituye el texto principal, y la de la derecha aporta comentarios, imágenes y esquemas ilustrativos.

En el Capítulo 4, se muestran los variados patrones de tinción que exhiben los antígenos a nivel tisular para, a ���������������������������������������������������������������������������������������B4����>D��������������� ������������������������������������!��������������������������������������������������������� ������������los tejidos, órganos, aparatos y sistemas del cuerpo humano mediante una descripción exhaustiva de los marca-������������� ������������������8����������(���������������������������������������&���������que la relación de elementos histológicos y sus correspondientes marcadores se sitúa en la columna izquierda de cada página, mientras que la columna derecha se reserva para las más de 900 microfotografías en color ilustrativas ���������������� ���������������!��.����������������������������������������������������������������!��������������������&����������5�����������7�������8����������5���������������������������������������*�����������+� ������������������������������������������������������������������������������ �����������������distintos órganos y tejidos humanos, algo de gran utilidad tanto con vistas a la docencia, como a la investigación o a la asistencia.

Como decíamos, en nuestra opinión este libro cubre el vacío que existe hoy día entre los textos que tratan exclusivamente de la metodología inmunohistoquímica y aquellos otros que sólo acometen su aplicación al diagnóstico histopatológico. El empleo de la inmunohistoquímica en el diagnóstico requiere un conocimiento ��������� ���������������������� ��������������� ����������� ����������������������������������� �����������interpretar adecuadamente la inmunohistoquímica en patología quirúrgica. Esperamos que este atlas contribuya a la formación de los MIR de Anatomía Patológica y sirva también como libro de consulta para los especialistas. 7���!�������������������� �����������������������7��������"����������!����������&��������������;��&���������������������� ��������������������������������������������������������������������������������������

Introducción I

XV

Atlas de inmunohistoquímicaXVI

celulares, sino también una calidad de imágenes histológicas equiparables, como mínimo, a las obtenidas mediante la aplicación de los métodos tricrómicos clásicos. Asimismo, este atlas constituye una obra de referencia para todos aquellos profesionales que, procediendo de áreas ajenas a la morfología microscópica, tengan que enfrentarse a ��� ������������������������������������������������� ��(�������������������� ���������������������������������������������������������������� ������������

<�������������;������������Atlas de Inmunohistoquímica es la recopilación en un CD de todos los esquemas �������������������������������������������� ��������������������'�%I>���!��������������������������-��������"��� ������������ �������������� ����������������������������������������������� ����������������objetivo del microscopio que se ha utilizado para la adquisición de las fotografías. Este compendio de ilustraciones puede ser de gran utilidad para los profesores de la asignatura de Histología de las distintas titulaciones en donde �����������B0���������1�������3������������2���������C���������)�����������C������������8�����������D���������������������;��&������������������������� ���������������������������������������������������������en la formación de los Técnicos Superiores de Anatomía Patológica.

Por último, es necesario aclarar que con esta obra hemos tratado de sistematizar de la forma más pedagógica posible la caracterización de las células, tejidos y órganos en estado de normalidad mediante métodos inmuno-��� ��������8��������������������������������������������������������������������������� ���������������metodología y la dilatada experiencia profesional de los autores. El objetivo como se comprenderá era muy am-bicioso y difícil de acotar. Por ello se habrán cometido omisiones que rogamos que el lector especialista en de-terminado tema sepa comprender y disculpar. Con el avance ininterrumpido de la inmunohistoquímica aparecen continuamente nuevos marcadores y diferentes localizaciones para los ya conocidos. Los autores se comprometen a seguir completando la labor aquí iniciada para posteriores ediciones. Por todo ello, se agradecerán encarecidam-ente todas aquellas sugerencias o nuevas aportaciones que consideren oportunas hacer los lectores de la presente obra pues, no cabe duda, que contribuirán a la mejora futura de la calidad de la misma.

INÉS MARTÍN-LACAVE B�������������DTOMÁS GARCÍA-CABALLERO�B�����������A���������������D

ABC 4����(��������A�������B��������DAEC 3-Amino-9-etilcarbazolAc AnticuerpoAg AntígenoAPAAP Fosfatasa alcalina anti-fosfatasa alcalina

B����������DAQP AcuaporinaBCIP 5-bromo-4-chloro-3-indolyl phosphateBSA Albúmina sérica bovinaCARD Catalysed Reported DepositionCK CitoqueratinaClN 4-Cloro-1-naftolCSA ����������� ������������� Cy CianinaDAB Tetraclorhidrato de 3,3’ diaminobencidinaEDTA Tampón tris-etilendiamino tetraacéticoEGTA Tampón etilenglicol tetracéticoEPOS Enhanced Polymer One-Step staining)3� )�3�����B����DFB Fast BlueFig FiguraFR Fast RedFsa Fosfatasa alcalinaC9@4� 9�����������������������Go Gluocosa oxidasaH.Harris Hematoxilina de HarrisHIER Recuperación de epitopos inducida por

calorHIS Hibridación in situHPV Papilomavirus humano9)&� 9������&��!����B����D9C� 9���������������9C�� 9���������!����B����D

9C�9� 9���������!�������������B����D9H��� 9�������������!����B����D9H� 9���������� ��!����B����DIGoI Inmunoglucosaoxidásico indirecto

B����D98 � 9������� ��!����B����D98 9� 9������� ��!�������������B����DIg InmunoglobulinaIHQ InmunohistoquímicaLB Lámina basal�571� 1�����A�����������������������B�����

�����DNBT Nitroblue tetrazoliumNF New Fushin877C� 8������������������������(�����878� 8�� ����������A��� ������B���������

�����(DPAS Periodic Acid-SchiffPBS Tampón fosfato salinoPLP Paraformaldehído-lisina-periodatoPx PeroxidasaRCA ����� ������������������ RER Retículo endoplasmático rugosoRT-PCR PCR a tiempo realSDS Sodium Dodecyl SulfateSSC Standard saline citrateTBS Tampón tris salinoTRICT Isotiocianato de tetrametilrodaminaTMA Micromatrices tisularesTSA ���������� ������������� Vol Volumen

Abreviaturas A

XIX

AUTORES ........................................................................................................................................................IX

PRÓLOGO ........................................................................................................................................................XI

INTRODUCCIÓN ...........................................................................................................................................XV

AGRADECIMIENTOS ............................................................................................................................... XVII

ABREVIATURAS ..........................................................................................................................................XIX

