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UNIVERSIDAD DE SAN CARLOS DE GUATEMALA

DIRECCION GENERAL DE DOCENCIA

BIENESTAR ESTUEIANTIL UNIVERSITARIO

UNIDAD DE SALUD

LABORATORIO

DOCUMENTO DE APOYO

Martha Eugenia Campos Urizar

Guatemala, Noviembre 2011

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CAPITULO I

PIPETA DE THOMA

La pipeta de Thoma es frecuentemente utilizada para realizar diluciones previas al conteo de células en cualquier

líquido corporal y para contar elementos formes en la sangre.

Generalmente se les conoce como la pipeta de blancos y la pipeta de rojos, éstas están divididas en partes iguales; la de

blancos en 11 partes y la de rojos en 101 partes. La dilución de la muestra se concentra en el bulbo:

BLANCOS ROJOS

11 101 100 10 1.0

0.5

COMO USAR LA PIPETA DE THOMA

Para calcular el factor de dilución en la pipeta de blancos colocamos la muestra (en el caso de los leucocitos sangre)

hasta la marca de 0.5 y luego diluyente hasta la marca de 11 con diluyente (ácido clorhídrico 0.1 N) calculando la

dilución de esta manera:

(FD) Factor de dilución= Volumen Total = 10* = 20

Volumen de Muestra 0.5

Pipeta de blancos Pipeta de rojos

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Donde volumen total va hacer igual a = Volumen de muestra + Volumen de diluyente

* La muestra se encuentra concentrada en el bulbo por lo tanto el volumen de dilución son 10 partes, la parte restante

de diluyente está en el vástago y es la que se descarta (4 gotas) previo al hacer el llenado de la cámara.

La variante con la pipeta de rojos es que el volumen total es de 100 por lo que el factor de dilución será 200 (100/0.5)

IMPORTANTE

La pipeta de Thoma se puede utilizar para diluir diferentes LÍQUIDOS la variante será la cantidad de muestra que

utilicemos al hacer la dilución, EJEMPLO

Un líquido articular turbio podemos llenar una pipeta de rojos con líquido hasta la marca de 3 y luego agregar solución

salina hasta la marca de 101 y la dilución será:

FD = 100/0.3 = 333.3 Volumen total = Muestra 0.3 + líquido 99.7 = 100

Luego de contar las células en la cámara colocaremos en la fórmula 333.3 como factor de dilución.

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CAPITULO II

QUE ES LA CAMARA DE NEWBAUER

La Cámara de Newbauer es un instrumento utilizado para realizar el recuento de células en cualquier líquido corporal,

orina y sangre.

Esta cámara de conteo está adaptada al microscopio. Se trata de un portaobjetos que tiene dos zonas ligeramente

deprimidas y que en el fondo de las cuales se ha marcado con la ayuda de un diamante una cuadrícula de dimensiones

conocidas. Se cubre la cámara con un cubre cámaras que se adhiere por simple tensión superficial.

Luego se introduce el líquido a contar, al que generalmente se ha sometido a una dilución previa con un diluyente, por

capilaridad entre la cámara y el cubre cámara; puesto que tiene dos zonas esto permite hacer dos recuentos

simultáneamente.

Cada cuadrante consta de 9 cuadrados grandes, cada uno de 1 mm de lado y por ende de 1 mm2 de superficie, así

pues el área sombreada y marcada L corresponde a 1 milímetro cuadrado. La profundidad es de 0.1 mm respecto a la

superficie.

El volumen de cada cuadrito es = Área X profundidad

Volumen = 1 mm2 X 0.1 mm = 0.1mm3

Por lo tanto volumen comprendido entre la superficie L y el cubreobjetos es de 0.1 milímetro cúbico, es decir 0.1 micro

litro.

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5

La fórmula de valoración del número de células (válida universalmente) es la siguiente:

Células/ mm3= (células contadas contadas) X (factor de dilución)

# de cuadros contados X área (mm2) X profundidad de la cámara (mm)

Células/ mm3= # células contadas X factor de dilución

# de cuadros X 0.1 mm3

COMO SE HACE UN RECUENTO

Para realizar el recuento celular, debe colocarse el cubreobjetos sobre el portaobjetos de esta cámara e introducir entre

ambos la muestra celular previamente preparada. Debe evitarse que la muestra rebalse, porque si esto sucede las

células a contar también se perderán. La velocidad de llenado de la cámara debe ser homogénea, evitando así una mala

distribución de las células en el preparado que traerá con ello errores en el recuento.

La muestra no debe secarse, debe esperar por lo menos 2 minutos para que sedimenten las células. Luego se coloca la

cámara en un microscopio óptico y se procede al conteo de la siguiente manera:

Volumen

contado

Volumen contado

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Una vez contadas las células se calcula considerando: la dilución de la muestra, la cantidad de cuadrados considerados,

el número de células contadas y el volumen de muestra debajo de cada cuadrado.

LA CUADRICULA CENTRAL de la cámara de Newbauer se utiliza para el conteo de eritrocitos y plaquetas en

sangre, se diferencia de los otros cuadrantes porque esta subdividido en 25 cuadros, el volumen de conteo variara de

0.1 mm3 a 0.1/25= 0.004 mm3.

