aplicacion de trichoderma como biocontrolador para fusarium sp y pyrenochaeta

7/24/2019 aplicacion de trichoderma como biocontrolador para fusarium sp y pyrenochaeta

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AGRADECIMIENTOS

Agradezco a la Profesora y hoy amiga Mblga. Liduvina

Sulca Quispe por su dedicacin, paciencia y constanteapoyo como Asesora de esta esis.

A todas las personas involucradas en el desarrollo de

este traba!o, desde la concepcin de la idea principal,

traba!o de campo, traba!o de gabinete y hasta el "ltimo

momento de la presentacin, me mostraron su apoyo

incondicional y el empu!e #ue slo da un amigo deverdad.

A mi t$a %haro, #ue nunca de!a de preocuparse por m$ y

siempre impulsa lo me!or #ue puedo llegar a ser. e

#uiero como a una madre.

A mis me!ores amigos #ue con su alegr$a, su

comprensin y apoyo hicieron #ue el paso por este via!ede realizacin personal y profesional sea inolvidable.

Ayer, hoy y siempre tienen mi cari&o, apoyo y

agradecimiento.


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CONTENIDO

Pg.

Resumen

I. INTRODUCCIN 1

1.1 Formulacin del Problema 3

1. !i"#esis $

II. O%&'TI(O) *

II.1 Ob+e#i,o -eneral *

''.( Ob+e#i,os es"ec/icos *

III. 0RCO T'RICO 2

3.1. Con#rol biolgico 2

3.1.1. In#roduccin 2

3.1.. De/inicin

3.1.3. 0ecanismo de accin de an#agonis#as microbianos 14

3.1.3.1. n#agonismo 11

3.1.3.. n#ibiosis 1

3.1.3.3. Com"e#encia 1

3.1.3.5. Fungis#asis 13

3.1.3.$. Resis#encia sis#6mica ad7uirida 13


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3.1.3.*. 0ico"arasi#ismo 15

3.1.5. 0icroorganismo con#rolador biolgico

de en/ermedades 1$

3.1.5.1. Trichodermas". 1$

3.1.5.. Fisiologa de Trichoderma harzianum8Ri/ai9. 4

3.1.5.3. 0ecanismos de accin de T. harzianum. *

3.1.5.5. Im"or#ancia del mico"arasi#ismo de

T. harzianumen el con#rol biolgico. 31

3.1.5.$. n#agonismo o ca"acidad an#agnica. 33

3.. Cul#i,o de cebolla 3$

3..1. 0or/ologa de la cebolla 3*

3... ':igencias agroclim#icas del cul#i,o 32

3..3. 'n/ermedades del cul#i,o de la cebolla 3;

3..5. Pudricin radicular en cebolla 53

3..5.1. gen#es causales de la "udricin radicular

en cebolla 55

3..5. )n#omas de la en/ermedad $

3..5.3. Ciclo de la en/ermedad $3

3..5.5. 0ane+o < con#rol de la en/ermedad $$

3..$. 'l cul#i,o de la cebolla en el ,alle de =ocumba $*


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3..*. n#eceden#es *1

I(. 0T'RI=') > 0?TODO) 24

5.1. 0a#erial e:"erimen#al 24

5.1.1 0a#erial de =abora#orio 24

5.1. O#ros 21

5.1.3 '7ui"os 21

5.1.5 Reac#i,os de labora#orio 2

5. Ubicacin < delimi#acin del @rea de es#udio 2

5..1 Poblacin 23

5.. 0ues#ra 23

5.3.DiseAo de In,es#igacin 23

5.5. 0e#odologa 25

5.5.1. Procesamien#o de la mues#ra 25

5.5.1.1. Toma de mues#ra 25

5.5.1.. )iembra en medio de cul#i,o 2$

5.5.1.3. Cmara Bmeda 2$

5.5.1.5. Puri/icacin del !ongo 2*

5.5.. Iden#i/icacin de los !ongos 2*

5.5.3. Prueba de Pa#ogenicidad de ocB 22

5.$. Prueba de n#agonismo 2


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5.$.1. ',aluacin de an#agonismo median#e el 06#odo

del Cul#i,o Dual 2

5.$.. ',aluacin de n#agonismo "or mico"arasi#ismo. 4

5.$.3. (ariables 1

5.$.5. nlisis es#ads#ico

(. R')U=TDO) 3

$.1 islamien#o e iden#i/icacin de Bongos "a#genos del

Cul#i,o de Cebolla. 3

$.. Prueba de n#agonismo median#e el 06#odo del

Cul#i,o Dual *

$..1. nlisis 's#ads#ico "ara mues#ras relacionadas ;