PRIMERA PARTE: MÉTODOS

CAPÍTULO 1: TÉCNICAS INMUNOHISTOQUÍMICAS

Tomás García-Caballero, Rosalía Gallego y Gérard Morel

1. Bases conceptuales en inmunohistoquímica ................................................................................................ 3'�'��#�������� ................................................................................................................................................. 31.2. Antígeno .................................................................................................................................................... 41.3. Anticuerpo ................................................................................................................................................. >

2. Preservación y procesamiento de las muestras ......................................................................................... 162.1. Tipos de muestra ..................................................................................................................................... 162.2. Fijación ................................................................................................................................................... 172.3. Congelación ............................................................................................................................................ 23$�I��8��������������������� ...................................................................................................................... $>$�>��5����������������������� ................................................................................................................... 27

3. Recuperación antigénica .............................................................................................................................. 293.1. Concepto ................................................................................................................................................. 293.2. Recuperación enzimática ........................................................................................................................ 293.3. Recuperación térmica ............................................................................................................................. 30

4. Métodos de detección .................................................................................................................................... 354.1. Métodos de conjugación ......................................................................................................................... 364.2. Método del puente .................................................................................................................................. 36I�G��0�������������(���� ����������A��� ������BPAPD ........................................................................ 37I�I��0��������������������������������A������������������BAPAAPD .......................................................... 40I�>��0�������������(��������A�������BABCD ......................................................................................... 42I�K��0����������������A�����������������������BLSABD ........................................................................... 434.7. Métodos de polímeros ............................................................................................................................. 44I�=��0�������������������� ....................................................................................................................... 46

Índice I

XXI

Atlas de inmunohistoquímicaXXII

5. Problemas y controles ................................................................................................................................... 49>�'��8������� ............................................................................................................................................... >%>�$��4�������������� ................................................................................................................................. >K>�G��4��������������� ................................................................................................................................ >=>�I��4�����������������................................................................................................................................ 60

6. Estandarización y avances ........................................................................................................................... 616.1. Fases en la estandarización ..................................................................................................................... 616.2. Automatización ....................................................................................................................................... 636.3. Micromatrices tisulares ........................................................................................................................... 646.4. Chips de inmunotinción múltiple ............................................................................................................ 68K�>��"�����������������(��� ........................................................................................................................ 68

����������� � ................................................................................................................................................ 687.1. Variables .................................................................................................................................................. 697.2. Sistemas de puntuación (score) .............................................................................................................. 707.3. Análisis de imagen .................................................................................................................................. 70F�I��4����������������������������������� .............................................................................................. 72Bibliografía ................................................................................................................................................... 73

CAPÍTULO 2: MÉTODOS DE INMUNOTINCIÓN MÚLTIPLE

Inés Martín-Lacave y Rosalía Gallego

1. Introducción .................................................................................................................................................. 812. Doble inmunohistoquímica .......................................................................................................................... 81

$�'��7�������������������������������������������������......................................................................... 82$�$��7����������������������������������������������� ......................................................................... =>2.3. Cromógenos ............................................................................................................................................ 92

3. Demostración de más de dos antígenos por inmunohistoquímica ............................................................ 934. Combinación de la inmunohistoquímica con otras técnicas de tinción ................................................... 94

4.1. Doble tinción de inmunohistoquímica con carbohidratos ...................................................................... 944.2. Doble tinción de inmunohistoquímica con TUNEL ............................................................................... ,>4.3. Doble tinción de inmunohistoquímica con hibridación in situ�BHISD ..................................................... 96

��������������������������� ...................................................................................................................... 96>�'��9���������� ............................................................................................................................................ 96>�$��7�������������������������������������������������......................................................................... 99>�G��7����������������������������������������������� ....................................................................... 100>�I��C������� ........................................................................................................................................ 102Bibliografía ................................................................................................................................................. 104

CAPÍTULO 3: MARCAJE ULTRAESTRUCTURAL

Gérard Morel y Kawtar Raghay

1. Introducción ................................................................................................................................................ 1092. Herramientas para el marcaje ultraestructural ........................................................................................110

2.1. Partículas de oro coloidal .......................................................................................................................1112.2. IgG conjugada ........................................................................................................................................111

XXIIIÍndice

2.3. Otros conjugados ...................................................................................................................................1112.4. Propiedades de la IgG conjugada en la reacción inmunocitoquímica ...................................................112$�>��4������������ IgG conjugada...............................................................................................................112

3. Fijación .......................................................................................................................................................1124. Método post-inclusión ..................................................................................................................................114

4.1. Fijación ..................................................................................................................................................''>4.2. Preparación tisular .................................................................................................................................''>4.3. Inmunomarcaje ......................................................................................................................................1174.4. Iconografía ............................................................................................................................................ 120

5. Método pre-inclusión .................................................................................................................................. 121>�'��8������� ................................................................................................................................................ 121>�$��C�(����� ................................................................................................................................................. 122>�G��8������������������ ................................................................................................................................ 122>�I��9���������(� ..................................................................................................................................... 123>�>��9�������� ............................................................................................................................................ 128>�K��0����������������������A��������� ................................................................................................ 128

6. Método sin inclusión ................................................................................................................................... 1336.1. Principio ................................................................................................................................................ 1336.2. Fijación ................................................................................................................................................. 1336.3. Congelación .......................................................................................................................................... 134K�I��:����&����������������������� ............................................................................................................ 'G>K�>��9���������(� ..................................................................................................................................... 1366.6. Iconografía ............................................................................................................................................ 139

7. Comparación de los tres métodos .............................................................................................................. 1397.1. Sensibilidad ........................................................................................................................................... 1397.2. Preservación morfológica ..................................................................................................................... 1407.3. Resolución ............................................................................................................................................ 140F�I��)����������� ......................................................................................................................................... 140F�>��C����������� ........................................................................................................................................... 1417.6. Coste ..................................................................................................................................................... 141

����������������� ......................................................................................................................................... 1418.1. Inmunomarcaje múltiple ....................................................................................................................... 1418.2. Inmunomarcaje e hibridación in situ .................................................................................................... 'I>Bibliografía ................................................................................................................................................. 147

SEGUNDA PARTE: CARACTERIZACIÓN DE CÉLULAS Y TEJIDOS

CAPÍTULO 4: PATRONES DE TINCIÓN

Tomás García-Caballero e Inés Martín-Lacave

1. Patrón citoplasmático ................................................................................................................................. 1511.1. Homogéneo ........................................................................................................................................... '>'1.2. Fibrilar .................................................................................................................................................. '>$1.3. Granular ................................................................................................................................................ '>G