Por lo tanto la fórmula para eritrocitos o plaquetas en sangre será:

Células/ mm3= # células contadas X factor de dilución

# de cuadros X 0.004 mm3

DE NE

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Líquidos corporales

1 2 3

4

5

8 9

6

7

USOS DE LA CAMARA DE NEWBAUER

Esta cámara de recuento está diseñada para el conteo celular de cualquier líquido corporal, en ella se puede contar

dependiendo de la cantidad celular 4 cuadrantes como en el recuento de células blancas en sangre o bien los 9

cuadrantes si la cantidad celular fuera baja (se pueden contar tanto leucocitos como eritrocitos).

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Tréveris, 1825-Bonn, 1863) Físico

alemán. Profesor en la Universidad

de Bonn, estudió diversos fenómenos

ópticos.

August Beer

CAPITULO III

GENERALIDADES “LEY DE LAMBERT Y BEER”

LOS DESCUBRIDORES

PRINCIPIOS

LEY DE BEER-LAMBERT

La Absorbancia de una especie en solución homogénea es directamente proporcional a su actividad óptica, longitud del

paso óptico y su concentración. Es una relación empírica que relaciona la absorción de luz con las propiedades del

material atravesado.

Su uso es en distintos métodos de la espectrofotometría para química analítica.

En iguales condiciones podemos determinar la concentración de una sustancia X a partir de una solución estándar de

concentración conocida.

Fue un suizo – alemán, nació en

Mülhausen, astrónomo, matemático,

físico y hombre docto.

Johann Heinrich Lambert

Un cuerpo que radia

obedece a la ley de Lambert si

su luminancia espectral

energética es la misma para

un elemento cualquiera de su

superficie, y no depende de la

dirección de emisión.

La absorbancia de una

sustancia o especie es

directamente proporcional a

la concentración de la misma.

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De esto podemos deducir:

Abs Muestra = Abs Estándar

[Muestra ] [Estándar]

[Muestra] = Absorbancia Muestra X [Estándar]

Absorbancia Estándar

EN CADA PROCEDIMIENTO BIOQUÍMICO DEBEMOS TOMAR EN CUENTA QUE LA MUESTRA O EL ESTÁNDAR NO

ESTEN PREVIAMENTE DILUÍDOS.

Los procedimientos espectrofotométricos generalmente se trabajan, no importando el número de muestras a

determinar; un tubo Blanco, uno estándar y uno o más de muestra(s):

Dentro del procedimiento se deben agregar los componentes de la siguiente forma:

TUBO BLANCO ESTANDAR MUESTRA

Agua 0.5 ml -- --

Estándar -- 0.5 ml --

Muestra(s) -- -- 0.5 ml

REACTIVO DE REACCIÓN 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml

Blanco Estándar Muestra

Toda dilución que se realice

previo a este procedimiento

debe tomarse en cuenta para el

resultado final

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DE ESTO PODEMOS MODIFICAR NUESTRA FÓRMULA DE LA SIGUIENTE FORMA:

[Muestra] = Absorbancia Muestra X FD Muestra X [Estándar]

Absorbancia Estándar FD Estándar

Donde FD es factor de dilución

Si no se hubiera hecho ninguna dilución a cualquiera de los componentes se colocar un 1.

DILUCIONES

Al igual que en la pipeta de toma en bioquímica son muy utilizadas las diluciones. La fórmula como lo vimos

anteriormente es:

(FD) Factor de dilución = Volumen Total (Volumen de diluyente + Volumen de Muestra)

Volumen de Muestra

Por medio de esta fórmula se puede averiguar cuanta cantidad de diluyente necesitamos para una dilución específica,

cuando tenemos una cantidad limitada de muestra; siempre recordando que al final debemos despejar del volumen total

el volumen de diluyente.

EL FACTOR DE DILUCIÓN:

Es el número total de volúmenes al que se lleva un volumen dado de muestra original.

En otros términos, el factor de dilución también corresponde a la división de la concentración de la muestra original

sobre la concentración de la muestra diluida.

Las diluciones se pueden expresar así:

1 ó 1/2 ó 1: 2 lo que significa una parte de muestra diluida en una parte de diluyente para 2

un volumen total de 2 partes

Volumen TOTAL

Entonces en una dilución 1: 25 será:

Muestra Diluyente

Las diluciones también pueden expresarse como porcentajes, ejemplo:

Volumen Muestra Volumen Diluyente

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1/2 = 0.5 X 100 = 50%

3/5= 0.6 X 100= 60%

TRATE DE RESOLVER LA GUIA ENTREGADA CON ANTERIORIDAD SI TUVIERA ALGUNA DUDA QUE SURGIERA EN EL

DESARROLLO DE LA MISMA TRATARÉ DE RESOLVERSELA ATRAVÉS DEL ESPACIO INTERACTIVO DE

WIKISPACES.COM (UNIDAD DE SALUD) AL QUE PODRA INGRESAR AL PINCHAR EL LINK QUE LE INCLUYO JUNTO

AL CORREO CON ESTE DOCUMENTO.

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