$... Prueba de # "ara mues#ras relacionadas ;4

$.3 Ca"acidad an#agnica "or mico"arasi#ismo de Bongos

"a#genos del Cul#i,o de Cebolla ;

(I. DI)CU)IN ;5

(II. CONC=U)ION') 143

(III. R'CO0'NDCION') 145

IE. %I%=IO-RFI 14$

E. N'EO) 112


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INDICE DE CUADROS

Pg.

Cuadro 1'scala "ara e,aluacin de la ca"acidad an#agnica 3$

Cuadro O"eracionaliGacin de ,ariables 1

Cuadro 3 Incidencia de Bongos "a#genos aislados 5

Cuadro 5 sociacin de !ongos "a#genos aislados $

Cuadro $ Porcen#a+e de inBibicin "or T. harzianum

sobre agen#es e#iolgicos. *

Cuadro * nlisis es#ads#ico del "orcen#a+e de inBibicin

de crecimien#o de Pyrenochaeta terrestris. 2

Cuadro 2 nlisis es#ads#ico del "orcen#a+e de inBibicin

de crecimien#o de Fusarium oxysporum 2

Cuadro nlisis es#ads#ico del "orcen#a+e de inBibicin

de crecimien#o de Fusarium solani

Cuadro ; nlisis es#ads#ico "ara mues#ras relacionadas ;

Cuadro 14 Prueba de T "ara mues#ras relacionadas ;4

Cuadro 11 Ca"acidad an#agnica "or mico"arasi#ismo ;

Cuadro 1 gen#es '#iolgicos en mues#ras de Cebolla 11

Cuadro 13 sociacin de gen#e '#iolgico en mues#ras


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de Cebolla 14

INDICE DE FIGURAS

Pg.

Figura 1 Conidios < conidi/oros de Trichoderma s".

Figura Conidi/oros de /orma "iramidal de T. harzianum8Ri/ai9 *

Figura 3 Incidencia de Bongos "a#genos aislados. 5

Figura 5 Incidencia de sociacin de Bongos

"a#genos aislados $

Figura $ Porcen#a+e de inBibicin de crecimien#o *

Figura *.H Ca"acidad an#agnica en Pyrenochaeta terrestris ;

Figura 2.H Ca"acidad an#agnica en Fusarium oxysporum ;3

Figura .H Ca"acidad an#agnica en Fusarium solani ;3

Figura ; gen#e e#iolgico en mues#ras de cebolla 11;

Figura 14 gen#e e#iolgico en mues#ras de cebolla 14

Figura 11 sociaciones de Bongos en mues#ras de cebolla 1

Figura 1 sociaciones de Bongos en mues#ras de cebolla 1

Figura 13 Toma de 0ues#ra 13

Figura 15 0ues#reo en cam"o 13

Figura 1$ )in#oma#ologa "ar#e a6rea 15


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Figura 1* )in#oma#ologa en races. 15

Figura 12 Traba+o en labora#orio. 1$

Figura 1 islamien#o de Pyrenochaeta terrestris 1$

Figura 1; islamien#o de Fusarium oxysporum 1*

Figura 4 islamien#o de Fusarium solani. 1*


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RESUMEN

'l cul#i,o de cebolla en el (alle de =ocumba es una de las "rinci"ales

ac#i,idades econmicas de la Pro,incia &orge %asadre es#e cul#i,o ,iene

"resen#ado en los l#imos aAos serios "roblemas /i#osani#arios en#re ellos

de "udricin radical. 's#a si#uacin 7ue Ba im"ac#ado en la economa de

los "roduc#ores de la regin obligndolos a im"lemen#ar m6#odos de

con#rol /i#osani#ario "oco e/ec#i,os < con consecuencias al medio

ambien#e. 'n la ac#ualidad e:is#e una #endencia al uso del Con#rol

%iolgico donde se reconoce la "o#encialidad de Trichoderma con

resul#ados "osi#i,os como an#agonis#a sobre Bongos /i#o"a#genos delsuelo.