Atlas de inmunohistoquímicaXXIV

1.4. Puntiforme paranuclear ......................................................................................................................... '>I'�>��1���� ..................................................................................................................................................... '>I1.6. En mosaico ............................................................................................................................................ '>>

2. Patrón nuclear ............................................................................................................................................. 1552.1. Homogéneo ........................................................................................................................................... '>>2.2. Nucleolar ............................................................................................................................................... '>K2.3. Envoltura nuclear .................................................................................................................................. '>K

3. Patrón nuclear y citoplasmático ................................................................................................................ 1564. Patrón de membrana .................................................................................................................................. 157

4.1. Completo ............................................................................................................................................... '>F4.2. Apical .................................................................................................................................................... '>F4.3. Lateral ................................................................................................................................................... '>=

5. Patrón de membrana y citoplasmático ..................................................................................................... 158>�'��0������������������!��������� ....................................................................................................... '>=>�$��0������������������������������� .................................................................................................... '>,

6. Patrón extracelular ..................................................................................................................................... 1596.1. Coloide .................................................................................................................................................. '>,6.2. Lámina basal ......................................................................................................................................... 1606.3. Fibras y sustancia fundamental amorfa ................................................................................................ 160Bibliografía ................................................................................................................................................. 160

CAPÍTULO 5: CARACTERIZACIÓN SUBCELULAR Carlos R Morales y Maryssa Canuel

1. Marcadores de la membrana plasmática .................................................................................................. 1612. Marcadores nucleares ................................................................................................................................. 161

2.1. Núcleo ................................................................................................................................................... 1612.2. Lámina nuclear ..................................................................................................................................... 1612.3. Nucléolo ................................................................................................................................................ 162

3. Marcadores del retículo endoplasmático rugoso ...................................................................................... 1624. Marcadores del aparato de Golgi .............................................................................................................. 162

I�'��:����������Bcis-G���D ........................................................................................................................... 162I�$��:�������������Bmedial-G���D .............................................................................................................. 1634.3. Región trans-G����BTGND .................................................................................................................... 163

5. Marcadores de endosomas y fagosomas .................................................................................................... 163>�'��)��������������� .......................................................................................................................... 163>�$��)������������� ................................................................................................................................ 164>�G��C������ ............................................................................................................................................ 164

6. Marcadores de lisosomas ............................................................................................................................ 1657. Marcadores de peroxisomas ....................................................................................................................... 1658. Marcadores de mitocondrias ...................................................................................................................... 1659. Marcadores de especializaciones apicales ................................................................................................. 166

9.1. Microvellosidades ................................................................................................................................. 1669.2. Estereocilios .......................................................................................................................................... 1669.3. Cilios ..................................................................................................................................................... 166

10. Marcadores de especializaciones unitivas ............................................................................................... 16710.1. Uniones ocluyentes ............................................................................................................................. 167

XXVÍndice

10.2. Uniones adherentes ............................................................................................................................. 16810.3. Nexos .................................................................................................................................................. 168

11. Marcadores de lámina basal ..................................................................................................................... 168Bibliografía ................................................................................................................................................ 169

CAPÍTULO 6: TEJIDO EPITELIAL Inés Martín-Lacave, Beatriz Fernández y Tomás García-Caballero

1. Marcador general de epitelios .................................................................................................................... 1732. Epitelios de revestimiento ........................................................................................................................... 173

2.1. Epitelio simple plano ............................................................................................................................ 1732.2. Epitelio simple cúbico .......................................................................................................................... 'F>2.3. Epitelio simple cilíndrico ...................................................................................................................... 'F>$�I��)��������������������������������.................................................................................................... 'F>$�>��)������������������������������ ........................................................................................................... 176$�K��)�������������������������� ��������&��........................................................................................ 176$�F��)������������������������ ��������&��............................................................................................. 176

3. Glándulas exocrinas .................................................................................................................................... 1773.1. Células secretoras ................................................................................................................................. 1773.2. Células ductales .................................................................................................................................... 1773.3. Células mioepiteliales ........................................................................................................................... 178

4. Marcadores de especializaciones apicales ................................................................................................. 1784.1. Microvellosidades ................................................................................................................................. 1784.2. Estereocilios .......................................................................................................................................... 1794.3. Cilios ..................................................................................................................................................... 179

5. Marcadores de lámina basal ...................................................................................................................... 1796. Tabla de citoqueratinas en sistemas y órganos ......................................................................................... 179

Bibliografía ................................................................................................................................................. 183

CAPÍTULO 7: TEJIDO CONJUNTIVO Y VARIEDADESInés Martín-Lacave y José C Utrilla

1. Tejido conjuntivo ......................................................................................................................................... 1871.1. Células conjuntivas ............................................................................................................................... 1871.2. Fibras conjuntivas y proteínas asociadas .............................................................................................. 1901.3. Sustancia fundamental amorfa .............................................................................................................. 191

2. Tejido cartilaginoso ..................................................................................................................................... 1912.1. Concrocitos ........................................................................................................................................... 1912.2. Matriz cartilaginosa .............................................................................................................................. 1922.3. Pericondrio ............................................................................................................................................ 192

3. Tejido óseo.................................................................................................................................................... 1933.1. Células óseas ......................................................................................................................................... 1933.2. Matriz ósea ............................................................................................................................................ 1943.3. Periostio ................................................................................................................................................ 1943.4. Membrana sinovial ............................................................................................................................... ',>Bibliografía ................................................................................................................................................. 195

Atlas de inmunohistoquímicaXXVI

CAPÍTULO 8: SANGRE Y MÉDULA ÓSEA

Inés Martín-Lacave y Manuel de Miguel

1. Sangre ...................................................................................................................................................... 2011.1. Eritrocitos ............................................................................................................................................. 2011.2. Plaquetas ............................................................................................................................................... 2011.3 Leucocitos .............................................................................................................................................. 202

2. Médula ósea ................................................................................................................................................. 2042.1. Sinusoides medulares ............................................................................................................................ 2042.2. Estroma ................................................................................................................................................. 2042.3. Células progenitoras hematopoyéticas.................................................................................................. $%>2.4. Serie eritroide ........................................................................................................................................ $%>$�>��0����������� ...................................................................................................................................... $%>2.6. Serie granulomonocítica ....................................................................................................................... 2062.7. Serie linfoide ......................................................................................................................................... 206Bibliografía ................................................................................................................................................. 207

CAPÍTULO 9: TEJIDO MUSCULAR

Inés Martín-Lacave y José Mª Fernández-Santos

1. Marcadores generales ..................................................................................................................................211�������������� ..................................................................................................................................................211����������������� ......................................................................................................................................... 212

3.1. Marcadores generales ........................................................................................................................... 2123.2. Músculo estriado esquelético ................................................................................................................ 2133.3. Músculo estriado cardíaco .................................................................................................................... $'>

4. Lámina externa ........................................................................................................................................... 216Bibliografía ................................................................................................................................................. 216

CAPÍTULO 10: TEJIDO NERVIOSO

Inés Martín-Lacave y Tomás García-Caballero

1. Marcadores neuronales .............................................................................................................................. 2211.1. Neuronas en desarrollo ......................................................................................................................... 2211.2. Neuronas maduras................................................................................................................................. 221

2. Marcadores de sinapsis ............................................................................................................................... 2223. Marcadores de células gliales ..................................................................................................................... 223

3.1. Sistema nervioso central ....................................................................................................................... 2233.2. Sistema nervioso periférico .................................................................................................................. $$>

4. Marcadores de leptomeninges .................................................................................................................... 2265. Marcadores de nervios periféricos ............................................................................................................ 226

>�'��7 ��� .................................................................................................................................................. 226>�$��4����������Schwann .............................................................................................................................. 226>�G��3��������������� .................................................................................................................................... 227>�I��)������ ............................................................................................................................................. 227

XXVIIÍndice

>�>��8������� ............................................................................................................................................... 227Bibliografía ................................................................................................................................................. 228

TERCERA PARTE: CARACTERIZACIÓN DE ÓRGANOS Y SISTEMAS

CAPÍTULO 11: SISTEMA CIRCULATORIO

Inés Martín-Lacave y Julia Buján

1. Marcadores pan-endoteliales ..................................................................................................................... 2352. Vasos sanguíneos ......................................................................................................................................... 236

2.1. Túnica íntima ........................................................................................................................................ 2362.2. Túnica media ......................................................................................................................................... 2372.3. Túnica adventicia .................................................................................................................................. 238

3. Corazón ...................................................................................................................................................... 2393.1. Endocardio ............................................................................................................................................ 2393.2. Miocardio .............................................................................................................................................. 2393.3. Sistema de conducción.......................................................................................................................... 2403.4. Pericardio visceral: mesotelio ............................................................................................................... 240

4. Vasos linfáticos ............................................................................................................................................ 2414.1. Endotelio ............................................................................................................................................... 241I�$���!�����������B�1D ................................................................................................................................ 241Bibliografía ................................................................................................................................................. 242

CAPÍTULO 12: SISTEMA INMUNITARIOMáximo Fraga e Inés Martín-Lacave

1. Ganglio linfático .......................................................................................................................................... 2471.1. Corteza .................................................................................................................................................. 2471.2. Médula .................................................................................................................................................. $>%

2. Bazo .............................................................................................................................................................. 2512.1. Pulpa blanca .......................................................................................................................................... $>'2.2. Pulpa roja .............................................................................................................................................. $>G

3. Timo ........................................................................................................................................................... 2543.1. Corteza .................................................................................................................................................. $>I3.2. Médula .................................................................................................................................................. $>>Bibliografía ................................................................................................................................................. 255

CAPÍTULO 13: SISTEMA ENDOCRINO

Inés Martín-Lacave y Tomás García-Caballero

���!� ���� ...................................................................................................................................................... 261'�'��7���������� ...................................................................................................................................... 261'�$������������� ....................................................................................................................................... 264

Atlas de inmunohistoquímicaXXVIII

2. Glándula pineal ........................................................................................................................................... 2642.1. Pinealocitos ........................................................................................................................................... 264$�$��4����������������������B�������D ............................................................................................................... $K>2.3. Axones .................................................................................................................................................. $K>

3. Tiroides ...................................................................................................................................................... 2653.1. Células foliculares................................................................................................................................. $K>3.2. Coloide .................................................................................................................................................. 2663.3. Células C o parafoliculares ................................................................................................................... 266

4. Paratiroides.................................................................................................................................................. 2674.1. Células principales ................................................................................................................................ 267I�$��4������� ����� ...................................................................................................................................... 267

5. Glándulas suprarrenales ............................................................................................................................ 268>�'��4���&������������� ............................................................................................................................... 268>�$��0����������������� ............................................................................................................................... 268

6. Islotes de Langerhans ................................................................................................................................. 2696.1. Marcadores generales ........................................................................................................................... 2696.2. Células A o alfa ..................................................................................................................................... 2706.3. Células B o beta .................................................................................................................................... 2706.4. Células D o delta ................................................................................................................................... 270K�>��4�������PP ............................................................................................................................................. 271Bibliografía ................................................................................................................................................. 271

CAPÍTULO 14: APARATO DIGESTIVO

Tomás García-Caballero, Beatriz Fernández y Lucía García-Caballero

1. Labio............................................................................................................................................................. 2771.1. Piel ........................................................................................................................................................ 2771.2. Bermellón ............................................................................................................................................. 2781.3. Mucosa .................................................................................................................................................. 278

2. Cavidad oral ................................................................................................................................................ 2782.1. Mucosa .................................................................................................................................................. 2782.2. Lengua .................................................................................................................................................. 2802.3. Diente .................................................................................................................................................... 2812.4. Glándulas salivales ............................................................................................................................... $=>

3. Amígdalas palatinas .................................................................................................................................... 2873.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 2873.2. Componente linfoide ............................................................................................................................ 287

4. Esófago ...................................................................................................................................................... 2894.1. Mucosa .................................................................................................................................................. 2894.2. Glándulas esofágicas............................................................................................................................. 2904.3. Muscular propia .................................................................................................................................... 290

5. Estómago ...................................................................................................................................................... 290>�'��)��������������������������............................................................................................................... 290>�$��H�!��������.������ ................................................................................................................................ 291>�G��H�!���������������� ............................................................................................................................... 292>�I��4�������������������� ....................................................................................................................... 293

XXIXÍndice

6. Intestino delgado ......................................................................................................................................... 2936.1. Mucosa .................................................................................................................................................. 2936.2. Glándulas de Brunner ........................................................................................................................... 2976.3. Placas de Peyer ..................................................................................................................................... 2986.4. Muscular propia .................................................................................................................................... 298K�>��8�� ��������� ................................................................................................................................... 299

7. Intestino grueso ........................................................................................................................................... 2997.1. Mucosa .................................................................................................................................................. 2997.2. Plexos nerviosos ................................................................................................................................... 301