'l "resen#e #raba+o #iene como ob+e#i,o de#erminar la e#iologa < el con#rol

in vitro con Trichoderma harzianum sobre los agen#es e#iolgico

causan#es de la "udricin radicular en el cul#i,o deAllium cepa L.8cebolla)

'l an#agonismo se e,alu "or el m6#odo del cul#i,o dual con/ron#ando a

los agen#es e#iolgicos aislados Pyrenochaeta terrestris, Fusarium

oxysporum


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I. INTRODUCCION

=a "roduccin de cebolla en el Per Ba ido incremen#ndose de manera

signi/ica#i,a en los l#imos dieG aAos. 's un "roduc#o agroe:"or#able al

7ue se le debe dar ma


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terrestris, Fusarium oxysporum < Fusarium solani. 's#a si#uacin Ba

im"ac#ado en la economa de los "roduc#ores de la regin obligndolos a

cambiar de "arcelas cada aAos < abrir nue,os cam"os de cul#i,o con las

consecuencias 7ue es#a "rc#ica ocasiona al medio ambien#e al u#iliGar

/uer#emen#e /ungicidas es as 7ue el monocul#i,o < el mane+o /i#osani#ario

"ara el con#rol de las en/ermedades de raG Ba ocasionado 7ue el

"roblema se "resen#e con#inuamen#e "roduciendo mucBas "6rdidas

8PulidoH!errera et al. 449.

'n su ma


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'n la ac#ualidad el uso de Trichoderma harzianum Ba sido es#udiado

mundialmen#e "or sus e:celen#es carac#ers#icas como biocon#rolador de

Bongos del suelo < reconocido como agen#e de con#rol biolgico con#ra

en/ermedades causadas "or Bongos /i#o"a#genos 8!arman 44*9.)u em"leo se +us#i/ica "or las relaciones an#agonis#as 7ue es#ablece

/undamen#almen#e con los Bongos /i#o"a#genos 7ue ,i,en en el suelo

adems de la in/luencia 7ue e+erce sobre el crecimien#o ,ege#a#i,o de

algunas "lan#as de im"or#ancia econmica 8indBam e# al. 1;* ndre

et al.,1;;9.

1.1 Formulacin del Problema

llium ce"a = 8cebolla9 es una de las Bor#aliGas ms im"or#an#es 9 Porcen#a+e de InBibicin deCrecimien#o del "a#geno 8cm9.

Cuadro ,2 O"eracionaliGacin de ,ariables

ARIA/(ES INDICADOR

INDEPENDIENTE )*Ca"acidad an#agnicadeTrichoderma harzianum 8TricBo D9

c#i,idad an#agnica de Trichodermaharzianum.

DEPENDIENTE )B*Porcen#a+e de InBibicin deCrecimien#o del "a#geno 8cm9

Crecimien#o radial de Pyrenochaetaterrestresen Prueba Dual.

Crecimien#o radial de Fusariumoxysporum, en Prueba Dual.

Crecimien#o radial de Fusarium solanien Prueba Dual.

Fuente+ $laoraci5n propia

7.8.7. An!li"i" e"$ad?"$ico

0


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)e realiG el anlisis descri"#i,o de las ,ariables < la "rueba

de T )#uden# de mues#ras relacionadas "ara las com"araciones

de medias en#re gru"os u#iliGando el "rograma es#ads#ico

)P)) 8Statistical Pac%a!e &or the Social Sciences) (ersin 1;.4

. RESU(TADOS

8.1 Ai"lamien$o e iden$i6icacin de a%en$e e$iol%ico del Cul$i'o de

Cebolla

/1


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'n el "resen#e #raba+o se iden#i/ic como agen#e e#iolgico causan#e

de la "udricin radicular del cul#i,o de cebolla iden#i/icado como

Pyrenochaeta terrestres asociado a Fusarium oxysporum


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Pyrenochaeta terrestris 3Fusarium oxysporum Fusarium solani ;

Fusarium spp. 33

'hizoctonia solani 1Fuente: Elaboracin propia

Fi%ura 52 Incidencia de Bongos "a#genos aislados.