8. Apéndice ...................................................................................................................................................... 3028.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 3028.2. Componente linfoide ............................................................................................................................ 302

9. Canal anal .................................................................................................................................................... 3029.1. Zona colorrectal .................................................................................................................................... 3029.2. Zona transicional................................................................................................................................... 3039.3. Zona cutánea ......................................................................................................................................... 303

10. Hígado ...................................................................................................................................................... 30310.1. Hepatocitos ......................................................................................................................................... 30310.2. Canalículos biliares ............................................................................................................................. 30410.3. Células de Kupffer .............................................................................................................................. 30410.4. Células estrelladas perisinusoidales .................................................................................................... G%>'%�>��4��������������� .............................................................................................................................. G%>10.6. Vasos ................................................................................................................................................... G%>

11. Vesícula biliar ............................................................................................................................................ 30611.1. Epitelio ................................................................................................................................................ 30611.2. Conductos de Luschka ........................................................................................................................ 306

12. Páncreas exocrino ..................................................................................................................................... 30712.1. Células acinosas .................................................................................................................................. 30712.2. Células centroacinosas y conductos intercalares ................................................................................ 30712.3. Conductos intralobulillares, interlobulillares y principales ............................................................... 308Bibliografía ................................................................................................................................................. 309

CAPÍTULO 15: APARATO RESPIRATORIO

Rosalía Gallego y Kawtar Raghay 1. Fosas nasales y senos paranasales ............................................................................................................. 317

1.1 Mucosa nasal ......................................................................................................................................... 3171.2. Lámina propia ....................................................................................................................................... 319

2. Laringe ...................................................................................................................................................... 3192.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 3192.2. Lámina propia ....................................................................................................................................... 320

3. Tráquea ...................................................................................................................................................... 3203.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 3203.2. Lámina propia ....................................................................................................................................... 3213.3. Submucosa ............................................................................................................................................ 3213.4. Cartílago ............................................................................................................................................... 321G�>��0.�������� ����................................................................................................................................... 321

Atlas de inmunohistoquímicaXXX

4. Mucosa bronquial y bronquiolar ............................................................................................................... 3214.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 3214.2. Lámina propia ....................................................................................................................................... 3234.3. Muscular propia .................................................................................................................................... 3234.4. Cartílago hialino ................................................................................................................................... 323I�>��8�� � .................................................................................................................................................... 323

5. Alveolos pulmonares ................................................................................................................................... 323>�'��)�������������� .................................................................................................................................... 323>�$��0������������������ .......................................................................................................................... G$>

6. Vascularización pulmonar .......................................................................................................................... 3257. Pleura ...................................................................................................................................................... 325

Bibliografía .................................................................................................................................................. 326

CAPÍTULO 16: APARATO URINARIO

Rosalía Gallego y Tomás García-Caballero

1. Riñón ...................................................................................................................................................... 3291.1. Corpúsculo renal ................................................................................................................................... 3291.2. Túbulos renales ..................................................................................................................................... 3331.3. Aparato yuxtaglomerular ...................................................................................................................... GG>1.4. Vascularización renal ............................................................................................................................ 336'�>��4!�����������......................................................................................................................................... 337

2. Vias urinarias .............................................................................................................................................. 3372.1. Urotelio ................................................................................................................................................ 3372.2. Lámina propia y capa muscular ........................................................................................................... 338Bibliografía ................................................................................................................................................. 338

CAPÍTULO 17: APARATO GENITAL FEMENINO

Inés Martín-Lacave y Tomás García-Caballero

1. Ovarios ...................................................................................................................................................... 343'�'��)��������!����B�������D.................................................................................................................. 3431.2. Folículos ováricos ................................................................................................................................. 3431.3. Células estromales ................................................................................................................................ 3461.4. Células hiliares ...................................................................................................................................... 346'�>��4������.�� .......................................................................................................................................... 346

2. Trompas de Falopio..................................................................................................................................... 3472.1. Epitelio tubárico .................................................................................................................................... 3472.2. Capa muscular....................................................................................................................................... 348

3. Útero ...................................................................................................................................................... 3483.1. Endometrio ........................................................................................................................................... 3483.2. Miometrio ............................................................................................................................................. 349

4. Cérvix ...................................................................................................................................................... 3494.1. Endocérvix ............................................................................................................................................ 3494.2. Exocérvix .............................................................................................................................................. G>%4.3. Estroma cervical ................................................................................................................................... G>%

XXXIÍndice

5. Vagina ...................................................................................................................................................... 351>�'��)���������������������� ...................................................................................................................... G>'>�$���!���������� ....................................................................................................................................... G>'>�G��4������������....................................................................................................................................... G>'

6. Placenta ...................................................................................................................................................... 3516.1. Trofoblasto ............................................................................................................................................ G>'6.2. Células de H�������B���������D ....................................................................................................... G>$6.3. Células deciduales................................................................................................................................. G>G6.4. Mesénquima .......................................................................................................................................... G>GBibliografía ................................................................................................................................................. 353

CAPÍTULO 18: APARATO GENITAL MASCULINO

Javier Regadera e Inés Martín-Lacave

1. Testículo ...................................................................................................................................................... 3591.1. Túbulos seminíferos .............................................................................................................................. G>,1.2. Células de Leydig ................................................................................................................................. 361

2. Vías espermáticas ........................................................................................................................................ 3612.1. Túbulos rectos ....................................................................................................................................... 3612.2. Rete testis .............................................................................................................................................. 3622.3. Conductillos eferentes........................................................................................................................... 3622.4. Epidídimo ............................................................................................................................................. 362$�>��4��������������� ............................................................................................................................... 3632.6. Conducto eyaculador ............................................................................................................................ 363

3. Próstata ...................................................................................................................................................... 3643.1. Células secretoras epiteliales ................................................................................................................ 3643.2. Células basales ...................................................................................................................................... GK>3.3. Células neuroendocrinas ....................................................................................................................... GK>G�I��)����������������� .......................................................................................................................... GK>G�>��<����������!���� .................................................................................................................................... GK>

4. Vesículas seminales...................................................................................................................................... 3664.1. Epitelio .................................................................................................................................................. 3664.2. Capa muscular....................................................................................................................................... 366

5. Glándulas bulbouretrales ........................................................................................................................... 366>�'��4���������������������������� ................................................................................................................ 366>�$��4���������������B�������������D ............................................................................................................ 366>�G��4������ ............................................................................................................................................. 366

6. Pene ...................................................................................................................................................... 3676.1. Uretra esponjosa ................................................................................................................................... 3676.2. Tejido eréctil ......................................................................................................................................... 3676.3. Células intersticiales de Cajal ............................................................................................................... 3676.4. Nervios .................................................................................................................................................. 367Bibliografía ................................................................................................................................................. 368

Atlas de inmunohistoquímicaXXXII

CAPÍTULO 19: PIEL

Tomás García-Caballero y Andrés Beiras

1. Epidermis ..................................................................................................................................................... 3711.1. Queratinocitos ...................................................................................................................................... 3711.2. Melanocitos ........................................................................................................................................... 3741.3. Células de Langerhans .......................................................................................................................... GF>1.4. Células de Merkel ................................................................................................................................. GF>

2. Folículos pilosos ........................................................................................................................................... 3762.1. Panmarcadores ...................................................................................................................................... 3762.2. Vaina radicular externa ......................................................................................................................... 3762.3. Vaina radicular interna .......................................................................................................................... 3772.4. Corteza .................................................................................................................................................. 377$�>��)(��������� ........................................................................................................................................... 3782.6. Bulbo piloso .......................................................................................................................................... 3782.7. Membrana vítrea ................................................................................................................................... 3782.8. Músculo erector del pelo....................................................................................................................... 378

3. Glándulas sebáceas ..................................................................................................................................... 3794. Glándulas sudoríparas ecrinas .................................................................................................................. 379

4.1. Unidad secretora ................................................................................................................................... 3794.2. Células mioepiteliales ........................................................................................................................... 3804.3. Conducto secretor ................................................................................................................................. 3804.4. Acrosiringio .......................................................................................................................................... 381

5. Glándulas sudoríparas apocrinas .............................................................................................................. 381>�'��<�������������� ................................................................................................................................... 381>�$��4�������������������� ........................................................................................................................... 382>�G��4������������� ................................................................................................................................. 383

6. Dermis ...................................................................................................................................................... 3836.1. Fibroblastos ........................................................................................................................................... 3836.2. Dendrocitos dérmicos ........................................................................................................................... 383K�G��0���������� ..................................................................................................................................... 3846.4. Mastocitos ............................................................................................................................................. 384K�>��0�������� ........................................................................................................................................... 3846.6. Células glómicas ................................................................................................................................... G=>6.7. Nervios .................................................................................................................................................. G=>

�������������������"�� ................................................................................................................................ 3857.1. Corpúsculos de Meissner ...................................................................................................................... G=>7.2. Corpúsculos de Vater-Pacini ................................................................................................................. 386Bibliografía ................................................................................................................................................. 387

CAPÍTULO 20: MAMATomás García-Caballero y Beatriz Fernández

1. Unidad terminal ducto-lobulillar ............................................................................................................... 3931.1. Células madre ....................................................................................................................................... 3931.2. Células glandulares ............................................................................................................................... 3931.3. Células mioepiteliales ........................................................................................................................... G,>

XXXIIIÍndice

2. Ductos interlobulillares .............................................................................................................................. 3952.1. Células epiteliales ................................................................................................................................. G,>2.2. Células mioepiteliales ........................................................................................................................... 396

3. Estroma ...................................................................................................................................................... 397Bibliografía .................................................................................................................................................. 397

ÍNDICE ANALÍTICO .................................................................................................................................... 401

Atlas de inmunohistoquímica90

� Nakane (1968)$F, ������������������� ���������������������������������������� �����������-��� �������������� ��������� ��� ����������� ����mismo método inmunoperoxidásico indirecto y �����������������������������������8�������������������������������������������������������-������������������������������������A"4�����"�$�$����������'�������� �����������(����resultados.

Figura 2.13. Demostración secuencial de insulina y glucagón en islotes pancreáticos. Métodos: (A) Glu-������ B)3A8 A#71D� �� 9�������� B)3AC��AC:D� B$% D6�(B)� H�������� B)3A8 A#71D� �� 9�������� B)3AC��AC:D�BI% D��

��8����������������������������������������������������������������������������� ���������������������������������������������������������!�necesario.

� Llevando esta técnica al extremo, Glass et al. (2009)13, han descrito un nuevo método al que denominan SIMPLE (����� �������� �������-dase Labeling and Erasing), que consiste en la

Precauciones generales:�� Como los tratamientos existentes para la elimi-

������������������������������'M�������������-tante drásticos, es conveniente usar material in-�������������������������������!�������������

�� Asimismo, es recomendable utilizar como pri-���������������#71���� ����������������el tejido después del tratamiento.

�� )�� ����������� ��������� ��� ������� ������ �������������������������������������������-�����������������

������������������������� ���

<�����&������&��������������������������������-�������������������������������#71������������������������������� ��������(���������A����������������'M������������������������������������������������������������&���������$M�������������������

Este es el fundamento del equipo de doble marcaje )�3��������#7�258.

(1) Ig ratón anti-Ag1 (5) Bloqueo proteínas

(2) EV cabra anti-Ig ratón&Px (6) Ig ratón anti-Ag2

(3) DAB (7) EV cabra anti-Ig ratón&Px

(4) Glicina-HCl (8) AEC

Figura 2.12. Eliminación de la 1ª serie de anticuerpos: )3A8 A#71�B7�'D���)3A8 A7)4�B7�$D�B���.��3���"��-ke, 2001)58.

���������������������������������������������-rablemente entre los distintos autores: desde un tiem-���������������������������������������A"4��%�'�M, pH 2,2, de 1 minuto cada uno156 a 1 hora en HCl 1N106����� I=���������������A"4��$0��"�$18.

Recientemente, Pirici et al. (2009),33 han ensayado �������������������������!������� Western blotting ���������������������������������������������������������������������A5#5���"�$����������G%AK%���-

A B

������������ �������������� 91

������������ ��� ��� ������� �������� �����������������98 ��������������7)4������������������������!������������������������5�����-tiñe y elimina la 1ª serie de anticuerpos y vuelta ������&��������������������������� ������������������>���������������������������

Desventajas:�� Como se ha visto, para que se produzca la diso-

������������������������(��������'M�������������������������������������������������������������������$IAI=�������� ���������������������������������������������������

�� )�������������������������������������-��������������������������������&����������$����������������������������������������-������������������������ �������

� En realidad, estos autores demostraron 3 antí-����������������������������������)����������serie intercalaron, además del tratamiento con microondas, dos tratamientos bloqueantes de �����������������������������������������de la misma especie que el anticuerpo secunda-rio y otro con suero fetal bovino.

��7���!��������#71��������������7)4��Fast Red y Fast Blue también resisten el tratamiento con calor.