Fuente: Elaboracin propia

De lo obser,ado en cuan#o a los aislamien#os de los Bongos

"a#genos se ob#u,o #ambi6n las asociaciones de Bongos

encon#radas de#erminndose de la siguien#e manera

Cuadro 7. sociacin de !ongos "a#genos aislados

A"ociacin de -on%o" Pa$%eno"ai"lado"

Nro. de Incidencia"

Asociaci5n P. terrestris y F. solani *

/(


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Asociaci5n P. terrestris y Fusarium spp. 1$


'l Cuadro N 5 mues#ra 7ue el ma


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=a media general del "orcen#a+e de inBibicin de crecimien#o en la

"rueba de an#agonismo de Pyrenochaetaterrestris /ue de 253 J.

'l ,alor de la des,iacin es#ndar indica 7ue en "romedio las

obser,aciones indi,iduales se des,an en 144 siendo su

,arianGa de 141*K asimismo se obser,a 7ue la m:ima /ue de

25J < la mnima 2323J < un rango de 5*.

Cuadro L2nlisis es#ads#ico del "orcen#a+e de inBibicin de

crecimien#o deFusarium oxysporum

(arianGa

Des,iacin

es#ndar 0edia

Com"or#amien#o

Rango0inino 0:imo

5&LL 1&7 8,&5K 7K&L 87& ;&J1


/


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=a media general del "orcen#a+e de inBibicin de crecimien#o de

Fu"arium o


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8.,.1. An!li"i" E"$ad?"$ico #ara mue"$ra" relacionada"

Cuadro 2nlisis 's#ads#ico "ara mues#ras relacionadas

0ues#ras relacionadas0edia del

PIC

N

mues#ras

Des,iacin

#".

'rror #". de la

media

Par 1 Pyrenochaeta terrestris 253 2 144 52

Fusarium oxysporum $3 2 1;5 4

Par Pyrenochaeta terrestris 253 2 144 52

Fusarium solani 5;3 2 552 14;

Par 3 Fusarium oxysporum $3 2 1;5 4

Fusarium solani /8,9- : -,//: ;,8


'n el cuadro NQ ; "ara la "rueba de # de mues#ras relacionada

se obser,a los "romedios de inBibicin de crecimien#o donde

el ma


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8.,.,. Prueba de $ #ara mue"$ra" relacionada"

!o No e:is#en di/erencias es#ads#icas en "orcen#a+e de

inBibicin en#re gru"os

!1 ':is#en di/erencias es#ads#icas en "orcen#a+e de

inBibicin en#re gru"os

[ 4.4$

Cuadro 1J2 Prueba de # )#uden# "ara mues#ras relacionadas

0ues#ras relacionadas

Di/erencias relacionadas

# gl)ig.

8bila#eral90ediaDes.

#".

'rror #". de

la media

;$J In#er,alo decon/ianGa "ara la

di/erencia

In/erior )u"erior

Par 1 P. terrestris

< Fusarium

oxysporum

5$ 34* 14 42; $$4 *3 * 444

Par P. terrestris

< Fusarium

solani

$$1 *5 11 13 21 15* * 444

Par 3 Fusarium

oxysporum

< Fusarium

solani

34* 3; 152 H44; 12 22 * 4$4


//


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De la "rueba de # de mues#ras relacionadas se "uede de#erminar

lo siguien#e

)e obser,a 7ue e:is#e di/erencias signi/ica#i,as en el "orcen#a+e

de InBibicin de crecimien#o en#re Pyrenochaeta. terrestris

7ue re"or#a 25.3J < Fusarium oxysporum$.3J K es#o con un

ni,el de con/ianGa del ;$J.

':is#en di/erencias signi/ica#i,as en el "orcen#a+e de inBibicin

de crecimien#o en#re Pyrenochaeta. terrestris 7ue re"or#a

25.3J < Fusarium solani con 5;.33J K es#o con un ni,el de

con/ianGa del ;$J.

)e obser,a 7ue e:is#e di/erencias signi/ica#i,as en el "orcen#a+e

de inBibicin de crecimien#o en#re Fusarium oxysporum 7ue

re"or#a $.3J < Fusarium solani con 5;.33J K es#o con un

ni,el de con/ianGa del ;$J

De acuerdo a es#os resul#ados se e,idenci 7ue el "orcen#a+e

de inBibicin de crecimien#o ob#enido en #odos los #ra#amien#os

/ue "osi#i,o "or lo #an#o se ace"#a la Bi"#esis al#erna con un

;$J de con/iabilidad.

/0


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8.5 Ca#acidad an$a%nica #or mico#ara"i$i"mo de on%o" #a$%eno"

del Cul$i'o de Cebolla

)e clasi/ic de acuerdo con el grado basado en una escala de 4 a 5

de 'GG


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Fi%ura K.> Ca"acidad an#agnica sobre Fusarium oxysporum

'e&erencia+ $laorada por el autor.