Advertencia:�� )������ ���7�$� � ���� ��� �� ������ ����-

���������������������� �����������(��� ���mediante la misma.

Figura 2.15. Demostración de somatostatina (SS) B������������������D�y calcitonina (CT) (de color �������A�(D� en tiroides de rata usando anticuer-������������������������� ����������������������métodos inmunoenzimáticos diferentes. Métodos: (A) 55B)3A8 A#71D�4@B�571AC��AC:D6�(B) SS(EV-Px-#71D�4@B)3A8 A7)4D�BI% D�

�������>%�4�������������������� ������������(����resultados. Este método aporta la ventaja adicional de que inhibe las actividades enzimáticas de la peroxida-���������������������������������

Precauciones:�� 5��.��"�����et al. (2003)15, el tratamiento con

�������� ��A���������� ��� ��������� ��������-��� ��� ������ ��� �� ��� � ������ ��������� ������������������������������������������!�����������������������������

�� 5��.�������������������������������������-����� ��� ������������ ����������� ��� �� ���con albúmina bovina.

�������������� ������������������

Fueron Lan et al. (1995)21 quiénes comprobaron que la cadena de anticuerpos de la 1ª serie también �����������������������������������&������������������������������������������������������������������-����������������B��������������'%%��0���"�KD�����>�minutos cada uno, en un horno microondas.

Posibilidades:�� 78778�C1�B7�'D���878�7)4�B7�$D�� )3A8 �#71�B7�'D���)3AC���C:�B7�$D�� )3A8 �#71�B7�'D���)3A8 �7)4�B7�$D�� Otras

(1) Ig ratón anti-Ag1 (6) Bloqueo proteínas y Px endógena

(2) Ig cerdo ati-Ig ratón (7) Ig ratón anti-Ag2

(3) Ig ratón anti-Fsa (8) Ig cerdo ati-Ig ratón

(4) Fast Blue (9) PAP ratón

(5) Microondas (10) AEC

Figura 2.14. Desnaturalización de la 1ª serie por calor: 78778AC1�B7�'D�878�7)4�B���.������et al., 1995)21.

A B

Atlas de inmunohistoquímica Sistema circulatorio 239

Figura 11.12. Miocardio. Las fibras musculares cardia-cas se marcan con los anticuerpos anti-actina muscu-lar específica (A) y anti-desmina (B), que se intensifica a nivel de los discos intercalados. (A) 40x; (B) 60x.

Figura 11.13. Miocardio. Los discos intercalados se marcan de forma nítida para catenina-β (A) y CD56 (B), aunque este último también se localiza a nivel sar-coplásmico (40x).

Figura 11.14. Cardiomiocitos. Estas células expresan miosina (MHC-α), como se puede observar en cultivos celulares (A) y en secciones de miocardio (B). 20x.

3. CORAZÓN3.1. ENDOCARDIO: ENDOTELIO

(Véanse apartados 1 y 2.1.1. de este capítulo).

3.2. MIOCARDIO

3.2.1. Marcadores generales fibras

• Actinamuscularespecífica • Actinademúsculocardiaco-α80

• Cateninas: en los discos intercalados47,49

• CD56/NCAM (Neural cell adhesion molecule): en los discos intercalados83

• Conexinas 43 y 45: en los discos intercala-dos15,22,69

• Cristalina-αB: en los discos intercalados51

• Desmina: en los discos intercalados (desmoso-discos intercalados (desmoso-mas) y las líneas Z22,45,47,88

• Desmoplaquina: en los discos intercalados47

• Distrofina: patrón de membrana25,47

• Espectrina: patrón de membrana47

• Mioglobina: en el sarcoplasma43

• Miosina (cadena ligera) (MLC)22,30

• Miosina (cadena pesada) (MHC)22,30

• Titina: patrón estriado30

• Tropomiosina30

• Troponinas I y T4,22,30

• Tubulina: en el sarcoplasma47

• Vinculina: patrón de membrana47

(Véase también Capítulo 9, apartado 3.3)

3.2.2. Fibras auriculares

• ANF (Atrial natriuretic factor)4,28,60

• Angiotensinógeno: inmunotinción intensa78

• Miosina (cadena ligera-2a) (MLC-2a)22,48

• Miosina(cadenapesada-α)(MHC-α)22,48,95

3.2.3. Fibras ventriculares

• Angiotensinógeno: solo a nivel de la capa suben-docárdica ventricular78

• Miosina (cadena ligera-2v) (MLC-2v)22,95

• Miosina(cadenapesada-β)(MHC-β)22

A B

A B

A B

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Atlas de inmunohistoquímica252 Sistema inmunitario

Figura 12.11. Folículos linfoides en el bazo. A) CD20. Intensa positividad en todo el folículo linfoide (10x). B) IgD. Se marca únicamente el manto folicular; el centro germinal y la zona marginal son negativos (20x). C) Bcl-2. Tanto el manto como la zona marginal muestran inmunorreactividad; el centro germinal es negativo (20x). D) CD21. Las células foliculares dendríticas se tiñen intensamente, y de forma algo más débil, las células de la zona marginal (20x).

Figura 12.12. A) CD3. Marcaje de la VLPA (imagen complementaria de la Figura 12.11A). B) CD4. La mayor parte de los linfocitos de la VLPA expresan CD4 (10x).

Figura 12.13. Extensa inmunorreactividad para CD5 en linfocitos T de la VLPA, así como en elementos dispersos de la pulpa esplénica (10x).

2.1.1. Folículos linfoides

Manto: véase ganglio linfático.Centro germinal: véase ganglio linfático.Zona marginal • Marcadores generales B• Bcl263 • CD2195,96,102 • IgM (IgD y CD23, en cambio, generalmente

negativos)95,96,102

2.1.2. Vainas linfoides periarteriolares (VLPA)

• CD3101

• CD4: predominan sobre los linfocitos CD8107

• CD5101

• CD8107

• CD45RO41

2.1.3. Células reticulares fibroblásticas

• Actina de músculo liso85

• CD4941

• Miosina de músculo liso76

2.1.4. Fibras reticulares

• Colágeno-III54

• Colágeno-IV53,85

• Colágeno-XVII 53

• Fibronectina49

• Laminina53

• Tenascina49

• Vitronectina49

2.1.5. Células dendríticas interdigitantes

(Véase ganglio linfático).

2.1.6. Macrófagos

(Véase ganglio linfático).

A B

C D

A B

INMUNOHIST_NUEVO_12_10.indd 252 21/02/2012 10:43:20

Atlas de inmunohistoquímica Aparato digestivo 305

Figura 14.64. Actina de músculo liso. Con este anti-cuerpo se marca el citoplasma y las prolongaciones de las células estrelladas perisinusoidales de Ito (40x).

Figura 14.65. CK7. Tinción específica e intensa del conducto biliar, mientras que los hepatocitos son nega-tivos (40x).

10.4. CÉLULAS ESTRELLADAS PERISINUSOIDALES

• Actina de músculo liso (SMA)7,38

• CD-56/N-CAM (Neural cell adhesion mole-cule)87

• Desmina7,188,203

• GFAP(Glialfibrillaryacidicprotein)22,46

• Receptor de estrógenos β207

• Sinemina206

• Vimentina: también positiva en células endote-liales y de Kupffer188

• Vitamina A: autofluorescencia78

• WT-1 (Wilms’ tumor-1 transcription factor): nuclear67

10.5. CONDUCTOS BILIARES

• Anhidrasa carbónica-IX151

• CA-19.9 (Cancer antigen-19.9)• Cadherina-E: membrana plasmática y cito-

plasma• Catenina-β:membrana plasmática• CD138• CKAE1/AE3: tinción intensa• CKs 7, 8, 18 y 19: tinción intensa149,190

• CKs 34βE12, 5/6, 10, 17 y 20: negativas• Claudina-4100

• EMA (Epithelial membrane antigen): membra-na apical

• Ep-CAM (Epithelial cell adhesion molecule)

10.6. VASOS

• CD31: vasos sanguíneos y linfáticos• CD34: vasos sanguíneos y linfáticos• D2-40/Podoplanina: vasos linfáticos

A

INMUNOHIST_NUEVO_12_10.indd 305 21/02/2012 10:44:36

Atlas de inmunohistoquímica374 Piel

Figura 19.8. EGFR. Inmunorreactividad citoplasmáti-ca y de membrana que disminuye conforme ascendemos hacia las capas superficiales. La células de la capa basal muestran marcaje intenso de las caras laterales y la cara superficial (100x).

Figura 19.9. A) Melan-A. Tinción específica de mela-nocitos (40x). B) Panmelanoma (Melan-A + Tirosina-sa + HMB45). Marcaje del citoplasma y las prolonga-ciones de los melanocitos (100x). C) Proteína S-100. Inmunorreactividad en núcleo, citoplasma y dendritas de un melanocito (100x).

1.1.9. Citoquinas y factores de crecimiento en queratinocitos

• EGFR (Epidermal growth factor receptor)9

• FGF-B (Fibroblast growth factor-basic)44

• GM-CSF (Granulocyte macrophage- colony stimulating factor)22,66

• IL-1 y -6 (Interleukin-1, -6)7,92

• TGF-α y -β (Transforming growth factor-α, -β)93

• TNF-α (Tumor necrosis factor-α)92

1.2. MELANOCITOS

• ACTH (Adrenocorticotropic hormone): pro-mueve la biosíntesis de eumelanina123

• Bcl-2 (B-cell lymphoma-2): también en células de Merkel94

• CD117/c-Kit: sensible21,39,67

• c-Met/HGFR (Mesenchymal-epithelial tran-(Mesenchymal-epithelial tran-sition factor/Hepatocyte growth factor recep-tor)104

• FGFR-1 (Fibroblast growth factor receptor-1)6

• HMB-45 (Human melanoma black-45): mela-nocitos embrionarios, bulbo piloso y melanoci-tos activados (pero no en reposo)38,61

• Melan-A/MART-1 (Melanoma antigen recog-nized by T cells-1): sensible y específico11,15,61,64

• MITF (Microphthalmia associated transcrip-tion factor): también marca mastocitos y ma-crófagos10

• MSH-α (Melanocyte-stimulating hormone-α): promueve la biosíntesis de eumelanina123

• NKI/C3: también tiñe histiocitos127

• PLN-2:sensibleyespecífico10,99

• Proteína relacionada con tirosinasa 1/Mel-5: sensible y específica8,21,118

• Proteína S-100: baja sensibilidad para me-lanocitos intraepidérmicos e inespecífica (en epidermis se marcan también las células de Langerhans)10

• Tirosinasa: sensible y específica10

• Vimentina: inespecífica (en epidermis se tiñen también las células de Langerhans)

B

A

C

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Atlas de inmunohistoquímica Piel 381

Figura 19.22. EMA. Tinción luminal y de la capa basal del conducto secretor (40x).

Figura 19.23. A) GCDFP-15. Tinción específica del acrosiringio con marcaje luminal y periluminal (20x). B) CEA. En este caso la inmunorreactividad se loca-liza exclusivamente en la capa de células luminales (40x).

10 (focal y débil), 17 (capa luminal, débil) y 19 (capa luminal)

• CKCAM5.2 (CKs 7 y 8): aunque se ha descri-to negatividad con este marcador,77 en nuestra experiencia las CKs 7 y 8 muestran positividad débil y focal

• CKs 6 y 1661

• CKs 18 y 20: negativas• EGFR (Epidermal growth factor receptor):72

capa basal• EMA (Epithelial membrane antigen): borde lu-

minal77 y capa basal (microgranular)• GCDFP-15 (Gross cystic disease fluid pro-

tein-15): luz102

4.4. ACROSIRINGIO

• CEA (Carcinoembryonic antigen)• CKs 1, 10, 11 y 1983

• EMA (Epithelial membrane antigen)5

• Filagrina56

• GCDFP-15 (Gross cystic disease fluid pro-tein-15)

• HLA-DR (Human leucocyte antigen-DR)90

5. GLÁNDULAS SUDORÍPARAS APOCRINAS5.1. UNIDAD SECRETORA

• CD117/c-Kit67

• CEA (Carcinoembryonic antigen): tinción dé-bil y focal77,102

• CKs AE1/AE3, 34βE12 y 10• CKCAM 5.2 (CKs 7 y 8): positiva con acentua-

ción del borde luminal77

• CKs 8, 18 y 1961

• CKs 5/6, 10, 17 y 20: negativas• EGF (Epidermal growth factor)103

• EGFR (Epidermal growth factor receptor)103

• EMA (Epithelial membrane antigen): acentua-ción del borde luminal77,102

• GCDFP-15 (Gross cystic disease fluid pro-tein-15): componente secretor y luz de los con-ductos102

A B

A

B

INMUNOHIST_NUEVO_12_10.indd 381 21/02/2012 10:46:07

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