Fi%ura .> Ca"acidad an#agnica sobre Fusarium solani.

'e&erencia+ $laorada por el autor.

0)


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I. DISCUSI4N

'l ob+e#i,o del es#udio /ue de#erminar la e#iologa < con#rol in vitro, con

Trichoderma harzianum sobre el agen#e e#iolgico causan#e de la

"udricin radicular en el cul#i,o deAllium cepa L.(ceolla) en el ,alle de

=ocumba Pro,incia &orge %asadre. De los resul#ados ob#enidos se

re"or#a como agen#es e#iolgicos a los Bongos /i#o"a#genos

Pyrenochaeta terrestris, Fusarium oxysporum< Fusarium solani.

Cer,an#es < Das 84149 en su es#udio de biocon#rol de la "udricin

radicular concuerda con los resul#ados ob#enidos Pyrenochaeta terrestris

< Fusarium oxysporum a los cuales realiGa "ruebas de biocon#rol con

Trichoderma harzianum logrando una al#a accin an#agnica in vitro e

in vivoconsiderando 7ue aislamien#os na#i,os de Trichodermaen suelos

sembrados con cebolla seran agen#es "romisorios en el con#rol biolgico

de la "udricin radicular en el cul#i,o de cebolla ocasionada "or

F. oxysporum y P. terretris.

Crdenas 84439 aisl el agen#e causal de la RaG Rosada 8RR9 de la

cebolla iden#i/icndose como P. terrestris.

0(


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%ell < colaboradores 81;9. De igual modo obser, 7ue la ce"a de

TrichodermainBibi el crecimien#o de F. oxysporuma "ar#ir de las 2 B de

e:"osicin en un 32 J Bas#a un 24J a las 1* B de e:"osicinK

corroborando los resul#ados ob#enidos en el "resen#e es#udio.

Crdenas 84439 aisl el agen#e causal de la RaG Rosada 8RR9 de la

cebolla iden#i/icndose como P. terrestres. ',alu el e/ec#o de

/ungicidas comerciales sobre el crecimien#o del micelio del Bongo en

es#udio en una "rueba in vitro considerndose "roduc#os de con#ac#o

sis#6micos < com"ues#os los cuales inBibieron en un 144 J el desarrollo

del micelio. 's#os /ungicidas /ueron seleccionados "ara e,aluar su

e/ec#i,idad como "re,en#i,os de la RR u#iliGados como desin/es#an#es de

semillas se encon#r 7ue #odos /ueron e/icien#es e:ce"#o Folicur < Til# los

cuales inBibieron la germinacin de semilla.

Un es#udio de !ernndeG e# al. 844*9 realiGando e,aluaciones in vitro

del an#agonismo de es"ecies de Trichoderma sobre Bongos /i#o"a#genos

7ue a/ec#an las ,i#ro"lan#as de "iAa 8nana comosus 8=.9 0err.9

de#erminaron 7ue el "orcen#a+e de inBibicin de crecimien#o 8PIC9 de la

colonia Fusarium su!lutinanscon T. harzianum/ue de un 5J.

0+


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(elG7ueG 844*9 encon#r una e/icien#e inBibicin del crecimien#o

micelial de Colletotrichum acutatum8;J9 < C. !loeosporioides8144J9

/ren#e a T. harziamun. Tambi6n se Ba e,aluado el uso de es#e an#agonis#a

/ren#e a o#ros "a#genos del cul#i,o de mango inclu


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ma


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's#os resul#ados e,idencian lo encon#rado "or -uedeG e# al 8419 en

su in,es#igacin #i#ulada ',aluacin in vitro de aislamien#os de

Trichoderma harzianum"ara el con#rol de 'hizoctonia solani, Sclerotium

rol&sii< Fusarium oxysporumen "lan#as de #oma#eK sugiri 7ue con los

aislamien#os au#c#onos de T. harzianum es "robable llegar a un con#rol

e/icaG de los Bongos "a#genos '. solani, S. rol&sii< F. oxysporum en el

cul#i,o de #oma#e cuando se a"lica de /orma "re,en#i,a en semilleros

aplicacion de trichoderma como biocontrolador para fusarium sp y pyrenochaeta

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